Đang tải... (xem toàn văn)
Bisphenol A (BPA) là chất gây rối loạn nội tiết tố, vì vậy một vài quốc gia cấm sử dụng chất này trong bao bì nhựa đựng thực phẩm và đồ chơi nhựa cho trẻ em. BPA được tìm thấy trong nước mặt ở nồng độ đo được từ ng/L- µg/L. Tuy nhiên các dữ liệu độc học về phơi nhiễm mãn tính động vật thủy sinh với BPA ở dải nồng độ này hiện tại rất ít.
Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 Bài nghiên cứu Ảnh hưởng mãn tính phơi nhiễm Bisphenol A lên cá sọc ngựa (Danio rerio) giai đoạn Juvenile Ngơ Thị Mai1 , Đồn Thị Phương Thảo2 , Võ Thị Ngọc Diễm2 , Nguyễn Thành Công3 , Lê Phi Nga4,* TÓM TẮT Giới thiệu: Bisphenol A (BPA) chất gây rối loạn nội tiết tố, vài quốc gia cấm sử dụng chất bao bì nhựa đựng thực phẩm đồ chơi nhựa cho trẻ em BPA tìm thấy nước mặt nồng độ đo từ ng/L- µ g/L Tuy nhiên liệu độc học phơi nhiễm mãn tính động vật thủy sinh với BPA dải nồng độ Phương pháp: Nghiên cứu sử dụng cá sọc ngựa 30 ngày tuổi, cho phơi nhiễm với BPA 0, 1, 10 100 μg/L, 60 ngày, giai đoạn tăng trưởng mạnh (Juvenile) Kết thúc thí nghiệm, tất cá đo chiều dài, cân trọng lượng, lấy mô gan tươi để đánh giá bệnh học Kết quả: Chiều dài trọng lượng cá tăng nhóm phơi nhiễm với BPA 100 μg/L so với nhóm khác Cũng nhóm quan sát thấy thay đổi hình thái tế bào gan tăng số lượng kích thước khơng bào, trương nở nhân tế bào chất, giảm glycogen tăng lipid, khơng có tượng viêm Cá nhóm phơi nhiễm với nồng độ BPA < 100 µ g/L cho thấy điểm cuối đáp ứng khác biệt so với nhóm đối chứng Kết luận: Phơi nhiễm mãn tính với BPA 100 µ g/L lên cá sọc ngựa giai đoạn Juvenile gây tăng trọng lượng, chiều dài làm thay đổi hình thái tế bào gan, gây hại lên chức gan Từ khố: bisphenol A, Danio rerio, giai đoạn Juvenile, hình thái tế bào gan, phơi nhiễm mãn tính Khoa Sinh học Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM GIỚI THIỆU nghiên cứu phơi nhiễm nồng độ µ g/L 10 Trong Bisphenol A (BPA) số chất gây rối loạn nội tiết (nhóm chất EDCs) sử dụng phổ biến ảnh hưởng tiêu cực tới Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại môi trường sinh thái người Cơ quan bảo vệ học Quốc tế, ĐHQG-HCM môi trường US- EPA chương trình độc học Quốc Khoa Kỹ thuật Hóa học, Trường Đại gia (NTP) Hoa Kỳ xếp BPA vị trí thứ học Bách khoa, ĐHQG-HCM 309 hóa chất có số ToxPi ưu tiên độc học Liên hệ kiểm định dựa khả tương tác với số Lê Phi Nga, Khoa Kỹ thuật Hóa học, Trường đường tín hiệu sinh hóa học Gần Jone CorĐại học Bách khoa, ĐHQG-HCM rales (2015) có tổng quan đồ sộ từ 500 nghiên Email: lephinga@hcmut.edu.vn cứu giới BPA môi trường từ nguồn Lịch sử thải đến nước mặt, chất thải, bùn thải, trầm tích, đất, • Ngày nhận: 07-12-2018 khơng khí, động vật hoang dã người BPA • Ngày chấp nhận: 14-6-2019 công bố phát châu Á, châu Âu Bắc Mỹ • Ngày đăng: 25-6-2019 Nồng độ BPA nước mặt từ 0-35 µ g/L, DOI : https://doi.org/10.32508/stdjsee.v3i1.468 nước thải đầu nhà máy xử lý nước thải từ 0-370 µ g/L, nhiên hầu hết kết phân tích < µ g/L Ở Việt Nam, Tâm cộng (2016) cho thấy, nồng độ BPA nước mặt thấp Vào mùa Bản quyền khô nồng độ BPA kênh thành phố Hồ © ĐHQG Tp.HCM Đây báo cơng bố Chí Minh khoảng 144 ng/L Vào mùa mưa số mở phát hành theo điều khoản khoảng 24,8-66,8 ng/L Có thực tế trái ngược là, the Creative Commons Attribution 4.0 International license phơi nhiễm với BPA nồng độ ng/L – µ g/L 4,5 nghiên cứu độc tính BPA phần lớn lại tập trung nồng độ cao, mg/L 6–9 Rất nghiên cứu này, sử dụng cá sọc ngựa làm Bộ môn Giải phẫu bệnh, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh mơ hình nghiên cứu độc tính mãn tính theo dẫn OECD 11 với khoảng nồng độ phơi nhiễm BPA 1100 µ g/L, khoảng ghi nhận cao số nơi môi trường sinh thái giới 3,12 BPA thuộc ECDs, chúng tơi giả thiết ngồi tác động lên sinh sản nhiều nghiên cứu cho thấy, chất tác động đến chuyển hóa sinh hóa bình thường sinh vật, đặc biệt giai đoạn tăng trưởng Ngơ Thị Mai (2017) 13 phơi nhiễm mãn tính cá sọc ngựa giai đoạn tăng trưởng mạnh (Juvenile: 30-90 ngày tuổi ) với 1-100 µ g/L BPA Kết cho thấy chất có tác động lên biểu hệ protein gan có vai trò chuyển hóa sinh hóa gan Nghiên cứu chúng tơi lặp lại điều kiện thử nghiệm mãn tính nghiên cứu Ngô Thị Mai (2017) 13 với điểm cuối quan sát khác biệt thay đổi tăng trưởng thể (kích thước trọng lượng) hình thái tế bào gan cá Những thay đổi này, xác định được, hệ tác động mức protein biết Trích dẫn báo này: Thị Mai N, Thảo D T P, Ngọc Diễm V T, Thành Công N, Phi Nga L Ảnh hưởng mãn tính phơi nhiễm Bisphenol A lên cá sọc ngựa (Danio rerio) giai đoạn Juvenile Sci Tech Dev J Sci Earth Environ.; 3(1):37-45 37 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nguyên vật liệu Cá sọc ngựa (Danio rerio) thu mua từ trại cá giống Thủ Đức, TP Hồ Chí Minh, ni cho sinh sản qua hai vòng đời điều kiện phòng thí nghiệm độc học Mơi trường nước nhân tạo pha chế từ nước siêu với loại muối khoáng nguyên tố vi lượng có độ tinh >98% (Sigma, Merck) BPA tinh khiết (>99%) Sigma Aldrich Ethanol tinh khiết (>99%) dùng làm dung mơi hòa tan BPA Đánh giá ảnh hưởng mãn tính phơi nhiễm BPA lên tăng trưởng Điều kiện thí nghiệm phơi nhiễm mãn tính với BPA tuân thủ theo OECD TG 234 11 , bao gồm lô 1μg/L, 10 μg/L, 100 μg/L lô đối chứng (0μg/L BPA) Mỗi lô gồm bể hình trụ chứa lít nước Mỗi bể có 10 cá 30 ngày tuổi (bắt đầu vào giai đoạn sinh trường mạnh- Juvenile) Định kì tuần lần đo số ánh sáng, pH, nhiệt độ oxy hòa tan Nồng độ BPA trì lơ thí nghiệm cách thay 1/3 thể tích môi trường chứa BPA pha sau 48 Số cá chết bể lô đối chứng khơng vượt q thí nghiệm kết thúc Theo nghiên cứu thối hóa BPA nước tự nhiên 14 thời gian bán hủy BPA khoảng 28 ngày Do đó, việc thay nước thí nghiệm sau ngày đảm bảo nồng độ BPA > 80% suốt 60 ngày Kết thúc 60 ngày thí nghiệm, cá từ lơ thí nghiệm gây mê nước đá lạnh nhanh chóng cân trọng lượng đo chiều dài Thí nghiệm phơi nhiễm thực Phòng Độc học môi trường, Viện Môi trường Tài nguyên, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Phân tích mô bệnh học gan cá Cá gây mê dung dịch MS222 chứa tricaine methane sulfonate 15 để tách toàn gan cố định dung dịch formalin 10% Mô gan sau cố định paraffin cắt thành tiêu mỏng khoảng 4μm Để đánh giá thay đổi tổng thể, tiêu xử lý nhuộm hematoxylin eosin 16 Những tiêu nhuộm sau soi kính hiển vi quang học với độ phóng đại từ 10x - 400x để xác định thay đổi mặt bệnh học gan Các tiêu nhóm phơi nhiễm với BPA so sánh với nhóm đối chứng dựa vấn đề hình thái học tế bào phổ biến đáp ứng với chất độc gan mà không gây u, bao gồm thay đổi sau 16 : (1) 38 tình trạng khơng bào theo mức độ: khơng có (+/-), có khơng bào rõ rệt (+) số lượng không bào nhiều, phân bố khắp tế bào (2+); (2) bào tương tế bào gan bị kiềm hóa; (3) trương lên nhân bào tương với hạch nhân rõ; (4) loại phản ứng viêm thâm nhập đại thực bào; (5) viêm hạt (granuloma); (6) xơ gan/chai gan (fibrosis cirrhosis) Một vài tiêu sau chọn ngẫu nhiên để tiến hành nhuộm PAS để có thêm chứng hay suy giảm glycogen 16 Phương pháp sử dụng để khẳng định thêm tình trạng chuyển hóa glycogen nghiên cứu Ngô Thị Mai, 2017 13 gan theo ba xu hướng: trì bình thường (khuếch tán dương) bị suy giảm (dương tính xuất cục bộ) khơng có glycogen (âm tính) mà thay khơng bào Phân tích mô gan thực Bộ môn Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Đánh giá điều kiện phơi nhiễm mãn tính Ở Bảng cho thấy yếu tố mơi trường thí nghiệm ghi nhận suốt 60 ngày thí nghiệm Chỉ số oxi hòa tan mơi trường nước ni cá hai nhóm đối chứng (7,67±0,44 mg O2 /L) nhóm phơi nhiễm (7,70±0,46 mg O2 /L) với BPA tương đương với 90% lượng oxy bão hòa nhiệt độ 27 o C Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê điều kiện mơi trường thí nghiệm nhóm đối chứng nhóm bị phơi nhiễm với BPA, kiểm định ttest = -0,22 < t17 (0,05) = 2,03 Tương tự, nhiệt độ nước tất lơ thí nghiệm đối chứng trì 27,0±0,3 (o C) Kiểm định ttest = 0,62 < t17 (0,05) = 2,11) cho thấy nhiệt độ nước q trình thí nghiệm khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê nhóm đối chứng nhóm bị phơi nhiễm với BPA Chỉ số pH nước thí nghiệm bể lơ đối chứng trì 7,2±0,2 lơ phơi nhiễm với BPA trì 7,3±0,2 Kiểm định cho thấy ttest = -0,34 < t17 (0,05) = 2,11, số pH nước q trình thí nghiệm khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê nhóm đối chứng nhóm phơi nhiễm Như vậy, thơng số mơi trường thí nghiệm trì ổn định suốt 60 ngày thí nghiệm, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê nhóm thí nghiệm với so với đối chứng Yếu tố mơi trường thí nghiệm hồn tồn phù hợp với chuẩn OECD TG234 11 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 Bảng 1: Các yếu tố môi trườngtrong suốt 60 ngày phơi nhiễm Thông số Mean ±SD Nhiệt độ nước ( o C) DO (mg O2 /L) pH ĐC BPA ĐC BPA ĐC BPA 7,67±0,44 7,70±0,46 27,11±0,27 27,08±0,21 7,23±0,19 7,30±0,15 Ghi chú: Mean ±SD: Trung bình ± Độ lệch chuẩn; ĐC: Nhóm đối chứng; BPA: Nhóm phơi nhiễm với BPA Ảnh hưởng BPA lên tăng trưởng Sự tăng trưởng cá (kích thước trọng lượng) khảo sát trước phơi nhiễm (30 ngày tuổi) sau phơi nhiễm (90 ngày tuổi) Kết Bảng cho thấy trọng lượng lô cá phơi nhiễm với 1μg/L 10μg/L BPA so với lô đối chứng khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p>0,05) Chỉ có lơ cá phơi nhiễm với BPA 100μg/L có trọng lượng khác biệt đáng kể với p0,05) Chỉ có nhóm cá phơi nhiễm với BPA 100 μg/L so với nhóm đối chứng chiều dài cá có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p< 0,05) Chiều dài trọng lượng thể cá trước sau thí nghiệm đươc chuyển sang tỷ số BMI (bằng cân nặng (g) chia cho bình phương chiều dài (cm2 ) Chỉ số dùng để đánh giá trình trạng béo phì chuột 17 , chim 18 rùa 19 Chỉ số nhiên khơng cho thấy có khác biệt đáng kể lô cá phơi nhiễm với BPA với so với đối chứng (Bảng 2) Ảnh hưởng BPA lên hình thái mơ gan Gan cá phơi nhiễm với BPA có thay đổi mô học so với mẫu mô lô đối chứng, không quan sát thấy phản ứng viêm Các tế bào gan có xu hướng xuất với mật độ dày Trên trường kính xuất nhiều khơng bào, điều cho thấy có thay đổi mô để đáp ứng với tăng lên/giảm lipid glycogen, tăng lên lipid glycogen 20 Đặc biệt quan sát thấy rõ rệt lô phơi nhiễm BPA 100μg/L Ngồi ra, mẫu mơ phơi nhiễm BPA 100μg/L quan sát thấy kiềm hóa bào tương, trương lên nhân tế bào bào tương, hạch nhân rõ Đối với phản ứng viêm (sự thâm nhập đại thực bào, viêm dạng hạt xơ hóa gan/chai gan) khơng quan sát thấy hai nhóm phơi nhiễm với BPA nhóm đối chứng Kết đánh giá mơ bệnh học gan cá sau thí nghiệm thể Bảng Hình Tế bào gan cá phơi nhiễm với BPA 100 μg/L chọn ngẫu nhiên cho thí nghiệm nhuộm PAS để xác nhận lại tồn khơng bào, qua củng cố thêm giả thiết khả bị suy giảm glycogen gan Tế bào hồn tồn khơng bắt màu đỏ tươi cho thấy khơng có tồn nhiều glycogen gan (Hình 2) Như vậy, có suy giảm glycogen gan cá bị phơi nhiễm với BPA 100μg/L Rất tiếc gan cá sọc ngựa nhỏ, dễ vỡ trình cắt lát mô, nên nghiên cứu không đủ mẫu nhóm đối chứng, để kết luận chắn suy giảm glycogen gây BPA THẢO LUẬN BPA thuộc nhóm gây rối loạn nội tiết tố mà giai đoạn tăng trưởng Juvenile vai trò nội tiết tố tăng trưởng quan trọng Nghiên cứu cho thấy phơi nhiễm BPA gây ảnh hưởng lên tăng trưởng phụ thuộc nồng độ BPA Phơi nhiễm BPA 100 μg/L gây nên tăng chiều dài trọng lượng thể so với đối chứng Không thể kết luận tăng trưởng mạnh có lợi hay có hại cho sức khỏe cá thiếu chứng trực tiếp Hiện liệu độc học công bố BPA cá phơi nhiễm mãn tính dải nồng độ μg/L ỏi Nhóm nghiên cứu Lindholst (2001, 2003) 21,22 sử dụng cá hồi cầu vồng (Oncorhynchus mykiss) cá sọc ngựa để tìm hiểu mối tương quan trình trao đổi chất với đáp ứng giống hormone estrogen phơi nhiễm BPA 100 μg/L dựa lượng BPA hấp thụ/đào thải theo thời gian 2-168 Kết cho thấy tượng trao đổi chất xảy nhanh gan cá Ngoài ra, Rubin (2001) nghiên cứu ảnh hưởng BPA lên đời chuột thuộc giống Sprague-Dawley cho chuột mang thai uống nước có chứa BPA liều 100 μg 1200 μg BPA/kg trọng lượng thể/ngày từ ngày thứ thai kì Những chuột sinh bị phơi nhiễm với BPA có trọng lượng thể tăng lên điều 39 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 Bảng 2: Trọng lượng chiều dài cá trước sau thí nghiệm BPA (μg/L) Trọng lượng thể cá (g) Chiều dài cá (mm) BMI (g/cm2 ) Trước phơi nhiễm Sau phơi nhiễm Trước phơi nhiễm Sau phơi nhiễm 0,026±0,001a 0,17±0,07a 15,25 ± 1,28a 26,65±5,21a 2,38 0,029±0,007a 0,19±0,09a 15,16 ± 3,01a 28,16±3,81a 2,39 10 0,027±0,001a 0,20±0,07a 15,76 ± 2,31a 28,76±4,64a 2,42 100 0,027±0,003a 0,22±0,08b 14,97 ± 3,45a 30,75±4,41b 2,32 a b Ghi chú: khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05, n = 37 Hình 1: Ảnh hiển vi tế bào gan cá sau thí nghiệm Đối chứng (A), Phơi nhiễm với BPA 10 μg/L (B) 100 μg/L (C) 40 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Trái Đất Mơi trường, 3(1):37-45 Hình 2: Tiêu nhuộm PAS tế bào gan cá sau phơi nhiễm với 100 µ g/L BPA Bảng 3: Khác biệt hình thái tế bào gan nhóm thí nghiệm Mẫu Đối chứng BPA 10 µ g/L BPA 100 µ g/L Hình thái tế bào gan Phản ứng viêm Đáp ứng độc học Tạo không bào chứa lipid +/- Đại thực bào - Kiềm hoá bào tương +/- Viêm dạng hạt - Trương nở nhân/khơng bào +/- Xơ hố gan/chai gan - Tạo không bào chứa lipid +/- Viêm dạng hạt - Kiềm hoá bào tương +/- Viêm dạng hạt - Trương nở nhân/khơng bào +/- Xơ hố gan/chai gan - Tạo không bào chứa lipid 2+ Viêm dạng hạt - Kiềm hoá bào tương 2+ Xơ hoá gan/chai gan - Trương nở nhân/không bào + Đại thực bào - +/- Không đáp ứng +/- Không đáp ứng 2+ Đáng ý 41 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 thể rõ ràng từ sinh tiếp tục giai đoạn trưởng thành Để giải thích chế gây tăng trọng lượng thể sinh vật bị phơi nhiễm BPA, Rubin (2009) 23 cho có tới lý khác BPA ảnh hưởng đến trọng lượng thể sinh vật, là: (1) BPA hoạt động giai đoạn tiền sinh tế bào mỡ, tăng cường trình biệt hóa tế bào mỡ tích lũy mỡ tế bào đích; (2) Hoạt động giống estrogen cách để BPA làm tăng lượng mỡ; (3) Thời gian mang thai thời gian nhạy cảm với estrogen chất giống estrogen BPA; (4) BPA hoạt động thơng qua protein thuộc nhóm ERRs, ERRα ERRγ đóng vai trò quan trọng việc kiểm sốt cân nội mơi trình sinh học chức bình thường ty thể 24,25 ; (5) BPA điều hòa lượng mỡ tích lũy thơng qua đường tác động thyroid hormone, qua việc kiểm soát lượng glucose; (6) BPA làm rối loạn đường truyền tín hiệu PPARγ protein có vai trò quan trọng q trình biệt hóa tế bào mỡ, kiểm sốt cân lượng, cân nội mơi lipid Như vậy, qua nghiên cứu này, BPA ảnh hưởng tới trình trao đổi chất bên thể sau phơi nhiễm kéo dài dẫn tới ảnh hưởng đến tăng trưởng cá sọc ngựa giai đoạn Juvenile Cá xem mơ hình đáng quan tâm để nghiên cứu độc học gan mà khơng gây u phòng thí nghiệm ngồi trường, hình thái tế bào gan nhiều lồi cá mơ tả trước cá hồi cầu vồng (Oncorhynchus mykiss), cá Medaka (Oryzias latipes ), cá da trơn (Ictalurus punctatus) 26 Tương tự động vật có vú, gan cá đóng vai trò quan trọng việc cân nội mơi q trình chuyển hóa thể 27 Tế bào gan đóng vai trò quan trọng việc thải độc tố tổng hợp protein huyết albumin, fibrinogen, nhân tố bổ trợ protein đáp ứng cấp tính Gan cá sọc ngựa khác với với gan động vật có vú tế bào gan không xếp thành dây thùy Các tế bào gan cá thường có xu hướng kiềm tế bào gan cá đực có sản xuất protein vitellogenin 28 Ngoài ra, tế bào gan cá có xu hướng có nhiều khơng bào để đáp ứng với mức glycogen cao mức lipid cao hai 29,30 Trong nghiên cứu này, không bào gan mở rộng tập trung biểu rõ nhóm cá phơi nhiễm với BPA nồng độ 100 μg/L so với nhóm khác nhóm đối chứng (Hình 1) Điều cho thấy phơi nhiễm với BPA liều thấp thời gian dài gây tích lũy lipid Quan sát tế bào thấy có tăng kích thước khơng bào, đáp ứng với tăng lipid bào tương Kết tương đồng với kết nghiên cứu cá hồi cầu vồng (Oncorhynchus mykiss) 21 , Medaka (Oryzias latipes 42 ) cho cá phơi nhiễm với bis(tri-n-butylin) oxide (TBTO), di-n-butyltindichloride (DBTC) 31 Tuy nhiên, khác với loài cá khác, cá sọc ngựa giai đoạn tăng trưởng phơi nhiễm với BPA thời gian dài lại có tượng suy giảm glycogen gan (Hình 2) Theo công bố trước đây, glycogen xảy sinh vật bị ảnh hưởng trực tiếp chất độc nguyên nhân đói, bị căng thẳng mang thai 20 Jayashree (2013) 32 nghiên cứu suy giảm glycogen gan chuột đực trưởng thành cho phơi nhiễm với BPA cấp độ phân tử cho thấy ảnh hưởng chất đến trình chuyển tín hiệu insulin oxi hóa glucose gan Sự oxy hóa glucose suy giảm glycogen quan sát thấy nhóm phơi nhiễm Ở nghiên cứu này, ngồi tượng khơng bào lớn bất thường, thay đổi mặt hình thái khác quan sát thấy gan nhóm cá phơi nhiễm với BPA 100 μg/L Những thay đổi gồm kiềm hóa bào tương và/ nhân tế bào trương nở, nhân tế bào có gai lệch bên Những quan sát tương đồng với kết ghi nhận Wester (2003) 31 Đặc biệt, không quan sát thấy phản ứng viêm hội tụ đại thực bào, khối u, triệu chứng xơ hóa/xơ hóa gan tất nhóm cá phơi nhiễm với BPA so với nhóm đối chứng Điều khơng giống động vật có vú, tổn thương xảy ra, tế bào nhu mơ gan thường có triệu chứng bị xơ hóa q trình bệnh tiến triển 31 , xơ hóa gan bước xảy dẫn tới hoại tử tế bào gan cá KẾT LUẬN Đáp ứng cá sọc ngựa phơi nhiễm với BPA suốt giai đoạn tăng trưởng Juvenile (từ 30 ngày tuổi đến 90 ngày tuổi) phụ thuộc vào nồng độ chất nước 100 µ g/L BPA nồng độ phơi nhiễm quan sát thấy tăng kích thước trọng lượng thể cá, nhiên kèm theo rủi ro thay đổi hình thái gan, dẫn đến ảnh hưởng chức gan Phơi nhiễm với BPA nồng độ thấp 100 µ g/L, khơng gây nên thay đổi đáng kể thể tế bào gan DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BMI: Body Mass Index- số khối thể BPA: Bisphenol A DBTC: di-n-butyltindichloride DO: Dissolved oxygen - oxy hòa tan EDCs: Endocrine Distrupting Chemicals - chất hóa học gây biến đổi nội tiết ERRα : Estogen related receptor alpha - thụ thể alpha liên quan đến estrogen Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 ERRγ : Estogen related receptor gamma - thụ thể dạng gamma liên quan đến estrogen ERRs: Estogen related receptors - thụ thể liên quan đến estrogen NTP: National Toxicology Program- Chương trình độc học quốc gia OECD: Organization for Economic Co-operation and Development -Tổ chức Hợp tác Kinh tế Phát triển PAS : Periodic acid-Schiff - phương pháp nhuộm acid PPARγ : Peroxisome proliferator-activated receptor alpha - thụ thể hoạt hóa tiền peroxisome dạng gamma TBTO: bis (tri-n-butylin) oxide US-EPA: U.S Environmental Protection Agency Cục Bảo vệ Môi sinh Hoa Kỳ Y ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU Các thí nghiệm với cá sọc ngựa nghiên cứu thuộc đề tài C2017-20-35 Đại học Quốc gia TP.HCM Đề tài chấp thuận đạo đức nghiên cứu y sinh học, chứng nhận Viện nghiên cứu hệ gene, số 4-2019/NCHG-HĐĐĐ XUNG ĐỘT LỢI ÍCH Các tác giả khơng có xung đột lợi ích 10 11 12 13 ĐĨNG GĨP CỦA CÁC TÁC GIẢ Ngơ Thị Mai, Đồn Thị Phương Thảo, Võ Thị Ngọc Diễm Nguyễn Thành Công người thực thí nghiệm, thu thập xử lý liệu thu Lê Phi Nga Ngơ Thị Mai đóng góp việc viết chỉnh sửa thảo LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu tài trợ từ đề tài C2017-20-35 Đại học Quốc gia TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO Reif DM, Judson RS, Richard AM, Knudsen TB, Dix DJ, Kavlock RJ, et al Endocrine profiling and prioritization of environmental chemicals using ToxCast data Environmental Health Perspectives 2010;118(12):1714–20 Available from: DOI: 10.1289/ehp.1002180 Corrales J, Kristofco LA, Steele WZ, Yates BS, Breed CS, Williams ES, et al Global Assessment of Bisphenol A in the Environment: Review and Analysis of Its Occurrence and Bioaccumulation Dose Response 2015;13(3):1–25 Available from: DOI:10.1177/1559325815598308 Le TMT, Nguyen PD, Dinh QT, Ngo HH, Do HLC Presence of e-EDCs in surface water and effluents of pollution sources in Sai Gon and Dong Nai river basin Sustainable Environmental Research 2016;26(1):20–27 Available from: DOI:10.1016/ j.serj.2015.09.001 Calafat AM, Kuklenyik Z, Reidy JA, Caudill SP, Ekong J, Needham LL Urinary Concentrations of Bisphenol A and 4Nonylphenol in a Human Reference Population Environmental Health Perspectives 2005;113(4):391–396 Available from: DOI:10.1289/ehp.7534 Rubin BS, Murray MK, Damassa DA, King JC, Soto AM Perinatal exposure to low doses of bisphenol A affects body weight, 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 patterns of estrous cyclicity, and plasma LH levels Environmenatl Health Perspectives 2001;109(7):675–80 Available from: DOI:10.1289/ehp.01109675 Zhang W, Xiong B, Sun WF, An S, Lin KF, Gou MJ, et al Acute and chronic toxic effects of bisphenol A on Chlorella pyrenoidosa and Scenedesmus obliquus Environmental Toxicology 2014;29(6):714–22 Available from: DOI:10.1002/tox.21806 Mihaich EM, Friederich U, Caspers N, Hall AT, Klecka GM, Dimond SS, et al Acute and chronic toxicity testing of bisphenol A with aquatic invertebrates and plants Ecotoxicology and Environmental Safety 2009;72(5):1392–1401 Available from: DOI:10.1016/j.ecoenv.2009.02.005 Mu X, Huang Y, Lei Y, Teng M, Li X, Wang C, et al Developmental effects and estrogenicity of bisphenol A alternatives in a zebrafish embryo model Environmental Science & Technology 2018;52(5):3222–31 Available from: 10.1021/acs.est.7b06255 Moreman J, Lee O, Trznadel M, David A, Kudoh T, Tyler CR Acute toxicity, teratogenic, and estrogenic effects of bisphenol A and its alternative replacements bisphenol S, bisphenol F, and bisphenol AF in zebrafish embryo-larvae Environmental Science & Technology 2017;51(21):12796–805 Available from: 10.1021/acs.est.7b03283 Wester PW, Canton JH Histopathological study of Poecilia reticulata (guppy) after long-term exposure to bis(trin-butyltin)oxide (TBTO) and di-n-butyltindichloride (DBTC) Aquatic Toxicology 1978;10(2-3):143–65 Available from: DOI:10.1016/0166-445X(87)90020-8 OECD TG No 234: Fish Sexual Development Test Guideline for the testing of chemicals; 2011 Belfroid A, Velzen MV, Horst BVD, Vethaak D Occurrence of bisphenol A in surface water and uptake in fish: evaluation of field measurements Chemospheres 2002;49(1):97–103 Ngo TM, Do HLC, Chi, Le PN A proteomic analysis to assess the effects of chronic exposure of bisphenol A to adult zebrafish (Danio rerio) Tạp Chí Sinh học 2017;39(3):333–374 Available from: DOI:10.15625/0866-7160/v39n3.98995 Dorn PB, Chou CS, Gentempo JJ Degradation of Bisphenol A in natural waters Chemosphere 1978;16(7):1501–07 Available from: DOI:10.1016/0045-6535(87)90090-7 Matthews M, Varga ZM Anesthesia and Euthanasia in Zebrafish ILAR Journal 2012;53(2):192–204 Available from: DOI:10.1093/ilar.53.2.192 Bộ Y tế Hướng dẫn qui trình kỹ thuật chuyên ngành giải phẫu bệnh, tế bào học NXB Y học; 2016: 248-250 Novelli ELB, Diniz YS, Galhardi CM, Ebaid GMX, Rodrigues HG, Mani F, et al Anthropometrical parameters and markers of obesity in rats Laboratory Animals 2007;41:111–120 Brown ME Assessing body condition in birds In: Nolan V, Kittlerson ED, editors Current Ornithology New York: Plenum Press; 1996 p 67–135 Berry KH, Christopher MM Guidelines for the field evaluation of desert tortoise health and disease Journal of Wildlife Diseases 2001;37:427–50 Wolf JC, Wolfe MJ A brief overview of nonneoplastic hepatic toxicity in fish Toxicologic Pathology 2005;33(1):75–85 Available from: DOI:10.1080/01926230590890187 Lindholst C, Wynne PM, Marriott P, Pedersen SN, Bjerregaard P Metabolism of bisphenol A in zebrafish (Danio rerio) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in relation to estrogenic response Compartive Biochemistry and Physiology - Part C: Toxicology and Pharmacology 2003;135(2):169–77 Lindholst C, Pedersen SN, Bjerregaard P Uptake, metabolism and excretion of bisphenol A in the rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) Aquatic Toxicology 2001;55(1-2):75–84 Rubin BS, Soto AM Bisphenol A: Perinatal exposure and body weight Molecular Cell Endocrinology 2009;304(1-2):55–62 Available from: DOI:10.1016/j.mce.2009.02.023 Keiter S, Baumann L, Frber H, Holbech H, Skutlarek D, Engwall M, et al Long-term effects of a binary mixture of perfluorooctane sulfonate (PFOS) and bisphenol A (BPA) in zebrafish (Danio rerio) Aquatic Toxicology 2012;118-119:116– 29 Available from: DOI:10.1016/j.aquatox.2012.04.003 43 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Trái Đất Môi trường, 3(1):37-45 25 Moon MK, Kim MJ, Jung IK, Koo YD, Ann HY, Lee KJ, et al Bisphenol A Impairs Mitochondrial Function in the Liver at Doses below the No Observed Adverse Effect Level Journal of Korean Medical Science 2012;27(6):644–52 26 Boorman GA, Botts S, Bunton TE, Fournie JW, Harshbarger JC, Hawkins WE, et al Diagnostic criteria for degenerative, inflammatory, proliferative nonneoplastic and neoplastic liver lesions in medaka (Oryzias latipes): consensus of a National Toxicology Program Pathology Working Group Toxicologic Pathollogy 1997;25(2):202–10 Available from: DOI:10.1177/ 019262339702500210 27 Roberts RJ, Ellis AE The anatomy and physiology of teleosts Fish Pathology, 3th Editiion; 2001: 12–54 28 Menke AL, Spitsbergen JM, Wolterbeek AP, Woutersen RA Normal anatomy and histology of the adult zebrafish Toxicologic Pathology 2011;39(5):759–75 Available from: DOI: 10.1177/0192623311409597 44 29 Ferguson HW Systemic Pathology of Fish: A Text and Atlas of Comparative Tissue Responses in Diseases of Teleosts.1st Edition: Iowa State; 1989 30 Bindhumol V, Chitra KC, Mathur PP Bisphenol A induces reactive oxygen species generation in the liver of male rats Toxicology 2003;188(2-3):117–41 31 Wester PW, Brandhof EVD, Vos JH, Ven LVD Histopathological study of Poecilia reticulata (guppy) after long-term exposure to bis(tri-n-butyltin)oxide (TBTO) and di-n-butyltindichloride (DBTC) Aquatic Toxicology 1978;10(2-3):143–65 RIVM report Available from: 10.1016/0166-445X(87)90020-8 32 Jayashree S, Indumathi D, Akilavalli N, Sathish S, Selvaraj J, Balasubramanian K Effect of Bisphenol-A on insulin signal transduction and glucose oxidation in liver of adult male albino rat Environmental Toxicology and Pharmacology 2013;35(2):300–310 Available from: DOI:10.1016/j.etap.2012 12.016 Science & Technology Development Journal – Science of The Earth & Environment, 3(1):37-45 Chronic efffects of bisphenol an exposure on zebrafish (Danio rerio) at juvenile state Ngo Thi Mai1 , Doan Thi Phuong Thao2 , Vo Thi Ngoc Diem2 , Nguyen Thanh Cong3 , Le Phi Nga4,* ABSTRACT Faculty of Biology and Biotechnology, University of Sience, VNU-HCM Introduction: Bisphenol A (BPA) is an endocrine disrupting chemical, therefore some countries have banned the use of it in plastic containers for food storage and plastic toys for children BPA can be found in natural waters with measured concentrations varying from ng/l to µ g/l However, in fact that the chronic ecotoxicology data obtained from aquatic animals for BPA exposure at these levels are quite few Methods: In this study zebrafish at 30 days of age were exposed to four variants 0, 1, 10 and 100 μg/l BPA along 60 days, which is the fasted growth period in zebrafish (Juvenile stage) At the end of the experiments, all fish weight and length were measured and their fresh livers were used for histological assessment Results: The results showed that weight and length of fish in 100 µ g/l BPA group increased significantly as compared with that in the other experimental groups Also only in this group, changes in hepatic morphology such as vacuolar number and size increasement, cytoplasmicand/or nuclear enlargement, glycogen reduction, lipid enhancement, were observed, but especially no significant inflammation Fish in the other groups exposed to BPA concentrations 99%) Sigma Aldrich Ethanol tinh khiết (>99%) dùng làm dung mơi h a tan BPA Đánh giá ảnh hưởng mãn tính phơi nhiễm BPA lên tăng trưởng Điều kiện thí nghiệm phơi nhiễm mãn tính với BPA tuân thủ... tiết tố mà giai đoạn tăng trưởng Juvenile vai trò nội tiết tố tăng trưởng quan trọng Nghiên cứu cho thấy phơi nhiễm BPA gây ảnh hưởng lên tăng trưởng phụ thuộc nồng độ BPA Phơi nhiễm BPA 100 μg/L