BỘ Y TẾ KỸ THUẬT Cơ BẢN VÀ ĐẢM BẢO CHẤT LƯỢNG ■ TRONG XÉT NGHIÊM VI SINH Y HOC SÁCH ĐÀO TẠO cử NHÂN KỸ THUẬT Y HỌC CHUYÊN NGÀNH XÉT NGHIỆM Mã số: ĐK.01.Z.01 Chủ biên: PGS.TS Đinh Hữu Dung NHÀ XUẤT BẢN Y HỌC HÀ NÔI - 2008 CHỈ ĐẠO BIÊN SOẠN: Vụ Khoa học Đào tạo, Bộ Y tế CHỦ BIÊN: P G S TS Đ inh Hữu D ung NHỮNG NGƯỜI BIÊN SOẠN: PG S TS Đ inh Hữu Dung PG S.TS Bùi K hắc Hậu PG S.TS Lê H ồng Hinh P G S.TS Lẽ V ăn P hủng PG S.TS N guyễn Thị Tuyến P G S.TS N guyễn Thị V inh THƯ Kí BIÊN SOẠN: P G S TS N guyễn Thị Vinh TỔ CHỨC BẢN THẢO: ThS Phí Vân Thãm TS N guyễn M ạnh Pha © B ả n quyền thuộc Bộ Y t ế (Vụ Khoa học Đào tạo) LỜI GIỚI THIỆU • Thực số điều Luật Giáo dục, Bộ Giáo dục & Đào tạo Bộ Y tê ban hành chương trình khung đào tạo c nhân kỹ thuật y học Bộ Y tê tô chức biên soạn tài liệu dạy - học môn học chuyên môn, chuyên ngành theo chương trình nhằm bước xây dựng tài liệu dạy - học chuẩn chuyên môn để đảm bảo chất lượng đào tạo nhân lực y tế Sách “/íỹ thu ật đảm háo chất ỉượng xét nghiệm vi sin h y h ọc” biên soạn dựa vào chương trình giáo dục dại học Trường Đại học Y Hà Nội sở chương trình khung phê duyệt Sách biên soạn theo phương châm: kiến thức cđ bản, hệ thống; nội dung xác, khoa học, cập nhật tiến khoa học, kỹ thuật đại thực tiễn Việt Nam Sách "'Kỹ thuật đ ảm bảo chất lượng xét nghiệm vi sin h y học" biên soạn bơi nhà giáo giàu kinh nghiệm tâm huyết Bộ môn Vi sinh vật, Trường Đại học Y Hà Nội Sách “Kỹ th u ật hán va d a m báo ch ất lượng xét nghiệm vi sinh y học" Hội đồng chuyên môn Bộ Y tế thẩm định năm 2008 Bộ Y tế ban hành tài liệu đạt chuẩn chuyên môn đê sử dụng cho ngành giai đoạn nav- Trong trình sử dụng, sách phải chỉnh lý, bổ sung cập nhật Bộ Y tế xin chân thành cảm ơn chuyên gia Trường Đại học Y Hà Nội dành nhiều công sức biên soạn cuô'n sách, c ả m ơn TS Phạm Hùng Vân PGS.TS.Vũ Đình Chính đọc phản biện đê cn sách sớm hồn thành kịp thrii p h ụ r Vì } oho côn g t r đàn t o n h â n lực y tê, Vì lần đầu xuất bản, chúng tơi mong nhận ý kiến đóng góp đồng aghiệp, bạn sinh viên độc giả để lần xuất sau sách hoàn thiên VỤ KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO BÒ Y TẾ LỜI NÓI ĐẦU Năm học 2000 - 0 Trường Đại học Y Hà Nội bắt đầu đào tạo cử nhân Kỹ thuật Y học, chuyên ngành Xét nghiệm Y học Trong chương trình đào tạo đối tượng này, kỹ thuật xét nghiệm đám bảo chất lượng xét nghiệm cấu trúc thành hai học phần riêng biệt, mơn Vi sinh vật tham gia giảng dạy số học trình Những năm qua tài liệu dạy-học Vi sinh hai học phần nàv tài liệu phát tay Cn giáo trình “Kv thu ật hán ưà đ ảm hảo ch ấ t lượng xét nghiệm vi sinh y học" biên soạn nhàm khắc phục tình trạng Nội dung sách bao gồm kỹ thuật nội dung thiết yếu đảm bảo chất lưỢng mà người làm việc phòng xét nghiệm Vi sinh y học phải thực được, cn sách tài liệu tham khảo tôt cho học viên sau đại học chuyên ngành Vi sinh đồng nghiệp trẻ làm việc phòng xét nghiệm Vi sinh Mục tiêu học tập thường bao gồm nội dung: lý thuyết thực hành kỹ thực hành Với tài liệu sinh viên tự học tích cực đạt mục tiêu "lý thuyết thực hành”, “kỹ thực hành” đạt sau thực tập phòng xét nghiệm Đây tài liệu dạy học thức biên soạn iần nên chắn cịn có thiếu sót, mong sinh viên, học viên các' bạn đồng nghiệp phat để giáo trình sửa chữa, bổ sung lần in sau T h a y m ặ t c c t c giả Chủ biên PGS.TS ĐINH HỮU DUNG MỤC LỤC Lịi nói dáu lỉài Qui dịnh làm việc phòng xét nghiệm vi sinh Nguyễn Thị Vinh Bài Sử dụng báo quản kính hiến 13 VI B ùi K h ắc H ậu Bài Xử lý dụng cụ thuỷ tinh nhiễm vi sinh vật 19 Nguyễn Thị Vinh Bài Các biện pháp tiệt trùng khu trùng 23 Lê H ồng Hinh F3ài Kỹ thuật pha sô dung dịch nhuộm dung dịchthử - phát tính chất sinh vật hố học thường dùng xét nghiệm vi sinh 31 Nguyễn Thị Tuyến 40 Bài Điều chế môi trường nuôi cấy vi khuán Nguyễn T hị Tuyến 47 Bài Thao tác vô trùng Đinh Hữu Dung 53 Bài Cấy vi khuẩn vào loại môi trường Đinh Hữu Dung Băi Pha huyền dịch cấy đếm VI 57 khuẩn Nguyễn Thị Vinh 60 Bài 10, L â y , xử lý v ả bảo q u ả n h u y ê t t ii h Lê Văn Phủng 62 lỉài 11 Lấy máu thó Lê Văn P hủng 65 Bài 12 Tiêm truyền súc vật thí nghiệm L ê Văn P húng Bài 13 Những khái niệm đám bảo chất lượng xét nghiệm vi sinh 68 Đ ính Hữu Dung Bài 14 Đảm bảo chất lượng xét nghiệm vi sinh: giám sát chất lượng - nội kiếm (Internal Quality Control) Tài liệu tham khảo 77 90 Bài QUI ĐỊNH VỀ LÀM VIỆC TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM VI SINH — - MỤC TIÊU — ^ ^ Trình bầy thực qui địhh làm việc ỉabo vỉ sình Trình bày thực biện pháp khử trụng chỗ làm việc x lý chất thải Trình bày biện pháp phịng ngừq x trí đ t^ c sọ tai nạn có thề xảy labo vỉ ửnh “ a - - m ^ m ^ ^ - ■ ' ■ ■i MỞ ĐẨU Phòng xét nghiệm (labo) Vi sinh sở y t ế cần phải thực cơng việc chẩn đốn trực tiếp chẩn đoán gián tiếp giúp bác sĩ lâm sàng điều trị bệnh nhiễm trùng phục vụ công tác dự phịng Tuỳ theo khả qui mơ sở (bệnh viện) mà labo phải có trang thiết bị cần thiết Tuy vậy, người ln đóng vai trị chủ chốt nên labo cần phải cồ đội ng ũ oán cỉvtdc đào t o m x é t n g h i ệ m vi BÌnh Làm việc labo Vi sinh làm việc với vi sinh vật gây bệnh nên ln có nguy bị nhiễm trùng khơng cho thân ngưồi làm xét nghiệm mà cho người mơi trường xung quanh Vì vậy, nhân viên labo phải tuân thủ đầy đủ qui định làm việc vối vi sinh vật gây bệnh, mà phải hiểu biết nguy ứế thực nghiêm biện pháp phòng ngừa tai nạn nghề nghiệp NHỪNG QUI ĐỊNH Đ Ề phòng N H IỂ M trùng Nhân viên làm việc vói vi sinh vật gây bệnh phải học cách làm việc thận trọng vói vi sinh vật gây bệnh, đặc biệt thao tác vô trùng Đê để phòng nhiễm trùng, làm việc labo vi sinh nhân viên phải thực nghiêm túc qui định sau đây: Không ăn, uô'ng, hút thuốc labo Phải mặc áo chồng (khơng mặc áo choàng khu vực làm việc); tiếp xúc với bệnh phẩm vi sinh vật gây bệnh phải mang găng tay Thận trọng sử dụng pipet/ơng hút (khơng hút bàng miệng huyểii dịch có vi sinh vật gây bệnh) Thận trọng không để bắn giọt nhỏ khơng khí: lắc dung dịch có vi sinh vật gây bệnh ly tâm phải đậy nắp kín, khơng niớ nắp máy chưa dừng hẳn Thực công việc xét nghiệm xong phải rửa tay kỹ xà phòng khử trùng bàn tay Khử trùng thường xuyên bàn, phòng làm việc Trên bàn để dụng cụ hàng ngày sử dụng, không đê dụng cụ dự trữ (dụng cụ, hoá chất lưu trữ phải để tủ kho riêng) Các nhân viên labo cần phải kiểm tra sức khoẻ định kỳ Với sơ vi sinh vật có vaccin phịng bệnh họ cần tiêm chủng kiểm tra hiệvi đáp ứng miễn dịch, ví dụ vaccin phịng bệnh virus viêm gan B KHỬ TRÙNG CHỎ LÀM VIỆC VÀ x LÝ CHẢT THẢI Nhân viên labo phải có thói quen khử trùng bàn tay thực xong công việc tiếp xúc với đồ vật chứa vi sinh vật gây bệnh Phịng làm việc phải ln giữ sẽ, chông lây nhiễm bàng cách: Lau chùi bàn làm việc, sàn nhà bàng chất sát khuẩn Dụng cụ nhiễm VI sinh vật chất thải có tác nhân gây bệnh phái đưrto tập trung thùng chứa riêng biệt, có nắp đậy kín phải đưỢc tiệt trùng hàng ngày (bằng lò hấp dung dịch kiềm hay acid đặc) Kim tiêm dùng lần, sau dùng xong phải cho vào lọ/hộp chứa chuyên biệt tiệt trùng hàng ngày; hộp chứa phải có thành dày khơng bị kim đâm thủng, miệng rộng & có nắp đậy; thận trọng tránh kim đâm vào tay Sau tiệt trùng, dụng cụ sử dụng chất thải khơng cịn khả gây nhiễm cho mơi trường Thiết bị (ví dụ tủ ấm, máy ly tâm, ) nhiễm vi sinh vật gây bệnh (ví dụ đổ/vỡ ống nghiệm) phải khử trùng chất sát khuẩn Nếu có sử dụng súc vật thí nghiệm, phải tuyệt đối đảm bảo vệ sinh mơi trường khử trùng chất thải trước cho vào hệ thông nước thải chung Khi súc vật chết, đốt cháy tiệt trùng, xác phải chôn hố sâu chất sát khuẩn (vôi bột bột cloramin) cách xa nguồn nước (sông, ao, hồ) 10 DẾ PHÒNG VÀ X Ử T R Í MỘT s ố TAI NẠN HAY GẬP Tuy làm việc thận trọng, song sơ tai nạn xảy labo Chúng ta phải biết trước đế thực nghiêm chỉnh biện pháp phòng ngừa có xảy biết cách xử trí kịp thịi 3.1 Tủ t h u c câ'p cứu Tủ thuôc cấp cứu bao gồm sô thuôc sau; - Nước cất vô trùng (hoặc dung dịch hydragyrum oxycyanatum 0,1% đựng chai nâu) đê rửa mắt - Vaselin 0,1% oxycyanat để nhỏ mắt, mũi bôi môi - Dung dịch iod, lugol đê bôi da bị thương - Dung dịch 0,5Ỹ/o KMnO^ đê xúc miệng, rửa vết thương 3.2 Một s ố tổ n t h n g , t a i n n biện p h p p h ò n g n gừa, x trí Một sơ tốn thương tai nạn thường gặp biện pháp phòng ngừa xử trí tổng hỢp bảng 1.1 B ảng 1.1 Một sỏ' tổn thương, tai nạn thường gặp biện pháp phịng ngừa, xử trí Loại tổ n thương Xử trí Biện pháp phịng ngừa Tốn thương học hoá chất Mắt Do dụng cụ thuỷ tinh vỡ, dung dịch t)oá chất hoăc chất sát khuẩn oó nống độ cao bắn vào mắt Đeo kính Nhanh chóng rửa kỹ nước bạch chuyển khárn chuyên khoa Mũi Do chất sát khuẩn, dung dịch kiềm acid Đeo trang Bôi vaselin oxycyanat - Do mảnh thuỷ tinh vỡ Thận trọng - Xử lý vết thương - Do kim tiêm dụng cụ kim loại sắc nhọn khác Thận trọng - Bóp (hút) cho máu chảy; rửa nước sạch; bơi cồn (iod hoăc betadin) - Bỏng Thận trọng - Cho nước lạnh chảy qua (khoảng 10 phút) sau bơi mỡ chống bỏng Da 11 Bảng 1.1 (Tiếp) Nhiễm vi sinh vật Tổn thương ngồi da có nguy bị nhiễm trùng Thận trọng - Xử lý vết thương (+ thuốc sát khuẩn) Vi khuẩn gảy bệnh vào miệng Không hút pipet miệng - Không nuốt: xúc miệng kỹ (nếu có thể, nước có chất sát khuẩn) Viêm gan truyền nhiễm - Đi găng tay - Khử trùng bàn tay Thận trọng khòng để kim tiêm đâm - Báo cáo lãnh đạo labo để có biện pháp thích hợp cần thiết - Tiêm phòng HIV/AIDS Loại tai nạn - Đi gàng tay - Khử trùng bàn tay Thận trọng không để kim tiêm đảm - Báo cáo lãnh đạo labo để có biện pháp thích hợp cần thiết Biện pháp phòng ngừa Cháy Đèn cổn, bếp điện, bếp ga Nổ lị hấp sẵn sàng bình cứu hoả, số điện thoại cấp cứu - Kiểm tra kỹ thuật định kỳ - Thực nghiêm chỉnh qui trình vận hành, Tự LƯỢNG GIÁ Vì ngưịi làm việc labo vi sinh phải tuân thủ đầy đủ qui định đề ra? Nêu qui định đề phịng nhiễm trùng Phải làm để giữ cho mơi trưịng labo khơng bị nhiễm trùng? Phải làm để labo vi sinh khơng gây nhiễm mơi trường bên ngồi? Liệt kê tai nạn xảy labo vi sinh cho biết cách xử trí tai nạn 12 - Cách pha bảo quản: Thực đối vối dung dịch thử Kovacs (xem mục 5.1) KỶ THUẬT PHA DUNG DỊCH THỬ - PHÁT HIỆN NITRIT Mục đích: phát sơ vi khn có khả chuyển hố nitrat thành nitrit Nếu có, nitrit kết hỢp vối thuôc thử tạo sản phẩm màu đỏ - Công thức: Dung d ịch A: + Acid sulfanilic 8g + Acid acetic 5M lOOOml Dung d ịch B : + - naphthvlamin + Acid acetic 5M 5g lOOOml Khi thử, trộn dung dịch A B - Bảo quản: Dung dịch bảo quản nhiệt độ 4-22° c , sử dụng vịng năm PHA DUNG DỊCH THỬNGHIỆM Đ ỏ METHYL VÀ VP (VOGES-PROSKAUER) Thử nghiệm đỏ methyl VP kiểm tra có mặt sản phẩm lên men đường glucose sinh acid chuyển hố đưịng tạo acetylmethylcarbinol (acetoin) - Cơng thức dung dịch thử đỏ methyl: + Bacto methyl red 0,lg + Cồn ethanol 95% 300ml Trộn đểu bố sung thêm nước cất vừa đủ 500ml Giữ chai nâu Khi thử nghiệm: cho 0,5ml thuôc thử vào ống canh thang nuôi cấy vi khuẩn 2,5ml; thị màu chuyển đỏ dương tính (tạo acid vói pH < 6,0), chuyến màu vàng âm tính (pH > 6,0) - Công thức dung dịch thử VP (Voges-Proskauer): Dung d ịch A: + a - naphthol + Cồn ethanol tuyệt đơl 5g lOOml Hồ tan a - naphthol cồn; cho vào ống đong, rót cồn vừa đủ lOOml Cất chai nâu, tủ lạnh 38 Dung d ịch B: + Hydroxyd kali (KOH) 40g + Nước cất lOOml Cân KOH nhanh; cho vào bình nước (