Hoàn thiện quy trình nhân dòng vô tính cây cỏ thi hắt hơi (achillea ptarmica) bằng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN PHAN THỊ TRANG HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH CỎ THI HẮT HƠI (ACHILLEA PTARMICA) BẰNG KĨ THUẬT NI CẤY MƠ TẾ BÀO THỰC VẬT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học Ngƣời hƣớng dẫn khoa học ThS PHẠM PHƢƠNG THU Hà Nội, 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: ThS Phạm Phƣơng Thu, Khoa Sinh - KTNN, trƣờng Ďại học Sƣ phạm Hà Nội ngƣời Ďã trực tiếp hƣớng dẫn, bảo tận tình, tạo Ďiều kiện thuận lợi suốt q trình tơi thực Ďề tài hồn thành khóa luận Ban giám hiệu trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 2, Ban chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN Ďã tạo Ďiều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nhƣ thực Ďề tài Ngoài ra, Ďể hồn thành Ďề tài tơi Ďã nhận Ďƣợc bảo kiến thức chuyên ngành nhƣ phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm từ tập thể cán Phòng thí nghiệm sinh lí thực vật, khoa Sinh KTNN, trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội Tôi xin Ďƣợc cảm ơn giúp Ďỡ q báu Ďó Cuối tơi xin cảm ơn gia Ďình, bạn bè Ďã Ďộng viên tơi giúp tơi vƣợt qua khó khăn Ďể hồn thành Ďƣợc Ďề tài Hà Nội, ngày… tháng….năm 2018 Sinh viên thực PHAN THỊ TRANG LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam Ďoan Ďây cơng trình nghiên cứu riêng ThS Phạm Phƣơng Thu hƣớng dẫn không trùng lặp với kết tác giả khác Hà Nội, ngày… tháng….năm 2018 Sinh viên thực PHAN THỊ TRANG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MS : Murashige Skoog BAP : - Benzul amino purin NAA :  - Napthlacetic acid Nxb : Nhà xuất TPHCM : Thành Phố Hồ Chí Minh KH&CN : Khoa Học Công Nghệ NPK : Nitơ, Photpho, Kali ĐHST : Điều hòa sinh trƣởng CT : Cơng thức ĐC : Đối Chứng MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn Ďề tài Mục Ďích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn NỘI DUNG CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung chi Achillea 1.2 Giới thiệu Cỏ thi hắt 1.2.1 Mô tả 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Phân bố 1.1.4 Đặc Ďiểm hình thái 1.1.5 Điều kiện sinh thái 1.3 Tình hình nghiên cứu ni cấy mơ tế bào thực vật giới Việt Nam CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.2 Địa Ďiểm tiến hành nghiên cứu 2.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 2.3.1 Thiết bị 2.3.2 Dụng cụ 2.4 Môi trƣờng nghiên cứu chất Ďiều hòa sinh trƣởng thực vật 2.5 Điều kiện nuôi cấy 10 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 10 2.6.1 Tạo vật liệu in vitro từ hạt hoa Cỏ thi hắt 10 2.6.2 Nhân nhanh chồi in vitro 11 2.6.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh 12 2.6.4 Rèn luyện Cỏ thi hắt in vitro thích nghi với mơi trƣờng tự nhiên 13 2.7 Phƣơng pháp phân tích thống kê số liệu thực nghiệm 13 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 3.1 Tạo vật liệu khởi Ďầu 15 3.2 Nhân nhanh chồi in vitro 17 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP lên khả nhân nhanh chồi Cỏ thi hắt 17 3.2.2 Ảnh hƣởng nƣớc dừa lên khả nhân nhanh chồi Cỏ thi hắt 20 3.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh 22 3.4 Rèn luyện Cỏ thi hắt in vitro thích nghi với môi trƣờng tự nhiên 24 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Các cơng thức thí nghiệm xác Ďịnh hiệu chất khử trùng 11 Bảng 2.2: Công thức ảnh hƣởng BAP lên trình nhân nhanh 12 Bảng 2.3: Cơng thức ảnh hƣởng nƣớc dừa lên trình nhân nhanh chồi in vitro 12 Bảng 2.4: Công thức ảnh hƣởng NAA Ďến tạo rễ Cỏ thi hắt in vitro 13 Bảng 2.5: Công thức ảnh hƣởng giá thể Ďến tỷ lệ sống Cỏ thi hắt 13 Bảng 3.1: Tỷ lệ nảy mầm hạt Cỏ thi hắt môi trƣờng MSo sau tuần 15 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng BAP lên khả nhân nhanh chồi in vitro sau tuần 18 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng nƣớc dừa lên khả nhân nhanh chồi in vitro sau tuần 20 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng α-NAA Ďến khả rễ chồi tạo in vitro hoàn chỉnh sau tuần 22 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng giá thể Ďến tỷ lệ sống Cỏ thi hắt sau tuần 25 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cỏ thi hắt – Achillea ptarmica (nguồn internet) Hình 3.1: Vật liệu khởi Ďầu 17 Hình 3.2: Ảnh hƣởng BAP Ďến khả nhân nhanh chồi in vitro 19 Hình 3.3: Ảnh hƣởng nƣớc dừa Ďến khả nhân nhanh chồi in vitro 21 Hình 3.4: Ảnh hƣởng NAA Ďến khả tạo rễ chồi in vitro 23 Hình 3.5: Một số hình ảnh rèn luyện 27 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Ngày nay, Ďời sống ngƣời Ďƣợc nâng lên nhu cầu chơi hoa, cảnh ngày lớn Hoa tƣơi Ďã trở thành loại sản phẩm mang giá trị kinh tế cao chiếm vị trí Ďặc biệt thị trƣờng sản phẩm hàng hóa nơng nghiệp giới Hiện Việt Nam, cấu trồng nông nghiệp chuyển Ďổi nhanh chóng sang cấu thị trƣờng theo hƣớng phát triển trồng xuất hoa cảnh, Ďây hƣớng Ďi mang lại lợi ích kinh tế cao Trong loại hoa cắt cành hoa cúc loài hoa Ďƣợc ƣa chuộng trồng phổ biến nƣớc ta Ďứng sau hoa hồng [20] Hoa cúc không Ďem lại giá trị Ďời sống tinh thần mà Ďem lại hiệu kinh tế cao cho ngƣời trồng Hoa cúc có nhiều loại với nhiều màu sắc khác nhau, cúc trắng, cúc Ďỏ, cúc tím, cúc vàng,… Là loại trồng Ďa dạng loài, màu sắc, dễ trồng, dễ sản xuất, dễ vận chuyển tiêu thụ nên Ďƣợc nhiều nhà vƣờn lựa chọn Ďƣa vào sản xuất Cây Cỏ thi hắt có tên khoa học Achillea ptarmica thuộc chi Achillea, họ Cúc [27] Cây có chùm hoa màu trắng rực rỡ với vẻ Ďẹp mong manh, quyến rũ, Ďƣợc trồng chậu, vƣờn làm cảnh, làm hoa cắt cành Ďể bàn, trang trí dâu làm hoa cƣới Ngoài tác dụng làm cảnh, trang trí, có tác dụng khác: “lá ăn sống nấu chín dùng làm thuốc chống trùng, ngồi Achillea ptarmica mang lại loại tinh dầu Ďƣợc sử dụng dƣợc liệu thảo dƣợc” [30] Cỏ thi hắt Ďƣợc nhân giống hạt, nhiên phƣơng pháp truyền thống thƣờng tốn nhiều thời gian hiệu không cao Trong Ďó nhân giống phƣơng pháp ni cấy mô tế bào (in vitro) cho hiệu cao hẳn Đây phƣơng pháp kỹ thuật khoa học nhằm tạo giống bệnh với số lƣợng lớn thời gian ngắn Ďiều kiện vô trùng tiền Ďề quan trọng Ďể góp phần bảo tồn nguồn gen Từ lí chúng tơi Ďịnh tiến hành Ďề tài “Hồn thiện quy trình nhân dòng vơ tính Cỏ thi hắt (Achillea ptarmica) kĩ thuật nuôi cấy mơ tế bào thực vật” Mục đích nghiên cứu - Thăm dò mơi trƣờng ni cấy thích hợp cho nhân giống Cỏ thi hắt - Đƣa sở cho việc xác Ďịnh quy trình nhân giống in vitro Cỏ thi hắt nhằm tạo sở cung cấp giống cho trình sản xuất Nội dung nghiên cứu - Tạo vật liệu in vitro từ hạt Cỏ thi hắt - Ảnh hƣởng BAP Ďến khả nhân nhanh chồi Cỏ thi hắt nhân giống invitro - Ảnh hƣởng nƣớc dừa Ďến khả tạo chồi Cỏ thi hắt nhân giống invitro - Ảnh hƣởng NAA Ďến khả tạo rễ invitro Cỏ thi hắt - Công thức giá thể tối ƣu phù hợp với Triệu chuông in vitro giai Ďoạn vƣờn ƣơm Ý nghĩa khoa học thực tiễn Ý nghĩa khoa học: Cung cấp dẫn liệu khoa học nuôi cấy in vitro Cỏ thi hắt (A.Ptarmica) phục vụ cho nghiên cứu sau Ý nghĩa thực tiễn: Hồn thiện quy trình nhân giống in vitro Cỏ thi hắt (A.Ptarmica), góp phần sản xuất giống có hiệu cao, chất lƣợng tốt C D Hình 3.2: Ảnh hưởng BA đến khả nh n nhanh chồi in vitro A BAP 0,1 mg/l B BAP 0.3 mg/l C BAP 0.5 mg/l D BAP 0,7 mg/l Phân tích bảng 3.2 cho thấy sau tuần ni cấy có chênh lệch hệ số nhân chồi môi trƣờng thăm dò Đặc biệt tiêu số lƣợng chồi phụ thuộc nhiều vào nồng Ďộ BAP môi trƣờng nuôi cấy Cụ thể, tăng dần nồng Ďộ BAP từ 0,1- 0,7 mg/l, hệ số nhân nhanh chồi tỷ lệ thuận, tƣơng ứng tăng dần từ 3,4 – 24,4 lần Tuy nhiên, tăng nồng Ďộ BAP lên 0,9 mg/l hệ số nhân chồi giảm mạnh (11,3 lần) Nhƣ mơi trƣờng MS có bổ sung 0,5mg/l BAP cơng thức thích hợp, cho hệ số nhân nhanh chồi cao (24,4 lần) với chất lƣợng chồi tốt (chồi mập, thân xanh Ďồng Ďều) (bảng 3.2) Trƣớc Ďó, số nghiên cứu Ďã ghi nhận ảnh hƣởng chất Ďiều tiết sinh trƣởng Ďến khả nhân nhanh chồi loài Achillea spp Năm 2010, Danial cộng Ďã nghiên cứu ảnh hƣởng BAP Ďến khả nảy chồi A biebersteinii [18] Nhóm tác giả Ďã nhận thấy tăng nồng Ďộ BAP lên mức Ďịnh gây tác Ďộng kìm hãm nảy chồi từ mẫu A biebersteinii Điều Ďƣợc ghi nhận tƣơng tự nghiên cứu 19 Khi dần tăng nồng Ďộ BAP lên 0,9 mg/l hệ số nhân chồi giảm xuống Điều Ďƣợc giải thích tỷ lệ cytokinin s n có tế bào BAP bổ sung Nếu nồng Ďộ cytokinin nội môi cao, tỷ lệ chồi không bị ảnh hƣởng, hàm lƣợng BAP Ďƣợc bổ sung thêm nhiều gây tác Ďộng ngƣợc chiều làm giảm tỷ lệ chồi 3.2.2 Ảnh hưởng nước dừa lên khả nhân nhanh chồi Cỏ thi hắt Chúng Ďã tiến hành nhân nhanh chồi in vitro mơi trƣờng có bổ sung nƣớc dừa nồng Ďộ khác Kết sau tuần ni cấy Ďƣợc trình bày bảng 3.3 hình 3.3 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng nƣớc dừa lên khả nhân nhanh chồi in vitro sau tuần Môi trƣờng Số chồi Chất lƣợng (Tb±SD) chồi CT1 MSo 3,4±1,14 a Xanh -Mập CT2 MSo+5% 4,0±1,22a Xanh -Gầy CT3 MSo+10% 3,2±0,83 a Xanh -Gầy CT4 MSo+15% 3,4±1,64 a Xanh -Mập LSD 0.05 1,61 Ghi chú: Trong phạm vi cột, giá trị mang chữ khác sai khác mang ý nghĩa thống kê mức  = 0.05 20 A B C D Hình 3.3: Ảnh hưởng nước dừa đến khả nh n nhanh chồi in vitro A MSo, B 5% nước dừa/l, C 10% nước dừa/l, D 10% nước dừa/l Kết thu Ďƣợc từ bảng 3.3 cho thấy khơng có chênh lệch hệ số nhân chồi môi trƣờng thăm dò Số chồi trung bình cơng thức bổ sung nƣớc dừa dao Ďộng từ 3,2 – chồi số chồi trung bình cơng thức có bổ sung chất ĐHST BAP (3,4 – 24,4 chồi) (bảng 3.2) Vì vậy, sau Ďánh giá tổng thể chúng tơi xác Ďịnh mơi trƣờng có BAP phù hợp 21 cho trình nhân nhanh chồi Ďặc biệt mơi trƣờng có bổ sung 0.5mg/l BAP với số chồi trung bình cao Ďạt 24,4 chồi 3.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh Trong số chất Ďiều hòa sinh trƣởng, NAA thuộc nhóm auxin Ďƣợc coi hợp chất kích thích trình rễ chồi cách hiệu nuôi cấy invitro [14] Trong nghiên cứu Ďể Ďánh giá khả rễ chồi Cỏ thi hắt hơi, NAA Ďƣợc bổ sung vào môi trƣờng dinh dƣỡng với nồng Ďộ 0,1mg/l, 0,3mg/l, 0,5mg/l 0,7mg/l Sau tuần nuôi cấy theo dõi thu Ďƣợc kết nhƣ bảng 3.4 hình 3.4 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng α-NAA đến khả rễ chồi tạo in vitro hoàn chỉnh sau tuần Môi trƣờng Chiều dài rễ Số rễ (Tb±SD) (mm) (Tb±SD) Chất lƣợng chồi CT1 MSo 13,0± 4,06a 45,4± 15,1b Xanh –Mập CT2 MSo+N0,1 16,0±5,04a 48,4± 11,94b Xanh –Mập CT3 MSo+N0,3 14,0±4,52a 81,0±20,12 a Xanh –Mập CT4 MSo+N0,5 12,4±2,07a 32,8±6,83 bc Xanh –Mập CT5 MSo+N0,7 12,2±1,09 a 25,4±6,58 c Xanh –Mập 4.83 17.36 LSD 0.05 Ghi chú: Trong phạm vi cột, giá trị mang chữ khác sai khác mang ý nghĩa thống kê mức  = 0.05 22 A B C D Hình 3.4: Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ chồi in vitro A NAA 0,1 mg/l C NAA 0.5 mg/l B NAA 0.3 mg/l D NAA 0,7 mg/ Phân tích bảng 3.4, thấy khả tạo rễ chồi mơi trƣờng có nồng Ďộ NAA khác khơng có biến Ďộng lớn Cụ thể, số lƣợng rễ trung bình cơng thức bổ sung NAA dao Ďộng từ 12,2 ÷ 16,0 rễ/mẫu Trong Ďó, khác biệt có ý nghĩa Ďƣợc ghi nhận rõ rệt 23 tiêu chiều dài rễ Khi tăng dần nồng Ďộ NAA từ 0,1 ÷ 0,3 mg/l, chiều dài rễ tăng từ 45,4 81,0 mm, số rễ cao nồng Ďộ 0,1 mg/l NAA Mặt khác, tiếp tục tăng nồng Ďộ NAA Ďến 0,7 mg/l cho kết ngƣợc lại, chiều dài rễ giảm Nhƣ vậy, nghiên cứu này, môi trƣờng MS bổ sung 0,3 mg/l NAA cơng thức thích hợp cho q trình kích thích chồi rễ tạo in vitro hoàn chỉnh 3.4 Rèn luyện Cỏ thi hắt in vitro thích nghi với môi trƣờng tự nhiên Đây giai Ďoạn quan trọng, có ý nghĩa Ďịnh Ďến khả ứng dụng vào thực tế sản xuất Là giai Ďoạn chuyển tiếp từ môi trƣờng sống nhân tạo hồn tồn thuận lợi sang mơi trƣờng tự nhiên có nhiều yếu tố biến Ďộng (thời tiết, Ďất Ďai…), Ďặc biệt Ďộ ẩm nhiệt Ďộ Lúc chuyển từ trạng thái dị dƣỡng sang tự dƣỡng Chính thay Ďổi Ďột ngột nhƣ vậy, nên việc Ďƣa in vitro ngồi Ďất gặp nhiều khó khăn [8] Do yêu cầu Cỏ thi hắt chịu khô hạn, không yêu cầu Ďối với Ďất, chịu lạnh[30], nên Ďể nâng cao tỷ lệ sống in vitro chúng tơi Ďƣa bình chứa nhà lƣới có mái che Ďể từ 5-7 ngày Ďể thích nghi dần với Ďiều kiện mơi trƣờng tự nhiên Sau thời gian huấn luyện, Ďƣợc rửa loại bỏ thạch dƣới vòi nƣớc chảy (khi rửa phải nhẹ nhàng tránh làm Ďứt tổn thƣơng rễ) Ďƣợc cấy vào khay Ďã chuẩn bị với thành phần giá thể khác (bảng 2.5) Ďể Ďánh giá tỷ lệ sống mô Số liệu bảng 3.5 cho thấy sau tuần với giá thể 100% cát ẩm Cỏ thi hắt in vitro Ďạt tỷ lệ sống cao (97,11%) Ngoài ra, tỷ lệ sống phụ thuộc vào nhiều yếu tố nhƣ chất lƣợng Ďiều kiện thời tiết (nhiệt Ďộ, ánh sáng, Ďộ ẩm) Tuy nhiên, bƣớc Ďầu chúng tơi kết luận giá thể 100% cát ẩm thích hợp cho giai Ďoạn vƣờn ƣơm 24 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng giá thể đến tỷ lệ sống Cỏ thi hắt sau tuần Công thức Loại giá thể Tỷ lệ sống (%) I 50% Ďất + 50% sơ dừa II 30% Ďất + 70% sơ dừa III 100% cát ẩm 97,11 IV 50% Ďất + 50% cát 57,60 V 30% Ďất + 70% cát 76,90 A B C D 25 E F 26 G H Hình 3.5: Một số hình ảnh rèn luyện A, B Cây ngày C Cây ngày D Cây 14 ngày E Cây 20 ngày F Cây trồng đất G, H Cây hoa 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu đƣợc từ đề tài này, đƣa số kết luận sau: - Công thức khử trùng tối ƣu cho hạt A ptarmia NACLO 5% 15 phút Ở công thức tỷ lệ nảy mầm cao nhất, Ďạt 53.33% - Môi trƣờng MS có bổ sung 0,5mg/l BAP cơng thức thích hợp Ďể nhân nhanh chồi từ mẫu A ptarmica Hệ số nhân nhanh chồi Ďạt 24,4 lần với chất lƣợng chồi Ďồng Ďều Ďạt tiêu chuẩn - Môi trƣờng MS có bổ sung 0,3 mg/l NAA cơng thức thích hợp cho q trình tạo rễ chồi in vitro Cỏ thi hắt hơi, Ďạt 14 rễ sau tuần nuôi cấy - Trong giai Ďoạn vƣờn ƣơm, A ptarmica sinh trƣởng tốt giá thể 100% cát, tỷ lệ sống sót Ďạt 97.11% Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu cải tiến, hồn thiện mơi trƣờng nhân nhanh chồi in vitro Cỏ thi hắt - Nghiên cứu sau giai Ďoạn nuôi cấy in vitro nhƣ giai Ďoạn vƣờn ƣơm giá thể khác Ďể tìm Ďiều kiện sinh trƣởng phát triển tốt cho Cỏ thi hắt - Tiếp tục nghiên cứu nhằm Ďánh giá hoạt chất hàm lƣợng tinh dầu A ptarmica Ďƣợc nuôi cấy in vitro 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tài liệu tiếng Việt [1] Nguyễn Tiến Bân,Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, Nxb Nơng Nghiệp [2] Lê Kim Biên (2007), Thực vật chí Việt Nam 7, Họ Cúc-Asteraceae Dumort, Nxb Khoa Học Kỹ Thuật, tr 398-401 [3] Hồ Văn Chi,Từ điển thực vật thông dụng(tập 1), Nxb Khoa Học Kỹ Thuật, tr 171 [4] Quách Chí Cƣơng, Trƣơng Vĩ, (1997), Hoa Cúc, (Bản dịch Đặng Văn Đông), NXB Đại học Thanh Hoa, Trung Quốc [5] Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc (2003), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao - Cây hoa Cúc, Nxb Lao Động – Xã Hội, Hà Nội [6] Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc (2004), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao - Cây hoa Cúc, Nxb Lao Động – Xã Hội [7] Lê Huy Hàm, Nguyễn Thị Kim Lý, Lê Đức Thảo, N.K Dadlani, Nguyễn Xuân Linh, Phạm Thị Lý Thu, Phạm Xuân Hoạt (2012), Kỹ thuật sản xuất số loại hoa, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội [8] Trần Khắc Hạnh, Trần Thị Lệ, Nguyễn Thị Kim Lý, Nguyễn Xuân Linh (2004), “Xây dựng quy trình nhân giống hoa cúc (Standard Chrysanthemum) phƣơng pháp nuôi cấy in vitro”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, 1506-1508 [9] Phạm Hoàng Hộ,C y cỏ Việt Nam(quyển III), Nxb trẻ, tr 283 [10] Trần An Hƣơng, Trần Tuấn Anh, Phạm Thanh Hƣơng (2006), Tìm hiểu giới thực vật, Nxb Giáo dục [11] Nguyễn Thị Kim Lý (2001), Nghiên cứu tuyển chọn nh n giống c y cúc vùng đất trồng hoa Hà Nội, Luận văn tiến sỹ nông nghiệp, Viện Khoa học kỹ thuật Nông Nghiệp Việt Nam 29 [12] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), hương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội [13] Nguyễn Xn Thìn (2006), Thực vật có hoa, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội * Tài liệu tiếng Anh [14] Alvarenga, I C., Pacheco, F V., silva, S T., bertolucci, S K., pinto, J E., 2015 In vitroculture of achillea millefodiuml.: quality and intensity of linght on growth and production of volatiles, Plant Cell Tissue Organ Cult, 122(2): 299-308 [15] Althaus, J B., Kaiser, M., Brun, R., Schmidt, T J., 2014 Antiprotozoal activity of Achillea ptarmica (Asteraceae) and its main alkamide constituents Molecules, 19(5): 6428-6438 [16] Ball EA (1950) Differentiation in a callus culture of Sequoia sempervirens Growth 14, 295- 325 [17] Čellárová, E., Greláková, K., Repčák, M., Hončariv, R., 1982 Morphogenesis in callus tissue cultures of some Matricaria and Achillea species Biologia plantarum, 24(6): 430-433 [18] Danial, K., Kahrizi, M., 2010 Effect of 6-benzylaminopurine, 2,4dichlorophenoxyacetic acidand indole-3-butyric micropropagation stages of Achillea biebersteinii Asian acid J on Chem, 22(3): 2383-2386 [19] Haberlandt, G (1902) Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen Sitzungsber.Akad.Wiss Wien Math.-Naturwiss Kl., Abt J 111, 69– 92.19 [20] Linh Xuân Nguyễn (1998), Cut Flower Production in ASIA FAO, Bangkok, Thailan [21] Linnaeus (1753) , Species Plantarum 1, 358–359 30 [22] Morel GM (1960) Producing virus-free cymbidiums American Orchid Society Bulletin 29 495-497 [23] Morel GM (1963) La culture in vitro du méristème apical de certaines orchi- dées Comptes Rendus de l’Académie des Sciences 256, 4955- 4957 [24] Morel GM (1964) Tissue culture – a new means of clonal propagation of orchids American Orchid Society Bulletin 33 , 473-478 [25] Murashige T and Skoog F (1962), “A revised medium for rupid growth and bioassays with tobacco tissue culture”, Physiol Plant 15: 473-479 [26] White, P.R (1934) Potentially unlimited growth of excised tomato root tips in a liquid medium Plant Physiol 585–600 * Tài liệu Internet [27] https://en.wikipedia.org/wiki/Achillea_ptarmica [28] http://khoahocphattrien.vn/chichsach/nhan-giong-bang-nuoi-cay-mo- chua-nhan-duoc-giong-cay-an-khach/201601… [29] https://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_Cỏ_thi#Th.C6.B0_vi.E1.BB.87n [30] www.plantsinusa.com/show/plant/Achillea-Ptarmica/1885 [31] www.timtailieu.vn/tai-lieu/cong-nghe-nuoi-cay-mo-va-te-bao-thuc-vat- nhan-giong-in-vitro-32538/ 31 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG Q TRÌNH NI CẤY Bình in vitro giai Ďoạn nhân nhanh chồi Bình in vitro giai Ďoạn tạo rễ PHỤ LỤC 2: MỘT SỐ HÌNH ẢNH HOA CỎ THI HẮT HƠI ... thi n quy trình nhân dòng vơ tính Cỏ thi hắt (Achillea ptarmica) kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Mục đích nghiên cứu - Thăm dò mơi trƣờng ni cấy thích hợp cho nhân giống Cỏ thi hắt - Đƣa sở... thực tiễn Ý nghĩa khoa học: Cung cấp dẫn liệu khoa học nuôi cấy in vitro Cỏ thi hắt (A .Ptarmica) phục vụ cho nghiên cứu sau Ý nghĩa thực tiễn: Hồn thi n quy trình nhân giống in vitro Cỏ thi hắt. .. Tình hình nghiên cứu ni cấy mơ tế bào thực vật giới Việt Nam Những năm 70 kỷ XX thập niên bùng nổ công nghệ sinh học thực vật, Ďặc biệt kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Đây công cụ nghiên