Cập nhật nghiên cứu Enterovirus Research

Cập nhật nghiên cứu Enterovirus Research: Chẩn đoán sinh học phân tử Phát triển Vaccine Tài trợ Viện nghiên cứu sức khỏe quốc gia (NHRI) Bộ Y Tế Phúc Lợi (MOHW) Đài Loan Min-Shi Lee (李敏西), MPH, PhD Đại Diện Nhóm Nghiên Cứu Vaccine Enterovirus Viện Các Bệnh Truyền Nhiễm Và Vaccine Quốc Gia (NIIDV), Viện Nghiên Cứu Sức Khỏe Quốc Gia (NHRI) Trúc Nam, Đài Loan Enterovirus 71: Picornaviridae, 7.5kb ssRNA P1: kháng nguyên P2: chép, độc lực P3: Protease Loài v Serotypes Enterovirus người (116 serotypes, ICTV 2017) Loài Enterovirus A Số serotypes 25 Enterovirus B 63 Enterovirus C 23 Enterovirus D Serotypes CA2-8, CA10, CA12, CA14, CA16, EV-A71, EV-A89-91, EV-A114, EV-A119, EV-A120, EV-A121, SV19, SV43, SV46, BA13 CA9, CB1-6, E1-7, E9, E11-E21, E2427, E29-33, EV69, EV73-75, EV77-88, EV93, EV97-98, EV100-101, EV106107…… PV1-3, CA1, CA11, CA13, CA17, CA19-22, CA24, EV-C95-96, EV-C99, EV-C102, EVC104-105, EV-C109, EV-C113, EV-C116 EV-D68, EV-D70, EV-D94, EV-D111 EVD120 EV71 đ ợ c c h ia m genogroup (A, B C) gồm 11 genotypes (A, B1~B5, C1~C5) Phân bố quốc tế EV-A71 Châu Á China 2008-2015 (C4) Cambodia 2012 (C4) Vietnam 2003 (C5) 2011 (C4) 2013 (B5) 2016 (B5) Taiwan 1998 (C2) 2000 (B4) 2005 (C4) 2008 (B5) 2012 (B5) Brunei 2006 (B5) Malaysia 2003 (B5) 2006 (B5) 2008~12 (B5) Singapore 2006 (B5) 2008 (B5) So sánh ứng viên vaccine EV71 virus toàn phần bất hoạt thủ nghiệm lâm sàng Tổ chức (Quốc gia) CDC/NHRI (Taiwan) Virus Genotype Cell Antigen Dosage, line ug (methods) (~107 B4 Vero TCID50/ml) C4 (~107 Sinovac (China) TCID50/ml) Beijing Vigoo C4 (~107 (China) TCID50/ml) C4 (~107 CAMS (China) TCID50/ml) Inviragen/Takeda B2 (~107 (Singapore) TCID50/ml) Vero Vero KMB17 Vero Tình trạng Phase III L, M, H (total (two industry protein) partners) (viral protein Cấp phép China by ELISA) 0.8 (viral protein Cấp phép China by ELISA) 0.25 (viral Cấp phép China protein by ELISA) 0.6 and 3.0 (total Phase I protein) Hoàn tất Đồng thuận định lượng antigens vaccine EV71 đòi hỏi cấp thiết Nhiễm enterovirus nặng Taiwan từ năm 2012 台灣地區腸病毒重症偵測 Nguồn: Taiwan CDC Year Nghi ngờ Xác định (tử vong) 2018 211 36 (8) 2017 129 24 (1) 2016 2015 2014 2013 2012 Total 142 100 54 122 294 33 (1) (2) (1) 10 (1) 146 (2) 261 (16) Top Serotypes EV ( s ố c a ) Echo11(12), EV71(8), CV-A4(2), CV-B1(2) EV-D68(12), CV-A6 (3), CV-A9 (2), CV-B3 (2), Echo5 (2), EV71 (2) EV-71 (23), CV-A4 (2), CV-A6 (2), CV-B3 (2) CV-B5 (3), CV-A16 (2), Echo3 (1) CVA2, CVA5, CVA16, CVB5, Echo11, EV71 EV71 (6), CVA6 (3), Echo30(1) EV71 (139), CV-A2 (2) EV71(177), EV-D68(12), Echo11(12), CVA6(8), CVA2(5) • Dịch EV-D68 diện rộng năm 2014 dịch bùng phát EV-D68 & EV-A71 năm 2018 Bắc Mỹ Top serotypes EV Taiwan, từ năm 2005 (Taiwan CDC) Năm Số EV phân lập 2005 1924 2006 1303 2007 856 2008 670 2009 1431 2010 1742 2011 3315 2012 2250 2013 1463 2014 1147 2015 1036 2016 1843 Top Top CV-B3 37% CV-A2 19% CV-A6 25% CV-A2 34% CV-A6 29% CV-A16 30% CV-A10 45% EV-A71 39% CV-A16 31% CV-A10 32% CV-A16 32% CV-A10 29% CV-A16 24% CV-A5 15% CV-A10 21% EV-A71 27% CV-A4 25% CV-A4 20% CV-A9 18% CV-A2 19% CV-A4 9% CV-A4 19% CV-A4 16% CV-A5 18% Top Top Top EV-A71 CV-A6 CV-A5 18% 6% 4% CV-A4 ECHO-18 CV-B2 15% 15% 10% CV-A16 CV-A4 ECHO-6 19% 7% 5% CV-B4 CV-A16 CV-B1 11% 4% 3% CV-A6 CV-A5 CV-A5 17% 12% 5% CV-A6 CV-A5 CV-B1 17% 12% 3% CV-A4 CV-B5 EV-A71 9% 9% 9% CV-B3 CV-A4 ECHO-6 12% 7% 6% CV-B4 CV-B2 CV-A10 8% 6% 5% CV-B4 CV-B2 CV-A9 8% 6% 8% CV-A6 CV-A5 ECHO-6 15% 10% 3% CV-A2 CV-A4 CV-A16 16% 7% 5% So sánh phương pháp phân tử để phát sớm xác định serotype Enterovirus từ mẫu phết họng bệnh nhi Tiếp cận sinh học phân tử giám sát Enterovirus miền Bắc Đài Loan, 2008-2012 Đánh giá phương pháp chẩn đoán giám sát enterovirus BV NĐ1, TP HCM, Vietnam Phân lập virus (BVNĐ1, Vietnam) Năm No tested EV Dương (%) CODEHOP (NHRI, Taiwan) EV-A71 (%) No tested EV Dương (%) EV-A71 (%) 2011 54 21 (38.9) 16 (29.6) 54 44 (81.5) 29 (53.7) 2012 2013 2014 409 412 79 (19.3) 28 (6.8) 173 (42.0) 66 (16.0) 409 412 266 (65.0) 226 (54.9) 60 (14.7) 83 (20.1) 521 120 (23.0) 14 (2.7) 521 310 (59.5) 35 (6.7) 2015 356 125 (35.1) 34 (9.6) 356 234 (65.7) 39 (11.0) 2016 324 99 (30.5) 17 (5.2) 325 217 (66.8) 74 (22.8) 2017 250 36 (14.4) (1.6) 50 22 (44.0) (4.0) Dùng virus EV71 tăng trưởng cao làm virus cho gốc để bào chế vaccine đa giá Xét nghiệm D-antigen cho hiệu lực in vitro NextVaccine Generation Enterovirus Enterovirus hệ Vaccines Hệ thống sản xuất dựa phản ứng sinh học Tiêm da để tiết kiệm antigen 17 Chiến lược phát triển Vaccine Enterovirus đa giá • Phát tr iển riêng lẻ nhiều tế bào Vero – tư ng thíc h v i c ác v irus v ac c ine tăng tr ng c ao s au k ết hợp lại (tốn thời gian) • Phát triển virus EV71 tăng trưởng cao tế bào Vero tổng hợp nhiều virus vaccine tăng trưởng cao di truyền ngược (RG) 18 Phát triển vaccine enterovirus đa giá di truyền ngược • Phát triển virus vaccine EV71 tăng trưởng cao tế bào Vero (Chia MY et al 2018) • Thiết lập tảng di truyền ngược (RG) sử dụng virus vaccine tăng trưởng cao virus cho gốc • Tổng hợp virus vaccine tăng trưởng cao cho nhiều serotype enterovirus tảng di truyền ngược 19 Hiệu giá virus v h ì n h t h i m ả n h b m g ố c (B5-141-R D) v t ế b o V e r o t n g t h í c h EV71 viruses (B5-141-4-2 v B5-141-6-5) Chủng Virus B5-141-RD B5-141-4-2 B5-141-6-5 Hiệu giá virus Hiệu giá virus (log 10 (log 10 PFU/mL) PFU/mL) Xét nghiệm Xét nghiệm mảnh bám mảnh bámmiễn dịch Too small to Too small to count count 8.15 8.13 7.97 8.09 Bằng sáng chế Taiwan tháng 10, 2018; Chia MY et al Vaccine 2018 20 Đ ỉ n h h i ệ u g i v i r u s c ủ a EV71 B5-141-6-5 với Hệ thống cấy tế bào Vero microcarrier Run 370 g/mL Run 400 mL g/mL Run 380 mL g/mL 1.6X106 cells/ml 2.7X106 cells/ml 1.9X106 cells/ml Thời gian thu (ngày sau nhiễm) 5 Hiệu giá virus(Log 10 Tissue Culture Infectious Dose TCID50/mL) 7.9 8.2 8.3 Working volume Tỷ trọng Microcarrier Tỷ trọng tế bào trước nhiễm Bằng sáng chế Taiwan tháng 10, 2018; Chia MY et al Vaccine 2018 Hình chụp phần tử virus EV71 tinh lọc siêu ly tâm 22 Hiệu giá kháng thể trung hòa máu thỏ tiêm liều ứng viên vaccine EV71 genotype B5 kèm tá dược Alum EV71 Genotype Phần tử rỗng 0.05 μg 0.25 μg Phần tử đặc 0.05 μg0.25 μg A