15 MÔI TRƯỜNG DÙNG ĐỂ PHÁT HIỆN VI KHUẨN HIẾU KHÍ, KỴ KHÍ VÀ NẤM Quy định chung Mơi trường nuôi cấy dùng để kiểm tra vô khuẩn phải quan Kiểm định Quốc gia quy định Môi trường phải bảo đảm phát triển tốt cho phần lớn loại vi sinh vật hiếu khí, kị khí thường có khơng khí sở sản xuất Để kiểm tra tính vơ khuẩn sinh phẩm phải dùng môi trường thioglycolat dạng nước Thành phần môi trường mô tả phần Mỗi loại môi trường thioglycolat điều chế phải kiểm tra tính vơ khuẩn, khả làm cho vi sinh vật phát triển (dinh dưỡng) tính trung hồ Để kiểm tra tính vơ khuẩn chế phẩm khơng có chất bảo quản thimerosal, mơi trường phải dùng vòng tuần lễ kể từ ngày pha chế Môi trường sau sản xuất phải bảo quản nhiệt độ phòng tránh ánh sáng Để kiểm tra sinh phẩm có chứa thimerosal dùng môi trường thioglycolat pha mới, môi trường phải dùng vòng đến 10 ngày, kể từ ngày sản xuất Thời hạn sử dụng cụ thể môi trường thioglycolat xác định cách kiểm tra tính chất trung hồ mơi trường sau pha chế Thành phần cách pha chế môi trường thioglycolat lỏng L - Cystin 0,50 g Natri clorid 2,50 g Glucose (C6H12O6 H2O) 5,50 g Thạch (agar) 0,75 g Chiết xuất men (tan nước) 5,00 g Casein thuỷ phân men tuỵ 15,00 g Nước cất 1000,0 ml Thioglycolat Na 0,50 g Resazurin Na (dung dịch 0,01% pha) 1,00 ml pH cuối 7,0 - 7,2 (sau hấp 121 oC từ 18 - 20 phút) Cách pha chế: Cho thành phần đầu vào cốc Khuấy lít nước nóng, cho phần nước lại, sau đun cách thuỷ cốc đựng mơi trường, ý L -Cystin tan hoàn toàn Cho thioglycolat natri, tiếp cho dung dịch natri hydroxyd 1N tính để hấp pH phải 7,0 - 7, Đun nóng lại, khơng đun sơi, cần, lọc qua giấy lọc ướt, sau cho thêm Resazurin natri Phân chia vào ống nghiệm thích hợp tuỳ theo yêu cầu Hấp 121 oC thời gian từ 18 - 20 phút Khi lấy từ lò hấp ướt ra, làm lạnh vòi nước lạnh 25 oC Bảo quản nhiệt độ từ 20 - 30 oC, tránh ánh sáng Nếu 1/3 phần ống môi trường đổi thành màu hồng, không nên dùng dùng phải hấp nước lại lần Môi trường bảo quản tuần khơng dùng Có thể dùng mơi trường bột hãng thương mại để pha chế môi trường này, vừa đảm bảo chất lượng vừa pha chế đơn giản Yêu cầu chất lượng môi trường nuôi cấy Môi trường thioglycolat sau điều chế phải đạt u cầu sau: Tính vơ khuẩn: Phải vơ khuẩn ( Phụ lục 15.7) Tính chất phát triển: Phải bảo đảm cho chủng Bacillus subtilis ATCC-6633, Micrococcus luteus ATCC-9341, Clostridium sporogenes ATCC-11437 Candida albicans ATCC-10231 phát triển tốt với liều gây nhiễm 10-100 CFU/0,1ml chủng/ống mơi trường Tính chất trung hoà: Phải bảo đảm cho chủng vi sinh vật phát triển tốt với liều gây nhiễm 10-100CFU/0,1ml chủng/ống mơi trường (trong mơi trường có thimerosal nồng độ 1/10 000 không thấp độ pha 1/100.000) (Xem phụ lục 15.13)