BÁO CÁO XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC ĐIỂN CHO DƯỢC LIỆU MUỒNG TRÂU

1 TRƯƠNG ĐAI HOC NGUYÊN TÂT THANH KHOA DƯƠC BÁO CÁO XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯƠC ĐIỂN CHO DƯƠC LIỆU MUỒNG TRÂU (Cassia Alata L.) Ngươi thưc hiên: Huynh Lâm Thi Ngoc Thi MSSV: 2111007505 Lơp: 11CDS03 Nhóm: 18 MUC LUC MƠ ĐÂU CHƯƠNG – TÔNG QUAN CHƯƠNG – KÊT QUA THƯC NGHIÊM 2.1 Phân Kiêm Nghiêm Dươc Liêu Băng Phương Phap Vi Hoc 2.1.1 Bóc tach biêu bi 2.1.2 Soi bôt dươc liêu 2.1.3 Cắt nhuôm vi phẫu la 2.2 Phân tích sơ bơ thành phân hóa thưc vật 2.2.1 Chuẩn bi dich chiết 2.2.2 Xac đinh cac nhóm hơp chất Bảng Phân Tích Sơ Bơ Thành Phân Hóa Hoc Thưc Vật CHƯƠNG – XÂY DƯNG TIÊU CHUẨN DƯỢC ĐIỂN MÔT SÔ BAI THUÔC DÂN GIAN TAI LIÊU THAM KHAO MƠ ĐÂU Trong nghiên cứu sản xuất dươc liêu cac chế phẩm từ dươc liêu, đê chiết xuất tinh chế cac cao chiết dươc liêu; ki êm soat đ ảm bảo ch ất lương dươc liêu cac chế phẩm từ dươc liêu hay phân lập cac ch ất tinh khiết, ta phải biết thành phân (và mức đô cao là: cấu trúc hóa hoc) cac chất có dươc liêu đó Trong sử dụng dươc li êu, có nhiều trương hơp dươc liêu đươc sử dụng nhiều có hiêu điều tri thành phân hóa hoc chúng lại đươc bi ết khơng đ ủ hay đơi hồn tồn chưa đươc nghiên cứu Ngày viêc hi bi ết v ề thành ph ân hóa hoc thưc vật cac dươc liêu ngày trở nên quan tr ong mà tiêu chuẩn hóa dươc liêu, kiêm soat chất lương dươc liêu cac dạng chế phẩm từ dươc liêu có xu hương yêu câu bắt bc đê đảm bảo tính an tồn, hiêu chất lương sản phẩm cho sử dụng.Thành phân hóa hoc môt dươc liêu phức tạp thương không th ê đươc bi ết tương tận Vi thông thương mức đô đơn giản nhất, viêc nghiên cứu cac thành ph ân hóa hoc dươc liêu thương đươc bắt đâu băng viêc xac đinh cac nhóm hơp chất thương gặp thưc vật băng cac phản ứng hóa hoc Viêc xac đinh đươc goi “phân tích thành phân hóa hoc thưc vật” Trong phân tích thành phân hóa hoc thưc vật, ta sử dụng phản ứng hóa hoc đặc trưng cho môt nhóm hơp chất đê xac đinh sư có mặt nhóm hơp chất nghiên cứu thưc vật Viêc nghiên cứu có th ê đươc tiến hành theo bươc: Phân tích sơ bơ: Cac chất nguyên liêu thưc vật đươc phân thành môt vài phân đoạn đơn giản băng cach sử dụng cac quy trinh chi ếc đ ơn gi ản, điều kiên đinh (dung môi, pH, môi trương v.v ) Đinh tính nhanh cac hơp chất cac phân đoạn băng mơt số thuốc thử chung Đinh tính xac đinh: Dùng cac quy trinh chiết đặc hi h ơn, nhiều phản ứng đặc hiêu đê xac đinh sư có mặt nhóm hơp chất Không phải tất cac nhóm hơp chất dươc liêu có th ê đinh tính Phân tích thành phân hóa hoc thưc vật có th ê xac đinh môt s ố nhóm hơp chất phổ biến thưc vật 4 Ơ mức cao hơn, viêc đinh tính cac nhóm hơp chất băng ph ương phap khac như: Cac phương phap sắc ký kết hơp vơi đinh tính hóa h oc, k ết h ơp v phân tích quang phổ có thê đươc sử dụng 5 CHƯƠNG – TƠNG QUAN Tên viêt nam:Mng trâu Tên khoa hoc:Cassia alata L., thuôc ho Đậu - Fabaceae Mô tả: Cây nhỏ cao chừng 1,5m hay hơn, phân cành La lơn có cuống dài 30-40cm, có ria, mang 8-12 đôi la chét Cụm hoa nach la, gôm nhiều hoa màu vàng Quả dẹt có canh hai bên ria, chứa tơi 60 hạt, hinh tram Cây hoa kết vào mùa đông Bộ phận dùng: La, cành, hạt, rễ Nơi sống: Cây moc hoang đươc trông nhiều nơi, có nhiều mi ền Nam miền Trung Có thê trông băng cành băng hạt Cây ưa đất, cao rao, ấm mat Trông băng cành, moc tốt, khỏe nhanh Cắt đoạn dài 2030cm, đem trông vào vụ xuân hè Nhiều nơi trông thành hàng rào Thu hái:Ta thương thu hai la thân vào mùa hạ thu, trươc hoa Dùng tươi hay phơi nắng cho khô Quả thu hai vào thang 10-12, l hạt ph khơ hay dùng tươi Thành phần hóa hoc: Trong la, rễ có chứa cac dẫn chất anthraquinon Có hàm lương 0,15-0,20% la, 1,5-2% Trong la có chrysophanol, aloe emodin, rheine emodin; có flavonoid kaempferol Ngồi cịn có mơt steroid sitosterol rễ Tính vị, tác dụng: Cac bơ phận có vi đắng, mùi hăng hắc, tính mat; có tac dụng nhuận tràng, giải nhiêt, sat trùng, l ti N ếu vàng thi nhuận gan, tiêu thưc, tiêu đôc, tiêu viêm La có vi cay, tính ấm; có tac d ụng sat trùng, chống ngứa Công dụng: Thương đươc dùng chữa tao bón, nhiều đơm; phù thũng, đan gan, vàng da La dùng tri viêm da thân kinh, hắc lào, thấp sang, ngứa l da, mụn nhot sưng lở 6 Liêu dùng: Bôt la uống vơi liều thấp (4-8g) dùng nhuận tràng, li ều cao (1012g) dùng tẩy xổ La gia nat, lấy nươc bơi xat đê ch ữa bênh ngồi da Ngồi ra, la cịn đươc dùng tri ghe cho gia súc CHƯƠNG – KÊT QUA THỰC NGHIỆM 2.1 Phần Kiêm Nghiêm Dươc Liêu Băng Phương Pháp Vi Hoc 2.1.1 Bóc tách biêu bi Lơ khí kiêu song bào Mảnh biêu bi 2.1.2 Soi bột dươc liêu Mảnh biêu bi có chứa lơ khí kiêu song bào Mảnh mơ mềm Lông che chở đơn bào Mảnh biêu bi có chứa cutin u lôi Mảnh mạch điêm Mảnh mạch vạch Mảnh mạch mạng Mảnh mạch xoắn 2.1.3 Cắt nhuộm vi phẫu lá Quy trình cắt nhuộm vi phẫu Bước 1: Dùng dao lam cắt vi phẫu Bước 2: Ngâm vi phẫu nước javel đến vi phẫu trắng, không 30 phút Bước 3: Rửa vi phẫu nước thường (3-4 lần) Bước 4: Ngâm vi phẫu dung dịch acid acetic 10% phút Bước 5: Loại bỏ hết acid acetic Bước 6: Rửa phẩm nhuộm vi phẫu nước thường Bước 7: Ngâm vi phẫu nhuộm nước thường hay glycerin Biêu bi Cutin u lôi Lông che chở Mô mềm giậu Mô mềm khuyết Mô dày Gô Libe Mô mềm đạo Biêu bi dươi Cấu tạo vi phẫu la muông trâu 10 Sơ đô cấu tạo la muông trâu Lông che chở đơn bào Cutin u lơi 11 2.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 2.2.1 Chuẩn bị dịch chiết Chiết dich chiết côn Ba dươc liêu đươc chiết tiếp băng côn cao đô (hoặc methanol) binh nón vơi sinh hàn hôi lưu 20 – 30 phút bếp cach th ủy, th ưc hi ên – lân Gôp cac dich chiết, loc qua bông, loại clorophlyl (nếu có) l ại đ ến cịn khoảng 50 ml dich chiết côn Chiết dich chiết nươc Ba dươc liêu sau chiết băng côn, đô ba khay loại hết côn, sau đó đươc đem chiết nóng vơi nươc binh nón bếp cach thủy sôi G ôp cac dich chiết, đê nguôi, loc (và cô lại cân) đê thu đươc khoảng 50 ml d ich chiết nươc 2.2.2 Xác định các nhóm hơp chất  Xác định nhóm hợp chất tan dịch chiết cồn Dich chiết côn đươc dùng đê xac đinh cac nhóm hơp chất sau: Alkaloid Flavonoid Cac chất khử Coumarin Tannin Acid hữu Saponin Định tính alkaloid Lấy ml dung dich côn cho vào chén sứ, b ốc tơi cắn Hòa c ắn – ml dung dich HCl 5% Chia dung dich acid vào ống nghi êm nh ỏ Đinh tính alkaloid băng cac thuốc thử: Mayer, Bertrand, Bouchardat, Dragendoff Hager So sanh kết vơi ống chứng không thuốc thử Nếu dung dich đục có kết tủa: Có alkaloid Định tính coumarin Nhỏ vài giot dich chiết côn lên môt miếng giấy loc Bay côn cho tơi khô, nhỏ lên vết dich chiết – giot dung dich NaOH 10% s mở vịng 100oC 10 phút Che môt nửa vết dich chiết băng miếng kim loại soi dươi đèn tử ngoại 365nm Sau vài phút lấy mi ếng kim lo ại che n ửa 12 vết dich chiết Nếu phân bi che có cương đô phat quang yếu nửa không bi che sau đó sang dân lên cho tơi có cương tương đ ương: Có coumarin Định tính anthraquinon Lấy khoảng 0,5g bôt dươc liêu cho vào ống nghiêm thêm 50ml dichloromethan, lắc Loc dich dichloromethan qua vào môt ống nghiêm khac đa chứa sẵn 2ml NaOH 10%, lắc Lơp ki ềm có màu đ ỏ phản ứng dương tính Định tính saponin Lấy ml dich chiết côn cho vào chén sứ, bếp cach th ủy tơi c ắn hịa cắn ml côn 25% bếp cach thủy, l oc vào ống nghi êm Thêm ml nươc lắc mạnh theo chiều doc ống Nếu có bot bền: Có saponin Định tính flavonoid Đinh tính cac dẫn chất có cấu trúc y – pyron y – dihydropyron Lấy khoảng ml dich côn cho vào chén sứ, bốc khoảng ml gạn dich côn vào ống nghiêm nhỏ Thêm vào dung dich mơt b ơt magnesi kim loại 0,5 ml HCL đđ Nếu dung dich có màu hông tơi đ ỏ: Có flavonoid Định tính tannin Lấy 2ml dich chiết cho vào mơt chén sứ, bốc tơi cắn Hịa tan c ắn v 40ml nươc bếp cach thủy Loc, chia dich chiết vào ống nghiêm a Ông nghiêm 1: Pha loang 0,5ml dich chiết vơi 1ml nươc cất Thêm 2-3 giot thuốc thử FeCl3 5% lắc Nếu dung dich có màu xanh đen hay xanh rêu: Có polyphenol b Ông nghiêm 2: Thêm vào dich loc giot dung dich gelatin mu ối, l ắc đều, so sanh vơi ống chứng chứa dich chiết ban đâu Nếu có tủa tr ắng: Có tannin Ghi chú: Dươi tên goi polyphenol tất cac chất có nhiều nhóm hydroxyphenol phân tử cho màu xanh đen hay xanh rêu v FeCl 3, đó có tannin Viêc kết luận dich chiết có tannin chắn làm thêm phản ứng chung polyphenol phản ứng bắt bc phải dương tính 13 Định tính chất khử Lấy 5ml dich chiết vào môt chén sứ, bốc dich côn đến cắn Hòa cắn vơi 3ml nươc cất bếp cach thủy, đê nguôi loc qua gi loc Thêm vào dich loc 0,5ml dung dich Fehling A 0,5ml dung dich Fehling B Đun cach th ủy phút Nếu có kết tủa đỏ gạch dươi ống nghi êm: Có cac h ơp ch ất kh (chủ yếu đương khử) Định tính acid hữu Lấy ml dich chiết cho vào môt ống nghi êm Pha loang v ml n ươc thêm vào dung dich mơt tinh thê natri carbonat Nếu có cac b ot khí nh ỏ s ủi lên từ cac tinh thê Na2CO3: Có acid hữu  Xác định chất tan dịch chiết nước Dich chiết nươc đươc dùng đê xac đinh cac nhóm hơp chất sau: Alkaloid Saponosid Acid hữu Flavonoid Cac chất khử Polyuronid Tannin Định tính alkaloid Lấy khoảng 10 ml dich nươc cho vào môt binh lăng gạn 50 ml, ki ềm hóa dich chiết tơi pH 10 băng dung dich NH 4OH đậm đặc băng chloroform (10 ml x lân) Gôp chung dung môi hữu c vơi 10ml băng nươc cất Lắc lơp chloroform vơi dung dich acid hydrochloric 5% (20 ml x l ân) Chia dung dich acid vào ống nghiêm nhỏ Đinh tính alkaloid băng cac thu ốc thử: Mayer, Bertrand Bouchardat, Dragendoff Hager So sanh vơi ống chứng không có thuốc thử Nếu dung dich đục có tủa: Có alkaloid Định tính flavonoid Đinh tính cac dẫn chất có nhân y-pyron y-dihydropyron Lấy khoảng ml dich nươc cho vào chén sứ, bốc tơi cắn Hòa tan c ắn khoảng ml côn 25%, loc vào ống nghiêm nhỏ Thêm vào dung d ich bôt Mg kim loại 0,5ml HCL đđ (phản ứng cyanidin) Nếu dung dich có màu từ hông tơi đỏ: Có flavonoid (flavanon, flavanonol, flavon,flavonol) 14 Định tính tannin a Ông nghiêm 1: Lấy 0,5ml dich chiết cho vào môt ống nghi êm nh ỏ Thêm 2-3 giot thuốc thử FeCl3 5%, lắc Nếu dung dich có màu xanh đen hay xanh rêu: Có polyphenol b Ông nghiêm 2: Lấy 2ml dich chiết, thêm vào dich loc giot dung dich gelatin muối, lắc đều, so sanh vơi dich chiết ban đâu Nếu có tủa tr ắng: Có tannin Ghi chú: Dươi tên goi polyphenol tất cac ch ất có nhi ều nhóm hydroxyphenol phân tử cho màu xanh đen hay xanh rêu v FeCl 3, đó có tannin Viêc kết luận dich chiết có tannin chắn làm thêm phản ứng chung polyphenol phản ứng bắt bc phải dương tính, bên cạnh phản ứng vơi dung dich gelatin-muối Định tính saponin Lấy khoảng ml dich nươc cho vào chén sứ, đun cach th ủy t c ắn khơ Hịa cắn vơi ml côn 25%, loc vào ống nghiêm Pha loang vơi 5ml nươc, l ắc mạnh theo chiều doc ống 15 giây Nếu có côt b ot b ền 15 phút: Có saponin Định tính hợp chất khử Lấy ml dich chiết cach thủy tơi khơ, hịa tan c ắn c ôn 25%, l oc, cho dich loc vào ống nghiêm, thêm 0,5 ml dung dich Fehling A 0,5 ml dung dich Fehling B, đun cach thủy phút Nếu có kết tủa đ ỏ g ạch n ặng l ắng d ươi ống nghiêm: Có cac chất khử (chủ yếu đương khử) Định tính acid hữu Lấy ml dich chiết nươc vào môt ống nghiêm.Thêm vào dung dich môt tinh thê natri carbonat Nếu có cac bot khí nhỏ sủi lên từ cac tinh th ê Na 2CO3: Có acid hữu Định tính hợp chất polyuronid Nhỏ giot ml dich chiết nươc vào môt ống nghiêm có chứa 10 ml côn 95% (hoặc aceton) Nếu có nhiều tủa đươc tạo thành: Có cac polyuronid (gôm, pectin, chất nhây,…) 15 16 Alkaloid (côn) Coumarin (côn) Anthraquinon (côn) Flavonoid (côn) Tanin (côn) Acid hữu (côn) 17 BANG PHÂN TÍCH SƠ BỘ THANH PHÂN HĨA HOC THỰC VẬT Dươc liêu: Muông trâu - Bộ phận dùng: La Kết định tính dịch chiết Nhóm hợp chất Alkaloid Coumarin Thuốc thử, cách thực Phản ứng dương tính Dịch chiết nước Khơng thủy phân ± - Không thủy phân + - Kết tủa Phát quang mạnh Dd kiềm có màu hồng Anthraglycosid NaOH 10% ++ tới đỏ Dd FeCl3 Xanh rêu hay xanh đen ++ Tannin Dd gelatin muối Tủa trắng +++ Flavonoid Mg/HCL đđ Dd có màu hồng tới đỏ ++ T/ Thử Liebermann Có vịng tím nâu Saponin Lắc mạnh dd nước Tạo bọt bền ≥ 15 phút Acid hữu Na2CO3 Sủi bọt ++ Chất khử T/ thử Fehling Tủa đỏ gạch Hợp chất Tủa trắng – vàng Pha loãng với cồn 90% ± polyuronic nâu Kết luận: Trong la muông trâu có chứa alkaloid, anthraglycosid, tannin, flavonoid acid h ữu Ghi chú: T/thử chung alkaloid Phát quang kiềm Dịch chiết cồn (±): Nghi ngơ (++): Có (-): Khơng có (+++): Có nhiều (+): Có Kết định tính chung Có Khơng có + Có + + + + - Có Có Có Khơng có Khơng có Khí bay lên Khơng có ± Khơng có 18 CHƯƠNG – XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯƠC ĐIỂN MUỒNG TRÂU (Lá) Folium Senna alatae La chét phơi hay sấy khô Muông trâu [Senna alata (L.) Roxb Syn Cassia alata L.], ho đậu (Fabaceae) Mô tả La kép hinh lông chim, dài 30 cm đến 40 cm, gôm đến 12 đôi la chét hinh trứng hinh bâu dục hẹp tròn hai đâu, la chét dài cm đ ến 13 cm, r ông 2,5 cm đến cm, to dân phía ngon Cuống ngắn phinh to gốc Gân la hinh lông chim Mặt la màu xanh đậm, mặt dươi la màu xanh nh ạt h ơn, hai mặt nhẵn Mép la nguyên Vi phẫu Gân la có mặt phẳng, mặt dươi lôi Bi bi bi bi dươi phân gân la phân phiến la có lông che chở đ ơn bào ng ắn, đ âu nh on, m ặt dươi la mật đô lông dày Riêng phân phiến la có u l cutin l khí c ả hai mặt Cac tế bào mô dày góc xếp thành đam n ăm sat bi bi ph ân gân la Môt cung libe gô năm gân la, hai đâu cung cn vào phía nh ưng khơng giap Libe năm thành đam nhỏ liên tục, gôm tế bào nhỏ thành nhăn nheo, xen kẽ vơi cac đam libe mô mềm libe g ôm nh ững tế bào to hơn, trịn, vach mỏng Gơ tập trung thành m ôt đam dày nh ững tế bào có thành hóa gô vùng mặt cuống la tạo mơt vịng cung g ơm nh ững bó gô hinh tam giac mặt dươi vùng cuống la Phía ngồi cung libe-gơ có m ơt vịng mơ cứng bao quanh thành mơt vịng kín hinh tim vùng gân la, g ôm tế bào có thành dày Phía cung libe-gơ có mơ mềm đặc g ôm tế bào thành mỏng hinh đa giac Tinh thê calci oxalat hinh l ập ph ương năm tế bào mô mềm ven theo cung mô cứng Phân mô mềm gôm tế bào to, thành mỏng, vùng phiến la có nh ững khuyết hinh xoan Bột Bơt màu xanh, chất xốp nhẹ Soi kính hiên vi thấy: mảnh bi bi bi bi dươi la có tế bào thành mỏng mang lông che ch đ ơn bào ng ắn, đ âu 19 nhon, lơ khí kiêu song bào u lơi cutin Mảnh bi bi cu ống la gân la có mang lông che chở đơn bào Mảnh lông đơn bào b i gay, m ảnh mô m ềm S kèm tinh thê calci oxalat hinh khối lập phương riêng l e M ảnh m ạch êm, mạch mạng, mạch xoắn mạch vạch Độ ẩm Khơng qua 13,0 % Tro tồn phần Khơng qua 5,0 % Tro không tan acid hydrocloric Không qua 0,7 % Tạp chất Không qua 0,5 % Chế biến Thu hoạch vào mùa hạ, hai lấy la, phơi âm can, sấy nhẹ hay đến khô Bảo quản Đê nơi khơ, mat, tranh anh sang Tính vị, quy kinh Tân, ôn Vào cac kinh can, đại trương Công năng, chủ trị Nhuận tràng, lơi gan mật, tiêu đôc, tiêu viêm, sat trùng, ngứa Chủ tri : Tao bón (dùng sống), viêm gan, da vàng (dùng thuốc đa khơ) Dùng ngồi chữa hắc lào, viêm da thân kinh, ngứa lở Cách dùng, liêu lương Ngày dùng – g ( nhuận tràng), dạng thuốc sắc Dùng ngoài: lương thích hơp, rửa sạch, gia nat la, lấy nươc c ốt bôi, m ôt ngày lân, lấy la tươi vị, chà sat vào chơ bi hắc lào Kiêng kỵ Phụ nữ có thai không nên dùng 20 MỘT SÔ BAI THUÔC DÂN GIAN Chữa tao bón: Mng trâu 20g, Chút chít 20g, Đại hồng 4-6g s ắc uống ngày Chữa thấp khơp: Muông trâu 40g, Vòi voi 30g, Tang ký sinh, Quế chi, Dứa dại, rễ Cỏ xươc, môi vi 20g Sắc uống ngày thang 7-10 ngày Chữa viêm thân kinh toa: Muông trâu 24g, Cây lức 20g, Thân Thông, rễ Nhàu, Kiến cị, mơi vi 12g, Đơ Trong 8g Sắc uống ngày thang Chữa hắc lào: + La tươi đem gia nat, lấy nươc bôi, có thê thêm mu ối dich qu ả chanh đê có tac dụng mạnh + La muông trâu đem nghiền nat Đổ vào đó nươc đun sôi có pha natri fluorid, đê yên 24 giơ, rối loc qua vải Thêm vào ba 90o, ngâm 24 gi rôi ép lấy côn Hơp côn nươc lại, cô tơi đô cao mềm Cao có thê bảo quản không bi mốc có natri fluorid Chữa ban trai (ban chẩn): La muông trâu 8g, Hương 10g, đot Tre non, Ké đâu ngưa, Mùi tàu, Lức, môi vi 8g, Mức hoa trắng 6g, vỏ Quýt 4g, Đăng tâm 2g, sắc uống ngày thang 21 TAI LIỆU THAM KHAO Hôi đông dươc điên Viêt Nam (2009), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y hoc, Hà Nôi Và môt số trang web: thuocdongduoc.vn, tailieu.vn, hup.edu.vn, hocvienquany.vn 22 Table of Contents ... có Khí bay lên Khơng có ± Khơng có 18 CHƯƠNG – XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯƠC ĐIỂN MUỒNG TRÂU (Lá) Folium Senna alatae La chét phơi hay sấy khô Muông trâu [Senna alata (L.) Roxb Syn Cassia alata L.],... thành phân hóa thưc vật 2.2.1 Chuẩn bi dich chiết 2.2.2 Xac đinh cac nhóm hơp chất Bảng Phân Tích Sơ Bô Thành Phân Hóa Hoc Thưc Vật CHƯƠNG – XÂY DƯNG TIÊU CHUẨN DƯỢC ĐIỂN MÔT SÔ BAI THUÔC DÂN GIAN... tính mat; có tac dụng nhuận tràng, giải nhiêt, sat trùng, l ti N ếu vàng thi nhuận gan, tiêu thưc, tiêu đôc, tiêu viêm La có vi cay, tính ấm; có tac d ụng sat trùng, chống ngứa Công dụng: Thương