Nghiên cứu phân lập và thử tác dụng hạ huyết áp của flavonoid trong cây cần tây việt nam

B ộ G IÁ O D Ụ C VÀ Đ À O T Ạ O BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ợ c HÀ NỘI N g ƯYỄN THỊ BẢO n g h iê n c ứ u p h â n lậ p v th h h u y ế t p c ủ a fla v o n o id tr o n g c â y c ầ n tâ y v iệ t n a m ( A PIIIM GRAVEOLEIVS L APIA C EA E ) CH U Y ÊN NCỈÀNH ; DƯỢC LÝ- DUỤC LÂM SÀNG M Ã SỐ ; 03()2()2 LUẬN V Ã N THẠC s ĩ D ợ c HỌC Hướng dẫn klioa học: PGS.TS M AI TẤT TỐ '5 " ' \ PGS.TS B Ế THỊ THU Ấ n \ HÀ NỘI - 2001 Lời eảm ơn Đ ể h o n th n h b ả n lu ậ n v ă n n y , tô i n h ậ n đ ợ c h n g d ẫ n tậ n tìn h c h u đ o c ủ a : P G S TS M a i T ấ t T ố c h ủ n h iệ m b ộ m ô n D ợ c lự c , P G S T S B ế T h ị T h u ấ n g iả n g v iê n b ộ m ô n D ợ c liệ u trư n g đ i h ọ c D ợ c H N ộ i N h â n d ịp n y tô i x in b y tỏ lò n g b iế t n c h â n th n h v s â u s ắ c n h ấ t X in c h â n th n h c ả m n c c c n b ộ v c c c ô k ỹ th u ậ t v iê n b ộ m ô n D ợ c liệ u v D ợ c lự c đ ã c h o p h é p , tạ o đ iề u k iệ n c h o tô i tro n g s u ố t q u tr ìn h h ọ c tậ p , n g h iê n c ứ u v b ả o v ệ lu ậ n v ă n tố t n g h iệ p X in c h â n th n h c ả m n TS N g u y ễ n V ă n Đ n g trư n g p h ò n g q u ả n lý k h o a h ọ c v c c c n b ộ B ện h v iệ n , V iệ n D ợ c L iệ u tru n g n g , B ộ m ô n D ợ c lâ m sà n g , P h ò n g đ o tạ o S au đ i h ọ c , T h v iệ n trư n g Đ i H ọ c D ợ c H N ộ i đ ã g iú p đ ỡ , đ ó n g g ó p n h ữ n g ý k iế n q u ý b u v c u n g c ấ p n h iề u tư liệ u q u a n trọ n g N h â n d ịp n y c h o p h é p tô i c ả m n c c b n đ n g n g h iệ p , s in h v iê n c ù n g h ọ c tậ p v n g h iê n c ứ u tro n g s u ố t q u tr ìn h th ự c h iệ n đ ề tà i đ ã đ ộ n g v iê n v g iú p đ ỡ đ ể tô i h o n th n h b ả n lu ậ n v ă n n y H nội th n g 12 n ă m 0 N g u y ễ n T h ị B ảo ' NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VAN Viết tắt V iết đáy đủ DL Dược liệu THA Tăng huyết áp Ftp Flavonoid toàn phần HDL High D ensity Lipoprotein ( lipoprotein tỷ trọng cao ) HDL-C High D ensity Lipoprotein- Cholesterol ( cholesterol' lipoprotein tỷ trọng cao) LDL Low D ensity Lipoprotein ( lipoprotein tỷ trọng thấp) LDL-C Low D ensity Lipoprotein- Cholesterol ( cholesterol- lipoprotein tỷ trọng thấp ) VLDL Very Low Density Lipoprotein ( lipid tỷ trọng thấp) TG Triglycerid CHOLtp Cholesterol tồn phần SKLM Sắc ký lófp mỏng SKG Sắc ký giấy ưv U ltra violet spectrom etry (Tử n g o i) M DA M alonyl D ialdehyd DĐVN Dược điển Việt Nam MỤC LỤC Trang ĐẬT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔ N G Q UAN 1 M ột số hiểu biết Cần tây 1.1 Đặc điểm hình thái thực vật 1 Thành phần hoá học 1 Tác dụng công dụng Vai trò Flavonoid bệnh tăng huyết áp 1.3 Bệnh tăng huyết áp thuốc điều trị 12 Bệnh tăng huyết áp 12 1.3.2 Thuốc điều trị tăng huyết áp 17 1.3.3 Bệnh tăng huyết áp theo Y học cổ truyền thuốc 27 CHUƠNG 2: ĐƠÌ TUỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP N G H IÊN c ú u 29 2.1 Đối tượng nghiên cứu 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu 29 2.2.1 N ghiên cứu hoá học 29 2.2.2 N ghiên cứu tác dụng dược lý 30 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 36 CHƯƠNG THỰC NG H IỆM VÀ KẾT 3.1 Chiết suất, định tính, định lượng phân lập flavonoid toàn 38 38 phần Cần tây 3.1.1 Chiết suất 38 3.1.2 Đ ịnh tính Flavonoid toàn phần chế phẩm 39 3.1.3 Đ ịnh lượng flavonoid toàn phần phương pháp cân 44 3.1.4 Phân lập Flavonoid nhận dạng chất phân lập 45 3.2 Thử độc tính thử tác dụng dược lý flavonoid tồn phần 52 3.2.1 Độc tính cấp 52 3.2.2 Ảnh hưởng chế phẩm tim ếch chỗ 52 3.2.3 Ảnh hưởng chế phẩm tim ếch cô 53 lập 3.2.4 Thử tác dụng hệ m ạch tai thỏ cô lập 56 3.2.5 Thử tác dụng hệ m ạch tai thỏ chỗ 57 3.2.6 Thử tác dụng điều hoà lipid 58 3.2.7 Tác dụng huyết áp M èo 62 CHƯƠNG BÀ N LUẬN 63 CHƯƠNG K ẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 65 T À I L IÊ U T H A M K H Ả O 66 ĐẶT VẤN ĐỂ Tăng huyết áp (THA) m ột bệnh phổ biến nước phát triển m nước phát triển nên tổ chức y tế giới (W HO ) nước quan tâm nghiên cứu thường xuyên Theo thống kê W HO (1979 ) tỷ lệ THA toàn giới 8-18% Châu Âu 10%, Châu M ỹ 15-20% Đến năm 1996 tỷ lệ toàn giới 20% Việt Nam năm 60 có 1% cho người trưởng thành, đến năm 70 có khoảng 1,9% đến năm 90 11,5%, tăng gấp 10 lần [19] Theo kết nhiều cơng trình nghiên cứu [ 20, 25, 48 ] tăng huyết áp làm gia tăng sư xâm nhập phân tử lipid từ huyết tương vào tế bào nội bì thành động m ạch hình thành m ảng vữa xơ làm tắc m ột phần hay trọn động m ạch vành, phần tim liên quan không tưới máu sau m ột thời gian bị hoại tử Nếu để lâu dẫn tới bệnh nguy hiểm suy tim, nhồi m áu tim, suy thận , tai biến m ạch m áu não Đó lý tim m ạch xếp vào bệnh có nguyên nhân gây tử vong cao Việc chẩn đoán sớm điều trị kịp thời bệnh tăng huyết áp quan trọng Cùng với phát triển xã hội, thuốc điều trị THA ngày đa dạng dược chất lẫn dạng bào chế Tuy nhiên giá thành dược phẩm tây y cao thường gây tác dụng phụ buồn nơn, chóng mặt, nhức đầu N ên xu hướng chung th ế giới quay trở lại nghiên cứu sử dụng nguồn dược liệu thiên nhiên làm thuốc phòng điều trị bệnh tim m ạch V iệt N am m ột quốc gia có khí hậu nhiệt đới gió m ùa với nhiều dược liệu có tác dụng hạ huyết áp, nhiều chưa nghiên cứu đầy đủ Theo kinh nghiệm dân gian số tài liệu công bố cho thấy Cần tây ( Apium graveolens L ) họ Hoa tán ( Apiaceae) loại rau đồng thời m ột thuốc quý trồng có tác dụng hạ huyết áp Từ năm 90 có cơng trình nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hoá học số tác dụng dược lý Cần tây trồng m ột số vùng quanh Hà nội [ 13, 24, 27, 30 ] sơ có tính chất thăm dò, khảo sát ban đầu Với m ong m uốn góp phần tạo sở khoa học cho việc chế biến sử dụng Cần tây- nguồn nguyên liệu sẵn có nước để làm thuốc phòng chữa bệnh tăng huyết áp chúng tơi tiếp tục nghiên cứu nhóm chất Flavonoid thành phần hố học có hàm lượng cao thử tác dụng hạ HA chúng Đề tài thực với hai mục liêu ; Chiết tách phân lập Flavonoid Nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp Flavonoid toàn phần Chương TỔNG QUAN 1.1 MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỂ CÂY CAN TÂY Cây Cần Tây gọi D ưig Cần Thái, Cần tầu T ên khoa học A p iu m g v e o le n s L , h ọ h o a tá n ( A p ia c e a e ), câ y có n g u n g ố c C h âu Âu (V ù n g Đ ịa T ru n g H ả i) C ần tâ y đư ợc d i th ự c v nư c ta từ lâ u đ i đ ã th íc h n g h i tố t vớ i đ iề u k iệ n k h í h ậ u , th ổ n h ỡ n g V iệ t N am nư c ta c â y C ần tâ y đư ợc trồ n g p h ổ b iế n đ ể m u ăn C ây C ần tây đ ã có tên thứ c tro n g tài liệu k h o a h ọ c thự c vật q uan trọ n g n h : " Thực vật ch í đơng dương" [44], "C ây cỏ th ờng th V iệt N am " [6 ]," C ây cỏ V iệt N am "[14], "N hững th u ố c vị th u ố c V iệ t N am " [2 ]," C ây tin h dầu V iệt N am "[22] m ô t số tài liệu khác Ảnh 1: Cây cần táy (Ảnh chụp vùng Cầu Diễn, Hà Nội) 1.1.1 Đ ặc điểm h ìn h th i th ự c vật: Năm 1997 luận văn tốt nghiệp, Hoàng Tùng nghiên cứu kết luận m ẫu Cần tây trồng Hà nội vùng xung quanh Cần tây có tên khoa học Apium graveolens L họ Hoa tán Apiaceae Cây Cần tây thảo, cao thân nhẵn, có nhiều rãnh dọc, nhiều cành, mọc thẳng đứng Lá gốc có cuống, hình thn hay tam giác, có dạng năm cạnh, xẻ thuỳ cho tói phía phiến, thuỳ hình tam giác dạng mắt chim, tù, có khía lượn tai bèo, không cuống, chia hay không chia thuỳ Hoa mọc thành cụm, gồm nhiều tán, tán đầu cành có cuống dài tán bên, khơng có tổng bao Hoa nhỏ, màu trắng nhạt hay màu lục Hoa lưỡng tính, mẫu 5: đài, cánh hoa, số rụng sớm nhị xếp xen kẽ hoa Bộ nhuỵ gồm hai nỗn, đính với thành bầu dưới, vòi nhuỵ rời, gốc vòi có tuyến mật Quả có cán chia đơi mang hình cầu, dạng trứng, nhẵn có cạnh lồi chạy dọc, khơng rõ Hạt có phơi nhỏ, có nội nhũ chứa dầu Trên vi phẫu cắt ngang thân, rễ có ống tiết tinh dầu thành tròn đều, tập trung nhiều đám mô dày lớp libe thân, phần m m ềm gân phiến Còn rễ, ống tiết nằm rải rác mô mềm vỏ, tập trung nhiều lớp libe [ , 7, 27, 44], 1.1.2 T h n h p h ầ n h o học: Trong A pium graveolens L có V itam in A, B c, chất khoáng, kim loại, acid am in tinh dầu H àm lượng tinh dầu khoảng 1%, 2-6% Tinh dầu Cần tây có chứa khoảng 50 thành phần khác d- lim onen cao ( 72,16% ), sau đến P- selinen ( 12,17% ).Trong tinh dầu d- lim onen chiếm 60%, P- selinen chiếm 10% 3% phtalid ngồi có Stiben, m ột ancol vòng a - Y terpin, a -ịỉ pinen, santalol, a-ị3 eudesmol, dihydrocarvone [7, 21, 22 ] P htalid bao gồm 3-n- b u ty lphtalid butyl-4,5-dihydrophtalid (sedanenolid), sedanolid, anhydric sedanoic M ùi thơm Cần tây chíiứi lim onen phtalid [36] ■ M ột số tài liệu công b ố [ 31, 47, 51, 52, 54, 55, 59, 60 ] Cần tây chứa F lavonoid là: A pigenin, L uteolin, A piin ( A pigenin apiosyl gliicosid), L uteolin 7- apiosyl g lu cosid , L uteolin 3'- m ethyl ether - apiosyl gliicosid C oum arin : Psoralen với d ẫn chất là: B ergapten ( 5- m ethoxy psoralen), X an th o to x in ( - m eth o x y psoralen), Isopim pinellin (5,8- dim eth o x y psoralen), 4, 5', - trim ethyl psoralen N goài Cần tây có thànli phần khác Iihư : họp chất có nitơ, chất béo, cellulose, caroten, phytosterol Đ ối với Cần tây V iệt N am , theo N guyễn V ăn Toaiih hàm lưọiìg tinh dầu hoa 0,42% , thân 0,35% ( tíiih theo dược liệu khơ) Trên sắc ký đồ sắc ký klií có 21 píc, đa số píc nằm vùng m ono- terpen, m ột vài píc nằm víiiig sesq u iteip en [ 30 ] H oàng T ùng xác địiih rau Cần tây thàiih phần tiiili dầu, chất béo có F lavonoid, C oum arin, caroten phytosterol Trong thành phần Flavonoid Icà chủ yếu Bằng phương pháp sắc ký giấy xác định dịch chiết thân có n h ấ t vết chất F lavonoid, vết chất coum arin T rong dịch chiết rễ có Iihất vết chất Flavonoid, vết chất coum arin Bằng sắc ký giấy tác giả phân lập vết chất có đm h hấp thụ cực đại nằm VLing ánh sáng tử n g o ại đặc tn m g cho F lavonoid [ 27 ] Đ ỗ Thị T hảo phương pháp h oà tan -kết tủa dung m ôi sắc ký cột với chất hấp phụ silicagel phân lập thành phần tiiih khiết có tính chất h o học quan g phổ đặc tiinig cho họp chất coum arin xác địiih d ịch chiết Flavonoid tồn phần có vết chất F lavonoid [ 24] 57 Bảng 3.9: Ả ih hưởng dung dịch flavonoid toàn phần hệ mạch tai thỏ cô lập liều 0,1 % Số giọt dung dịch chảy tĩnh m ạch rìa tai Thỏ Dung dịch ringer tai Dung dịch 0,1 % 24 78 37 61 35 80 46 79 56 97 40 67 41 72 27 63 TB 38,25+10,19 74,63+11,62