Nghiên cứu invitro ảnh hưởng của tá dược tới tác dụng của ketoconazol trong dạng thuốc dùng ngoài da

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI IIỌC Dược HÀ NỘI BỘ Y TÊ Ds Trần Kim Chi NGHIÊN CỨU IN VITRO ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC TỚI TÁC DỤNG CỦA KETOCONAZOL TRONG DẠNG THUỐC DÙNG NGỒI DA Chun ngành: Cơng nghiệp dược phẩm bào chế thuốc Mã sô: 30201 LUẬN VÀN TỐT NGIIIỆP TIIẠC s ĩ DƯỢC IIỌC -IIÀ NỘI 1999- LỜI CẢM ƠN Đề tài thực môn Bào chế tổ môn Vi nấm kháng sinh - Trường Đại học Dược Hà nội, hướng dãn PTS Nguyễn Văn Long PTS Chu Thị Lộc Trong q trình nghiên cứu tơi nhận giúp đỡ tạo điều kiện đầy đủ Thầy, Cô giáo môn bào chế tổ mơn vi nấm-kháng sinh Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PTS Nguyễn Văn Long, PTS Chu Thị Lộc - bảo hướng dẫn tận tình thời gian tơi thực đề tài tồn thể thầy giáo, gia đình bạn bè động viên hỗ trợ tơi hồn thành nhiệm vụ đề tài Hà nội, ngày 01 tháng năm 1999 DS Trần Kim Chi MỤC LỤC PHẦN I: MỞ ĐẦU PHẦN II: TỔNG QUAN 2.1 Thuốc chống nấm 2.1.1 Vài nét thuốc chống nấm 2.1.2 Các loại vi nấm gây bệnh 2.2 Bệnh nấm cỉa 2.3 Thuốc chống nấm họ Imidazol 2.3.1 Sơ lược thuốc chống nấm họ Imidazol 2.3.2 Ketoconazol m % 2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến giải phóng khỏi tá dược dạng thuốc dùng 2.4.1 Vài nét cấu trúc, nhiệm vụ chứcnăng sinh lý da 2.4.2 Ảnh hưởng yếu tố công thức kỹ thuật bào chế 9 10 2.5 Phương pháp nghiên khả giải phóng dược chất in vitro khỏi tá dược dạng thuốc dùng da 19 2.6 Phương pháp nghiên cứu tác dụng thuốc chống nấm dùng da in vitro 20 PHẨN III: NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIÊN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 21 3.1 Nguyên liệu 21 3.2 Phương tiện 22 3.3 Phương pháp nghiên cứu 22 3.3.1 Phương pháp chế mẫu 22 3.3.2 Phương pháp khảo sát tốc độ giải phóng hoạt chất thuốc mỡ Ketoconazol chế tạo qua màng celophan 26 3.3.3 Kháo sát tốc độ giải phóns hoạt chất mẫu chê tạo qua màns; celophan 3.3.4 Phương pháp thử tác dụng thuốc mỡ chế tạo vi nấm ill vitro 27 27 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT 29 4.1 Nghiên cứu khả giải phóng Ketocona/ol khỏi tá dược qua màng celophan 4.1.1 Đường chuẩn Ketoconazol nước 29 29 4.1.2 Sự giải phóng Ketoconazol khỏi tá dược thân dầu tá dược khan 30 ỉ Sự giải phóng Ketoconazol khỏi tá dược thân nước 30 4.1.4 Sự giải phóng Ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương 35 4.1.5 Sự giải phóng Ketoconazol khỏi tá dược emulgel 41 4.1.6 So sánh giải phóng Ketoconazol khỏi mẫu thuốc mỡ thực nghiệm sau 30 phút 42 4.1.7 So sánh giải phóng Ketoconazol khỏi mẫu thuốc mỡ thực nghiệm sau 43 4.2 Nghiên cứu tác tỉụng chống nấm in vitro 44 4.2.1 Phương pháp khuếch tán thạch 44 4.2.2 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu 46 4.3 Đánh giá tương quan khả giải phóng qua màng tác (lụng chống nấm in vitro 48 PHẨN V: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Đề xuất 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHÂN II: TỒNG QUAN 2.1 Thuốc chống nấm 2.1.1 Vài nét thuốc chống nấm Thuốc chống nấm thuốc dùng chủ yếu để điều trị phòng bệnh nhiễm nấm Chúng bao gồm chủ yếu nhóm thuốc sau: • Allylamin (naftifine terbinafine), • Kháng sinh họ macroliđ polyen (gồm có amphotericin B nystatin), • Các kháng sinh chống nấm khác griseofulvin, • Dãn xuất imidazol (như ketoconazol, miconazol, clotrimazol), • Dẫn xuất triazol (như fluconazol), • Một vài acid béo (acid caprylic propionic muối chúng), • Một số hợp chất khác amorolfine, ciclopirox olamine, flucytosine, haloprogin, tolnaftate, acid undecenoic muối • Các thuốc khác dùng nhiễm nấm như: acid benzoic, co-trimoxazol, tím tinh thể, kali iodid, selen sulfit, natri thiosulphat chất kháng khuẩn khác [19] 2.1.2 Các loại vi nấm gây bệnh Vi nấm bao gồm nấm mốc nấm men, nhóm vi sinh vật có cấu tạo tế bào Eucaryote Tế bào vi nấm nhỏ, muốn quan sát phải dùng kính hiển vi Nấm khơng có chất diệp lục, sống hoại sinh ký sinh Nấm mốc nấm men khác đặc tính hình thái chúng Nhiều lồi vi nấm ứng dụng công nghệ lên men sinh tổng hợp thực phẩm thuốc Tuy nhiên, bên cạnh đặc tính có ích, khơng lồi vi nấm gây nên nhiều tác dụng có hại Người ta xác định khoảng 13-15 lồi nấm men có khả gây bệnh cho người cho động vật Đáng ý loài: Candida albicans, Ciyptococcus neoformans, Trichosporon cutaneum, Trichosporon capitatum, Trichophyton rubrum, Epidermophyton interidigitale Nấm mốc nấm men, chúng phát triển nhanh nhiều nguồn chất hữu gặp khí hậu nóng ẩm Nhiều loại nấm ký sinh người, động vật, thực vật gây bệnh nấm nguy hiểm Một số nấm sinh độc tố gây ung thư nhiều bệnh tật khác Một vài loại nấm có tác dụng gây bệnh thực gây bệnh cá thể Các loại nấm khác có khả gây bệnh thấp cần có thay đổi chế bảo vệ bình thường kháng lại bệnh, bệnh gọi nhiễm khuẩn hội [5] Nhiễm nấm phân loại nhiễm nấm bề mặt có tác động lên da, tóc, móng chân, móng tay màng nhầy, nhiễm nấm toàn thân Nhiễm nấm tồn thân có khuynh hướng xuất bệnh nhân bị suy giảm hệ thống miễn dịch bệnh AIDS Nhiễm nấm chỗ giới hạn vùng thể, lan rộng vào mô, lây truyền lan rộng từ nơi nhiễm ban đầu đến quan khác toàn thể Điều trị nấm nên định sau vi sinh vật gây nhiễm xác định, thường bệnh nhân suy giảm miễn dịch việc điều trị thường bắt đầu trước vi sinh vật gây bệnh ni cấy xác định, việc nhiễm bệnh tiến triển nhanh Tóm tắt thuốc sử dụng điều trị bệnh nấm [19] Nấm • Aspergillus flavus Thuốc chống nấm A • Amphotericin B fumigatus • Blastomyces dermatidis • • Amphotericin B, Azol Candida albicans • Amphotericin B, azol, nystatin, • da niêm mạc terbinafin • sâu lan truyền • Amphotericin B, ampỉioterecin kết hợp với flucytosine, azol • Cladosporium carrionii • Flucytosine, thiabendazol • Rhinocladiella aquaspersa • Coccidioidoides immitis • Amphotericin B • Cryptococcus neoformans • Amphotericin B, azol • Histoplasma capsulatum • itraconazol, • Amphotericin B, azol Nấm họ Mucoraceae: Rhizopus • Amphotericin B equinus • Madurella mycetomatis • M grisea • Ketoconazol • Pseudalleschria boydii • Paracoccidioides braslliensis • Amphotericin B, Ketoconazol • Pneumocystis carinii • • Prototheca spp • Amphoterecin B • Nani da • nấm da bề mặt • Co-trimoxazol, pentamidine azol, ciclopirox olamine, tolnaftate, acid undecenoic • lan rộng • Azol, griseojulvin • • Azol, griseofulvin, terbinafine lang ben • Sporothrix schenckii Kali iodid • da • • da • Amphotericin B 2.2 Bệnh nấm da [19] Nhiễm nấm da chủ yếu bệnh nấm da, lang ben bệnh nhiễm Candida albicans Ngồi Aspergillus flavus A fumigatus, Blastomyces dermatidis, Cryptococcus neoformance, Histoplasma capsulatum w Đơi nhiễm nấm ảnh hưởng đến màng nhày, móng chân móng tay, mơ da, lan truyền đến mơ sâu đặc biệt bệnh nhân suy giảm miễn dịch • Nấm da (ecpet mảng tròn, nấm tóc) vi sinh vật sống đất nguyên nhân gây bệnh người loài Epidermophyton interidigitale, Microsporum can is Trichophyton mentữgrophytes Nấm da tăng sinh điều kiện nóng ẩm điều kiện vệ sinh tồi thường xuất vùng nhiệt đới • Nhiễm nấm da bề mặt chỗ thể nhẹ thường đáp ứng điều trị chỗ Các azol sử dụng da gồm clotrimazol, econazol, ketoconazol miconazol • Nhiễm nấm vài vị trí thể đáp ứng điều trị da, nhiễm nấm lan rộng khu vực sừng hoá cao, trường hợp cần kết hợp điều trị tồn thân • Ketoconazol có phổ tác dụng rộng, nhung đơi có tác dụng phụ nghiêm trọng dùng dài ngày, thay itraconazol, chất cho đáp ứng điều trị nhanh đòi hòi thời gian điều trị ngắn • Nấm móng: điều trị kết hợp với griseofulvin theo đường uống azol dùng ngồi da cho đáp ứng tốt Sử dụng ketoconazol đường uống nấm móng bị hạn chế khả độc tiềm tàng • Lang ben: nhiễm nấm bề mặt nấm men M aỉasseiia furfur (Pityrosporum orbiculaire) Bệnh lang ben thường đáp ứng với chất chống nấm azol dùng da 2.3 Thuốc chống nấm họ Imidazol 2.3.1 Sơ lược thuốc chống nấm họ Imidazol • Bifonazol: có phổ tác dụng rộng, nấm da, Malassezia furfur, Candida spp • Butoconazol: có tác dụng lên Candida spp, nấm da dùng chỗ để điều trị nấm Candida âm đạo • Clotrimazol: có tác dụng tương tự Ketoconazol • Croconazol hydroclorid: dùng điều trị nhiễm Candida da bề mặt, nấm da lang ben • Econazol: có tác dụng tương tự Ketoconazol • Enilconazol: dùng thuốc thú y • Fenticonazol nitrat: có tác dụng in vitro nấm da,Malassezia furfur, Candida albicans • Fluconazol: dùng theo đường uống đường tĩnh mạch nhiễm Candida, viêm màng não cj-yptococcus nấm da • Flutrimazol: dùng da điều trị nhiễm nấm bề mặt • Isoconazol: có phổ tác dụng rộng lên Candida spp Và nấm da • Itraconazol: dùng điều trị nhiễm Candida, nấm tóc, lang ben vài trường hợp nhiễm nấm tồn thân • Ketoconazol: • Lanoconazol: dùng ngồi điều trị nhiễm nấm bề mặt • Miconazol: dùng điều trị nhiễm Candida bề mặt nhiễm nấm da Cũng dùng theo đường tĩnh mạch điều trị nhiễm nấm tồn thân • Omoconazol nitrat: có tác dụng lên vi khuẩn nấm Thường dùng điều trị nhiễm Candida da, nấm da lang ben • Oxiconazol nitrat: thường dùng ngồi điều trị nhiễm nấm da • Sulconazol: có tác dụng lên nấm da, M aỉasseiia furfur Candida albicans.[19] 2.3.2 Ketoconazol 2.3.2.1 Cấu trúc hoá học C! H3CC - N \ / N ch2 o C26H28C12N40 = 531,4 Tên khoa học: (±)-cis-l-acetyl-4-{4-[2-(2,4-diclophenyl)-2-imidazol-lylm ethyl-1,3 -dioxolan-4-ylmethyloxy]pheny 1}piperazin 2.3.2.2 Tính chất: • Lý tính: bột trắng gần trắng Thực tế không tan nước, tan ethanol; tan methanol; dễ tan methylen clorid • Hố tính: dễ bị oxi hoá phân huỷ tác động ánh sáng.[22] 2.3.2.3 Tác dụng: Ketoconazol chất chống nấm họ imidazol tác động lên tổng họp ergosterol biến đổi tính thấm màng tế bào nấm nhạy cảm với ketoconazol Ketoconazol có phổ tác dụng rộng: tác dụng lên Candida spp., Blastomyces dermatidis, Coccidioides immitis, Epidermophyton floccosum, Histopỉasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis, Malassezia furfur, Microsporum canis, Trichophyton meỉitagrophytes, T rubrum Một vài chủng Aspergillus spp., Cỉyptococcus neoformans Sporothrix schenckii nhạy cảm với Ketoconazol Giá trị nồng độ ức chế tổi thiểu (MIC) phụ thuộc vào phương pháp xác định, không luôn số dự đốn tác dụng in vivo Ketoconazol có tác dụng số vi khuẩn Gram dương [20] 2.3.2.4 Dược động học Ketoconazol: Hấp thu qua đường tiêu hoá biến thiên tăng lên giảm pH dày Pic nồng độ máu khoảng 3,5 |Lig/ml đạt sau h sau dùng 200 mg theo đường uống Hấp thu vào thể dùng dạng dùng ngồi khơng tối 4.1.4.3 Sự giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương sử dụng cặp chất diện hoạt khơng ion hố (Tween 80 Span 80) dung môi PG - Chế tạo phương pháp hồ tan (cơng thức 11) Bảng 10: Sự giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương dùng chất diện hoạt khơng ion hố điều chế phương pháp hồ tan D 0,114 0,175 0,208 0,263 0,281 0,312 0,352 c (mg/ml) 0,007 0,010 0,013 0,015 0,017 0,019 0,022 T (h ) 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000 4,000 T 1/2 (h) 0,707 1,000 1,225 1,414 1,581 1,732 2,000 Q (mg) 0,167 0,263 0,322 0,417 0,458 0,523 0,604 tương dùng chất diện hoạt khơng ion hố điều chế phương pháp hoà tan 39 - Chế tạo phương pháp phân tán (cơng thức 11*) Bảng 11: Sự giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương dùng chất diện hoạt khơng ion hố điều chế phương pháp phân tán 0,081 0,139 0,179 0,209 0,241 0,269 0,303 0,005 0,008 0,011 0,013 0,015 0,016 0,019 T (h ) 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000 4,000 T 1/2 (h) 0,707 1,000 1,225 1,414 1,581 1,732 2,000 Q (mg) 0,119 0,208 0,276 0,332 0,393 0,449 0,518 D c (mg/ml) Hình 13: Đổ thị biểu diễn tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương dùng chất diện hoạt khơng ion hố điều chế phương pháp phân tán Cũng với tá dược thân nước, lượng ketoconazol giải phóng khỏi tá dược nhũ tương sử dụng chất diện hoạt không ion hố (Tween 80 Span 80) với dung mơi PG, điều chế phương pháp hoà tan phân tán tuyến tính vói t1/2 Mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương chế tạo phương pháp hoà tan cao so với tá dược nhũ tương chế tạo phương pháp phân tán 40 Hình 14: Đồ thị so sánh giải phóng ketoconazol từ cơng thức chế với tá dược nhũ tương sau Nhìn chung, mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương điều chế phương pháp hoà tan cao so vói điều chế phương pháp phân tán Mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược nhũ tương xếp sau: nhũ tương dùng dung môi PG chất diện hoạt anion > nhũ tương dùng dung môi PG với cặp chất nhũ hố khơng ion hố > nhũ tương sử dụng dung môi DMF chất diện hoạt anion 4.1.5 Sự giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel, dùng cặp chất diện hoạt khơng ion hố (cơng thức 12) Bảng 12: Sự giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel, dùng cặp chất diện hoạt khơng ion hố D 0,205 0,291 0,375 0,439 0,507 0,564 0,636 c (mg/ml) 0,013 0,018 0,023 0,027 0,031 0,034 0,039 T (h ) 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000 4,000 T 1/2 (h) 0,707 1,000 1,225 1,414 1,581 1,732 2,000 Q (mg) 0,301 0,439 0,581 0,699 0,826 0,945 1,090 41 Hình 15: Đồ thị biểu diễn tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel dùng cặp chất diện hoạt không ion hố Từ kết ghi bảng 12 hình 15 thấy mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel lớn khoảng lần so với tá dược nhũ tương khác lớn nhiều so với tá dược khác Điều giải thích sử dụng tá dược emulgel, độ tan tốc độ tan ketoconazol tăng lên nhiều dung mơi chất diện hoạt mức độ tốc độ giải phóng tăng lên 4.1.6 So sánh giải phóng ketoconazol khỏi mẫu thuốc mỡ thực nghiệm sau 30 phút đầu tiên: Bảng 13: Lượng hoạt chất giải phóng sau 30 phút mẫu thuốc mỡ thực nghiệm CÔNG 0 10 11 12 13 THÚC Qmg 0,293 ,1 0 0,214 0,188 0,179 0,168 0,141 0,158 0,119 0,167 0,301 42 0.301 0.293 0.214 0.188 0.179 168 167 0.158 Q sau 30' 0.141 0.119 0.100 CM in CO to Ơ) Hình 16: Đồ thị so sánh giải phóng ketoconazol khỏi thuốc mỡ thực nghiệm sau 30 phút Như thấy rằng, tá dược PEG emulgel giải phóng ketoconazol nhanh 30 phút đầu tiên, điều có ý nghĩa thuốc chống nấm 4.1.7 So sánh giải phóng ketoconazol khỏi mẫu thuốc mỡ thực nghiệm sau h: Bảng 14: Lượng hoạt chất giải phóng sau h mẫu thuốc mỡ thực nghiệm: CÔNG ọ* 0 0,629 0,213 0,459 0,478 0,648 0,609 0,512 0,572 0,518 0,604 1,09 10 10* 11 11* 12 THỨC Q mg 43 m Q Sau 4h Hình 17: Đồ thị so sánh giải phóng ketoconazol khỏi thuốc mỡ thực nghiệm sau Kết cho thấy: số tá dược khảo sát tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel > tá dược PEG > tá dược caipobol > tá dược CMC > tá dược HPMC > tá dược nhũ hoá điều chế phương pháp hoà tan > tá dược nhũ hoá điều chế phương pháp phân tán > tá dược thân dầu Mức độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel > tá dược nhũ hoá điều chế phương pháp hồ tan > tá dược nhũ hố điều chế phương pháp phân tán > tá dược thân nước > tá dược thân dầu Kết phù hợp với kết luận nhiều tác giả khác nghiên cứu ảnh hưởng tá dược với giải phóng dược chất tan, đặc biệt chất chông viêm không steroid [15] Như số tá dược khảo sát, mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược emulgel cao 4.2 Nghiên cứu tác dụng chống nấm in vitro: 4.2.1 Phương pháp khuếch tán thạch: Tiến hành nghiên cứu tác dụng chống nấm in vitro theo phương pháp ghi mục 3.5.1 Kết trình bày bảng 15 hình 18: 44 Khơng thấy có tác dụng chủng Saccharomyces cereviacea ATCC 2601 Bảng 15: Tác dụng kháng nấm mẫu thuốc mỡ thực nghiệm c albicans ATCC 10231 K kháng nấm biểu thị Cóng thức th nấm đường kính vòng ức chế d (mm) Công thức (PEG) 17,4 Công thức (HPM Q 11,3 Công thức (CMC) 17,6 Công thức (carbopol 934) 18,2 Công thức (PG, chất diện hoạt anion, 19,5 phương pháp hồ tan) Cơng thức 9*(PG, chất diện hoạt anion, 16,8 phương pháp phân tán) Công thức 10 (DMF, chất diện hoạt anion, 18,3 phương pháp hoà tan) Công thức 10*(DMF, chất diện hoạt anion, 17,3 phương pháp hồ tan) Cơng thức 11 (PG, chất diện hoạt khơng ion 19 hố, phươne pháp hồ tan) Cơng thức 11*(PG, chất diện hoạt khơng ion 16,5 hố, phương pháp phân tán) Công thức 12 (emulgel) 19,5 45 d (mm) 25 1— — — 17.6 18.2 17.4 15 10 19.5 18.3 17.3 16 19.5 19.5 16.5 11.3 - - 9* 10 1( 10 * 11 11 ’ 12 cơng thức Hình 18: Đồ thị so sánh tác dụng kháng nấm thuốc mỡ Ketoconazol 2% thực nghiệm c albicans ATCC 10231 Từ kết bảng 15 hình 18 nhận thấy: - Trong số tá dược thân nước sử dụng để chế thuốc mỡ ketoconazol tác dụng kháng nấm c albicans tốt dùng tá dược gel carbopol 934, tác dụng kháng nấm hổn họp PEG gel CMC 3% không khác tốt gel HPMC 14% - Các thuốc mỡ ketoconazol chế tạo với hệ tá dược nhũ tương tác dụng kháng c albicans tốt tá dược thân nưó'c(PEG gel) - Trong số chế phẩm ketoconazol chế tạo với tá dược nhũ tương phương pháp hoà tan ưu điểm hon phương pháp phân tán đối vói tác dụng kháng c albicans - Kem ketoconazol chế tạo với tá dược nhũ tương dùng chất nhũ hoá anion (natri laurylsulphat) dung môi PG điều chế phương pháp hồ tan tá dược emulgel có tác dụng chống nấm tốt so với tá dược nhũ tương khác 4.2.2 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu: Tiến hành nghiên cứu tác dụng chống nấm in vitro theo phương pháp ghi mục 3.5.2 Kết trình bày bảng 16 hình 19 Bảng 16: Nồng độ ức chế tối thiểu thuốc mỡ Ketoconazol thực nghiệm c albicans ATCC 10231 46 Công thức th nấm M IC m g /m l Công thức (PEG) 6,25 Công thức (HPM Q 12,5 Công thức (CMC) 6,2 Công thức (carbopol 934) 6,25 Công thức (PG, chất diện hoạt anion, phương pháp hồ tan) Cơng thức 9*(PG, chất diện hoạt anion, 6,25 phương pháp phân tán) Công thức 10 (DMF, chất diện hoạt anion, phương pháp hoà tan) Công thức 10*(DMF, chất diện hoạt anion, 6.2 phương pháp hồ tan) Cơng thức 11 (PG, chất diện hoạt khơng ion hố, phương pháp hồ tan) Cơng thức 11*(PG, chất diện hoạt khơng 6.25 ion hố, phương pháp phân tán) Công thức 12 (emulgel) MIC (mg/ml) 9c ô n S*th ứ ỈO 10* 11 11* 12 Hình 19: Đồ thị biểu thị nồng độ ức chế tối thiểu thuốc mỡ ketoconazol thực nghiệm c albicans ATCC 10231 47 Từ kết bảng 16 hình 19 nhận thấy: - Trong số thuốc mỡ ketoconazol thực nghiệm chế tạo tá dược thân nước, nồng độ ức chế tối thiểu c albicans thuốc mỡ với tá dược gel carbopol 934 0,6%, PEG gel CMC 3% không khác thấp gel HPMC 14% - Các thuốc mỡ ketoconazol chế tạo với hệ tá dược nhũ tương có MIC c albicans thấp so với tá dược thân nước - Trong số chế phẩm ketoconazol chế tạo với tá dược nhũ tương phương pháp hồ tan có MIC c albicans thấp so với phương pháp phân tán Từ kết nghiên cứu in vitro tác dụng chống nấm hai phương pháp khuếch tán thạch xác định nồng độ ức chế tối thiểu sơ rút nhận xét sau: - Trong số thuốc mỡ thực nghiệm chế tạo với hệ tá dược thân nước, thuốc mỡ chế tạo với tá dược carbopol, PEG CMC có tác dụng chống nấm tốt tá dược HPMC - Kem nhũ tương ketoconazol thực nghiệm chế tạo phương pháp hoà tan có tác dụng chống nấm tốt so với phưang pháp phân tán - So sánh tác dụng chống nấm thuốc mỡ thực nghiệm, mẫu chế tạo với tá dược emulgel tá dược nhũ tương cho tác dụng chống nấm tốt so với tá dược thân nước 4.3 Đánh giá tương quan khả giải phóng qua màng tác dụng chống nấm in vitro: Qua kết nghiên cứu nhận xét mối tương quan khả giải phóng ketoconazol khỏi tá dược qua màng bán thấm celophan tác dụng chống nấm invitro sau: Ketoconazol giải phóng khỏi tá dược nhũ tương điều chế phương pháp hoà tan với mức độ tốc độ tốt phương pháp phân tán Kết thử tác dụng chống nấm in vitro c albicans hai phương pháp khuếch tán thạch xác định nồng độ ức chế tối thiểu 48 Ketoconazol giải phóng khỏi tá dược nhũ tương điều chế phương pháp hoà tốt so với tá dược thân nước HPMC, CMC carbopol Kết thử tác dụng chống nấm in vitro c albicans hai phương pháp khuếch tán thạch xác đinh nồng độ ức chế tối thiểu Ketoconazol giải phóng khỏi tá dược emulgel với mức độ tốc độ tốt tá dược nhũ tương điều chế phương pháp phân tán tá dược thân nước Kết thử tác dụng chống nấm in vitro c albicans hai phương pháp khuếch tán thạch xác đinh nồng độ ức chế tối thiểu Từ số liệu thực nghiệm thu qua nghiên cứu giải phóng ketoconazol khỏi tá dược qua màng celophan thử tác dụng chống nấm c albicans ATCC 10231 kết luận tương quan mức độ tốc độ giải phóng ketoconazol khỏi tá dược tương đối thuận với tác dụng kháng nấm in vitro Do đó, phương pháp nghiên cứu giải phóng qua màng áp dụng phương tiện đánh giá sơ chất lượng chế phẩm chứa ketoconazol dạng thuốc bơi ngồi da thuốc mỡ, kem, gel Hình 20: Ảnh chụp tác dụng kháng nấm công thức chế tạo c albicans ATCC 10231 49 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT: 5.1 Kết luận: Qua kết thực nghiệm thu được, rút số kết luận sau: Khả giải phóng ketoconazol qua màng bán thấm celophan tác dụng chống nấm in vitro kem Ketoconazol chế tạo với tá dược nhũ tương phương pháp hoà tan tốt hon so với phương pháp phân tán Khả giải phóng qua màng celophan Ketoconazol dạng thuốc bơi ngồi da chế tạo với tá dược emulgel > tá dược PEG > tá dược nhũ hoá > tá dược gel (carbopol 934, CMC, HPMC) Tác dụng chống nấm in vitro thuốc mỡ Ketoconazol chế tạo với tá dược emulgel tá dược nhũ hoá chế tạo phương pháp hoà tan > tá dược thân nước PEG, CMC carbopol 934 > tá dược nhũ hoá phương pháp phân tán > tá dược thân nước HPMC Nói chung có mối tương quan thuận tác dụng chống nấm khả giải phóng qua màng Ketoconazol dạng thuốc bơi ngồi da Tuy nhiên, vài tá dược cụ thể mối tương quan chưa thể 1'ố ràng tá dược PEG emulgel Có thể dùng phương pháp đánh giá giải phóng dược chất qua màng bán thấm thuốc mỡ để sơ đánh giá chất lượng 5.2 Đê xuất: Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tá dược, dung môi kỹ thuật bào chế lên khả giải phóng hoạt chất tác dụng chống nấm để có kết luận toàn diện Nghiên cứu độ ổn định mẫu chế tạo có tác dụng tốt in vitro, từ đưa chế phẩm với hiệu điều trị cao 50 TÀI LIỆU T H A M K H Ả O TÀ ỉ LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Bộ môn bào chế, - Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, Trường Đại hoc Dược Hà nội, Hà nội, 1998 [2] Dược điển Việt nam II, 1993 [3] Nguyễn Lân Dũng, Bùi Xuân Đồng, Lê Đình Lương - Vi nấm - NXB KHKT, Hà nội 1982 [4] Bùi Xuân Đồng, Hà Huy Kế - Nấm mốc phưong pháp phòng chống, NXB KHKT, 1999 [5] Nguyễn Văn Long, Sinh dược học thuốc mỡ, Tài liệu sau đại học, Trường Đại học Dược Hà nội - 1996 [6] Chu Thị Lộc, Kiêm nghiệm thuốc phưcng pháp vi sinh vật, Tài liệu sau đại học, TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI [6] Amin P D et al., Drug Develop Ind Pharm , 22 (1996) , 735-739 [7] Aulton E.M - Pharmaceutics - The Scicncc of Dosage form Design, 1988 [8] Bauker G.S., Christopher, Rhodes T - Modern Pharm aceutics, 1996 [9] British Pharmacopeoia - 1993 [10] Chien Y.E., Drug Develop Ind Pharm , 13, (1987) [11] Claudia Valenta and Sabine Wedenig - J Pharm Pharm acol., 49, 1997, 995-959 [12] Corti P et al - Pharm Act Hclv 72, (1998), 263-269 [13] Da-Peng et al, Drug Develop Ind Pharm , 23, (1997), 99-106 [14] Da-Peng et al, Drug Develop Ind Pharm , 23, (1997), 95-98 [15] Guangwei Le et al — Int J Pharm , 160 (1998), 1- [16] Kolesnikova A.G - M icro Im m uno Epiolemiol, Moskva, 1986 [17]Lachman L Leberman H.A., Kanig J.L - Theory and practice of industrial pharm acy, Philadenphia, 1986 [18] Le Hir - Pharm acie G alcniquc, T edition, 1997 f 19] M artindale - The extra Pharm acopoeia, 29lh, 1989 [20] R em ington’s Pharm accutical Sciences, 1990 [21] Sane R T et al - Indian J Pharm Sci [22] The United State Pharm acopoeia XXIII - 1995 [23] Touitou E., Int J P harm , 70, 1991 [24] USP DI, 14th Edition, 1994 tiếp tục điều trị vài ngày sau hết triệu chứng Dầu gội đầu chứa 2% Ketoconazol dùng hai lần tuần đến tuần để điều trị gầu lần/ngày ngày trường hợp lang ben [24] 23.2.1 Các dạng bào chế Ketoconazol: • Dạng dùng theo đường uống: - hỗn dịch 100 mg/ ml - viên nén ƯSP 200 mg • Dạng dùng ngồi: - kem Ketoconazol 2%: Nizoral - dầu gội đầu có Ketoconazol 2%: Nizoral - chế phẩm khác phối hợp Ketoconazol với kháng sinh thuốc chống viêm phi steroid: ví dụ Ketoderma.[24] 2.4 Các yếu tơ ảnh hưởng đến giải phóng khỏi tá dược dạng thuốc dùng 2.4.1 Vài nét cấu trúc, nhiệm vụ chức sinh lý da: 2.4.1.1 Cấu trúc da: • Lớp biểu bì: gồm màng chất béo bảo vệ, lớp sùng • Trung bì: tổ chức liên kết cấu tạo với sợi protein thân nước • Hạ bì: tổ chức mỡ • Phần phụ: nang lông, tuyến mồ hôi 2.4.1.2 Nhiệm vụ, chức sinh lý da: • Chức học • Chức bảo vệ - Bảo vệ vi sinh vật: môi trường acid tuyến bã nhờn chất tiết, thân da tiết acid béo có mạch cacbon ngắn có tác dụng ức chế phát triển vi khuẩn nấm mốc - Bảo vệ hoá học - Bảo vệ khỏi tia: tia cực tím - Bảo vệ nhiệt điều chỉnh nhiệt [18] ... giải phóng dược chất in vitro khỏi tá dược dạng thuốc dùng da 19 2.6 Phương pháp nghiên cứu tác dụng thuốc chống nấm dùng da in vitro 20 PHẨN III: NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIÊN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c... nấm azol dùng da 2.3 Thuốc chống nấm họ Imidazol 2.3.1 Sơ lược thuốc chống nấm họ Imidazol • Bifonazol: có phổ tác dụng rộng, nấm da, Malassezia furfur, Candida spp • Butoconazol: có tác dụng lên... hoá dược chất pH hệ Một dược chất có hệ số khuếch tán khác dạng kết tinh thù hình khác nhau, cần chọn dạng nào, dẫn chất có hệ số khuếch tán lớn tá dược sử dụng Mặt khác tá dược có ảnh hưởng tới