Nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ treptomyces 191 16

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN VĂN TIỆP NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 191.16 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2018 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN VĂN TIỆP Mã sinh viên: 1301418 NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 191.16 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PSG.TS Cao Văn Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh – Sinh học HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực mơn Vi sinh – Sinh học, trường Đại học Dược Hà Nội, q trình làm khóa luận tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ để hồn thiện khóa luận Trước tiên, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Cao Văn Thu, người định hướng nghiên cứu, hướng dẫn, truyền đạt kiến thức bảo tận tình cho tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội dạy, giúp đỡ suốt q trình học tập trường Đặc biệt, tơi xin cảm ơn thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên giảng dạy môn Vi sinh – Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện cho học tập, thực đề tài nghiên cứu môn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến viện Cơng ngiệp Thực phẩm, viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương, viện Hóa học – viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ thời gian thực khóa luận Do thời gian thực có hạn, điều kiện nghiên cứu trình độ thân hạn chế nên khơng thể tránh khỏi sai sót khóa luận Vì vậy, tơi mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Văn Tiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ, HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Đại cƣơng xạ khuẩn 1.1.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn .2 1.1.2 Đặc điểm hình thái sinh lý xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces 1.1.3 Phân loại Streptomyces 1.2 Tổng quan nghiên cứu kháng sinh từ xạ khuẩn biển 1.2.1 Xu hướng nghiên cứu xạ khuẩn biển 1.2.2 Kháng sinh tạo Streptomyces từ biển 1.3 Bảo quản cải tạo giống 1.3.1 Bảo quản giống xạ khuẩn 1.3.2 Phương pháp cải tạo giống 1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 1.4.1 Lên men bề mặt 1.4.2 Lên men chìm .7 1.4.3 Một số yếu tố ảnh hưởng trình lên men 1.5 Thu sản phẩm tinh chế kháng sinh từ dịch lên men 1.6 Các phƣơng pháp nghiên cứu cấu trúc kháng sinh 10 1.6.1 Phổ khối lượng (MS) 10 1.6.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 10 1.6.3 Phổ hồng ngoại (IR) 11 1.6.4 Phổ tử ngoại - khả kiến (UV-Vis) 11 1.7 Một số nghiên cứu xạ khuẩn loài Streptomyces parvus 11 1.7.1 Hoạt tính kháng khuẩn chống ung thư Streptomyces parvus phân lập từ biển: tối ưu hóa ứng dụng .11 1.7.2 Hoạt tính kháng khuẩn thành phần từ dịch lọc lên men Streptomyces parvus 33 12 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên liệu, thiết bị 13 2.1.1 Chủng giống vi sinh vật 13 2.1.2 Các môi trường nuôi cấy 13 2.1.3 Dụng cụ, dung mơi hóa chất 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.3 Phƣơng pháp thực nghiệm 16 2.3.1 Phương pháp nuôi cấy giữ giống ống thạch nghiêng .16 2.3.2 Xác định đặc điểm hình thái chủng Streptomyces 191.16 .16 2.3.3 Đánh giá hoạt tính kháng sinh phương pháp khuếch tán 18 2.3.4 Phương pháp cải tạo chọn giống 20 2.3.4.1 Sàng lọc ngẫu nhiên 20 2.3.4.2 Đột biến cải tạo giống 20 2.3.5 Phương pháp lên men chìm tổng hợp kháng sinh 22 2.3.6 Phương pháp tách kháng sinh sắc ký 22 2.3.7 Phương pháp kết tinh kháng sinh .23 2.3.8 Sơ xác định cấu trúc kháng sinh tinh khiết thu 23 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 24 3.1 Xác định đặc điểm hình thái, phân loại chủng xạ khuẩn Streptomyces 191.16 3.1.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn theo phân loại ISP .24 3.1.2 Kết giải trình tự gen 16S rADN 24 3.2 Kết sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 191.16 môi trƣờng khác 25 3.3 Kết cải tạo giống 27 3.3.1 Kết sàng lọc ngẫu nhiên 27 3.3.2 Kết đột biến UV 27 3.3.3 Kết đột biến hóa học 29 3.4 Kết lên men sinh tổng hợp kháng sinh 30 3.4.1 Chọn môi trường lên men tốt 30 3.4.2 Chọn dạng chủng, biến chủng lên men tốt .31 3.5 Kết đánh giá ảnh hƣởng pH nhiệt độ đến độ bền hoạt tính kháng sinh 32 3.5.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 32 3.5.2 Ảnh hưởng pH 32 3.6 Kết chọn dung môi hữu chiết xuất kháng sinh 33 3.7 Kết tinh chế kháng sinh 35 3.7.1 Kết tách kháng sinh sắc ký lớp mỏng .35 3.7.2 Sắc ký cột lần 36 3.7.3 Sắc ký cột lần 36 3.7.4 Sắc ký cột lần 38 3.7.5 Kết trình tinh chế kháng sinh 39 3.8 Kết sơ xác định kháng sinh tinh khiết thu đƣợc 39 3.8.1 Phổ khối lượng 39 3.8.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 39 3.8.3 Phổ tử ngoại – khả kiến 39 3.8.4 Phổ hồng ngoại 40 3.8.5 So sánh kháng sinh KS2 với số kháng sinh phân lập từ S.parvus 41 BÀN LUẬN 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIÊU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 16S rADN 16S ribosomal Acid 2’ deoxyribonucleic COSY Corelation Spectroscopy – Phổ NMR tương quan ̅ Đường kính trung bình DMHC Dung mơi hữu DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer dNTP deoxynucliotide triphosphate ddNTP dideoxynucliotide triphosphate ĐBHH Đột biến hóa học Gr (-) Gram âm Gr (+) Gram dương HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coleration – Phổ tương quan đa liên kết dị nhân HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence – Phổ kết hợp lượng tử đơn dị nhân HTKS Hoạt tính kháng sinh IR Infra Red – Phổ hồng ngoại ISP International Streptomyces Project (Chương trình Streptomyces quốc tế KS Kháng sinh MS Mass spectrometry – Phổ khối MT Môi trường MTdt Môi trường dịch thể NMR Nuclear Magnetic Resonance – Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NXB Nhà xuất PCR Polymerase Chain Reaction – Phản ứng khuếch đại gen s Sai số có hiệu chỉnh SKLM Sắc ký lớp mỏng SLNN Sàng lọc ngẫu nhiên SSC Saline-sodium citrate – Dung dịch đệm muối citrat UV-Vis Ultraviolet–visible: Phổ tử – khả kiến VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số kháng sinh tạo Streptomyces từ biển Bảng 2.1: Các vi sinh vật kiểm định Bảng 2.2: Thành phần môi trường nuôi cấy xạ khuẩn Bảng 2.3: Môi trường nuôi cấy VSV kiểm định Bảng 3.1: Kết so sánh trình tự gen chủng Streptomyces 191.16 Bảng 3.2: So sánh đặc điểm chủng Streptomyces 191.16 với loài Bảng 3.3: Kết thử HTKS với vi khuẩn kiểm định Bảng 3.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sàng lọc ngẫu nhiên Bảng 3.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Bảng 3.6: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Bảng 3.7: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học Bảng 3.8: Kết chọn môi trường lên men Bảng 3.9: Kết lên men dạng chủng, biến chủng MT1dt Bảng 3.10: Độ bền hoạt tính kháng sinh với nhiệt độ Bảng 3.11: Ảnh hưởng pH lên độ bền hoạt tính kháng sinh Bảng 3.12: Kết lựa chọn dung môi pH chiết kháng sinh Bảng 3.13: Kết SKLM lựa chọn hệ dung môi Bảng 3.14: Kết thử hoạt tính phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Bảng 3.15: Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Bảng 3.16: Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần lần Bảng 3.17: Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Bảng 3.18: Kết phổ IR KS1 Bảng 3.19: Kết phổ IR KS2 Bảng 3.20: Một số kháng sinh phân lập từ chủng thuộc S.parvus Bảng PB.1: Môi trường phân loại xạ khuẩn theo ISP Bảng PB.2: Các dung môi sử dụng Bảng PB.3: Các hóa chất sử dụng Bảng PB.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sàng lọc ngẫu nhiên Bảng PB.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Bảng PB.6: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Bảng PB.7: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học Bảng PB.8: Kết thử hoạt tính phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Bảng PB.9: So sánh KS2 với vòng phenoxazone Bảng PB.10: So sánh KS2 với khung Arylomycin Hình PH.19b: Phổ COSY KS2 PL.22 Hình PH.20: Phổ UV-Vis KS1 PL.23 Hình PH.21: Phổ UV-Vis KS2 PL.24 Hình PH.22: Phổ IR KS1 PL.25 Hình PH.23: Phổ IR KS2 PL.26 Bảng PB.1: Môi trƣờng phân loại xạ khuẩn theo ISP (g/1000ml) Thành phần ISP1 Trypton 5,0 Cao nấm men 3,0 ISP2 ISP3 ISP4 ISP5 4,0 Dịch chiết Malt 10,0 Glucose 4,0 Bột mì ISP6 ISP7 ISP9 0,5 5,65 1,0 20,0 Tinh bột 10,0 K2HPO4 1,0 1,0 KH2PO4 2,38 FeSO4.7H2O 0,556 0,01 MgSO4.7H2O 1,0 0,5 CaCO3 2,0 0,01 NaCl 1,0 0,5 (NH4)2SO4 2,0 1,0 2,64 L-Asparagin 1,0 1,0 Glycerin 10,0 15,0 L-Tyrosin 0,5 DD muối VL 1,0 1,0 1,0 Dung dịch A 1,0 36,0 Dung dịch B 1,0 Thạch 20,0 18,0 20,0 20,0 15,0 20,0 18,0 H2O vđ (ml) 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 pH 7,07,2 7,3 7,07,4 7,07,4 7,07,4 7,07,2 7,27,4 6,87,0 Dung dịch muối vi lượng: MnCl2.4H2O 0,1g; FeSO4.7H2O 0,1g; ZnSO4.7H2O 0,1g; nước cất vừa đủ 1000ml; pH = 7,0-7,2 Dung dịch A: Pepton 20,0g; acid citric 0,384g; FeSO4.7H2O 0,556g; NH4OH 25% 0,264g; Na2S2O3 10ml; K2HPO4 1g; nước cất vừa đủ 1000ml Dung dịch B: CuSO4.5H2O 0,64g; FeSO4.7H2O 0,11g; MnCl2.4H2O 0,79g; ZnSO4.7H2O 0,15g; nước cất vừa đủ 1000ml PL.27 Bảng PB.2: Các dung môi sử dụng Dung môi Khối lượng riêng Xuất xứ Nhiệt độ sôi (oC) (g/ml) Methanol Trung Quốc 0,791-0,793 64,5 Đức 0,894 70,4 Việt Nam 0,789-0,791 78,3 Chloroform Trung Quốc 1,47-1,48 60-62 n-butanol Trung Quốc 0,81 116-118 Aceton Trung Quốc 0,79 56 Triethylamin Trung Quốc 0,726-0,728 89,5 Amoniac 25% Đức 0,88 37,7 Diethylformamide Đức 0,946-0,95 153 n-Butylacetate Trung Quốc 0,88-0,885 117-118 n-Propanol Trung Quốc 0,803 97,1 Dicloromethan Trung Quốc 1,33 39,6 Đức 0,6548 69 Ethylacetate Ethanol n-Hexan PL.28 Bảng PB.3: Các hóa chất sử dụng Hóa chất Xuất xứ Đóng gói Hóa chất Xuất xứ Đóng gói Tinh bột Việt Nam Lọ 500g Cao nấm men Đức Lọ 500g Lactose Trung Quốc Lọ 500g Thạch Việt Nam Gói 50g Glucose Trung Quốc Lọ 500g Trypton Trung Quốc Lọ 500g Saccarose Việt Nam Lọ 500g Dịch chiết Malt Tây Ban Nha Lọ 100g Bột đậu tương Việt Nam Lọ 500g (NH4)2SO4 Đức Lọ lít Bột ngơ Việt Nam Lọ 500g L-Asparagin Đức Lọ 100g Pepton Trung Quốc Lọ 500g Glycerin Trung Quốc Lọ 500ml Cao thịt Đức Lọ 500g L-Tyrosin Nhật Bản Lọ 10g KNO3 Trung Quốc Lọ 500g MnCl2.4H2O Trung Quốc Lọ 500g KCl Trung Quốc Lọ 500g CuSO4.5H2O Trung Quốc Lọ 500g NaNO3 Trung Quốc Lọ 500g ZnSO4.7H2O Trung Quốc Lọ 500g NH4NO3 Trung Quốc Lọ 500g Na2S2O3 Trung Quốc Lọ 500ml CaCO3 Trung Quốc Lọ 500g D-xylose Anh Lọ 25g FeSO4.7H2O Trung Quốc Lọ 500g D-fructose Đức Lọ 250g K2HPO4 Trung Quốc Lọ 500g Bột mỳ Việt Nam Lọ 1kg MgSO4.7H2O Trung Quốc Lọ 500g HCl 0,1N Trung quốc Lọ 500ml NaCl Trung Quốc Lọ 500g NaOH 0,1N Trung Quốc Lọ 500ml PL.29 Bảng PB.4: Kết thử hoạt tính kháng sinh sàng lọc ngẫu nhiên Kết Dạng chủng B cereus ̅ Kết E.coli Dạng chủng ̅ s (mm) B cereus ̅ s E.coli ̅ s (mm) (mm) s (mm) 20,28 1,01 22,19 0,41 18 21,23 0,13 21,65 0,82 20,67 0,64 22,93 0,82 19 19,93 0,70 20,64 0,90 21,40 0,89 22,01 0,40 20 19,65 0,85 20,03 0,49 19,39 0,55 22,01 0,69 21 20,36 0,84 20,41 0,91 20,76 1,10 23,02 1,03 22 20,41 1,09 20,60 0,20 20,71 0,51 22,67 0,36 23 19,75 0,85 22,14 0,46 20,24 1,04 21,93 0,56 24 20,14 0,61 22,34 0,95 21,75 0,36 21,85 1,04 25 19,49 1,16 20,78 058 22,87 0,48 23,53 1,10 26 18,59 0,39 21,19 0,39 10 22,19 0,82 22,95 0,74 27 19,49 1,52 20,05 0,05 11 20,73 0,33 21,18 0,18 28 18,73 0,50 21,69 0,38 12 22,36 0,31 23,77 0,23 29 20,98 0,46 20,91 0,66 13 21,74 0,41 22,88 0,12 30 21,13 0,87 20,99 0,83 14 23,41 0,47 22,78 0,22 31 21,15 0,86 21,69 0,26 15 20,73 0,87 21,29 0,14 32 20,63 0,78 21,39 0,33 16 20,71 1,06 21,39 0,92 33 19,35 0,48 21,47 0,73 17 20,67 1,11 21,62 0,69 PL.30 Bảng PB.5: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Kết Dạng chủng B cereus ̅ Kết E.coli Dạng chủng ̅ s (mm) B cereus ̅ s E.coli ̅ s (mm) (mm) s (mm) 21,87 0,74 22,80 0,22 18 20,20 1,02 22,00 0,41 11,57 0,66 12,90 0,22 19 19,73 0,50 21,87 0,42 21,85 0,15 22,47 0,82 20 19,32 0,53 21,53 0,46 22,40 0,20 22,47 0,29 21 21,17 0,52 23,99 0,94 19,60 0,86 20,81 0,51 22 23,82 1,03 24,80 0,43 19,27 0,59 19,17 0,68 23 22,55 0,69 23,47 0,37 16,70 1,07 19,17 0,78 24 21,24 0,66 23,13 0,50 18,55 0,55 20,97 0,73 25 20,51 0,95 22,77 0,58 19,30 0,10 22,30 0,36 26 22,47 0,25 23,08 0,67 10 18,41 0,87 21,46 0,24 27 21,26 0,04 23,40 0,61 11 16,70 1,10 20,68 0,25 28 22,16 0,54 22,96 0,26 12 17,60 0,40 21,33 0,93 29 21,27 0,87 23,41 0,56 13 19,22 0,69 21,70 0,59 30 22,53 0,55 23,93 0,79 14 19,25 0,75 21,73 0,57 31 22,43 0,55 24,77 0,54 15 19,51 0,41 24,34 0,66 32 20,43 0,56 22,78 0,31 16 21,68 0,56 24,27 0,25 33 22,21 0,29 24,79 0,52 17 20,47 1,08 22,20 0,82 Chứng 22,11 0,73 22,62 0,27 PL.31 Bảng PB.6: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến UV lần Kết Dạng chủng B cereus ̅ Kết E.coli Dạng chủng ̅ s (mm) B cereus ̅ s E.coli ̅ s (mm) (mm) s (mm) 17,24 0,72 21,83 0,29 17 18,23 0,71 20,47 0,74 20,20 0,73 21,49 0,36 18 19,91 0,48 21,10 0,57 20,67 0,81 22,13 0,39 19 18,44 0,55 19,97 1,03 20,83 1,37 22,50 0,33 20 20,27 0,17 21,50 0,45 21,23 0,69 21,17 0,74 21 19,67 0,17 20,87 0,69 21,30 0,57 21,53 0,50 22 20,09 0,65 20,53 0,86 21,85 0,55 21,70 0,59 23 22,50 0,24 21,95 0,47 19,53 0,21 22,03 0,05 24 20,20 0,73 21,10 0,64 22,03 0,27 22,30 0,59 25 21,13 0,82 20,60 0,08 10 19,60 0,29 21,67 0,79 26 20,23 0,82 20,80 0,50 11 20,30 0,16 21,84 0,45 27 19,40 0,65 21,37 0,91 12 18,03 0,46 21,00 0,36 28 18,93 0,25 20,73 0,74 13 18,40 0,51 21,80 1,06 29 19,59 0,83 20,77 0,54 14 21,90 0,45 22,80 0,50 30 18,77 0,40 20,23 0,19 15 21,43 0,17 22,57 0,34 31 22,23 0,54 21,27 0,58 16 20,30 0,83 20,97 0,26 Chứng 21,83 0,29 21,47 0,61 PL.32 Bảng PB.7: Kết thử hoạt tính kháng sinh sau đột biến hóa học Kết Dạng chủng B cereus ̅ Kết E.coli Dạng chủng ̅ s (mm) B cereus ̅ s E.coli ̅ s (mm) (mm) s (mm) 11,03 0,46 16,10 0,86 17 19,87 1,03 20,73 0,33 21,65 0,11 21,90 0,29 18 18,80 1,07 19,23 1,02 18,03 0,52 19,14 0,26 19 16,99 0,15 17,37 0,17 19,81 0,42 19,23 0,25 20 17,04 0,17 16,81 0,21 17,78 0,35 17,98 0,13 21 19,14 0,19 20,77 0,31 18,30 0,70 20,80 0,50 22 20,59 0,40 20,47 0,10 16,76 0,33 18,01 0,22 23 17,27 0,56 19,37 2,38 19,71 0,57 20,73 0,87 24 19,20 0,78 20,77 0,83 19,97 0,59 19,82 0,61 25 19,88 0,54 19,60 0,80 10 19,83 1,00 20,20 0,22 26 18,95 0,70 20,87 0,26 11 19,50 0,73 19,90 0,22 27 19,77 0,37 21,47 0,68 12 17,98 0,17 18,21 0,25 28 12,55 0,45 15,87 0,29 13 19,40 0,57 19,59 0,72 29 17,33 0,95 17,37 0,52 14 20,97 0,40 21,23 0,26 30 18,63 0,68 19,10 0,14 15 21,66 0,42 21,63 1,28 31 20,41 0,29 20,10 0,55 16 20,91 0,37 21,57 0,87 Chứng 20,27 0,16 20,50 0,37 PL.33 Bảng PB.8: Kết thử hoạt tính phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần Phân đoạn Phân đoạn E.coli ̅ (mm) s 14,37 1,04 14,50 E.coli ̅ (mm) s 18,30 0,29 0,50 18,57 0,49 21,43 0,17 10 18,00 1,07 24,70 0,22 11 15,47 2,28 25,77 0,54 12 16,67 1,99 21,87 0,26 13 10,67 1,84 21,63 0,50 PL.34 Bảng PB.9: So sánh KS2 với vòng phenoxazone Vị trí Phenoxazone KS2 Vị trí C Phenoxazone KS2 C C=O # 166,45/166,63 127,5 127,54 101,6 - 130,2 - 146,0 146,03 125,9 - # 179,16 132,6 - 113,5 - 9a 129,1 - 4a 145,1 145,2 4-CH3 7,7 - 5a 140,5 140,51 6-CH3 15,0 15,02 PL.35 Bảng PB.10: So sánh KS2 với khung Arylomycin Vị trí C Arylomycin A5 KS2 Vị trí C Arylomycin A5 KS2 25 58,9 - 34 47,2 47,31 26 127,0 - 35 18,7 - 27 133,3 - 36 171,4 - 28 127,1 - 37 - - 29 153,3 - 38 50,9 - 30 116,7 - 39 32,8 - 31 128,4 - 40 128,6 - 32 169,3 - 41 129,9 - 33 - - 42 125,4 125,54 PL.36 ... Nam, thực đề tài nghiên cứu: Nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 191. 16 với mục tiêu sau: ♦ Xác định đặc điểm hình thái, phân loại xạ khuẩn nghiên cứu ♦ Nghiên cứu cải tạo chủng... TIỆP Mã sinh viên: 1301418 NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 191. 16 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PSG.TS Cao Văn Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh – Sinh học... dung nghiên cứu ♦ Nghiên cứu xác định hình thái, phân loại xạ khuẩn nghiên cứu ♦ Cải tạo chủng xạ khuẩn ban đầu ♦ Nghiên cứu lên men, chiết xuất, tinh chế kháng sinh thu ♦ Nghiên cứu cấu trúc kháng