Phương pháp Sắc ký trao đổi ion

Sắc ký (tiếng Anh: chromatography, từ tiếng Hy Lạp là χρῶμα chroma có nghĩa là màu sắc và γράφειν graphein nghĩa là ghi lại1) là một trong các kĩ thuật phân tích thường dùng trong phòng thí nghiệm của bộ môn hoá học phân tích dùng để tách các chất trong một hỗn hợp. Nó bao gồm việc cho mẫu chứa chất cần phân tích trong pha động, thường là dòng chảy của dung môi, di chuyển qua pha tĩnh. Pha tĩnh trì hoãn sự di chuyển của các thành phần trong mẫu. Khi các thành phần này di chuyển qua hệ thống với tốc độ khác nhau, chúng sẽ được tách khỏi nhau theo thời gian, giống như các vận động viên chạy maratông. Một cách lý tưởng, mỗi thành phần đi qua hệ thống trong một khoảng thời gian riêng biệt, gọi là thời gian lưu. Trong kĩ thuật sắc ký, hỗn hợp được chuyên chở trong chất lỏng hoặc khí và các thành phần của nó được tách ra do sự phân bố khác nhau của các chất tan khi chúng chảy qua pha tĩnh rắn hay lỏng. Nhiều kĩ thuật khác nhau đã được dùng để phân tích hợp chất phức tạp dựa trên ái tính khác nhau của các chất trong môi trường động khí hoặc lỏng và đối với môi trường hấp phụ tĩnh mà chúng di chuyển qua, như giấy, gelatin hay gel magie silicate. Sắc ký phân tích được dùng để xác định danh tính và nồng độ các phân tử trong hỗn hợp. Sắc ký tinh chế được dùng để tinh chế các chất có trong hỗn hợp.

Nội dung tiết học 4.4 Thu nhận protein 4.4.3 Phương pháp sắc kí 4.4.3.2 Phương pháp sắc kí trao đổi ion Phương pháp sắc kí trao đổi ion Nguyên tắc Dựa vào điện tích thực protein điểm pH định  Tương tác protein mang điện với hạt nhựa trao đổi ion  Tách giải cách tăng nồng độ ion pha động  Phương pháp sắc kí trao đổi ion Nguyên tắc Mơ hình sắc kí trao đổi ion Phương pháp sắc kí trao đổi ion Nguyên tắc Tương tác protein – nhựa trao đổi ion (a) Những hạt mang điện tích dương trao đổi ion âm với dung dịch đệm Protein tích điện âm trao đổi ion dương tương tác với b)protein thay ion âm tương tác với hạt, hạt thay ion dương tương tác với protein Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các phương pháp - Sắc kí trao đổi ion dương - Sắc kí trao đổi ion âm Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các phương pháp Sắc kí trao đổi ion dương Nhựa trao đổi mang điện tích âm: thường sử dụng cột diethylaminoethyl-cellulose (DEAE-cellulose)  Tương tác với protein mang điện tích dương  Tách giải cách tăng nồng độ ion pha động, ion dương (Na+)sẽ thay phân tử protein  Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các phương pháp Sắc kí trao đổi ion âm Nhựa trao đổi mang điện tích dương: thường sử dụng cột carboxymethyl-cellulose (CM-cellulose)   Tương tác với protein mang điện tích âm  Tách giải cách tăng nồng độ ion dịch(Cl ) pha động, ion âm dung dịch(Cl ) thay phân tử protein Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các lưu ý  Thực pH thích hợp  Nồng độ ion dung dịch đệm Có thể sử dụng biến thiên pH (gradient pH) biến thiên nồng độ ion (gradient nồng độ ion) để đạt kết phân tách protein tốt  ... Phương pháp sắc kí trao đổi ion Ngun tắc Mơ hình sắc kí trao đổi ion Phương pháp sắc kí trao đổi ion Nguyên tắc Tương tác protein – nhựa trao đổi ion (a) Những hạt mang điện tích dương trao đổi ion. .. phương pháp - Sắc kí trao đổi ion dương - Sắc kí trao đổi ion âm Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các phương pháp Sắc kí trao đổi ion dương Nhựa trao đổi mang điện tích âm: thường sử dụng cột... điện âm trao đổi ion dương tương tác với b)protein thay ion âm tương tác với hạt, hạt thay ion dương tương tác với protein Phương pháp sắc kí trao đổi ion Các phương pháp - Sắc kí trao đổi ion dương