Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của một số loài thuộc chi nấm ganoderma

BỘ TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI NẤM GANODERMA CHUYÊN NGÀNH: KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG PHẠM THẢO LINH HÀ NỘI, NĂM 2019 BỘ TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI NẤM GANODERMA CHUYÊN NGÀNH: KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG MÃ SỐ: 8440301 PHẠM THẢO LINH NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHAN DUỆ THANH TS LÊ THANH HUYỀN HÀ NỘI, NĂM 2019 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI Cán hướng dẫn 1: TS Phan Duệ Thanh (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị) Cán hướng dẫn 2: TS Lê Thanh Huyền (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị) Cán chấm phản biện 1: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị) Cán chấm phản biện 2: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị) Luận văn thạc sĩ bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI Ngày 16 tháng 01 năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học độc lập riêng Kết nghiên cứu luận văn trung thực thực sở nghiên cứu lý thuyết khảo sát tình hình thực tiễn Vườn quốc gia Tam Đảo, Vườn quốc gia Xuân Sơn, Trạm đa dạng sinh học Mê Linh, nghiên cứu phòng thí nghiệm Khoa Mơi trường – Trường Đại học Tài nguyên Môi trường Hà Nội, Bộ môn Công nghệ Sinh học – Trường Đại học Sư Phạm Hà Nội hướng dẫn khoa học TS Phan Duệ Thanh TS Lê Thanh Huyền Nội dung luận văn có sử dụng tài liệu tham khảo liệt kê rõ ràng đầy đủ theo danh mục tài liệu tham khảo Tôi xin cam đoan kết chưa công bố nghiên cứu khác Hà Nội, ngày 16 tháng 01 năm 2019 TÁC GIẢ LUẬN VĂN (Ký ghi rõ họ tên) Phạm Thảo Linh `2 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu tồn thể q thầy, giáo khoa Môi trường, Trường Đại học Tài nguyên Môi trường Hà Nội, Bộ môn Công nghệ Sinh học – Vi sinh, Khoa Sinh, Trường Đại học Sư Phạm Hà Nội truyền đạt giúp đỡ suốt trình học tập rèn luyện, tạo điều kiện cho tơi thực thí nghiệm phòng thí nghiệm Khoa Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến hai Cô giáo TS Phan Duệ Thanh TS Lê Thanh Huyền hết l ng giúp đỡ, dạy ảo, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Đồng thời, xin cảm ơn Ban quản lý Vườn quốc gia Tam Đảo, Vườn quốc gia Xuân Sơn, Trạm đa dạng sinh học Mê Linh tạo điều kiện cho nghiên cứu tiến hành khảo sát thực địa Cảm ơn bạn hai trường đồng hành suốt thời gian dài làm nghiên cứu Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình ạn è, ln tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ động viên suốt q trình nghiên cứu hồn thành nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 01 năm 2019 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Phạm Thảo Linh `3 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 10 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Lịch sử nghiên cứu nấm Ganoderma 1.1.1 Tình hình nghiên cứu nấm Ganoderma giới 1.1.2 Tình hình nghiên cứu nấm Ganoderma Việt Nam 1.2 Đặc điểm sinh học nấm Ganoderma 10 1.2.1 Khái quát chung chi nấm Ganoderma 10 1.2.2 Đặc điểm sinh học chi tiết chi nấm Ganoderma 15 1.2.3 Giá trị, ý nghĩa, vai trò chi nấm Ganoderma 18 1.3 Một vài đặc điểm khu vực nghiên cứu 20 1.3.1 Vườn quốc gia Tam Đảo 20 1.3.2 Vườn quốc gia Xuân Sơn 23 1.3.3 Trạm đa dạng sinh học Mê Linh 26 CHƯƠNG 30 ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.2.1 Địa điểm thu mẫu 30 2.2.2 Phạm vi nghiên cứu 30 2.3 Thiết bị nghiên cứu 30 `4 2.4 Môi trường nghiên cứu 31 2.5 Phương pháp nghiên cứu 32 2.5.1 Phương pháp thu mẫu bảo quản 32 2.5.2 Phương pháp thu thập tài liệu 34 2.5.3 Phương pháp phân tích 35 2.5.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học 37 2.5.5 Phương pháp sấy đến khối lượng không đổi 38 2.5.6 Phương pháp thu dịch 39 2.5.7 Phương pháp thống kê xử lý số liệu 39 CHƯƠNG 40 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Phân loại mẫu nghiên cứu 40 3.2 Kết phân lập khiết chủng nấm thuộc chi nấm Ganoderma khu vực nghiên cứu 48 3.2.1 Kết phân lập lần thứ 48 3.2.2 Kết phân lập lần thứ hai 50 3.2.3 Kết phân lập lần thứ ba 51 3.2.4 Cấy chuyển lưu giữ chủng nấm ống thạch nghiêng 53 3.2.5 Thu dịch nuôi cấy nấm 54 3.3.Đánh giá khả kháng khuẩn chủng nấm nghiên cứu 56 3.4 Đề xuất giải pháp bảo tồn loài thuộc chi nấm Ganoderma khu vực nghiên cứu 64 3.4.1 Các giải pháp bảo tồn nguyên vị 64 3.4.2 Các giải pháp bảo tồn chuyển vị 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ``55 TÓM TẮT LUẬN VĂN Họ tên học viên : Phạm Thảo Linh Lớp : CH3AMT Cán hướng dẫn 1: TS Phan Duệ Thanh Cán hướng dẫn 2: TS Lê Thanh Huyền Tên đề tài: Nghiên cứu khả kháng khuẩn số loài thuộc chi nấm Ganoderma Tóm tắt: Luận văn trình ày kết nghiên cứu gồm thu 39 mẫu khu vực nghiên cứu, phân loại, phân lập hệ sợi môi trường thạch, môi trường dịch lỏng xác định khả kháng khuẩn mẫu (Ganoderma aff brownii, Ganoderma sp.1, Ganoderma aff philippi, Ganoderma aff lucidum, Ganoderma sinense, Ganoderma aff neo-japnicum Imaz) thuộc chi nấm Ganoderma vi khuẩn Escherichia coli, Bacillus subtilis, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Từ khóa: Đa dạng sinh học, kháng khuẩn, nấm lớn, Ganoderma, VQG Tam Đảo, VQG Xuân Sơn, Trạm ĐDSH Mê Linh Summary: The thesis presents results of sampling 39 samples from the research area, species classification, hyphae mycelium isolation in agar environment, pure fungi in liquid environment and determining antibacterial possibilities of samples that belong to the Ganoderma fungi line (Ganoderma aff brownii, Ganoderma sp.1, Ganoderma aff philippi, Ganoderma aff lucidum, Ganoderma sinense, Ganoderma aff neo-japnicum Imaz) with Escherichia coli, Bacillus subtilis, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa bacteria Key words: Biodiversity, antibacterial, large fungi, Ganoderma, Tam Dao National Park, Xuan Son National Park, MeLinh Station for Biodiversity ``66 DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải thích VQG Vườn quốc gia KVNC Khu vực nghiên cứu VSV Vi sinh vật KHM Ký hiệu mẫu ĐDSH Đa dạng sinh học ADN Acid deoxyribonucleotide MT Môi trường PDA Potato Dextrose Agar MPA Malt Pepton Agar sp.1 Species aff affinis E.coli Escherichia coli ``77 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại chi nấm Ganoderma 10 Bảng 1.2: Các yếu tố sinh thái 13 Bảng 1.3: Đặc điểm số loại nấm Linh chi Đài Loan 17 Bảng 3.1: Đường kính hệ sợi nấm sau ngày nuôi cấy lần thứ 49 Bảng 3.2: Đường kính hệ sợi nấm sau ngày nuôi cấy lần thứ hai 51 Bảng 3.3: Đường kính hệ sợi nấm sau ngày cấy lần thứ ba 52 Bảng 3.4: Khối lượng sinh khối tươi thu từ dịch nuôi lắc hệ sợi sau ngày 55 Bảng 3.5: Khối lượng sinh khối thu từ dịch nuôi lắc hệ sợi sau ngày o sấy khô 40 C 57 Bảng 3.6: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Escherichia coli 59 Bảng 3.7: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Vibrio parahaemolyticus 60 Bảng 3.8: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Bacillus subtilis 61 Bảng 3.9: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Staphylococcus aureus 61 Bảng 3.10: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Pseudomonas aeruginosa 62 Bảng 3.5: Khối lượng sinh khối thu từ dịch nuôi lắc hệ sợi o sau ngày sấy khô 40 C STT Mẫu nấm Khối lượng sinh khối khô (g) Ganoderma aff brownii 0,063 Ganoderma sp.1 0,032 Ganoderma aff philippi 0,095 Ganoderma aff lucidum 0,083 (Nguồn gốc ảnh tác giả) Hình 3.20: Sinh khối hệ sợi giấy lọc sau sấy Làm tương tự ước giống dịch chiết thô mẫu nấm thô giã nhỏ (Nguồn gốc ảnh tác giả) Hình 3.21: Giấy lọc vơ trùng nhỏ dịch ni cấy Hình 3.22 thể mảnh giấy lọc tẩm dịch nuôi cấy nấm đặt lên ề mặt môi trường thạch đĩa petri nuôi cấy vi sinh vật kiểm định Các hộp Petri để tủ mát 4°C với thời gian 6-8h, sau chuyển tủ ấm 30°C Sau 24-48h, tiến hành kiểm tra khả kháng vi sinh vật kiểm định chủng nấm nghiên cứu ằng cách xác định đường kính v ng kháng khuẩn xuất xung quanh miếng giấy (Nguồn gốc ảnh tác giả) Hình 3.22: Khả kháng khuẩn chủng nấm vi khuẩn kiểm định V ng kháng khuẩn xuất nhỏ dịch nuôi lắc mẫu TL 44 (Ganoderma aff brownii) vào đĩa chứa vi khuẩn V parahaemolyticus, mẫu nấm TL 53 (Ganoderma aff philippi) vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, mẫu nấm TĐ.H (Ganoderma aff sinense) vi khuẩn Staphylococcus aureus Khi sử dụng dịch chiết thô mẫu nấm TL 48 (Ganoderma sp.1), v ng vô khuẩn xuất đối vi khuẩn kiểm định V parahaemolyticus dịch chiết thô mẫu TL.TĐ 02 (Ganoderma aff neojapnicum Imaz) vi khuẩn kiểm định E.coli (hình 3.23) Qua kết cho thấy điều kiện nuôi cấy khác chủng nấm thể hoạt tính kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định khác Hiện nay, nhà khoa học quan tâm tìm loại thuốc ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus, E coli kháng kháng sinh Nistatin, Gentamicin Cefotaxim (theo tài liệu ph ng, chống kháng thuốc Bộ Y tế) Bảng 3.6: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Escherichia coli STT Mẫu nấm Đường kính vòng tròn kháng khuẩn (mm) Dịch chiết từ Dịch nuôi Dịch chiết sinh khối nấm thô lắc nuôi lắc 0 0 0 0 0 0 x x Ganoderma aff.brownii Ganoderma sp.1 Ganoderma aff.philippi Ganoderma aff lucidum Ganoderma sinense Ganoderma aff neox x japnicum Imaz (Chú thích: - không ức chế, x - không nghiên cứu) 10 ± Năm 1885, München (Đức), ác sĩ tên Theodor Escherich quan tâm đến phát quan trọng Louis Pasteur Ro ert Kock loại vi khuẩn mà đến năm 1991 có tên khoa học xác Escherichia coli Ngồi ra, Escherichia coli gây ệnh đường ruột [20] Trong trình nghiên cứu, luận văn xác định mẫu nấm Ganoderma aff neo-japnicum Imaz có khả kháng lại loại vi khuẩn Đường kính v ng tr n kháng khuẩn dịch chiết nấm thô 10 ± 2mm ( ảng 3.6) Bảng 3.7: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Vibrio parahaemolyticus STT Mẫu nấm Đường kính vòng tròn kháng khuẩn (mm) Dịch chiết từ Dịch nuôi Dịch chiết sinh khối nấm thô lắc nuôi lắc 9±2 0 0 12 ± 0 0 0 x x Ganoderma aff brownii Ganoderma sp.1 Ganoderma aff philippi Ganoderma aff lucidum Ganoderma sinense Ganoderma aff neox X japnicum Imaz (Chú thích: - khơng ức chế, x - không nghiên cứu) Theo thông tin từ Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh, ệnh viêm ruột vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây ệnh truyền nhiễm cấp tính lây theo đường ăn uống Qua ảng 3.6 thấy có hai mẫu nấm mọc VQG Xuân Sơn có khả kháng với loại vi khuẩn Mẫu Ganoderma aff brownii có đường kính v ng tr n kháng khuẩn ± 2mm Đặc iệt mẫu Ganoderma sp.1 có đường kính v ng tr n kháng khuẩn lớn 12 ± 2mm, chứng tỏ nấm có giá trị dược liệu cao sử dụng dịch chiết từ nấm thô Bảng 3.8: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Bacillus subtilis STT Mẫu nấm Đường kính vòng tròn kháng khuẩn (mm) Dịch chiết từ Dịch nuôi Dịch chiết sinh khối nấm thô lắc nuôi lắc 0 0 0 0 0 0 x x Ganoderma aff brownii Ganoderma sp.1 Ganoderma aff philippi Ganoderma aff lucidum Ganoderma sinense Ganoderma aff neox x japnicum Imaz (Chú thích: - không ức chế, x - không nghiên cứu) Bảng 3.8 cho thấy mẫu nghiên cứu khả kháng khuẩn vi khuẩn Bacillus subtilis Bảng 3.9: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Staphylococcus aureus STT Mẫu nấm Đường kính vòng tròn kháng khuẩn (mm) Dịch chiết từ Dịch ni Dịch chiết sinh khối nấm thô lắc nuôi lắc 0 0 0 0 0 0 11 ± x x Ganoderma aff brownii Ganoderma sp.1 Ganoderma aff philippi Ganoderma aff lucidum Ganoderma sinense Ganoderma aff neox x japnicum Imaz (Chú thích: - khơng ức chế, x - không nghiên cứu) Theo Nguyễn Đỗ Phúc từ Viện y tế công cộng, vi khuẩn Staphylococcus aureus (tụ cầu) cư trú phổ iến da màng nhầy gây ệnh nhiễm khuẩn da, nhiễm khuẩn máu, viêm phổi, ngộ độc Trong trình nghiên cứu, em thấy đĩa thử khả kháng khuẩn mẫu Ganoderma sinense với VSV kiểm định Staphylococcus aureus có xuất v ng tr n hệ sợi từ miếng giấy chứa dịch ni lắc có đường kính đạt 11 ± 2mm, điểm khác so với mẫu nghiên cứu c n lại ( ảng 3.9) Bảng 3.10: Khả kháng khuẩn dịch chiết nấm vi khuẩn kiểm định Pseudomonas aeruginosa STT Mẫu nấm Đường kính vòng tròn kháng khuẩn (mm) Dịch chiết từ Dịch nuôi Dịch chiết sinh khối nấm thô lắc nuôi lắc 0 0 0 12 ± 0 0 0 x x Ganoderma aff brownii Ganoderma sp.1 Ganoderma aff philippi Ganoderma aff lucidum Ganoderma sinense Ganoderma aff neox x japnicum Imaz (Chú thích: - không ức chế, x - không nghiên cứu) Pseudomonas aeruginosa có tên tiếng Việt trực khuẩn mủ xanh vi khuẩn phổ biến gây bệnh người động vật Nếu vi khuẩn xâm nhập vào quan thiết yếu thể phổi, đường tiết niệu, thận gây hậu chết người;vì vi khuẩn phát triển tốt bề mặt bên thể Vi khuẩn phát dụng cụ y khoa, gây nhiễm khuẩn bệnh viện phòng mạch Đây nguyên nhân gây viêm chân lông (theo Thư viện Học liệu Mở Việt Nam) Bảng 3.10 thể mẫu Ganoderma aff philippi có khả kháng khuẩn với vi khuẩn từ dịch ni lắc, đường kính vòng tròn kháng khuẩn 12 ± 1mm Vậy qua trình nghiên cứu, nghiên cứu mẫu Ganoderma aff brownii mọc thân lâu năm, c n mẫu Ganoderma sp.1 Ganoderma aff philippi thu thân đổthuộc chi nấm Ganoderma VQG Xuân Sơn, Phú Thọ Mẫu Ganoderma aff neo-japnicum Imaz mọc thân đổ, mẫu Ganoderma sinense Ganoderma aff lucidum mọc tên lâu năm VQG Tam Đảo, Vĩnh Phúc Ở điều kiện khác nhau, nấm sinh khả kháng khuẩn khác Qua nghiên cứu, kết tương đồng với kết nghiên cứu Debendra công (2016) [25] Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết nấm linh chi có khả ức chế số vi sinh vật gây ệnh Trong số chủng vi khuẩn kiểm định luận văn sử dụng có vi khuẩn Bacillus subtilis Staphylococcus aureus vi khuẩn Gram dương, c n lại vi khuẩn Gram âm Cả mẫu nấm khơng có chủng ức chế loại vi khuẩn Gram âm Gram dương Trong đó, kết nghiên cứu Smania cộng (2007) cho thấy loài G australe ức chế khả sinh trưởng vi khuẩn Gram dương methyl ester chúng kháng lại vi khuẩn Gram âm [32] Nghiên cứu Suay cộng (2000) cho thấy lồi đại điện thuộc chi nấm Ganoderma có khả kháng vi sinh vật kiểm định cao ộ khác thuộc ngành nấm Basidiomycota [33] Tuy nhiên, khả kháng vi sinh vật kiểm định phụ thuộc vào q trình phân lập, điều kiện ni cấy (mơi trường nuôi cấy) loại vi sinh vật [29] Với khả ức chế vi khuẩn chủng nấm mở hy vọng nghiên cứu sâu chủng nấm để tìm hiểu điều kiện tốt sinh kháng sinh vi khuẩn mà luận văn nghiên cứu, có ý nghĩa góp phần cho y học y dược 3.4 Đề xuất giải pháp bảo tồn loài thuộc chi nấm Ganoderma khu vực nghiên cứu Qua trình nghiên cứu đề tài kết hợp vấn điều tra trực tiếp người dân kết hợp với nghiên cứu, nhận thấy ảo tồn chủng nấm Linh chi theo hướng sau: 3.4.1 Các giải pháp bảo tồn nguyên vị Chuyển liệu nghiên cứu luận văn mẫu nấm có hoạt tính kháng khuẩn để cán ộ quản lý VQG có iện pháp ảo tồn chỗ Phối hợp nghiên cứu với nhà khoa học cán ộ quản lý VQG để ảo tồn đa dạng sinh học nấm Ganoderma có hoạt tính chủng vi khuẩn: Escherichia coli, Bacillus subtilis, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Phối hợp với an quản lý VQG để khoanh vùng ảo vệ loại gỗ, khu vực có phát triển nấm Ganoderma có hoạt tính kháng khuẩn Có iển áo, ảng hiệu khu vực ảo tồn nấm lớn để du khách thăm quan không gây hại tới khu hệ nấm Nghiên cứu xây dựng số Quy phạm ảo vệ nấm vi sinh vật mặt điều tra, giám định, thu thập, chụp ảnh, nhân giống, ảo vệ nguồn gen mà nước thực năm gần để nâng cao hiểu iết ộ quản lý người dân, hiểu giá trị chi nấm Ganoderma mọc khu vực Tăng cường kiểm soát chặt chẽ việc nghiên cứu thu mẫu nấm trái phép Phải xuất trình giấy giới thiệu nhà trường hay giấy tờ chứng minh việc thu mẫu phục vụ cho mục đích nghiên cứu Ngồi ra, lập hệ thống thông tin theo dõi việc thu mẫu VQG Tam Đảo, VQG Xuân Sơn, Trạm ĐDSH Mê Linh Lập danh sách lồi nấm Ganoderma có hoạt tính theo thông tin đặc điểm để an quản lý VQG phổ iến tới khách du lịch người dân tham gia cơng tác ảo tồn Cần có hỗ trợ quan tâm với tổ chức, cá nhân ngồi nước cơng tác ảo tồn đa dạng sinh học Chủ động, tích cực học hỏi kiến thức chuyên môn, công nghệ, kĩ thuật từ nước tiên tiến việc nuôi trồng ảo vệ loài nấm lớn loài thuộc chi nấm Ganoderma 3.4.2 Các giải pháp bảo tồn chuyển vị Nhân rộng ni trồng lồi thuộc chi nấm Ganoderma có hoạt tính kháng khuẩn nghiên cứu ph ng thí nghiệm triển khai ni trồng trang trại trồng nấm địa àn nghiên cứu lân cận Lưu giữ chủng nấm lớn có hoạt tính kháng khuẩn phục vụ cho nghiên cứu sâu KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua kết nghiên cứu đề tài rút kết luận sau: - Mô tả đặc điểm sinh học, phân loại tuyển chọn sơ ộ mẫu tách dịch chiết nấm thuộc chi Ganoderma: Ganoderma aff brownii, Ganoderma sp.1, Ganoderma aff philippi, Ganoderma aff lucidum, Ganoderma sinense, Ganoderma aff neo-japnicum Imaz - Đã xác định khả kháng khuẩn số loài thuộc chi nấm Ganoderma mọc khu vực VQG Tam Đảo, VQG Xuân Sơn, Trạm ĐDSH Mê Linh vi sinh vật kiểm định Escherichia coli, Bacillus subtilis, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Cụ thể sau: Vòng kháng khuẩn xuất sử dụng với dịch nuôi lắc mẫu nấm Ganoderma aff brownii VSV kiểm định V parahaemolyticus (Φ = 9±2), mẫu nấm Ganoderma aff philippi VSV kiểm định P aeruginosa (Φ=12±1), mẫu nấm Ganoderma sinense VSV kiểm định S aureus (Φ=11±2) Khi sử dụng dịch chiết thơ mẫu nấm Ganoderma sp.1, vòng vô khuẩn xuất đối VSV kiểm định V parahaemolyticus (Φ = 12±2) dịch chiết thô mẫu Ganoderma aff neojapnicum Imaz VSV kiểm định E coli (Φ = 10±2) - Đã đề xuất giải pháp bảo tồn phù hợp chi nấm Ganoderma khu vực nghiên cứu Kiến nghị Do điều kiện nghiên cứu, thời gian thực luận văn kinh tế c n nhiều giới hạn nên số lượng mẫu c n nhiều hạn chế Nếu tiếp tục nghiên cứu em thu hái nhiều mẫu nấm nghiên cứu điều kiện ảnh hưởng để tăng khả sinh kháng sinh chủng nghiên cứu Bên cạnh đó, để xác định xác tên lồi dựa việc giải trình tự ADN tất mẫu mẫu Ganoderma sinense cho kết xác Và nghiên cứu sâu đặc tính điều kiện (môi trường, nhiệt độ, ánh sáng) ảnh hưởng trình sinh trưởng đến khả sinh kháng sinh cao chủng nấm Nếu tạo điều kiện nghiên cứu thời gian kinh tế để phát triển đề tài theo hướng chuyên sâu hơn, nhằm tìm khả kháng khuẩn chi nấm Ganoderma loại vi sinh vật khác, mang lại giá trị dược liệu nhằm mục đích phục vụ cho đời sống người Chính quyền địa phương an quản lý Vườn quốc gia Tam Đảo, Vườn quốc gia Xuân Sơn, Trạm đa dạng sinh học Mê Linh cần có can thiệp để có đạo, quản lý trực tiếp tới việc bảo vệ bảo tồn có kế hoạch nấm lớn chi nấm Ganoderma TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Dương Nguyễn Duy Tuyền (2013), Khảo sát tác dụng polysaccharid chiết từ nấm linh chi đỏ nấm linh chi vàng vi thể tế bào gan, lách tuyến ức chuột bị gây suy giảm miễn dịch, Tạp chí Dược liệu Đào Ẩn Tích (2013), Chính loại thảo, NXB Hồng Đức Đàm Nhuận (1996), Nghiên cứu thành phần loài số đặc điểm sinh học họ nấm Linh Chi (Ganodermataceae donk) Việt Nam, Luận án tiến sĩ Đoàn Suy Nghĩ, Nguyễn Thị Thu Thủy (2009), Nghiên cứu số tiêu sinh hóa khả kháng khuẩn nấm Hồng chi Ganoderma colossum, tạp chí khoa học, trường đại học Huế Lê Văn Liễu (1977) Một số nấm ăn nấm độc rừng; Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lê Bá Dũng (2003), Nấm lớn Tây Nguyên, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Lê Đình Hồi Vũ, Trần Đăng H a (2008), Đặc điểm sinh học suất số chủng giống nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) ni trồng Thừa Thiên Huế, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 49 Lê Thanh Huyền (2015), Một số dẫn liệu khu hệ nấm lớn rừng nguyên sinh Mường Phăng – Điện Biên, Tạp chí Khoa học Tài ngun Mơi trường số 04, tháng 9/2014 Lê Xuân Thám (1996), Nấm linh chi – dược liệu quý Việt Nam, NXB Mũi Cà Mau 10 Lê Xuân Thám (2005) Nấm linh chi, NXB Khoa học Kỹ thuật 11 Mai Thị Hằng, Đinh Thị Kim Nhung, Vương Trọng Hào (2011), Thực hành vi sinh vật học, NXB Đại học Sư phạm 12 Ngô Anh (2016), Tài nguyên nấm dược liệu kết nuôi trồng Lục bảo Linh chi giá thể tổng hợp Thừa Thiên Huế, Tạp chí khoa học công nghệ, Trường đại học khoa học – Đại học Huế, Tập 4, số 13 Nguyễn Phương Đại Nguyên (2013), Nghiên cứu thành phần loài đặc điểm sinh học loài nấm họ Ganodermataceae Donk khu vực Tây Nguyên, Luận văn thạc sĩ 14 Nguyễn Phương Đại Nguyên (2014), Đa dạng thành phần loài chi Ganoderma vườn quốc gia Kon Ka Kinh tỉnh Gia Lai, Việt Nam, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 15 Nguyễn Thượng Dong (2007), Nấm linh chi, NXB Khoa học Kỹ thuật 16 Phạm Trình Khánh Giang (2014), Nghiên cứu nấm Linh chi, Trường Đại học khoa học cơng nghệ thực phẩm Hồ Chí Minh 17 Tô Thu Hồng (2010), Định lượng kiểm tra tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn E.coli phân vịt còi cọc số quận thuộc thành phố Cần Thơ, Khoa Nông nghiệp Sinh học ứng dụng, Đại học Cần Thơ 18 Trần Đình Thắng, Nguyễn Hoa Du, Lê Văn Điệp, Dữ liệu nấm lớn, Trường đại học Vinh 19 Trần Hiểu Thanh, Trần Huệ, Cơng Diễn biên dịch (2003), Linh chi phòng bệnh, NXB Mũi Cà Mau 20 Trịnh Tam Kiệt tác giả (2001) Danh mục loài thực vật Việt Nam (phần Nấm), Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 21 Trịnh Tam Kiệt (2014), Danh lục nấm Việt Nam, nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 22 Vườn Quốc gia Xuân Sơn (2013), Quy hoạch bảo tồn phát triển bền vững Vườn Quốc gia Xuân Sơn, tỉnh Phú Thọ giai đoạn 2013 - 2020, Quyết định số 1794/QĐ-UBND ngày 17 tháng năm 2013 Ủy ban nhân dân tỉnh Phú Thọ Tài liệu tiếng Anh: 23 A F Md Hassan Iftekhar, Zubaida Khatoon Choudhry, Md Ismail Khan and Ahmed Abu Saleh (2016), Comparative study of antibacterial activity of wood-decay fungi and antibiotics, A Journal of the Bangladesh Pharmacological Society 24 Arora K, Bridge P.D (2004), Fungal biotechnology in agricuture, food and environmental, CRC Press 25 Bhosle S1*, Ranadive K2, Bapat G1, Garad S1, Deshpande G1 and Vaidya J6 (2010), Taxonomy and Diversity of Ganoderma from the Western parts of Maharashtra (India), Department of Botany, University of Pune, Pune – 411 007, India 26 Boh B, Berovic M., Zhang J, Zhi-Bin L (2007), Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds, Biotechnology Annual Review; 13: 265-301 27 Debendra Nath Roy*, A K Azad, Farzana Sultana, A.S.M Anisuzzaman (2016), In-vitro antimicrobial activity of ethyl acetate extract of two common edible mushrooms, The Journal of Phytopharmacology; 5(2): 7982 28 Kiet T T (1998), Preliminary checklist of macrofungi of Vietnam, Feddes Repertorium, Berlin 29 Luangharn T, Karunarathna SC, Khan, Xu JC, Mortimer PE and Hyde KD (2017), Antibacterial activity, optimal culture conditions and cultivation of the medicinal Ganoderma australe, new to Thailand, Mycosphere 8(8): 1108-1123 30 Ofodile Lauretta Nwanneka, A.O Ogbe, Oladipupo Olufunke (2011), Effect of the Mycelial Culture of Ganoderma lucidum on Human Pathogenic Bacteria, Yaba College of Technology, Nigeria 31 Ranjeet Singh (2014), Taxonomy, physicochemical evaluation and chemical investigation of Ganoderma applanatum and G brownii, International Journal of Advanced Research, Volume 2, Issue 5, 702-711 32 Smania E de FA, Monache FD, Yunes RA, Paulert R and Smania Junior A (2007), Antimicrobial activity of methyl australate from Ganoderma australe Brazilian, Journal of Pharmacognosy 17: 14–16 33 Suay I, Arenal F, Asensio FJ, Basilio A Cabello MA, Díez MT, García JB, del Val AG, Gorrochategui J, Hernández P, Peláez F, Vicente MF (2000), Screening of basidiomycetes for antimicrobial activities, Antonie van Leeuwenhoek 78: 129–140 34 Teng S C (1996), Fungi of China, China 35 Wee-Cheat Tan (2015), Ganoderma neo-japonicum Imazeki revisited: Domestication study and antioxidant properties of its basidiocarps and mycelia, University of Malaya 36 Kornerup A, Wanscher J H (1978), Methuen Handbook of Colour, Newport, Isle of Wight, United Kingdom ... có nấm linh chi Ganoderma Trước có số cơng trình nghiên cứu khả kháng khuẩn nấm linh chi [4], số lượng Xuất phát từ lý trên, tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu khả kháng khuẩn số loài thuộc. .. sợi nấm môi trường PDA 3.3 Nghiên cứu khả kháng khuẩn số loài thuộc chi nấm Ganoderma - Xác định tính kháng khuẩn dịch ni cấy hệ sợi, dịch chi t thể nấm Ganoderma số vi khuẩn gây bệnh (Escherichia... bảo tồn số loài thuộc chi nấm Ganoderma nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Lịch sử nghiên cứu nấm Ganoderma 1.1.1 Tình hình nghiên cứu nấm Ganoderma giới Từ xa xưa, nấm mang