Xác định tính đa hình của các gen TP53 và gen MDM2 ở bệnh nhân ung thư phổi tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN KHÁNH CHI XÁC ĐỊNH TÍNH ĐA HÌNH CỦA CÁC GEN TP53 VÀ GEN MDM2 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI CHUYÊN NGÀNH : HÓA SINH Y HỌC MÃ SỐ : 62720112 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Huy Thịnh PGS.TS Nguyễn Thị Hà Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Nghiêm Luật Phản biện 2: PGS.TS Phan Quốc Hoàn Phản biện 3: TS Trần Thị Chi Mai Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án Tiến sỹ cấp Trường họp Trường Đại học Y Hà Nội Vào hồi ngày tháng năm 2019 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Trường Đại học Y Hà Nội ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Ung thư phổi loại ung thư thường gặp có tỷ lệ tử vong cao loại ung thư Việt Nam nước có tỷ lệ ung thư phổi đứng đầu ung thư nam giới đứng thứ ung thư nữ giới Việc phát sớm yếu tố nguy để có biện pháp theo dõi chẩn đoán sớm, can thiệp kịp thời đóng vai trò đặc biệt quan trọng nhằm ngăn ngừa phát sinh, phát triển ung thư đồng thời nâng cao hiệu công tác khám điều trị bệnh Các gen TP53 MDM2 nhóm gen nằm đường tín hiệu TP53 đóng vai trò quan trọng việc trì tính ổn định gen tác động yếu tố có hại thương tổn DNA, giảm oxy máu, rối loạn chuyển hóa hay tăng cường hoạt động gen sinh ung thư Với biến đổi xảy TP53 hay MDM2 làm thay đổi trình sinh lý tế bào dẫn đến nguy phát sinh, phát triển ung thư TP53 MDM2 gen đa hình, nhiều đa hình nucleotid đơn gen tìm thấy tạo kiểu gen (genotype) khác cộng đồng Tuy nhiên, tất kiểu gen có khả thúc đẩy hình thành tiến triển ung thư Trên thực tế, người ta xác định số SNPs gen TP53 MDM2 có vai trò quan trọng bệnh sinh số loại ung thư, có ung thư phổi Việc xác định SNPs có vai trò quan trọng việc đánh giá nguy mắc bệnh khả đáp ứng điều trị cá thể Tại Việt Nam, năm gần có số cơng trình nghiên cứu vai trò gen TP53 ung thư phổi, nhiên chưa có nghiên cứu đánh giá tính đa hình gen TP53 vai trò gen MDM2 thông qua SNPs liên quan đến ung thư phổi Mục tiêu đề tài Xác định tỷ lệ kiểu gen số đa hình gen TP53 gen MDM2 bệnh nhân ung thư phổi người bình thường Phân tích mối liên quan số đa hình gen TP53 gen MDM2 với nguy ung thư phổi Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Các biến thể trình tự DNA người ảnh hưởng đến cách thể phát triển bệnh, cách thể đáp ứng với tác nhân gây bệnh, hóa chất, thuốc, vaccin loại tác nhân khác Các SNP cho chìa khóa tiềm việc thực y học cá thể hoá Tuy nhiên, vai trò quan trọng chúng nghiên cứu y học để so sánh vùng hệ gen nhóm người (có thể bệnh nhân người khỏe mạnh) nghiên cứu mức toàn hệ gen (genome-wide association studies - GWAS) Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành tìm hiểu tỷ lệ kiểu gen đa hình nhóm bệnh nhân ung thư phổi nhóm đối chứng, so sánh nhóm tính tốn tỷ suất chênh để xác định nguy mắc ung thư phổi cá đối tượng Các kỹ thuật sinh học phân tử sử dụng để xác định kiểu gen đa hình nucleotid đơn gen TP53 MDM2 Các kiểu gen nguy phát triển thành phương tiện sàng lọc sớm tư vấn cho cộng đồng, để phòng tránh, ngăn ngừa hình thành phát triển ung thư phổi Đây xem hướng tiếp cận đầy triển vọng, góp phần làm giảm tỷ lệ mắc ung thư phổi Cấu trúc luận án - Luận án trình bày 116 trang (không kể tài liệu tham khảo phần phụ lục) Luận án chia làm phần: + Đặt vấn đề: trang + Chương 1: Tổng quan tài liệu 36 trang + Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 12 trang + Chương 3: Kết nghiên cứu 31 trang + Chương 4: Bàn luận 32 trang + Kết luận: trang + Khuyến nghị: trang Luận án gồm 26 bảng, 35 hình Sử dụng 192 tài liệu tham khảo gồm tiếng Việt tiếng Anh Phần phụ lục gồm bệnh án nghiên cứu, danh sách 220 bệnh nhân ung thư phổi nguyên phát 230 người đối chứng, quy trình kỹ thuật Chương TỔNG QUAN Ung thư phổi 1.1 Dich tễ học ung thư phổi Những nghiên cứu dịch tễ học ghi nhận, ung thư phổi loại ung thư thường gặp có tỷ lệ tử vong cao loại hình ung thư Theo số liệu thống kê tình hình ung thư tồn giới (Globocan 2012), ước tính giới có khoảng 1,82 triệu ca ung thư phổi mắc khoảng 1,59 triệu ca tử vong ung thư phổi Tại Hoa Kỳ, thống kê cập nhật năm 2016, ung thư phổi loại ung thư có tỷ lệ tử vong cao tỷ lệ mắc đứng thứ hai hai giới Ước tính năm 2016, Hoa Kỳ có khoảng 224.390 trường hợp ung thư phổi phát khoảng 158.080 ca tử vong, chiếm đến 26,5% tổng số ca tử vong ung thư Các thống kê cho thấy, ung thư phổi phổ biến nam giới Tại nước phát triển, tỷ lệ nam/nữ 2,4/1 nước phát triển, tỷ lệ nam/nữ 1,8/1 Số ca mắc nữ giới đứng thứ loại hình ung thư (sau ung thư vú đại trực tràng) số ca tử vong đứng sau số ca tử vong ung thư vú Theo ghi nhận ung thư Việt Nam, sau 10 năm từ 2000 đến 2010, tỷ lệ mắc ung thư phổi nữ tăng 200% (6,4/100.000 năm 2000 đến 13,9/100.000 dân năm 2010), ung thư phổi loại ung thư có tốc độ tăng nhanh 1.2 Bệnh nguyên, bệnh sinh ung thư phổi Hút thuốc coi yếu tố nguy gây nên ung thư phổi, khoảng 80- 85% ca chẩn đoán ung thư phổi giới có hút thuốc Mức độ tăng nguy phụ thuộc vào: tuổi bắt đầu hút (hút sớm nguy cao), số bao- năm (càng lớn nguy cao), thời gian hút dài (nguy mắc bệnh lớn), nguy ung thư phổi người hút thuốc cao gấp 10 lần so với người không hút thuốc Các nghiên cứu rằng, người không trực tiếp hút thuốc thường xuyên tiếp xúc với người hút thuốc (hút thuốc thụ động) có nguy ung thư phổi cao Ngồi nhiều yếu tố coi yếu tố nguy cho ung thư phổi nhiễm khơng khí, xạ ion hóa, phơi nhiễm nghề nghiệp, virus, chế độ ăn, tiền sử mắc bệnh phế quản phổi Các nghiên cứu cấp độ phân tử cho thấy, phát sinh, phát triển ung thư phổi diễn qua nhiều giai đoạn tác động yếu tố nguy cơ, mẫn cảm gen q trình tích lũy đột biến xảy gen gây ung thư (oncogene) gen áp chế ung thư (tumor suppressor gene) Các chế điều hòa gen vốn hoạt động nhịp nhàng chặt chẽ bị rối loạn dẫn tới tăng cường hay ức chế bất thường gen chức Hình 1.1: Các đường tín hiệu phân tử bệnh sinh ung thư phổi (Theo Pass cộng sự) Gen TP53 MDM2 2.1 Gen áp chế ung thư TP53 Gen TP53 nằm nhánh ngắn nhiễm sắc thể số 17 (17p13.1), dài 20kb bao gồm 11 exon (từ E1 đến E11, E1 khơng mã hóa) 10 intron Gen TP53 mã hóa cho protein TP53 người phosphoprotein có trọng lượng phân tử 53 kDa bao gồm 393 acid amin với vùng chức khác Gen TP53 có vai trò quan trọng sửa chữa DNA, kiểm soát chu kỳ tế bào apoptosis Sự khiếm khuyết gen TP53 cho phép tăng sinh tế bào bất thường dẫn đến hình thành ung thư Khi thể bị tác động kích thích (tổn thương DNA, stress tế bào, thiếu oxy, biểu mức oncogen), TP53 hoạt hóa gây dừng chu kỳ phân bào DNA sửa chữa gây apoptosis DNA tổn thương không sửa chữa Vì vậy, TP53 xem trạm gác gen tế bào (guardian genome) Ngoài ra, TP53 có khả hoạt hóa ức chế số gen khác 2.2 Gen MDM2 Gen MDM2 (Murine double minute 2) gọi HDM2 (Human double minute 2) gồm có 12 exon intron nằm nhánh dài NST số 12, xác định lần năm 1980 Phân tử protein MDM2 tổng hợp có 491 acid amin, gồm vùng cấu trúc chức Cho đến nay, vai trò quan trọng biết đến MDM2 điều hòa hoạt động gen TP53 đường tín hiệu TP53 Ở điều kiện bình thường, MDM2 gắn kết vào vùng kích hoạt chép TP53, kiểm sốt phân bố giáng hóa protein TP53 Ngược lại, TP53 hoạt hóa thúc đẩy q trình chép MDM2 biểu TP53 MDM2 tế bào giữ trạng thái cân thơng qua q trình điều hòa ngược MDM2 TP53 Khi xuất yếu tố kích thích (tổn thương DNA, stress tế bào, thiếu oxy, biểu mức oncogene), MDM2 phosphoryl hóa bộc lộ vùng hoạt hóa TP53, khởi phát chức TP53 Đa hình gen TP53, MDM2 ung thư phổi Hiện tượng đa hình nucleotid đơn (SNP) khác trình tự DNA gen cá thể loài hay cặp nhiễm sắc thể người Đây tượng phổ biến, coi hậu đột biến điểm thay cặp nucleotid Theo kết nghiên cứu cơng bố có nhiều SNPs tìm thấy vùng mã hóa khơng mã hóa gen TP53 gen MDM2 Các SNPs tạo kiểu gen (genotype) khác TP53 MDM2 cộng đồng Một số SNPs đóng vai trò quan trọng phát sinh phát triển nhiều loại ung thư coi yếu tố nguy cần quan tâm Các SNP phân tích nghiên cứu làm thay đổi trình tự mã hố khơng chúng nằm vùng chức quan trọng TP53 Những vùng lý thuyết ảnh hưởng đến khả kiểm sốt hình thành khối u Đầu tiên phải kể đến tượng đa hình thái thêm 16 base pair vùng không mã hóa thứ (intron-3) TP53 Những người mang kiểu gen biểu protein TP53 tế bào mức thấp có nguy cao mắc số loại ung thư bao gồm ung thư phổi, ung thư vú ung thư đại trực tràng Điều chứng tỏ SNPs có khả thay đổi q trình hồn thiện mRNA Bên cạnh SNPs vùng mã hóa TP53 ba mã hóa 21 (GAC → GAT), 34 (CCC → CCA) 36 (CCG → CCT) không làm thay đổi trình tự acid amin làm giảm biểu protein TP53 Nhiều nghiên cứu SNPs nằm vùng N-tận TP53 chứa vị trí tương tác với MDM2 làm giảm khả dịch mã TP53 mRNA Mặt khác, SNPs vùng mã hóa làm thay đổi trình tự acid amin dẫn đến thay đổi khả bám TP53 đoạn trình tự đặc hiệu gen đích, thay đổi q trình hồn thiện, tính ổn định protein thay đổi khả tương tác TP53 với protein nội bào Đây SNPs nằm ba mã hóa 47 (P47S), 72 (R72P), 217 (V217M) 360 (G360A) Trong điều kiện bình thường, tác động protein p38 homeodomain-interacting protein kinase (HIPK2) TP53 phosphoryl hóa vị trí S46 dẫn đến tăng cường chép gen liên quan đến trình chết theo chương trình (appotosis) Và alen TP53-P47 thay alen TP53-S47 phosphoryl hóa vị trí S46 bị giảm sút làm giảm hoạt tính tác động lên gen đích trình thực bào tăng khả mắc ung thư Tương tự vậy, tính đa hình thái ba mã hóa 72 (R72P) tạo kiểu gen vị trí TP53-R72 TP53-P72 Nghiên cứu Boldrine cộng cho thấy kiểu gen đồng hợp tử TP53-P72 có nguy cao mắc ung thư phổi [48] Đồng thời kiểu gen TP53-P72 với kiểu gen G/G MDM2 thường gặp bệnh nhân ung thư phổi hút thuốc lâu năm Đối với dạng SNPs lại, V217M nằm vùng bám vào DNA TP53 (DNA binding domain), SNPs có khả làm giảm hoạt động TP53 gen bị ảnh hưởng trực tiếp gồm có CDKN1A, BAX PMAIP1 Nghiên cứu chức cho thấy kiểu gen TP53-M217 có biểu gen cao gấp nhiều lần kiểu gen TP53-V217 Như kiểu gen TP53-M217 có khả bảo vệ tế bào chống lại tác nhân gây ung thư tốt kiểu gen TP53-V217 Tuy nhiên chế phân tử tượng chưa thực rõ ràng SNPs G360A nằm vùng nối TP53 SNPs tác động lên biểu BAX MDM2, gen quan trọng đường tín hiệu TP53 Đa hình thái nucleotid đơn gen MDM2 intron đầu tiên, rs2279744 (MDM2 - SNP309), với biến đổi từ T thành G (MDM2 SNP309 T > G) làm gia tăng lực SP1 (Stimulatory protein 1) với MDM2, kết làm tăng biểu MDM2 dẫn đến gen TP53 bị ức chế điều kiện cho tế bào ung thư hình thành tiến triển Nhiều nghiên cứu dịch tễ gen giới tiến hành nhằm tìm kiếm liên quan đa hình nucleotid đơn gen TP53 MDM2 ung thư phổi kết cơng bố chưa thống có điểm chung nghiên cứu ghi nhận đa hình R72P gen TP53 309T>G gen MDM2 hai SNP liên quan nhiều với ung thư phổi Khác biệt nghiên cứu giải thích khác biệt cỡ mẫu hay yếu tố chủng tộc môi trường sống quần thể nghiên cứu khác Thực tế ung thư kết trình phức tạp có tương tác nhiều yếu tố kiểu gen, đặc điểm sinh học mơi trường sống Vì vậy, nghiên cứu SNP ung thư phổi cần có phân tích liên quan với đặc điểm sinh học hay tình trạng hút thuốc lá, nhiễm mơi trường sống để đánh giá cách tồn diện, đem lại thông tin giá trị cho chiến lược dự phòng ung thư phổi Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu thực 220 bệnh nhân ung thư phổi ngun phát chẩn đốn Trung tâm Hơ hấp, Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu- Bệnh viện Bạch Mai 230 đối chứng từ tháng 10 năm 2013 đến tháng 12 năm 2014 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân - 220 bệnh nhân chẩn đoán xác định ung thư phổi Trung tâm Hô Hấp, Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu- Bệnh viện Bạch Mai kết xét nghiệm mô bệnh học - Đồng ý tham gia nghiên cứu 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ - Ung thư phổi thứ phát - Ung thư phổi có kèm theo ung thư khác - Khơng đồng ý tham gia nghiên cứu 2.1.3 Nhóm chứng - 230 đối chứng lựa chọn từ người đến khám sức khỏe khoa Khám bệnh- Bệnh viện Bạch Mai Nhóm chứng khám lâm sàng, làm xét nghiệm cận lâm sàng, chụp XQ phổi, siêu âm kết luận không mắc ung thư phổi hay loại ung thư khác - Tương ứng tuổi giới với nhóm bệnh nhân ung thư phổi 10 2.1.4 Các đa hình gen phân tích - Gen TP53 + Thêm đoạn 16 cặp base pair intron (dup 16) + SNP P34P, codon 34, exon (CCC →CCA), mã hoá Prolin + SNP P36P, codon 36, exon (CCG →CCA), mã hoá Prolin + SNP P47S, codon 47, exon 4, (CCG TCG), tương ứng với Prolin Serin + SNP R72P codon 72, exon 4, (CGC CCC), tương ứng với Arginin Prolin + SNP V217M, codon 217, exon 6, (GTG ATG), tương ứng với Valin Methionine + SNP G360A codon 360, exon 10, (GGG GCG), tương ứng với Glycin Alanin - Gen MDM2: đa hình nucleotid đơn vị trí nucleotid 309, intron vùng promoter gen 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang có đối chứng 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian từ tháng 10 năm 2013 đến tháng 10 năm 2017 Địa điểm nghiên cứu: Bộ mơn Hóa Sinh trường Đại học Y Hà Nội Trung tâm Hô hấp, Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu- Bệnh viện Bạch Mai Trung tâm nghiên cứu Gen Protein, trường Đại Học Y Hà Nội 2.4 Đạo đức nghiên cứu Đề tài thông qua Hội đồng đạo đức Trường Đại học Y Hà Nội học theo Quyết định số 188/HĐĐĐĐHYHN, ngày 31/1/2013 2.5 Kinh phí thức đề tài Đề tài thực với hỗ trợ kinh phí đề tài nhánh cấp nhà nước “Đánh giá phân bố kiểu gen số gen liên quan đến ung thư phổi ung thư gan” thuộc đề tài nhiệm vụ Quỹ gen “Đánh giá đặc điểm di truyền người Việt Nam” 2.6 Quy trình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu bao gồm: Thu thập thông tin bệnh nhân theo bệnh án nghiên cứu Kỹ thuật tách chiết DNA từ mẫu máu ngoại vi Phản ứng PCR xác định kiểu gen đa hình Dup16 gen TP53 Kỹ thuật enzym cắt giới hạn (RFLP) để xác định kiểu gen đa hình R72P gen TP53 309T>G gen MDM2 Kỹ thuật giải trình tự 15 Bảng 3.4: Bảng tổng hợp kiểu gen SNP P34P, P36P, P47S, V217M, G360A gen TP53 Kiểu gen P34P(C>A) P36P(G>A) P47S(C>T) V217M(G>A) G360A(G>C) Kiểu gen đồng hợp nguyên thuỷ n % Kiểu gen dị hợp n C/C 450 C/A 100 G/G 450 A/A 0 G/A 100 C/C (P47P) * 450 100 G/G (V217V)* 450 100 G/G (G360G)* 450 % Kiểu gen đồng hợp đột biến n % 100 A/A C/T (P47S) * 0 G/A (V217M)* 0 G/C (G360A)* 0 0 T/T (S47S)* 0 A/A (M217M)* 0 C/C (A360A)* 0 (* ) Kiểu gen theo acid amin mã hố SNP có thay đổi trình tự acid amin Nhận xét: Khơng phát kiểu gen đột biến nhóm nghiên cứu 3.3 Kết phân tích đa hình kiểu gen SNP309 gen MDM2 Kết xác định kiểu gen SNP309T>G gen MDM2 phương pháp PCR-RFLP nh 3.4: Hình ảnh điện di sản phẩm cắt đoạn gen MDM2 mang SNP309 enzym MspA1i m nghiên cứu K17, C7: Kiểu gen đồng hợp tử T/T Mẫu K16, K23, C16: Kiểu gen đồng hợp tử G/G Mẫu K7, K13, C18, Kiểu gen dị hợp tử T/G M: Thang chuẩn 100bp; (-): Chứng âm, (-): Chứng dương Nhận xét: 16 Sản phẩm cắt gồm đoạn DNA có kích thước khác nhau, phù hợp với tính tốn lý thuyết Mẫu mang kiểu gen T/T gồm băng DNA có kích thước 157bp (mẫu K17, C7) Mẫu mang kiểu gen G/G gồm băng DNA có kích thước 109 bp 48 bp (mẫu K16, K23, C16 ) Mẫu mang kiểu gen dị hợp tử T/G gồm băng DNA có kích thước 157bp, 109 bp 48 bp (mẫu K7, K13, C18, C21) Kiểm tra lại kết xác định kiểu gen SNP 309T>G gen MDM2 phương pháp giải trình tự gen Hình 3.5: Kết giải trình tự đoạn gen chứa SNP 309 T>G gen MDM2 tương ứng kiểu gen T/T, T/G, G/G Nhận xét: Kết giải trình tự DNA mẫu nghiên cứu cho thấy hoàn toàn phù hợp với kết phân tích PCR-RFLP Bảng 3.5: Các kiểu gen SNP309T>G gen MDM2 nguy mắc ung thư phổi Đa hình thái T Alen G TT Kiểu gen Kết hợp gen lặn Kết hợp gen TG Ung thư phổi (n=220) n % 49, 217 50, 223 27, 60 44, 97 GG 63 TT+T G 157 GG 63 TT 60 28, 71, 28, 72, Nhóm chứng (n=230) n % 24 52,4 21 47,6 55 23,9 1,13 (0,87 – 1,47) 1,0 13 57,0 0,68 (0,43 – 1,07) 44 19,1 18 80,9 44 19,1 1,7 (1,09 – 2,63) 55 23,9 1,0 OR, 95%CI OR*, 95%CI 1,0 1,31 (0,77 – 2,32) 1,0 1,0 0,65 (0,41 – 1,03) 1,10 (0,84 – 1,44) 1,0 1,61 (1,03 – 2,51) 1,0 17 trội TG + GG 160 27, 17 76,1 0,84 (0,55 – 1,28) 0,78 (0,51 – 1,20) OR* điều chỉnh theo biến: tuổi, giới, tình trạng hút thuốc theo mơ hình hồi quy logistic đa biến Nhận xét: Kiểu gen dị hợp tử SNP 309TG chiếm tỷ lệ cao nhóm bệnh nhóm chứng Kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG làm tăng nguy mắc ung thư phổi 1,7 lần theo mơ hình gen lặn (OR = 1,7; 95%CI= 1,09 – 2,63) Khi hiệu chỉnh theo biến tuổi, giới tình trạng hút thuốc theo mơ hình hồi quy logistic đa biến cho thấy kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG làm tăng nguy mắc ung thư phổi 1,61 lần theo mơ hình gen lặn (OR = 1,61; 95%CI= 1,03 – 2,51) 3.4 Mối liên quan đa hình kiểu gen TP53 gen MDM2 với nguy mắc ung thư phổi 3.4.2 Mối liên quan đa hình gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng ung thư phổi 3.4.2.1 Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo giới Bảng 3.6: Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo giới Nhóm Nam Nữ OR GG/TT (95%CI) OR TG/TT (95%CI) OR GG/TG+TT (95%CI) OR TG+GG/TT (95%CI) 1,31 (0,71 – 2,43) 1,26 (0,43 – 3,67) 0,69 (0,41 – 1,18) 0,67 (0,29 – 1,56) 1,66 (1,01 - 2,76) 1,67 (0,68 – 4,06) 0,87 (0,526 - 1,43) 0,79 (0,35 – 1,77) Nhận xét: Kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG làm tăng nguy mắc ung thư phổi nam giới 1,66 lần theo mơ hình gen lặn ( OR-1,66; 95%CI=1,01-2,76) 3.4.2.2 Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo mô bệnh học Bảng 3.7: Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo mơ bệnh học Nhóm OR GG/TT (95%CI) OR TG/TT (95%CI) OR GG/TG+TT (95%CI) OR TG+GG/TT (95%CI) 18 UTBM không tế bào nhỏ 1,37 (0,79 – 2,37) 0,72 (0,45 – 1,14) 1,71 (1,09 – 2,68) 0,88 (0,57 – 1,37) UTBM tế bào nhỏ 0,94 (0,30 – 2,90) 0,42 (0,15 – 1,18) 1,59 (0,59 – 4,28) 0,55 (0,22 – 1,38) UTBM tuyến 1,40 (0,79 – 2,50) 0,76 (0,46 – 1,24) 1,69 (1,05 – 2,72) 0,92 (0,58 – 1,47) UTBM vảy 2,50 (0,44 – 14,29) 1,47 (2,97 – 7,30) 1,88 (0,55 – 6,38) 1,73 (0,37 – 8,04) Nhận xét: Kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG nhóm có hút thuốc làm tăng nguy mắc UTBM không tế bào nhỏ 1,71 lần (OR=1,71; 95% CI= 1,092,68) UTBM tuyến 1,69 lần (OR=1,69; 95%CI= 1,05-2,72) theo mơ hình gen lặn 3.4.2.3 Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo tình trạng hút thuốc Bảng 3.8: Mối liên quan đa hình kiểu gen MDM2 SNP309T>G nguy mắc ung thư phổi theo tình trạng hút thuốc OR OR GG/TT OR TG/TT OR TG+GG/TT Nhóm GG/TG+TT (95%CI) (95%CI) (95%CI) (95%CI) 2,09 1,86 0,85 1,12 Có hút thuốc (1,01 – (0,74 – 4,68) (0,38 – 1,90) (0,52 – 2,40) 4,31) 0,98 1,38 Không hút 0,58 0,68 (0,50 – (0,78 – thuốc (0,34 – 1,01) (0,41 – 1,14) 1,90) 2,43) Hút thuốc 1,99 1,86 0,92 1,18 20 bao-năm 2,18 1,08 (0,80 – (0,38 – 3,03) 5,98) Nhận xét: Kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG nhóm có hút thuốc làm tăng nguy mắc ung thư phổi 2,09 lần theo mơ hình gen lặn (OR= 2,09; 95%CI= 1,01-4,31) 3.4.3 Nguy mắc ung thư phổi kết hợp đa hình gen TP53 SNP R72P gen MDM2 SNP309T>G 3.4.3.1.Nguy mắc ung thư phổi kết hợp đa hình gen TP53 SNP R72P gen MDM2 SNP309T>G với hút thuốc Bảng 3.9: Nguy mắc ung thư phổi kết hợp đa hình gen TP53 SNP R72P gen MDM2 SNP309T>G với hút thuốc Đặc điểm Không hút thuốc Hút thuốc Hút thuốc < 20 bao.năm Hút thuốc > 20 bao.năm GG gen TP53 SNP R72P không hút thuốc CC gen TP53 SNP R72P hút thuốc TT gen MDM2 SNP309T>G không hút thuốc GG gen MDM2 SNP309T>G hút thuốc 1,87 (0,53 – 6,60) 0,80 (0,27 – 2,39) Ung thư phổi n % 126 57,3 Nhóm chứng n % 162 70,4 94 42,7 68 29,6 43 45,7 33 48,5 1,68 (1,01 – 2,79) 51 54,3 35 51,5 1,87 (1,15 – 3,06) 32 57,1 53 80,3 1,00 24 42,9 13 19,7 3,06 (1,37 - 6,84) 41 55,4 40 74,1 1,00 33 44,6 14 25,9 2,30 (1,07 - 4,93) OR 1,00 1,78 (1,20 - 2,62) Nhận xét: - Hút thuốc làm tăng nguy mắc ung thư phổi 1,78 lần (OR= 1,78; 95%CI= 1,20-2,62) - Hút thuốc >20 bao-năm làm tăng nguy mắc ung thư phổi lên 1,87 lần ( OR=1,87; 95%CI= 1,15-3,06) cao nguy mắc ung thư phổi hút thuốc G có hút thuốc nguy mắc ung thư phổi tăng cao gấp 2,3 lần so với người mang kiểu gen TT không hút thuốc (OR= 1,07-4,93) Chương BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu Tuổi: BN trẻ 33 tuổi lớn tuổi 86 tuổi, tuổi trung bình 59,89 ± 9,432 tuổi Độ tuổi thường gặp 50-70 tuổi (72,7%), phần lớn BN có độ tuổi từ 45 trở lên (93,6%) BN ung thư phổi trẻ tuổi (dưới 40 tuổi) ghi nhận trường hợp (2,7%) Kết phù hợp với ghi nhận số nghiên cứu nước quốc tế Ngô Quý Châu cộng năm 2012 nghiên cứu ung thư phổi Trung tâm Hô hấp bệnh viện Bạch mai công bố tuổi trung bình mắc ung thư phổi nhóm nghiên cứu 58,9 ± 8,6 Yang P CS (2005) ghi nhận, tuổi trung bình nhóm nghiên cứu 65,4 ± 11,0 tuổi Giới: Kết nghiên cứu góp phần khẳng định lại phổ biến ung thư phổi nam giới so với nữ giới với tỷ lệ nam/nữ 2,86/1 Theo Ngô Quý Châu CS nghiên cứu năm 2012 Trung tâm Hô hấp Bệnh viện Bạch Mai, bệnh nhân nam giới chiếm 73,3%, tỷ lệ nam/nữ 2,75/1 Hút thuốc lá: Nghiên cứu ung thư phổi, hầu hết nghiên cứu đề cập đến yếu tố hút thuốc lá, nhiên lại yếu tố khó lượng giá tách rời khỏi ảnh hưởng môi trường Nghiên cứu ghi nhận 94/220 (42,7%) trường hợp có hút thuốc khơng có bệnh nhân nữ có hút thuốc Phân tích tỷ lệ hút thuốc nhóm bệnh nhân ung thư phổi nhóm chứng, kết nghiên cứu của khẳng định lại lần hút thuốc làm tăng nguy ung thư phổi gấp 1,78 lần so với không hút thuốc Không vậy, mức độ nguy tăng theo số bao – năm Với người hút < 20 bao-năm, nguy mắc ung thư phổi tăng 1,68 lần người hút > 20 bao-năm, mức nguy tăng lên gấp 1,87 lần 21 Mô bệnh học: Trong nghiên cứu gặp 90,5% bệnh nhân UTBMKTBN Kết phù hợp với ghi nhận nghiên cứu khác.Theo Ngô Quý Châu CS., tỷ lệ UTPKTBN gặp 93,3% bệnh nhân ung thư phổi 4.2 Đa hình gen TP53 nhóm nghiên cứu Trong nghiên cứu chúng tơi khơng tìm thấy tính đa hình gen SNP P34P, SNP P36P, SNP P47S, SNP V217M , SNP G360A nhóm nghiên cứu Riêng đa hình dup16 chúng tơi ghi nhận có 8/220 bệnh nhân ung thư phổi có kiểu gen A1A2 thêm 16bp vùng intron gen TP53, chiếm tỷ lệ 3,6% cao nhóm chứng với tỷ lệ gặp 1,7% (4/230 trường hợp) Tuy nhiên khác biệt ý nghĩa thống kê với OR = 2,13; 95% CI = 0,633 - 7,184 Từ nghiên cứu này, lần chúng tơi tiến hành phân tích đa hình gen TP53 bệnh nhân ung thư phổi Việt Nam Kết chúng tơi góp phần làm sáng tỏ liên quan yếu tố chủng tộc loại hình ung thư phải tính đến tính đa hình gen TP53 SNP R72P gen TP53: SNP nghiên cứu nhiều nghiên cứu giới Trong nghiên cứu ghi nhận tỷ lệ cao không đáng kể kiểu gen P/P bệnh nhân ung thư phổi 26,4% so với 25,6% nhóm chứng Các nghiên cứu SNP R72P mối liên quan với ung thư phổi đề cập nhiều giới chưa có thống tác giả Một số nghiên cứu cơng bố khơng có mối liên quan SNP R72P với nguy mắc ung thư phổi tương tự Một số nghiên cứu với cỡ mẫu lớn ghi nhận tăng nguy mắc ung thư phổi người mang kiểu gen P/P so với kiểu gen R/R chủ yếu gặp người Châu Á 4.3 Đa hình thái gen MDM2 nhóm nghiên cứu Chúng tiến hành xác định kiểu gen SNP309 gen MDM2 220 bệnh nhân ung thư phổi 230 đối chứng Từ số liệu thu chúng tơi tiến hành phân tích tỷ lệ kiểu gen alen, so sánh nhóm bệnh nhóm chứng vào tỷ suất chênh OR với 95% CI Kết nghiên cứu nhận thấy nhóm ung thư phổi nhóm chứng tỷ lệ kiểu gen dị hợp tử TG chiếm đa số Nghiên cứu tương tự kết nghiên cứu khác tỷ lệ kiểu gen SNP309 MDM2 người châu Á Kết nghiên cứu cho thấy kiểu gen đồng hợp tử SNP 309GG làm gia tăng nguy mắc ung thư phổi 1,7 lần so với kiểu gen kết hợp SNP 309TT TG theo mơ hình gen lặn (OR=1,7; 95%CI=1,09-2,63) Tương 22 đồng với kết nghiên cứu nghiên cứu cộng gộp Gui cộng năm 2009 phân tích số liệu tổng hợp từ kết nghiên cứu với tổng số 6.603 bệnh nhân ung thư phổi 6678 đối chứng ghi nhận kiểu gen MDM2 SNP309GG làm tăng nguy mắc ung thư phổi theo mơ hình gen lặn với OR=1,17, 95% CI=1,02-1,34 Khi phân tích theo chủng tộc tác giả nhận thấy gia tăng nguy mắc ung thư phổi gặp người châu Á sau: Kiểu gen TG so với TT (OR=1,2; 95% CI-1,05-1,37), GG so với TT (OR=1,26; 95% CI=1,011,79) theo mơ hình gen trội (OR=1,26; 95% CI=1,11-1,43) Tuy nhiên nghiên cứu khơng tìm thấy mối liên quan kiểu gen SNP309 MDM2 người Châu Âu Người Châu Phi theo tất mơ hình gen Như vậy, vai trò kiểu gen theo chủng tộc môi trường sống cần làm rõ mối quan hệ với nguy phát sinh ung thư phổi Phân tích gần Wenwu He cộng năm 2012 đưa kết tương tự với nguy phát triển ung thư phổi theo mơ hình gen lặn SNP309GG gen MDM2 OR=1,144 (95% CI=1,037-1,262) người Châu Á theo mơ hình gen trội OR= 1,379 (95% CI=1,142-1,665) Nghiên cứu Gui Wenwu He bên cạnh ưu điểm vượt trội số lượng mẫu nghiên cứu lớn so với nghiên cứu chúng tơi hạn chế ảnh hưởng đến kết nghiên cứu Thứ nhất, lựa chọn đối chứng từ nghiên cứu khơng đồng hầu hết lựa chọn từ quần thể khỏe mạnh chưa loại trừ hết nguy phát triển ung thư phổi khác Thứ hai, số người châu Phi nghiên cứu tương đối nhỏ, đủ sức mạnh thống kê để phát mối liên quan có ý nghĩa thống kê Thứ ba, kết Gui dựa ước tính chưa điều chỉnh, phân tích xác nên thực liệu cá nhân có sẵn, điều cho phép điều chỉnh biến số khác bao gồm tuổi, dân tộc, tình trạng hút thuốc, yếu tố mơi trường lối sống Do việc lựa chọn nhóm bệnh nhóm chứng tốt đồng thời xét ước tính hiệu chỉnh theo đặc điểm cá nhân đưa kết xác đáng tin cậy Nghiên cứu thực tốt vấn đề cách lựa chọn nhóm ung thư phổi chặt chẽ theo tiêu chuẩn xét nghiệm giải phẫu bệnh Nhóm chứng lựa chọn người đến khám sức khỏe, có sàng lọc ung thư tương ứng tuổi giới với nhóm bệnh Kết nghiên cứu hiệu chỉnh theo đặc điểm tuổi giới nhằm tìm mối liên quan chặt chẽ Tuy nhiên, hạn chế nghiên cứu chúng tơi số lượng mẫu nhỏ nên khó tìm mối liên quan có ý nghĩa thống kê Hơn nữa, xem xét liên quan gen - gen gen-mơi trường phân tích chưa đề cập đến Do đó, để có hiểu biết tốt toàn diện mối liên quan đa hình gen 23 MDM2 SNP309T>G với nguy ung thư phổi cần phải phân tích yếu tố kể nghiên cứu 4.4 Mối liên quan đa hình gen TP53 gen MDM2 với nguy mắc ung thư phổi Ung thư phổi hậu q trình phức tạp có tương tác nhiều yếu tố bao gồm kiểu gen mơi trường Do đó, đa hình gen hay yếu tố mơi trường có tác động khiêm tốn tới phát triển bệnh Vì vậy, kết nghiên cứu đa hình gen cần đánh giá mối liên quan đến đặc điểm sinh học yếu tố môi trường để có cách đánh giá nguy mắc bệnh cách xác Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành tìm hiểu mối liên quan đa hình gen TP53, gen MDM2 nguy mắc ung thư phổi theo số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân ung thư phổi Đa hình gen TP53: nghiên cứu khơng tìm mối liên quan với nguy mắc ung thư phổi theo đặc điểm lâm sàng tuổi mắc bệnh khác biệt kiểu gen, khơng khác biệt theo giới hay theo mơ bệnh học Với tình trạng hút thuốc lá, số liệu nghiên cứu cho thấy hút thuốc làm tăng nguy mắc ung thư phổi, không ghi nhận mối liên quan có ý nghĩa thống kê tình trạng hút thuốc phân bố kiểu gen TP53 codon 72 mối liên quan với nguy mắc ung thư phổi theo mơ hình gen Mặc dù vậy, phân tích kết hợp kiểu gen đa hình codon 72 R/P gen TP53 với tình trạng hút thuốc lá, chúng tơi nhận thấy người có kiểu gen P/P mà hút thuốc nguy mắc ung thư phổi cao 3,06 lần (OR=3,06; 95% CI=1,37 – 6,84) Kết gợi ý người mang kiểu gen nhạy cảm, có tiếp xúc với yếu tố nguy khác gây cộng hưởng làm tăng nguy mắc bệnh cao Như vậy, nắm rõ kiểu gen thể tính nhạy cảm với ung thư phổi tương tác với yếu tố nguy khác giúp cho có biện pháp dự phòng, ngăn chặn xuất bệnh tốt SNP 309T>G gen MDM2: Trong nghiên cứu này, tiến hành phân tích tuổi mắc bệnh kiểu gen nhóm bệnh nhiên khơng ghi nhận khác biệt có ý nghĩa thống kê Với số lượng mẫu 220 bệnh nhân ung thư phổi khơng đủ độ lớn để tìm khác biệt Khi phân tích tìm mối liên quan SNP 309T>G gen MDM2 theo giới ghi nhận gia tăng nguy mắc ung thư phổi có ý nghĩa nhóm nam giới theo mơ hình gen lặn (OR=1,66; 95% CI=1,01-2,76) Kết ngược với nghiên cứu Wenwu He cộng năm 2012 ghi nhận nguy mắc ung 24 thư phổi tăng nữ giới mang kiểu gen GG (OR=1,282; 95% CI= 1,062-1,548) Tuy nhiên, bên cạnh nghiên cứu Wenwu He, công bố Chua cộng năm 2010 cho thấy kiểu gen SNP309TT lại làm tăng nguy ung thư phổi nữ giới không hút thuốc mà kiểu gen SNP309GG Cơ chế để giải thích khác biệt chưa rõ ràng, có khả liên quan đến receptor estrogen ảnh hưởng đến điều hoà biểu gen MDM2 Thụ thể estrogen phát rộng rãi tế bào ung thư phổi, cho thấy hormone steroid sinh dục đóng vai trò quan trọng sinh bệnh học bệnh ung thư phổi Bên cạnh đó, MDM2 đóng vai trò q trình tăng sinh estrogen mạnh mẽ tế bào độc lập với đường tín hiệu TP53 MDM2 gây tăng biểu tiểu đơn vị p65 NF-kB, yếu tố chống lại trình chết theo chương trình biểu tế bào ung thư Ngoài ra, SNP309 MDM2 làm tăng gắn kết Sp1, yếu tố hoạt hóa thụ thể nhiều hormon có estrogen Do đó, có khả ảnh hưởng đến điều hòa chép MDM2 phụ thuộc hormon dẫn đến làm tăng protein MDM2 tế bào Với chế kể trên, biến thể di truyền MD302 T309G làm gia tăng hình thành ung thư phổi theo cách đặc hiệu giới Tuy nhiên, kết nên giải thích cẩn thận tăng nguy ung thư phổi khơng tìm thấy mơ hình cộng gộp mơ hình gen trội Trong nghiên cứu chúng tơi, việc khơng tìm thấy mối liên quan với nguy ung thư phổi nữ giới giải thích cỡ mẫu nghiên cứu nhỏ Số lượng bệnh nhân ung thư phổi nam giới chiếm đa số nên có chi phối kết phân tích cách rõ ràng Do đó, cần có nghiên cứu phân tầng cho giới làm tăng sức mạnh cho ước tính mối liên quan theo chế kể Kết nghiên cứu cho thấy kiểu gen GG làm tăng khả mắc ung thư phổi không tế bào nhỏ 1,71 lần theo mơ hình gen lặn (OR=1,71; 95%CI=1,09 – 2,68), UTBM tuyến 1,69 lần (OR=1,69; 95%CI=1,05 – 2,72) Lý chưa ghi nhận mối liên quan với typ mô bệnh học khác ung thư phổi số lượng bệnh nhân ung thư phổi nghiên cứu chủ yếu UTBM tuyến Kết nghiên cứu tương tự Sun Ha Park cộng năm 2006 công bố kiểu gen SNP 309GG gen MDM2 làm tăng nguy ung thư biểu mô tuyến 1,91 lần (OR=1,91; 95% CI =1,16-3,14) Phân tích mối liên quan SNP 309T>G gen MDM2 với tình trạng hút thuốc cho thấy gia tăng khả mắc ung thư phổi 2,09 lần (95% CI= 1,01 – 4,31) người có hút thuốc theo mơ hình gen lặn Khi so sánh người có kiểu gen GG có hút thuốc với người có kiểu gen 25 TT không hút thuốc lá, nguy mắc ung thư phổi tăng cao lên 2,3 lần (95% CI= 1,07 – 4,93) Ghi nhận phù hợp với nghiên cứu giới chứng minh hút thuốc yếu tố nguy dẫn đến ung thư phổi người có kiểu gen SNP 309 GG hút thuốc làm tăng nguy ung thư phổi mắc ung thư phổi nghiên cứu Sun Ha Park năm 2006 Nghiên cứu nhiều hạn chế ảnh hưởng đến kết nghiên cứu Thứ nhất, cỡ mẫu tưởng đối nhỏ sức mạnh thống kê thấp Thứ hai, nhiều trường hợp bệnh nhân đến với chúng tơi khơng hút thuốc nhiều năm nên thơng tin chi tiết tình trạng hút thuốc có sai số Mặt khác, kết nghiên cứu bị nhiễu tình trạng hút thuốc thụ động chưa đánh giá Một yếu tố dẫn đến hạn chế kết nghiên cứu chúng tơi đối tượng nghiên cứu phân nhóm để phân tích typ mơ bệnh học ung thư, nữ giới bị ung thư phổi hay không gặp trường hợp nữ hút thuốc nghiên cứu Cuối cùng, nghiên cứu lựa chọn nhóm nghiên cứu bệnh viện nên đối tượng khơng đại diện cho dân số nói chung Các nghiên cứu tương lai cần thiết kế tốt với cỡ mẫu lớn khám phá thêm vai trò tiềm ẩn tương tác gen môi trường nguy bệnh ung thư phổi KẾT LUẬN Tỷ lệ kiểu gen số đa hình gen TP53 gen MDM2 nhóm nghiên cứu 1.1 Gen TP53  SNP dup16 - Tần số kiểu gen A1A2 nhóm bệnh nhóm chứng 3,6% 1,7%, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê  SNP R72P: - Tần số alen biến đổi C nhóm bệnh nhóm chứng 50,2% 46,1% - Tần số kiểu gen R/R, R/P P/P nhóm bệnh nhóm chứng là: 25,9%, 47,7%, 26,4% 33,5%, 40,9%, 25,7% - Kiểu gen dị hợp tử R/P chiếm đa số nhóm bệnh nhóm chứng  Các SNP: P34P, P36P, P47S, V217M, G360A 26 - Không phát khác biệt kiểu gen vị trí SNP P34P (CCC → CCA) P36P (CCG → CCT), P47S, V217M, G360A nhóm bệnh nhóm chứng 1.2 SNP309T>G gen MDM2 - Tần số alen biến đổi G nhóm bệnh nhóm chứng 50,7% 47,6% - Tần số kiểu gen TT, TG GG nhóm bệnh nhóm chứng là: 27,3%, 44,1%, 28,6% 23,9%, 57,0%, 19,1% - Kiểu gen dị hợp tử TG chiếm đa số nhóm bệnh nhóm chứng Mối liên quan số đa hình gen TP53 gen MDM2 nguy ung thư phổi 2.1 Gen TP53 - Khơng có mối liên quan SNP dup16 với nguy mắc ung thư phổi - Khơng có mối liên quan có ý nghĩa đa hình đơn gen R72P gen TP53 với nguy mắc ung thư phổi theo tất mơ hình di truyền - Người mang kiểu gen P/P codon 72 gen TP53 có hút thuốc lá: nguy mắc ung thư phổi cao người mang kiểu gen R/R không hút thuốc 3,06 lần (OR = 3,06; 95% CI = 1,37 – 6,84)  2.2 Gen MDM2 - Kiểu gen MDM2 SNP309T>G làm tăng nguy mắc ung thư phổi 1,7 lần theo mơ hình gen lặn (OR GG/TG+TT = 1,7; 95% CI = 1,09 – 2,63), tăng nguy mắc ung thư phổi nam giới nguy mắc UTBM tuyến theo mơ hình gen lặn với OR GG/TG+TT 1,66 (95% CI = 1,01 – 2,76); 1,69 ( 95% CI = 1,05 – 2,72) - Kiểu gen MDM2 SNP309T>G làm tăng nguy mắc ung thư phổi người hút thuốc 2,09 lần theo mơ hình gen lặn (OR = 2,09; 95% CI = 1,01 – 4,31) - Người mang kiểu gen GG có hút thuốc nguy mắc ung thư phổi cao người mang kiểu gen TT không hút thuốc 2,3 lần (OR = 2,30; 95% CI = 1,07 – 4,93) KIẾN NGHỊ 27 Cần triển khai nghiên cứu với cỡ mẫu lớn để phát mối liên quan đa hình gen TP53 gen MDM2 với nguy mắc ung thư phổi số loại hình ung thư khác Việt Nam Cần phải nghiên cứu kiểu gen TP53 MDM2 tương tác với yếu tố nguy ung thư phổi mơ hình tiến cứu, việc theo dõi đối tượng phơi nhiễm theo thời gian có tỷ lệ phát bệnh cho kiểu gen TP53 MDM2 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TRONG KHUÔN KHỔ ĐỀ TÀI Trần Khánh Chi, Trần Vân Khánh, Nguyễn Đức Hinh, Nguyễn Thị Hà, Lê Văn Hưng, Tạ Thành Văn, Trần Huy Thịnh (2014) Xác định tính đa hình đơn Pro47Ser TP53 bệnh nhân ung thư phổi kỹ thuật giải trình tự gen Tạp chí nghiên cứu y học Tập 91, số 5, trang 1-5 Trần Khánh Chi, Trần Vân Khánh, Nguyễn Đức Hinh, Nguyễn Thị Hà, Trần Thị Oanh, Tạ Thành Văn, Trần Huy Thịnh (2014) Xác định tính đa hình đơn vị trí 309 gen MDM2 bệnh nhân ung thư phổi phương pháp PCR-RFLP Tạp chí nghiên cứu y học Tập 90, số 5, trang 35-42 Trần Khánh Chi, Trần Huy Thịnh, Nguyễn Thị Hà Trần Vân Khánh (2015) Đa hình đơn Nucleotid 309 gen MDM2 nguy ung thư phổi Tạp chí Y học Việt Nam Tập 433, số đặc biệt, trang 50-54 Trần Khánh Chi, Trần Huy Thịnh (2017) Xác định tính đa hình thêm 16 base pairs vùng intron gen TP53 bệnh nhân ung thư phổi phương pháp PCR Tạp chí nghiên cứu y học Tập 107, số , trang 1-6 Trần Khánh Chi, Trần Huy Thịnh (2017) Mối liên quan SNP72 gen TP53 SNP 309 gen MDM2 với nguy ung thư phổi Tạp chí nghiên cứu y học Tập 106, số 1, trang 1-8 Trần Khánh Chi, Lê Hoàn, Trần Huy Thịnh (2017) Xác định số đa hình gen TP53 ung thư phổi Tạp chí Y học Việt Nam Số đặc biệt, trang 176-182 ... ung thư phổi, nhiên chưa có nghiên cứu đánh giá tính đa hình gen TP53 vai trò gen MDM2 thông qua SNPs liên quan đến ung thư phổi Mục tiêu đề tài Xác định tỷ lệ kiểu gen số đa hình gen TP53 gen MDM2. .. quan đa hình gen TP53, gen MDM2 nguy mắc ung thư phổi theo số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân ung thư phổi Đa hình gen TP53: nghiên cứu khơng tìm mối liên quan với nguy mắc ung thư phổi. .. hành phân tích đa hình gen TP53 bệnh nhân ung thư phổi Việt Nam Kết góp phần làm sáng tỏ liên quan yếu tố chủng tộc loại hình ung thư phải tính đến tính đa hình gen TP53 SNP R72P gen TP53: SNP nghiên