Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng của liposome doxorubicin

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ PHƯƠNG LINH NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN CHẤT LƯỢNG CỦA LIPOSOME DOXORUBICIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ PHƯƠNG LINH NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN CHẤT LƯỢNG CỦA LIPOSOME DOXORUBICIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : ThS.Nguyễn Văn Lâm Nơi thực Bộ môn Bào chế : Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 Lời cảm ơn Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới: ThS Nguyễn Văn Lâm Thầy người tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Đồng thời em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Phạm Thị Minh Huệ người trực tiếp giao đề tài bảo, định hướng cho em thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực đề tài Cuối xin cảm ơn người thân gia đình bạn bè ln động viên, cổ vũ suốt trình học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 21 tháng năm 2013 Lê Phương Linh Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Danh mục chữ ký hiệu viết tắt TT Viết tắt Từ/ cụm từ đầy đủ Chol Cholesterol CL Conventional liposome – Liposome quy ước DĐVN Dược điển Việt Nam D/L Drug / lipid- Tỷ lệ dược chất / lipid DLS Dynamic Light Scattering – Tán xạ ánh sáng động DSC Differenciel Scanning Calometry- Phân tích nhiệt vi sai DOX Doxorubicin DSPC 1,2-Distearoyl-sn -Glycero-3-Phosphocholin DSPE Distearoyl phosphatidyl ethanolamin 10 DSPEPEG 1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phospho ethanolamin-N-Methoxy Polyethylene glycol 11 EE Encapsulation Efficient - Hiệu suất liposome hóa 12 GUV Giant Unilamellar Vesicle – Liposome đơn lớp khổng lồ 13 IL Immunoliposome - Liposome miễn dịch 14 HBG HEPES Buffer Glucose – HEPES pH 7,4 môi trường glucose 5% 15 HBS HEPES Buffer Saline – HEPES pH 7,4 môi trường NaCl 9% 16 HEPES N-2- hydroxy ethyl piperazin-N-2-ethan sulfonic acid 17 HPLC High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) 18 KTTP Kích thước tiểu phân 19 LCL Long circulation liposome- Liposome tuần hoàn dài 20 LUV Large Unilamellar Vesicle – Liposome đơn lớp lớn 21 MLV Multi Lamellar Vesicle – Liposome đa lớp 22 MSPC Monostearoyl Phosphatidyl Choline 23 MUV Medium Unilamellar Vesicle – Liposome đơn lớp trung bình 24 MVV Multi Vesicular Vesicle – Liposome đa khoang 25 NEFA Non-esterified Fatty Acid – Acid béo khơng ester hóa 26 OLV Oligo Lamellar Vesicle – Liposome đa lớp nhỏ 27 PB KTTP Phân bố kích thước tiểu phân 28 PDI Polydispersity Index – Chỉ số đa phân tán 29 PEG Polyethylen glycol 30 PL Phospholipid 31 P-31NMR Phosphorus-31 Nuclear magnetic resonance- Cộng hưởng từ hạt nhân đồng vị P-31 32 SPC Soy phosphatidyl cholin - Phosphatidyl cholin dầu đậu nành 33 SUV Small Unilamellar Vesicle – Liposome đơn lớp nhỏ 34 TCCS Tiêu chuẩn sở 35 TEM Transmission Electron Microscopy – Hiển vi điện tử truyền qua Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Mục lục CHƯƠNG1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Doxorubicin 1.1.1 Cơng thức cấu tạo, tính chất lí hóa 1.1.2 Dược lý -cơ chế tác dụng định 1.1.3 Dược động học 1.1.4 Các dạng thuốc chứa doxorubicin thị trường 1.2 Đại cương liposom 1.2.1 Khái niệm, phân loại, ứng dụng 1.2.2 Phương pháp bào chế 1.2.3 Các phương pháp gắn dược chất vào liposome 1.2.4 Một số tiêu chất lượng hỗn dịch liposome 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng hỗn dịch liposome 1.2.5.1 Kích thước cấu trúc 1.2.5.2 Thành phần lớp vỏ 1.2.5.3 Môi trường bên bên liposome 12 1.2.6 Một số biện pháp tăng độ ổn định liposome .13 1.2.7 Liposome doxorubicin 14 1.2.7.1 Ưu điểm so với dạng thông thường 14 1.2.7.2 Một số nghiên cứu gần liposome DOX 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu, nguyên vật liệu phương tiện nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Nguyên vật liệu 17 2.1.3 Phương tiện nghiên cứu 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu .18 2.2.1 Phương pháp bào chế liposome doxorubicin 18 2.2.1.1 Bàochế liposome trắng chưa mang dược chất 18 2.2.1.2 Làm giảm kích thước tiểu phân .19 2.2.1.3.Tiến hành đổi hệ đệm bên liposome 19 2.2.1.4.Đưa DOX vào liposome 20 2.2.2 Phương pháp đánh giá cấu trúc hình thái liposome 21 2.2.3 Phương pháp đánh giá kích thước phân bố kích thước liposome 22 2.2.4 Phương pháp định lượng .22 2.2.4.1 Xây dựng đường chuẩn phương pháp đo quang UV-VIS 22 2.2.4.2 Định lượng dược chất toàn phần .22 2.2.4.3 Định lượng dược chất tự 23 2.2.4.4 Hiệu suất liposome hóa 23 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Xây dựng đường chuẩn 25 3.2 Lựa chọn quy trình làm giảm KTTP liposome phương pháp nén qua màng 26 3.3 Ảnh hưởng phương pháp làm giảm KTTP 28 3.4 Ảnh hưởng yếu tố công thức 33 3.4.1 Ảnh hưởng loại muối đệm đến hiệu suất liposome hóa 35 3.4.1.1 Ảnh hưởng muối đệm bên 35 3.4.1.2 Ảnh hưởng muối đệm bên 36 3.4.2 Ảnh hưởng tỉ lệ dược chất lipid 37 3.5 Bàn luận 38 3.5.1 Về quy trình bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin mg/ml 38 3.5.2 Về công thức bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin mg/ml 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Danh mục bảng biểu Số hiệu Tên bảng biểu Trang Bảng 1.1 Phân loại dựa thành phần phospholipid khác Bảng 1.2 Một số tiêu chất lượng liposome Bảng 2.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 17 Bảng 3.1 Kết đo mật độ quang mẫu dung dịch doxorubicin bước sóng 233 481 nm 25 Bảng 3.2 Công thức quy trình nén đẩy qua màng 26 Bảng 3.3 Sự phân bố KTTP phụ thuộc vào quy trình nén đẩy qua màng 27 Bảng 3.4 Các công thức mẫu sử dụng phương pháp giảm KTTP đưa dược chất khác 28 Bảng 3.5 Chất lượng hỗn dịch liposome qua phương pháp giảm kích thước tiểu phân 29 Bảng 3.6 Các công thức bào chế liposome DOX 33 Bảng 4.1 Tỷ lệ dược chất / lipid số biệt dược thị trường 40 Danh mục hình vẽ, đồ thị Số hiệu Tên hình vẽ, đồ thị Trang Hình 1.1 Cấu trúc liposome Hình 1.2 Các phương pháp tạo chênh lệch pH qua màng liposom Hình 1.3 Một số trạng thái tập hợp phospholipid Hình 2.1 Sơ đồ hệ thống lọc tiếp tuyến tự động 19 Hình 2.2 Sơ đồ tóm tắt giai đoạn quy trình bào chế liposom doxorubicin phương pháp tráng film 21 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ doxrubicin mật độ quang bước sóng khác 25 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn phân bố KTTP phụ thuộc vào quy trình nén đẩy qua màng 27 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn thay đổi KTTP (A) hiệu suất liposome (B) theo thời gian 30 Hình 3.4 Sự thay đổi hiệu suất liposome hóa mẫu M1→M4 theo thời gian 31 Hình 3.5 Ảnh chụp TEM liposome DOX citrat sử dụng phương pháp giảm KTTP 32 Hình 3.6 Sự thay đổi KTTP theo thời gian mẫu bào chế 34 Hình 3.7 Sự thay đổi PDI theo thời gian mẫu bào chế 34 Hình 3.8 Ảnh hưởng hệ đệm đến hiệu suất liposome hóa 35 Hình 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ D/L đến hiệu suất liposome hóa 37 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện bệnh ung thư nguyên nhân tử vong hàng đầu giới Ở Việt Nam, theo thống kê Dự án Mục tiêu quốc gia phòng chống ung thư ước tính năm có khoảng 150 nghìn ca mắc 75 nghìn ca tử vong Việc điều trị ung thư thách thức to lớn y học đại Doxorubicin dược chất chống ung thư phổ biến nay, nhiên thuốc gây nhiều tác dụng không mong muốn nghiêm trọng gây độc tế bào ung thư tế bào lành Để giảm độc tính tăng hiệu điều trị doxorubicin hóa trị liệu khác, nhà khoa học nghiên cứu phát triển liposome hệ mang thuốc đến tế bào ung thư đầy triển vọng Các chế phẩm liposome doxorubicin có mặt thị trường Việt Nam Cealyx, Doxil, Lipo-Dox, Myocet… Mặc dù dạng thuốc liposome có nhiều ưu điểm khả mang thuốc, kiểm sốt giải phóng thuốc khả đưa thuốc tới đích việc ứng dụng thực tế nhiều hạn chế liposome khơng ổn định Trong năm gần liposome đề tài quan tâm nghiên cứu nhiều trường Đại học Dược Hà Nội Chúng ta dần nắm vững quy trình kỹ thuật bào chế liposome tiềm ứng dụng lâm sàng, nhiên chưa có biện pháp hiệu cải thiện chất lượng liposome Đề tài “Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng liposome Doxorubicin” thực môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội dựa kết nghiên cứu từ trước nhằm hồn thiện dạng thuốc tiêm liposome với mục tiêu:  Nghiên cứu ảnh hưởng kỹ thuật bào chế thành phần công thức đến số tiêu chất lượng liposome doxorubicin  Đề xuất cải tiến công thức quy trình bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin mg/ml Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi việc dùng amoni sulfat pH 5,5 Đệm amoni cho hiệu suất liposome hóa cao khoảng 95% chí gần 100% sử dụng citrat cho hiệu suất 85-90% Nhưng trình bảo quản, hệ đệm citrat bền so với amoni thể qua quan sát cảm quan sử dụng môi trường bên HEPES/ NaCl: mẫu amoni sau tháng xuất kết tủa, sau tuần mẫu bị hỏng citrat qua tháng ổn định Thực tế chế phẩm thị trường sử dụng loại đệm citrat (Myocet) amoni sulfat (Doxil) để làm môi trường đệm bên Như vậy, sử dụng loại đệm để chế tạo liposome Việc sử dụng loại đệm lại phụ thuộc vào khả cải thiện độ ổn định liposome - Môi trường đẳng trương bên ngồi liposome: qua khảo sát, liposome dùng mơi trường đệm glucose bên bền dùng NaCl, thay đổi KTTP PDI sau tháng không đáng kể, mẫu không xuất kết tủa NaCl mẫu ổn định sau tháng, cấu trúc liposome bị phá hủy sau tháng Điều có liên quan tới khả tương tác nhóm OH phân tử glucose với bề mặt liposome hình thành liên kết hydro phân tử glucose với lớp kép lipid tạo thành lớp áo bảo vệ cho liposome tránh khỏi tác động bất lợi mơi trường bên ngồi q trình bảo quản Ngoài sử dụng glucose làm tăng độ nhớt môi trường làm giảm lực tương tác tiểu phân Các tài liệu nghiên cứu ảnh hưởng glucose oligome (maltodextrins) ổn định liposome bào chế phương pháp đông khô Kết cho thấy mẫu bào chế khơng sử dụng đường có gia tăng kích thước tiểu phân rò rỉ dược chất cách đáng kể phân tử có khả làm ổn định màng giảm tính thấm, tránh rò rỉ dược chất [10],[19] Qua tìm hiểu, chế phẩm liposome doxorubicin thị trường dùng saccharose làm chất đẳng trương môi trường bên ngồi, nhiên nghiên cứu cơng bố tạp chí quốc tế lại sử dụng đệm HBS để làm mơi trường bên ngồi Điều giá saccharose dùng cho chế phẩm tiêm cao nhiều so với NaCl, sản phẩm thực tế dùng saccharose Còn liposome sử dụng nghiên cứu cần ổn định thời gian nghiên cứu nên sử dụng NaCl để tiết kiệm chi phí Vì vậy, định lựa chọn mơi trường đẳng trương bên 39 liposome dung dịch glucose 5% thay NaCl 0,9% nghiên cứu trước - Nồng độ lipid: tỉ lệ D/L ảnh hưởng đáng kể tới hiệu suất liposome hóa Giữ nguyên hàm lượng DOX mg/ml thay đổi nồng độ lipid lipisome dẫn tới thay đổi tỷ lệ D/L Để khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ D/L tới chất lượng liposome dùng tỷ lệ D/L 1:4 1:8 Khi sử dụng đệm amoni hiệu suất đưa thuốc mẫu Khi sử dụng citrat D/L 1:8 cho hiệu suất đưa thuốc cao 1:4 Tuy nhiên theo kết nghiên cứu, tỷ lệ D/L 1:4 cho hiệu suất liposome hóa cao 85% sử dụng hệ đệm citrat amoni, nguy gặp tượng chuyển trạng thái tập hợp phospholipid Thực tế thị trường sử dụng tỷ lệ Bảng 4.1: Tỷ lệ dược chất / lipid số biệt dược thị trường Biệt dược Nhà sản xuất Mơi trường bên ngồi KTTP (nm) Thành phần lipid D/L Caelyx Alza Corporation The Liposome Saccharose 100 HSPC/Chol/PEG(56:39:5 1:8 Saccharose 150 EPC/Chol(55:45 kl/kl) 1:4 EVACET Trên sở kết thu được, nghiên cứu để xuất số thay đổi cơng thức quy trình bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin 2mg/ml so với quy trình ThS Nguyễn Văn Lâm đưa theo sơ đồ sau: 40 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Nhiệt độ: 40oC Tốc độ: 50 vòng/phút Hút chân khơng Nhiệt độ: 50oC Tốc độ: 80 vòng/phút Hút chân khơng Nhiệt độ: 50oC Qua màng 400: 10 lần Qua màng 100: 20 lần Bốc dung mơi 12h thiết bị cất quay Hydrat hóa SPC: 1000mg Chol: 300mg CHCl3: 100ml 100 ml dung dịch đệm citrat pH amoni sulfat pH 5,5 Nén qua màng polycarbonat Lọc qua màng cellulose nitrat 0,2 µm Thiết bị Microkros Màng PS 50 kD Diện tích màng lọc 28 cm2 Đổi hệ đệm 1l dung dịch đệm HBG pH 7,4 Đun cách thủy 50oC/15 phút Bơm vào lọ 10 ml hỗn dịch liposome Lắc kĩ hòa tan hết DOX Lọ thủy tinh chứa 20mg DOX đông khô Ủ 50oC 15 phút Bảo quản 2-8oC Hình 3.10: Cơng thức quy trình bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin 2mg/ml 41 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Nghiên cứu thu kết sau:  Đã khảo sát tính ưu việt phương pháp nén qua màng so với phương pháp siêu âm ảnh hưởng lớn tới chất lượng liposome thể rõ ràng qua hiệu suất liposome, PDI độ ổn định chế phẩm Cải tiến quy trình bào chế để nâng cao chất lượng liposome Lựa chọn phương pháp giảm kích thước tiểu phân nén qua màng với quy trình thơng qua bước: lọc thơ màng 400 nm đồng hóa màng 100 nm sau 20 - 30 chu kỳ bào chế liposome LUV kích thước 150 nm, PDI 0,05-0,15 Hiệu suất liposome tăng đáng kể 95% DOX vận chuyển vào liposome Kết thu tương đương với báo cáo nghiên cứu nước tiêu chế phẩm lưu hành  Đã khảo sát ảnh hưởng công thức bào chế: hệ đệm sử dụng để hydrat hóa, mơi trường đẳng trương bên liposome, tỷ lệ dược chất/ lipid ảnh hưởng tới chất lượng liposome Kết cho thấy:  Sử dụng hệ đệm amoni sulfat cho hiệu suất liposome hóa (95%) cao citrat 85-90% sử dụng hệ đệm citrat liposome bền vững  Sử dụng mơi trường đẳng trương bên ngồi liposome glucose cho mẫu ổn định NaCl  Lựa chọn tỷ lệ D/L 1:4 với hàm lượng DOX mg/ml, PC 10 mg/ml, Chol mg/ml tỷ lệ hợp lý vừa có hiệu suất liposome hóa cao, vừa tiết kiệm chi phí sản xuất tránh lãng phí nguyên liệu  Đã đề xuất số cải tiến công thức quy trình bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin 2mg/ml sở kết đạt ĐỀ XUẤT Đánh giá lại tiêu chất lượng thuốc tiêm liposome doxorubicin 2mg/ml theo cơng thức quy trình bào chế Tiếp tục nghiên cứu cải thiện độ ổn định cho chế phẩm liposome doxorubicin 42 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT: Nguyễn Chí Đức Anh, (2012), “Nghiên cứu ảnh hưởng kỹ thuật bào chế ảnh hưởng đến đặc tính liposome doxorubicin”, Khóa luận Dược sỹ Đại học, Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Văn Lâm, (2012), ”Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin đánh giá tác dụng khối u động vật”, Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Lê Thị Thu, (2011), "Nghiên cứu phương pháp nạp doxorubicin vào tiểu phân liposome", Khóa luận Dược sỹ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội Đào Thanh Tùng, (2011), “Nghiên cứu bào chế liposome doxorubicin”, Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Thị Cẩm Vân, (2012),”Nghiên cứu đánh giá độ ổn định chế phẩm liposome Doxorubicin, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH Abraham S A et al.,(2005), "The liposomal formulation of doxorubicin", Methods in enzymology, 391, p 71 Accardo A et al., (2012), "Peptide-modified liposomes for selective targeting of bombesin receptors overexpressed by cancer cells: a potential theranostic agent", International journal of nanomedicine, 7, p 2007 Barenholz Y et al., (1993), "Stability of liposomal doxorubicin formulations: problems and prospects", Medicinal research reviews, 13(4), pp 449-491 Betageri G., Parsons D (1992), "Drug encapsulation and release from multilamellar and unilamellar liposomes", International journal of pharmaceutics, 81(2-3), pp 235-241 10 Chiu G N et al., (2005), "Encapsulation of doxorubicin into thermosensitive liposomes via complexation with the transition metal manganese", Journal of controlled release, 104(2), pp 271-288 11 Glavas-Dodov M et al., (2005), "The effects of lyophilization on the stability of liposomes containing 5-FU", International journal of pharmaceutics, 291(1), pp 79-86 12 Grit M., Crommelin D J., (1993), "Chemical stability of liposomes: implications for their physical stability", Chemistry and physics of lipids, 64(1), pp 3-18 13 Hantel C et al., (2012), "Liposomal doxorubicin-based treatment in a preclinical model of adrenocortical carcinoma", Journal of Endocrinology, 213(2), pp 155-161 14 Johnston M J et al., (2008), "Influence of drug-to-lipid ratio on drug release properties and liposome integrity in liposomal doxorubicin formulations", Journal of liposome research, 18(2), pp 145-157 15 Meure L A et al., (2008), "Conventional and dense gas techniques for the production of liposomes: a review", Aaps Pharmscitech, 9(3), pp 798-809 16 Samad A., Sultana Y., Aqil M (2007), "Liposomal drug delivery systems: an update review", Current drug delivery, 4(4), pp 297-305 17 Samuni A M., Lipman A., Barenholz Y (2000), "Damage to liposomal lipids: protection by antioxidants and cholesterol-mediated dehydration", Chemistry and physics of lipids, 105(2), pp 121-134 18 Seynhaeve A L., Hoving S., Schipper D., Vermeulen C E., Aan De Wiel- Ambagtsheer G., Van Tiel S T., et al (2007), "Tumor necrosis factor α mediates homogeneous distribution of liposomes in murine melanoma that contributes to a better tumor response", Cancer research, 67(19), pp 9455-9462 19 Suzuki T., Komatsu H (1996), "Effects of glucose and its oligomers on the stability of freeze-dried liposomes", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)Biomembranes, 1278(2), pp 176-182 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 20 Use F., Use H., Actions P., Side-Effects T., Contra-Indications W (2007), "Martindale: the complete drug reference" 21 Wang Z., Yu Y., Dai W., Lu J., Cui J., Wu H., et al (2012), "The use of a tumor metastasis targeting peptide to deliver doxorubicin-containing liposomes to highly metastatic cancer", Biomaterials 22 Xu X., Burgess D J (2012), "Liposomes as carriers for controlled drug delivery", Long Acting Injections and Implants, Springer, pp 195-220 23 Xu X., Khan M A., Burgess D J (2012), "Predicting hydrophilic drug encapsulation inside unilamellar liposomes", International journal of pharmaceutics, 423(2), pp 410-418 24 Zalba S., Navarro I., Trocóniz I F., Tros De Ilarduya C., Garrido M J (2012), "Application of different methods to formulate PEG-liposomes of oxaliplatin: Evaluation< i> in vitro and< i> in vivo", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 81(2), pp 273-280 25 Zhao Y., Alakhova D Y., Kim J O., Bronich T K., Kabanov A V (2013), "A Simple Way to Enhance Doxil® Therapy: Drug Release from Liposomes at the Tumor Site by Amphiphilic Block Copolymer", Journal of controlled release PHỤ LỤC Phụ lục 1: Đồ thị phân bố kích thước liposom làm giảm KTTP quy trình nén qua màng khác Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Phụ lục 2: So sánh đồ thị phân bố kích thước liposom làm giảm KTTP phương pháp nén qua màng siêu âm Phụ lục 3: Hình chụp TEM Liposome DOX làm giảm KTTP phương pháp nén qua màng Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Phụ lục 4: Hình chụp TEM Liposome DOX làm giảm KTTP phương pháp siêu âm Phụ lục 5: Bảng thay đổi KTTP theo thời gian mẫu bào chế Thời gian Z-average 1ngày 14 ngày 21 ngày 28 ngày CG142 152,45 151,35 152,90 163,95 159,00 183,95 CG182 163,45 159,85 144,15 129,05 147,90 148,90 CM142 148,80 154,05 154,75 162,20 159,90 163,20 CM182 146,60 172,80 159,85 158,25 164,90 163,20 AG142 157,85 150,35 148,20 163,20 159,4 161,10 AG182 146,75 145,05 143,97 157,95 156,75 170,40 AM142 154,75 150,2 151,73 143,7 144,15 140,2 AM182 147,10 143,70 150,20 151,35 151,9 166,40 Phụ lục 6: Bảng thay đổi PDI theo thời gian mẫu bào chế Thời gian PDI ngày 14 ngày 21 ngày 28 ngày CG142 0,079 0,085 0,092 0,070 0,100 0,100 CG182 0,073 0,091 0,064 0,116 0,073 0,070 CM142 0,066 0,054 0,055 0,086 0,108 0,106 CM182 0,073 0,059 0,065 0,111 0,058 0,076 AG142 0,075 0,084 0,079 0,059 0,080 0,043 AG182 0,081 0,078 0,049 0,080 0,085 0,082 AM142 0,071 0,093 0,093 0,079 0,081 0,115 AM182 0,104 0,068 0,083 0,071 0,103 0,043 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Phụ lục 7: Bảng thay đổi hiệu suất liposome hóa theo thời gian mẫu bào chế Thời gian ngày 14 ngày 21 ngày 28 ngày Hiệu CG142 89,43 suất liposome CG182 89,88 hóa CM142 86,23 87,42 87,18 87,03 83,89 78,78 90,46 91,16 91,09 87,97 84,29 92,96 89,55 89,62 92,08 90,26 CM182 94,85 95,79 91,50 94,30 91,64 90,60 AG142 > 95 > 95 > 95 94,90 94,64 94,12 AG182 > 95 > 95 > 95 > 95 > 95 > 95 AM142 > 95 > 95 > 95 > 95 > 95 > 95 AM182 > 95 > 95 > 95 > 95 > 95 94,61 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Anh N C Đ (2012), Nghiên cứu ảnh hưởng kỹ thuật bào chế ảnh hưởng đến đặc tính liposome doxorubicin, Khóa luận Dược sỹ Đại học Đại học Dược Hà Nội Lâm N V (2012), Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm liposome doxorubicin đánh giá tác dụng khối u động vật, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Thu L T (2011), Nghiên cứu phương pháp nạp doxorubicin vào tiểu phân liposome, Khóa luận Dược sỹ Đại học Trường Đại học Dược Hà Nội Tùng Đ T (2012), Nghiên cứu bào chế liposome doxorubicin, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ, Đại học Dược Hà Nội Vân C N T (2012), Nghiên cứu đánh giá độ ổn định chế phẩm liposome Doxorubicin, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Abraham S A., Waterhouse D N., Mayer L D., Cullis P R., Madden T D., Bally M B (2005), "The liposomal formulation of doxorubicin", Methods in enzymology, 391, p 71 Accardo A., Salsano G., Morisco A., Aurilio M., Parisi A., Maione F., et al (2012), "Peptidemodified liposomes for selective targeting of bombesin receptors overexpressed by cancer cells: a potential theranostic agent", International journal of nanomedicine, 7, p 2007 Barenholz Y., Amselem S., Goren D., Cohen R., Gelvan D., Samuni A., et al (1993), "Stability of liposomal doxorubicin formulations: problems and prospects", Medicinal research reviews, 13(4), pp 449-491 Chiu G N., Abraham S A., Ickenstein L M., Ng R., Karlsson G., Edwards K., et al (2005), "Encapsulation of doxorubicin into thermosensitive liposomes via complexation with the transition metal manganese", Journal of controlled release, 104(2), pp 271-288 Glavas-Dodov M., Fredro-Kumbaradzi E., Goracinova K., Simonoska M., Calis S., TrajkovicJolevska S., et al (2005), "The effects of lyophilization on the stability of liposomes containing 5-FU", International journal of pharmaceutics, 291(1), pp 79-86 Gregoriadis G (1984), "Liposome technology Volume I: Preparation of liposomes" Grit M., Crommelin D J (1993), "Chemical stability of liposomes: implications for their physical stability", Chemistry and physics of lipids, 64(1), pp 3-18 Hantel C., Lewrick F., Reincke M., Süss R., Beuschlein F (2012), "Liposomal doxorubicinbased treatment in a preclinical model of adrenocortical carcinoma", Journal of Endocrinology, 213(2), pp 155-161 Johnston M J., Edwards K., Karlsson G., Cullis P R (2008), "Influence of drug-to-lipid ratio on drug release properties and liposome integrity in liposomal doxorubicin formulations", Journal of liposome research, 18(2), pp 145-157 Meure L A., Foster N R., Dehghani F (2008), "Conventional and dense gas techniques for the production of liposomes: a review", Aaps Pharmscitech, 9(3), pp 798-809 Samad A., Sultana Y., Aqil M (2007), "Liposomal drug delivery systems: an update review", Current drug delivery, 4(4), pp 297-305 Samuni A M., Lipman A., Barenholz Y (2000), "Damage to liposomal lipids: protection by antioxidants and cholesterol-mediated dehydration", Chemistry and physics of lipids, 105(2), pp 121-134 Seynhaeve A L., Hoving S., Schipper D., Vermeulen C E., Aan De Wiel-Ambagtsheer G., Van Tiel S T., et al (2007), "Tumor necrosis factor α mediates homogeneous distribution of liposomes in murine melanoma that contributes to a better tumor response", Cancer research, 67(19), pp 9455-9462 Suzuki T., Komatsu H (1996), "Effects of glucose and its oligomers on the stability of freezedried liposomes", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranes, 1278(2), pp 176182 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 20 21 22 23 24 Use F., Use H., Actions P., Side-Effects T., Contra-Indications W (2007), "Martindale: the complete drug reference" Wang Z., Yu Y., Dai W., Lu J., Cui J., Wu H., et al (2012), "The use of a tumor metastasis targeting peptide to deliver doxorubicin-containing liposomes to highly metastatic cancer", Biomaterials Xu X., Burgess D J (2012), "Liposomes as carriers for controlled drug delivery", Long Acting Injections and Implants, Springer, pp 195-220 Zalba S., Navarro I., Trocóniz I F., Tros De Ilarduya C., Garrido M J (2012), "Application of different methods to formulate PEG-liposomes of oxaliplatin: Evaluation< i> in vitro and< i> in vivo", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 81(2), pp 273-280 Zhao Y., Alakhova D Y., Kim J O., Bronich T K., Kabanov A V (2013), "A Simple Way to Enhance Doxil® Therapy: Drug Release from Liposomes at the Tumor Site by Amphiphilic Block Copolymer", Journal of controlled release ... chế 1.2.3 Các phương pháp gắn dược chất vào liposome 1.2.4 Một số tiêu chất lượng hỗn dịch liposome 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng hỗn dịch liposome 1.2.5.1... phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ PHƯƠNG LINH NGHIÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN CHẤT LƯỢNG CỦA LIPOSOME DOXORUBICIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : ThS.Nguyễn Văn Lâm... Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng liposome Doxorubicin thực môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội dựa kết nghiên cứu từ trước nhằm hoàn thiện dạng thuốc tiêm liposome với mục tiêu:  Nghiên