Nghiên cứu phân lập và khả năng lên men của một số chủng vi sinh trong môi trường có bổ sung tảo xoắn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI HÀ ÁNH NGỌC NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ KHẢ NĂNG LÊN MEN CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI SINH VẬT TRONG MƠI TRƯỜNG CĨ BỔ SUNG TẢO XOẮN (SPIRULINA spp.) Chuyên ngành: Sinh thái học Mã số: 60 42 01 20 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đinh Thị Kim Nhung HÀ NỘI, 2016 LỜI CẢM N Trong trình tìm hiểu, nghiên cứu hồn thành luận văn thạc sĩ, nhận lời bảo, hướng dẫn tận tình thầy giáo, anh chị em bạn Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới: PGS.TS Đinh Thị Kim Nhung - Người trực tiếp hướng dẫn, dạy bảo, động viên tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn cán phòng Vi sinh trường ĐH P Hà Nội Bên cạnh đó, Ban giám hiệu, Phòng sau đại học, Phòng, Ban trường ĐH P Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình làm việc Đồng thời xin chân thành cảm ơn cán Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương giúp đỡ tơi q trình chụp ảnh mẫu để hồn thành nghiên cứu Cảm ơn cán khoa học công nghệ - Tỉnh Vĩnh Phúc giúp đỡ tơi phân tích mẫu hồn thành luận văn Cùng với biết ơn chân thành tới người thân gia đình, bạn bè giúp đỡ động viên tơi suốt trình thực đề tài Hà Nội, tháng 08 năm 2016 Học viên Hà Ánh Ngọc LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, hướng dẫn PGS.TS Đinh Thị Kim Nhung Luận văn trùng lặp với đề tài khác Hà Nội, tháng 08 năm 2016 Học viên Hà Ánh Ngọc MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Đóng góp đề tài NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu tảo xoắn (Spirulina spp.) 1.1.1 lược tảo xoắn ( pirulina spp.) 1.1.2 Đặc điểm sinh học tảo xoắn ( pirulina spp.) 1.1.3 Giá trị dinh dưỡng công dụng tảo xoắn ( pirulina spp.) 1.1.4 Tình hình nghiên cứu tảo xoắn ( pirulina spp.) 1.2 Vi sinh vật q trình lên men tạo đồ uống có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 11 1.2.1 Vi khu n lactic 11 Cơ chế trình lên men lactic 12 1.2.2 Vi khu n acetic 13 1.2.3 Nấm men 13 1.2.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nhóm vi sinh vật lên men tạo đồ uống có bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 15 1.3 Ứng dụng (Spirulina spp.) thực phẩm, xử lý môi trường, y học mỹ phẩm 20 1.3.1 Ứng dụng thực ph m 20 1.3.2 Ứng dụng xử lý môi trường 21 1.3.3 Ứng dụng y học 22 1.3.4 Ứng dụng mỹ ph m 22 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Nguyên liệu 23 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thí nghiệm 23 2.1.3 Các loại môi trường 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phương pháp vi sinh 24 2.2.2 Phương pháp hóa sinh 26 2.2.2.8 Xác định độ cồn [43] 28 2.2.3 Phương pháp thống kê xử lý kết [18] 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Phân lập chủng vi sinh vật có khả lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 30 3.1.1 Phân lập chủng vi khu n lactic có khả lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 30 3.1.2 Phân lập chủng vi khu n acetic có khả lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 32 3.1.3 Phân lập chủng nấm men có khả lên men tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn tảo xoắn ( pirulina spp.) 33 3.2.Tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả lên men tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 35 3.2.1 Tuyển chọn chủng vi khu n lactic có khả lên men tạo đồ uống mơi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 35 3.2.2 Tuyển chọn chủng vi khu n acetic có khả lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 39 3.2.3 Tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 44 3.2.3.1 Tuyển chọn chủng có hoạt lực lên men cao 44 3.2.3.2 Khả chịu cồn chủng nấm men 45 3.2.4 Kiểm tra tính đối kháng nhóm vi sinh vật tuyển chọn lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 47 3.3 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng tới trình lên men chế tạo đồ uống mơi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 48 3.3.1 Ảnh hưởng hàm lượng đường tới trình lên men chế tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 48 3.3.2 Ảnh hưởng hàm lượng nitơ hữu tới trình lên men chế tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 50 3.3.3 Ảnh hưởng hàm lượng KH2PO4 tới trình lên men chế tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 52 3.3.4 Ảnh hưởng hàm lượng Mg O4.7H2O tới trình lên men chế tạo đồ uống có bổ sung tảo xoắn ( pirulina spp.) 54 3.4 Ảnh hưởng điều kiện lên men đến trình lên men chế tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 56 3.4.1 Ảnh hưởng pH ban đầu 56 3.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ tới trình lên men 58 3.5 Ứng dụng lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 60 3.5.1 Lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 61 3.5.2 Kiểm tra chất lượng sản ph m 62 3.5.3 Đánh giá cảm quan sản ph m 66 KẾT LUẬN 69 Kết luận 69 Kiến nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình d ng t o Spirulina spp.) kính hiển vi Hình 3.1 Ảnh chụp tế bào vi khuẩn lactic kính hiển vi quang học × 1000 lần 31 Hình 3.2 Ảnh chụp tế bào vi khuẩn lactic kính hiển vi điện tử × 10000 lần 32 Hình 3.3 Tế bào vi khuẩn acetic kính hiển vi quang học × 1000 lần 33 Hình 3.4 Tế bào nấm men kính hiển vi quang học × 1000 lần 34 Hình 3.5 Ảnh chụp tế bào nấm men kính hiển vi điện tử × 10000 lần 34 Hình 3.6 Chuyển hố ethanol thành acid acetic mẫu vi khuẩn acetic 40 Hình 3.7 Ho t tính catalase vi khuẩn acetic 41 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn số lượng tế bào mức pH khác mơi trường lên men nhóm vi sinh vật tuyển chọn 58 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn số lượng tế bào mức nhiệt độ khác môi trường lên men nhóm vi sinh vật tuyển chọn 60 Hình 3.10 Ba mẫu lên men t o nước gi i khát có bổ sung t o xoắn (Spirulinaspp.) 62 Hình 3.11 Kết qu kiểm tra vi sinh đánh giá s n phẩm nước gi i khát 63 Hình 3.12 Kết qu đánh giá s n phẩm nước gi i khát trước lên men 64 Hình 3.13 Kết qu đánh giá s n phẩm nước gi i khát sau lên men 65 Hình 3.14 Kiểm tra tổng số lợi khuẩn có nước gi i khát lên men 66 Hình 3.15 Quy trình lên men t o s n phẩm nước gi i khát có bổ sung t o xoắn (Spirulinaspp.) 68 100 15 độ C 80 20 độ C 60 25 độ C 30 độ C 40 35 độ C 20 Các nhóm vi sinh vật tuyển chọn Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn số lượng tế bào mức nhiệt độ khác trongmôi trường lên men nhóm vi sinh vật tuyển chọn Từ kết qu cho thấy, kho ng nhiệt độ 15-20 C thời gian lên men kéo dài, nh hưởng đến chất lượng s n phẩm, hiệu qu kinh tế Nhiệt độ kho ng 25-30 C t o số lượng tế bào lớn thuận lợi cho việc lên men, 0 nhóm 30 C số lượng tế bào lớn Ở nhiệt độ 35 C, thời gian lên men rút ngắn điều kiện thuận lợi cho số vi khuẩn sinh khí phát triển làm cho s n phẩm có mùi khơng tốt [9], [11], [38] Vậy hàm lượng đường sacarose 100(g/l), hàm lượng nitơ hữu tảo xoắn 9(g/l), KH2PO4 1,0(g/l), MgSO4.7H2O 0,6(g/l), điều kiện pH = 4,5, nhiệt độ 30 Clà thích hợp để lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 3.5 Ứng dụng lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) Chọn nhóm 1: Vi khuẩn Lactobacillus L2, vi khuẩn Acetobacter G1, nấm men Saccharomyces cerevisiae N1 lên men t o đồ uống môi trường bổ sung t o xoắn Spirulina kiểm tra an toàn thực phẩm theo TCVN 3.5.1 Lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) Lên men t o s n phẩm nước gi i khát với chất lượng tốt, an toàn cần ph i sử dụng lo i nguyên liệu, hàm lượng giống bổ sung (vi khuẩn, nấm men) lo i tỷ lệ, đ m b o yêu cầu vệ sinh Chú ý: Dịch t o bổ sung đường dịch t o bổ sung đường KH2PO4, MgSO4.7H2O khử trùng để nguội sau bổ sung giống không làm chết giống Không dùng lo i dụng cụ sắt để lên men nên dùng bình thủy tinh, sứ plastic Giai đoạn 1: Chế biến dịch tảo đường lên men Bước 1: Chế biến dịch tảo Pha chế thành dịch t o với tỷ lệ t o : nước = 9(g) bột t o:1000 ml) nước Bước 2: Bổ sung đường, KH2PO4, MgSO4.7H2Ođã khử trùng làm nguội Mục đích: h thấp nhiệt độ dịch t o, h n chế xâm nhập vi sinh vật thuận tiện cho trình phối trộn, tránh làm hương vị đặc trưng s n phẩm đồng thời bổ sung 100(g/l) đường vào dịch t o KH2PO4 1,0(g/l), MgSO4.7H2O 0,6(g/l) Bước 4: Lên men Đây trình lên men hiếu khí nên dễ nhiễm vi sinh vật l đặc biệt nấm mốc Do cần đổ dịch lên men vào bình thủy tinh rửa thật s ch, lau khơ đậy kín khăn v i tiệt trùng Đổ dịch t o xoắn có bổ sung đường để nguội vào, bổ sung dịch giống tỷ lệ 20% (VK: NM = 1:1) vào dịch lên men, để nơi thống mát vòng ngày Giai đoạn 2: Hoàn thiện thu sản phẩm Bước 1: Thu dịch lọc dịch lên men Sau trình lên men kết thúc thu lấy dịch lên men đem lọc Lọc dịch lên men: mục đích lo i bỏ cặn, xác vi sinh vật sau trình lên men, làm dịch lên men, tăng chất lượng c m quan Bước 2: Phối trộn bổ sung dịch Bổ sung thêm dịch qu : Chuối, mít, xồi nhằm t o mùi hương thơm Sau thu nhận dịch lên men, chúng tơi bổ sung từ 0,2% dịch chuối chín, dịch mít, dịch xoài cho mùi thơm nhẹ nhàng Bước 3: Thanh trùng, thu sản ph m Mục đích: Kết thúc trình lên men, diệt vi sinh vật gây h i, tăng thời gian b o qu n s n phẩm Sau trùng nước gi i khát đóng chai, b o qu n tủ l nh thời gian tuần Hình 3.10 Ba mẫu lên men tạo nước giải khát có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 3.5.2 Kiểm tra chất lượng sản ph m - Tôi gửi mẫu kiểm tra tiêu vi sinh hàm lượng số kim lo i nặng s n phẩm Kết qu : S n phẩm từ mẫu lên men đ t tiêu chất lượng an toàn thực phẩm theo quy định - Thành phần dinh dưỡng s n sau lên men tốt có hàm lượng nhiều lo i axitamin quý tăng lên như: Alanin, valin - Số lợi khuẩn đường ruột: Kho ng 10x10 lợi khuẩn Hình 3.11 Kết kiểm tra vi sinh đánh giá sản phẩm nước giải khát Hình 3.12 Kết đánh giá sản phẩm nước giải khát trước lên men Hình 3.13 Kết quảđánh giá sản phẩm nước giải khát sau lên men Hình 3.14 Kiểm tra tổng số lợi khuẩn có nước giải khát lên men 3.5.3 Đánh giá cảm quan sản ph m Từ s n phẩm khác biệt hương mùi tiến hành đánh giá c m quan s n phẩm: Mẫu A: Dịch chuối, mẫu B: Dịch mít, mẫu C: Dịch xồi Các mẫu sử dụng để đánh giá c m quan thị hiếu gồm 15 người tham gia thử mẫu, ta có b ng sau: Bảng 3.21 Đánh giá chất lượng sản phẩm nước giải khát phương pháp cảm quan STT Mẫu A Mẫu B Mẫu C Trung 10 11 12 13 14 15 Tổng 8 8 7 114 7,6 6 6 6 7 7 97 6,5 7 6 6 7 94 6,3 bình Nhận xét: Phụ gia có nh hưởng nhiều đến độ ưa thích chung s n phẩm: Mẫu A dịch chuối): có tổng số điểm 114, xếp vị trí thứ Mẫu B dịch mít): có tổng số điểm 97, xếp vị trí thứ Mẫu C dịch xồi): có tổng số điểm 94, xếp vị trí thứ Mẫu A bổ sung thêm dịch chuối nhiều người yêu thích Quy trình lên men t o nước gi i khát có bổ sung t o xoắn (Spirulina spp.) quy mơ phòng thí nghiệm sau: Bột t o xoắn pha loãng + Đường: 100g/l + pH : 4,5 Vi khuẩn Vi khuẩn lactic acetic Tỷ lệ : Nấm men Dịch lên men A : B Dịch sau lên men từ bột t o xoắn + Bổ sung dịch qu + Lọc trùng Đóng chai/lon Nước gi i khát thành phẩm Hình 3.15 Quy trình lên men tạo sản phẩm nước giải khát có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) Bước đầu xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất nước giải khát có bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) quy mơ phòng thí nghiệm ản ph m đạt tiêu chất lượng an toàn thực ph m theo quy định KẾT LUẬN Kết luận 1.1 Phân lập 15 chủng vi khuẩn lactic,10 chủng vi khuẩn acetic chủng nấm men Tuyển chọn chủng thuộc giống Lactobacillus: L2, L5, L12, L4, L9, L1, L7 , L11, L14, chủng thuộc giống Acetobacter: G1, G2, G3, G6, G7, G8và chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae: N1, N4, N7 Tuyển chọn chủng vi khuẩn Lactobacillus L2, chủng vi khuẩn Acetobacter G1 chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae N1 để lên men t o đồ uống môi trường bổ sung t o xoắn (Spirulina spp.) 1.2 Tìm mơi trường dinh dưỡng điều kiện thích hợp để lên men đồ uống có bổ sung t o xoắn (Spirulina spp.) đ t tiêu chuẩn an toàn thực phẩm với hàm lượng: đường Sacarose 100 (g/l), bột t o xoắn (Spirulina spp.) (g/l), KH2PO4 1,0(g/l), MgSO4.7H2O 0,6(g/l), pH = 4,5, nhiệt độ 30 C 1.3 Xây dựng quy trình cơng nghệ s n xuất đồ uống lên men có bổ sung t o xoắn (Spirulinaspp.) quy mơ phòng thí nghiệm S n phẩm kiểm nghiệm đ t tiêu chất lượng an toàn thực phẩm theo quy định Kiến nghị Cần có nghiên cứu tiếp hàm lượng giống bổ sung, phương pháp b o qu n chất lượng s n phẩm… để có s n phẩm hồn h o đưa thị trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước [1] Ph m Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (2004), “Hóa sinh học”, Nxb Giáo dục [2] Ngô Thị Thùy Dung, Huỳnh Thị Yến Ly, Huỳnh Xuân Phong (2011), “Phân lập tuyển chọn vi khu n lactic có khả sinh chất kháng khu n”, T p chí khoa học 2011:19a 176-184 Trường Đ i học Cần Thơ [3] Nguyễn Lân Dũng cộng (1976), “Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học”, tập I, II III, Nxb Khoa học kỹ thuật Hà Nội [4] Nguyễn Thành Đ t, Mai Thị Hằng (2000),“ inh học vi sinh vật”, Nxb Giáo Dục [5] Nguyễn Thành Đ t (2007), “Cơ sở sinh học vi sinh vật” tập I II, Nxb Đ i học Sư ph m [6] Mai Thị Hằng, Đinh Thị Kim Nhung, Vương Trọng Hào (2011), “Thực hành vi sinh vật học”, Nxb Đ i học Sư ph m [7] Thanh Gia Ngọc Hân (2007), “Nghiên cứu phương pháp chiết xuất dịch từ sinh khối vi khu n lam Spirulina platensis bổ sung vào nước giải khát”, Luận văn th c sĩ, Trường Đ i học Nơng lâm thành phố Hồ Chí Minh [8] Đặng Đình Kim, Đặng Hoàng Phước Hiền (1994), “Vi tảo ứng dụng chúng”, T p chí sinh học, 16 (3), 9-12 [9] Lâm Thị Hồng Liên (2013), “Nghiên cứu số chủng nấm men lên men kombucha từ trà Shan tuyết Hà Giang”, Luận văn th c sỹ, Trường Đ i học sư ph m Hà Nội [10] Đào Thị Lương, Nguyễn Thị Anh Đào, Nguyễn Thị Kim Quy, Trần Thị Lệ Quyên, Dương Văn Hợp 2014), “Phân lập tuyển chọn vi khu n lactic dùng chế biến bảo quản thức ăn thô xanh phụ ph m nông nghiệp cho gia súc nhai lại” T p chí sinh học, 36(1): 126 – 129 [11] Đinh Thị Kim Nhung (1996), “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khu n Acetobacter ứng dụng chúng lên men acid acetic theo phương pháp chìm”, Luận án Tiến sỹ Sinh học, Trường Đ i học Sư Ph m Hà Nội [12] Đinh Thị Kim Nhung (2007), “Ảnh hưởng số yếu tố tới trình lên men vang táo mèo (Docynia indica)”, T p chí khoa học cơng nghệ, 45(2), 87-92 [13] Ph m Hồng Quang, Nguyễn Vân Sơn, Lê Thị Mỹ Xuyên (2014), “Phân lập, tuyển chọn nấm men vi khu n acetic thử nghiệm lên men trà Thủy sâm (Kombucha)”, T p chí khoa học, Phần B: Nơng nghiệp, Thủy s n Công nghệ Sinh học: 34 (2014): 12-19 [14] Hoàng Nghĩa Sơn 2000), “Nghiên cứu sản xuất sử dụng tảo Spirulina platensislàm thức ăn bổ sung chăn ni gà qui mơ gia đình”, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Viện khoa học kỹ thuật nông nghiệp miền Nam, TP HCM [15] Trần Thị Tâm (2014), “Nghiên cứu đa dạng nấm men lên men kombucha từ trà Thái Nguyên”, Luận văn th c sĩ, Trường Đ i học sư ph m Hà Nội [16] Trần Thị Thanh 2000), “Công nghệ vi sinh”, NXB Giáo Dục, Hà Nội, 61-75 [17] Lê Văn Thăng 1999), “Spirulina - Nuôi trồng, sử dụng y dược dinh dưỡng”, Nxb Y học [18] Đặng Hùng Thắng (1999), “Thống kê ứng dụng”, NxbGiáo dục [19] Nguyễn Đình Thưởng 1980), “Cơng nghệ phân tích lên men’’, Nxb Khoa học kỹ thuật Hà Nội [20] Nguyễn Hữu Thước (1988), “Tảo xoắn Spirulina - Giá trị dinh dưỡng lợi ích với sức khỏe”, Nxb KHKT Hà Nội [21] Trần Linh Thước, (2006), “Phương pháp phân tích vi sinh vật”, Nxb giáo dục, trang 1- 29, 40- 69 [22] Nguyễn Trương B o Trân 2007), “Chọn giống vi khu n khảo sát số điều kiện lên men acetic để làm giấm trái cây”, Luận văn th c sỹ, Trường Đ i họcsư ph m TP Hồ Chí Minh [23] Vũ Văn Vụ, Nguyễn Văn Anh 1994), “Quang hợp sinh trưởng tảo Spirulina platensis điều kiện thiếu nitơ, photpho kali”, T p chí sinh học,16 (3), 55-57 Tài liệu nước ngồi [24] Acien Fernandez F G., Garc ıa Camacho F., Sanchez Perez J A., Fernandez Sevilla J.M., E Molina Grima (1997), “Modeling of Biomass Productivity in Tubular Photobioreactors for Microalgal Cultures: Effects of Dilution Rate, Tube Diameter, and olar Irradiance”, Biotechnology and Bioengineering, 58, (6), pp 605-616 [25] Arici M., Bilgin B., Sagdic O., Ozdemir C, 2004), “Some Characteristics of Lactobacillus Isolates from Infant Feaces”, Food Microbiology, 21, pp 19-24 [26] Ahsan M and Habib Mashuda Parvin B (2008), “A review on culture, production and use of Spirulina as food for humans and feeds for domestic animals and fish”, Rome, Italy [27] Belay, A (1997), “Mass culture of Spirulina outdoors”, The Earthrise farms experience, pp 131–158 [28] Bergey H, John G Holt (1992) Bergey’s manual of dererminativa bacteriology Wolters kluwer health, p.71- 84 [29] Boesch, C., Trček, J., Sievers, M & Teuber, M, 1998), “Acetobacter intermedius sp”nov Syst Appl Microbiol 21, 220–229 [30] Cyanotech Corporation (2002), “Analysis of Beta-Carotene and Total Carotenoids from pirulina” [31] Elias T Nerantzis (2000), “Continuous production of Arthrospira (Spirulina) platensis in a helical photobioreactor”, Athens, Greece [32] Harald W., Tietze (2004), “Spirulina Micro Food Macro Blessing”, Bermagui, Australia [33] Henrikson R (1980), “The nutritional composition of pirulina”, Earth food Spirulina, p 28-29 [34] FAO & WHO 2001), “Health and Nutrient Properties of Probiotics in Food including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria.Report of a joint FAO/WHOexpert consultation on evaluation of health and nutrient properties of probioticsincludingpowder milk with live lactic acid bacteria”, Cordoba, Argentina [35] Goh, W.N., Rosma A., Kaur, B., Fazilah, A., Karim A.A and Rajeev Bhat (2012), “Fermentation of black tea broth (Kombucha): I Effects of sucrose concentration and fermentation time on the yield of microbial cellulose”, International Food Research Journal 19(1), P 109-117 [36] Jacques Falquet (2008), “The nutritional aspects of Spirulina”, Antenna Technologies [37] J Lodder 1971), “The yeast A taxonomic study”, North Holland.Publ.Co Amsterdam London [38] Lim HJ., Kim SY., Lee WK 2004),“Isolation of Cholesterol-Lowering Lactic AcidBacteria from Human Intestine for Probiotic Use Journal of Veterinary cience”, (4),pp 391-395 [39] Van Eykelenburg, C (1980), “Ecophysiological studies on Spirulina platensisEffect of temperature, ligh intensity and nitrate concentration on growth and ultrastructure”, Antonie van Leeuwenhoek, 46, pp 113-127 ... QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Phân lập chủng vi sinh vật có khả lên men tạo đồ uống môi trường bổ sung tảo xoắn (Spirulina spp.) 30 3.1.1 Phân lập chủng vi khu n lactic có khả lên men. .. nấm men có khả lên men tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn tảo xoắn ( pirulina spp.) 33 3.2.Tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả lên men tạo đồ uống mơi trường có bổ sung tảo xoắn. .. nghiên cứu Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật có kh lên men t o đồ uống mơi trường có bổ sung t o xoắn (Spirulina spp.) Nhiệm vụ nghiên cứu 3.1 Phân lập chủng vi khuẩn, nấm men có kh lên men