PHẢN ỨNG CHUỖI TRÙNG NGƯNG PCR(Polymerase Chain Reaction)

PHẢN ỨNG CHUỖI TRÙNG NGƯNG (PCR) Polymerase Chain Reaction, Phản ứng chuỗi trùng ngưng nhờ polymerase hay phản ứng khuếch đại gen. Là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm tạo ra nhiều bản sao một đoạn ADN mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E.coli hay nấm men

PHẢN ỨNG CHUỖI

TRÙNG NGƯNG

PCR

PHẢN ỨNG CHUỖI

TRÙNG NGƯNG

PCR

YK17C - DDY

Polymerase Chain Reaction

(PCR)

• Phản ứng chuỗi trùng ngưng nhờ polymerase hay phản ứng khuếch đại gen

• Là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm tạo

ra nhiều bản sao một đoạn ADN mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E.coli hay nấm men

• Được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học và y học

(phát hiện bệnh di truyền, nhận dạng và chẩn đoán bệnh

nhiễm trùng, tách dòng gen, xác định huyết thống)

Thành phần của PCR

Nước thật tinh khiết, không chứa bất kỳ thành

phần nào

Dung dịch đệm

• Phụ thuộc vào loại enzim DNA polymerase

• Thường chứa muối đệm Tris HCl 10 mM, KCl 50mM và MgCl2 1,5 mM

Deoxynucleoside triphosphate (DNTP)

Mồi

• Sợi đơn ADN (20 – 30 bazơ) có trình tự bổ

sung với 2 đầu ADN

• Bao gồm mồi xuôi (forward primer) và mồi

ngược (reverse primer)

• Vai trò

Quyết định tính đặc hiệu của PCR

Khởi động enzim polymerase

Thành phần của PCR

Enzim ADN polymerase

• Xúc tác cho quá trình lắp ráp các nucleotide  A, T,

G, X vào mạch ADN mới tổng hợp

• Kết quả của PCR phụ thuộc vào khả năng chịu

nhiệt của enzym polymerase

ADN mẫu

• ADN kép, đơn hoặc ARN

• Có độ nguyên vẹn cao tránh lẫn tạp chất

Quy trình

Gồm 20 – 30 chu kỳ

Sự phát triển của PCR

• Reverse transcriptase PCR (RT- PCR) kỹ thuật mà ARN có thể được sử dụng làm khuôn cho sự khuyếch  đại PCR sau khi chuyển  đổi thành cADN

• Competitive RT-PCR kỹ thuật thường được sử dụng trong việc định lượng các loại ARN chuyên biệt

• Real-Time PCR phát hiện các sản phẩm PCR tích luỹ được tại thời điểm thực tế trong quá trình khuyếch đại gen

• PCR-ELISA sự kết hợp PCR với thử nghiệm miễn dịch liên kết enzym trong chẩm đoán

Ứng dụng

Vân tay di truyền là một kỹ thuật pháp y sử dụng

để xác định một người bằng cách so sánh DNA của một người với mẫu đã có

Kiểm tra huyết thống  mối quan hệ di truyền có

thể được xác định từ hai hoặc nhiều dấu vân tay di truyền

Chẩn đoán bệnh di truyền

Tách dòng gen

Gây đột biến điểm

Phân tích mẫu DNA cổ

THANK YOU

YK17C - DDY