vanbanphapluat co Tiêu chuẩn việt nam tcvn6191 2 1996

TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 6191-2 : 1996 CHẤT LƯỢNG NƯỚC - PHÁT HIỆN VÀ ĐẾM SỐ BÀO TỬ VI KHUẨN KỴ KHÍ KHỬ SUNPHIT (CLOSTRIDIA) -PHẦN : PHƯƠNG PHÁP MÀNG LỌC Water quality - Detection and enumeration of the spores of sulfite - reducing anaerobes (clostridia) - Part 2: Method by membrane filtration Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp phát đếm bào tử vi khuẩn kỵ khí khử sunphit (clostridia) phương pháp màng lọc Lĩnh vực áp dụng Phương pháp áp dụng cho tất loại nước, trừ có lượng lớn chất bị giữ lại màng lọc Tiêu chuẩn trích dẫn ISO 3696 - Nước dùng cho phòng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật; TCVN 5992 : 1995 (ISO 5667) Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn kỹ thuật lấy mẫu TCVN 5993 : 1995 (ISO 5567-3) Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn bảo quản xử lý mẫu ISO 7704 Chất lượng nước - Đánh giá màng lọc dùng cho phân tích vi sinh; ISO 8199 Chất lượng nước - Hướng dẫn chung kiểm nghiệm vi sinh cách đếm vi sinh vật môi trường nuôi cấy Định nghĩa Với mục đích tiêu chuẩn sử dụng định nghĩa sau đây: Clostridia: Là vi sinh vật kỵ khí có khả hình thành bào tử, khử sunphit, thuộc họ Bacillaceae giống clostridium Nguyên tắc Phát bào tử vi khuẩn kỵ khí khử sunphit (clostridia) thể tích mẫu nước xác định theo bước sau đây: 5.1 Lựa chọn bào tử Chọn lọc bào tử mẫu cách đun nóng khoảng thời gian đủ để tiêu diệt vi khuẩn dinh dưỡng 5.2 Lọc qua màng nuôi cấy Lọc mẫu nước qua màng lọc có kích thước lỗ cho bào tử vi khuẩn (0,2 m) giữ lại màng lọc Đặt màng lọc vào môi trường nuôi cấy chọn lọc xác định (thạch sắt sunphit), ủ 37 oC ± 1oC 20 h ± h 44 h ± h đếm khuẩn lạc có màu đen Môi trường nuôi cấy thuốc thử 6.1 Các nguyên liệu Để làm tăng độ tái lập kết nên sử dụng thành phần khơ, mơi trường hồn chỉnh khơ để pha chế dịch pha lỗng mơi trường ni cấy Tương tự thuốc thử có bán sẵn sử dụng Cần tuân thủ nghiêm ngặt dẫn nhà sản xuất Các thuốc thử hóa chất dùng để pha chế môi trường nuôi cấy phải loại phân tích Phải dùng nước cất nước khử ion, khơng chứa chất ức chế sinh trưởng vi sinh vật điều kiện thử nêu (xem ISO 3696) Dùng pH met để đo độ pH, phép đo thích hợp nhiệt độ 25 oC Nếu môi trường nuôi cấy pha chế mà khơng dùng phải bảo quản chỗ tối khoảng oC không tháng, trừ có dẫn khác 6.2 Thạch - Sắt - Sunphit 6.2.1 Mơi trường (thạch dinh dưỡng) Thành phần Cao thịt 3g Pepton 10 g Natri clorua 5g Thạch 15 g Nước 1000 ml Chuẩn bị Hấp để hòa tan, thêm nước đến lít, điều chỉnh pH đến 7,6 ± 0,1 dung dịch natri hydroxit mol/l Khử trùng 121oC ± oC nồi hấp áp lực 20 phút Bảo quản tủ lạnh sau đông đặc 6.2.2 Dung dịch natri sunphit (Na2SO3) Hòa tan 10 g natri sunphit 100 ml nước 6.2.3 Dung dịch sắt (III) sunfat (FeSO 4) Hòa tan g sắt (III) sunfat tinh thể 100 ml nước 6.2.4 Mơi trường hồn chỉnh Ngay trước sử dụng, đun chảy mơi trường (6.2.1) 18 ml dung dịch thêm vào ml dung dịch natri sunphit (6.2.2) giọt dung dịch sắt (III) (6.2.3.) Thêm ml dung dịch natri sunphit giọt dung dịch sắt (III) (6.2.3) sunfat vào ống thạch trước bắt đầu trình tự tiến hành (xem 9.3) 6.3 Thạch - Sunphit - Tryptoza Thành phần: Tryptoza 15 g Soyton 5g Caomen 5g Natri metabisunphit 1g Amoni sắt (III) xitrat 1g Nước 1000 ml Chuẩn bị: Hấp để hòa tan điều chỉnh pH đến 7,6 ± 0,1 25 oC Phân chia vào ống thử ống 18 ml Khử trùng môi trường 121 oC ± oC 15 phút Bảo quản tủ lạnh oC đến oC Không sử dụng môi trường pha chế sau tuần 7 Thiết bị dụng cụ thủy tinh Thiết bị dụng cụ bình thủy tinh phòng thí nghiệm vi sinh thơng thường, 7.1 Bình thủy tinh (Erienmeyen Flask, bình đáy tròn bình nón) có dung tích lít 7.2 Ống thử 160 mm x 16 mm 7.3 Pipet chia độ, có dung tích 10 ml có vạch chia 0,1 ml 7.4 Pipet có dung tích 10 ml 7.5 Bình dung tích lít 7.6 Bình 7.7 Nồi cách thủy 7.8 Thiết bị lọc màng 7.9 Màng lọc vơ trùng có kích thước lỗ danh định 0,2 m Chú thích - Chất lượng màng lọc khác theo nhãn hiệu chí theo lơ sản xuất, nên kiểm tra chất lượng sở qui định ISO 7704 7.10 Tủ ấm, trì nhiệt độ 37 ± oC 7.11 Đĩa petri Lấy mẫu Theo TCVN 5992 - 1995 (ISO 5667/2) Chất lượng nước - Lấy mẫu ISO 8199 kỹ thuật lấy mẫu Cách tiến hành 9.1 Xử lý mẫu Theo TCVN 5993 - 1995 (ISO 5667/3) Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn bảo quản xử lý mẫu ISO 8199 9.2 Chọn lọc bào tử (kỹ thuật) Trước thử, mẫu nước cần đun nóng nồi cách thủy 75 oC ± 5oC 15 phút kể từ lúc đạt nhiệt độ Cần định kỳ sử dụng chai chứa thể tích mẫu thử để kiểm tra đối chứng nhằm kiểm tra thời gian đun nóng cần thiết Nhiệt độ nước chai đối chứng ghi lại nhiệt kế 9.3 Cấy mẫu nuôi ấm Tham khảo ISO 7704 mô tả chung kỹ thuật màng lọc Theo hướng dẫn tài liệu trên, lọc thể tích nước thích hợp Đối với nước ống, nước suối, nước giếng, nước khoáng, nước biển nước bề mặt, nhiễm bẩn clostridia lọc 100 ml; nước bị ô nhiễm nặng nước thải dùng thể tích nhỏ Thể tích nước 10 ml nên trộn với 10 đến 100 ml nước dịch pha loãng khử trùng Điều chỉnh dịch pha loãng cho khuẩn lạc đen tách biệt dễ dàng đếm Sau lọc, tháo màng kẹp khử trùng đặt úp lên đáy đĩa petri, đảm bảo cho khơng có bọt khí tạo thành màng lọc Sau cẩn thận rót 18 ml mơi trường ni cấy hồn tồn hóa lỏng trước làm nguội đến khoảng 50 oC qua màng lọc giữ kẹp trùng Sau tạo lớp mơi trường, ủ kỵ khí điều kiện khác mà đảm bảo kỵ khí nhiệt độ 37 oC ± oC 20 h ± h 44 h ± h Nếu dùng tủ ấm bình kỵ khí màng lọc đặt lên bề mặt thạch với mặt đếm để hướng lên 9.4 Biểu thị kết Đếm tất khuẩn lạc đen sau ủ 20 h ± h 44 h ± h 10 Tính tốn kết Tính tốn kết theo ISO 8199 11 Báo cáo kết Báo cáo kết cần nói rõ phương pháp sử dụng, kết biểu thị số vi khuẩn kỵ khí khử sunphit (clostridia) đơn vị thể tích mẫu Thơng thường việc đếm tiến hành 44 h ± h Nếu điều khơng thể thực đếm 20 h ± h kết coi kết xấp xỉ Báo cáo kết phải nêu chi tiết thao tác mà không qui định tiêu chuẩn chi tiết bất thường ảnh hưởng đến kết Báo cáo kết cần bao gồm thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu  ... 1000 ml Chuẩn bị Hấp để hòa tan, thêm nước đến lít, điều chỉnh pH đến 7,6 ± 0,1 dung dịch natri hydroxit mol/l Khử trùng 121 oC ± oC nồi hấp áp lực 20 phút Bảo quản tủ lạnh sau đông đặc 6 .2. 2 Dung... chảy mơi trường (6 .2. 1) 18 ml dung dịch thêm vào ml dung dịch natri sunphit (6 .2. 2) giọt dung dịch sắt (III) (6 .2. 3.) Thêm ml dung dịch natri sunphit giọt dung dịch sắt (III) (6 .2. 3) sunfat vào... đếm tiến hành 44 h ± h Nếu điều khơng thể thực đếm 20 h ± h kết coi kết xấp xỉ Báo cáo kết phải nêu chi tiết thao tác mà không qui định tiêu chuẩn chi tiết bất thường ảnh hưởng đến kết Báo cáo