KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM CỦA VỎ VÀ HẠT TRÁI QUÁCH (Limonia acidissima L.)

Trƣờng Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ mơn Hố học Cộng Hồ Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập-Tự do-Hạnh phúc -  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: Ts Nguyễn Trọng Tuân Đề tài: “Khảo sát thành phần hoá học hoạt tính kháng nấm vỏ hạt trái quách (Limonia acidissima L.)” Sinh viên thực hiện: Lâm Minh Trƣờng MSSV: B1304124 Lớp: Hố Học – khóa: 39 Nội dung nhận xét: a) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị nghi chi tiết đầy đủ): ► Đánh giá nội dung thực đề tài: ► Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày .tháng .năm 2017 Cán hƣớng dẫn Ts Nguyễn Trọng Tuân i Trƣờng Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ mơn Hố Học Cộng Hồ Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập-Tự do-Hạnh phúc -  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán phản biện: Đề tài: “Khảo sát thành phần hố học hoạt tính kháng nấm vỏ hạt trái quách (Limonia acidissima L.)” Sinh viên thực hiện: Lâm Minh Trƣờng MSSV: B1304124 Lớp: Hoá Học – khoá: 39 Nội dung nhận xét: b) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị nghi chi tiết đầy đủ): ► Đánh giá nội dung thực đề tài: ► Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày .tháng .năm 2017 Cán phản biện ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, em nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ, dạy bảo to lớn từ thầy, cơ, bạn bè gia đình Vì vậy, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến: Quý thầy, cô Trƣờng Đại học Cần Thơ, đặc biệt quý thầy, cô Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học Tự nhiên truyền đạt kiến thức quý báu, kỹ bổ ích suốt bốn năm em học tập trƣờng Em xin chân thành cảm ơn thầy Nguyễn Trọng Tuân quan tâm, giúp đỡ, theo dõi, bảo tận tình tạo điều kiện để em hồn thành tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến anh Cao Văn Tín lớp Cao học Hóa Hữu K22 truyền đạt kinh nghiệm quý báu, hỗ trợ góp ý để em hồn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến bạn PTN Hóa sinh đồng hành, quan tâm, giúp đỡ suốt trình thực luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn đến thành viên gia đình ln ln ủng hộ, quan tâm, chăm sóc tạo điều kiện để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2017 Lâm Minh Trƣờng iii TÓM TẮT Quách (Limonia acidissima L.) loài ăn trái đƣợc trồng phổ biến vùng nhiệt đới, trái Quách không dùng để chế biến nƣớc giải khát rƣợu mà vị thuốc phổ biến y học cổ truyền dân tộc có tác dụng chữa đƣợc táo bón, trái chƣa chín làm săn da, bổ tiêu hóa Kết định tính thành phần hóa học cho thấy vỏ trái Quách có chứa hợp chất alkaloid, flavonoid, triterpenoid-steroid, đƣờng khử, tannin Còn hạt Qch có chứa hợp chất alkaloid, flavonoid, triterpenoid-steroid, đƣờng khử Kết hoạt tính kháng nấm cao methanol vỏ Quách, cao ethanol vỏ Quách, cao methanol hạt Quách, cao nƣớc vỏ Quách, cao nƣớc hạt Quách nấm Fusarium oxysporum có giá trị IC50 lần lƣợt 196,06 μg/mL, 213,96 μg/mL, 120,96 μg/mL, 614,62 μg/mL, 423,05 μg/mL, nấm Colletotrichum sp có giá trị IC50 lần lƣợt 500,82 μg/mL, 575,64 μg/mL, 314,06 μg/mL, 856,90 μg/mL, 721,32 μg/mL nấm Achlya có giá trị IC50 lần lƣợt 113,93 μg/mL, 194,30 μg/mL, 92,55 μg/mL, 359,29 μg/mL, 285,25 μg/mL Các kết góp phần làm phong phú thêm hoạt tính sinh học trái Quách (Limonia acidissima L.) Từ khóa: Trái Quách, Limonia acidissima L., Fusarium oxysporum, Colletotrichum sp., Achlya iv Trƣờng Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiện Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc Bộ Mơn Hóa Học - - Năm học 2016 – 2017 Đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM CỦA VỎ VÀ HẠT TRÁI QUÁCH (Limonia acidissima L.) LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam kết luận văn đƣợc hồn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chƣa đƣợc dùng cho luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2017 Lâm Minh Trƣờng v MỤC LỤC NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN i NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN ii LỜI CẢM ƠN iii TÓM TẮT iv LỜI CAM ĐOAN v MỤC LỤC vi DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH xi DANH MỤC VIẾT TẮT xiii CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan Quách 2.1.1 Tên gọi 2.1.2 Phân loại thực vật 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.1.4 Phân bố sinh thái 2.1.5 Công dụng dƣợc lý 2.1.6 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 2.1.7 Thành phần hóa học 2.2 Tổng quan nhóm chức 2.2.1 Alkaloid 2.2.2 Flavonoid 2.2.3 Triterpenoid–steroid 2.2.4 Glycoside 10 2.2.5 Saponin 11 2.2.6 Tanin 11 vi 2.3 Sơ lƣợc nấm Fusarium oxysporum, Colletotrichum sp gây hại trồng nấm Achlya gây hại thủy sản 12 2.3.1 Giới thiệu nấm Fusarium oxysporum 12 2.3.2 Giới thiệu nấm Colletotrichum sp 13 2.3.3 Giới thiệu nấm Achlya 14 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Địa điểm, thời gian phƣơng tiện 16 3.1.1 Địa điểm thời gian 16 3.1.2 Thu xử lý mẫu 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 16 3.2 Điều chế cao chiết 17 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 3.3.1 Định tính thành phần hóa học cao chiết 18 3.3.2 Khảo sát hoạt tính kháng nấm Fusarium oxysporum, Colletotrichum sp Achlya 20 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Khảo sát sơ thành phần hóa học cao chiết 23 4.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm Fusarium oxysporum cao chiết vỏ hạt trái Quách 25 4.2.1 Tác động ức chế nấm Fusarium oxysporum cao methanol vỏ Quách 25 4.2.2 Tác động ức chế nấm Fusarium oxysporum cao ethanol vỏ Quách 26 4.2.3 Tác động ức chế nấm Fusarium oxysporum cao methanol hạt Quách 27 4.2.4 Tác động ức chế nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc vỏ Quách 28 4.2.5 Tác động ức chế nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc hạt Quách 29 4.2.6 Đánh giá hoạt tính kháng nấm cao chiết vỏ hạt trái Quách nấm Fusarium oxysporum 30 vii 4.3 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm Colletotrichum sp cao chiết vỏ hạt trái Quách 31 4.3.1 Tác động ức chế nấm Colletotrichum sp cao methanol vỏ Quách 31 4.3.2 Tác động ức chế nấm Colletotrichum sp cao ethanol vỏ Quách 32 4.3.3 Tác động ức chế nấm Colletotrichum sp cao methanol hạt Quách 33 4.3.4 Tác động ức chế nấm Colletotrichum sp cao nƣớc vỏ Quách 34 4.3.5 Tác động ức chế nấm Colletotrichum sp cao nƣớc hạt Quách 35 4.3.6 Đánh giá hoạt tính kháng nấm cao chiết vỏ hạt trái Quách nấm Colletotrichum sp 36 4.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm Achlya cao chiết vỏ hạt trái Quách 37 4.4.1 Tác động ức chế nấm Achlya cao methanol vỏ Quách 37 4.4.2 Tác động ức chế nấm Achlya cao ethanol vỏ Quách 38 4.4.3 Tác động ức chế nấm Achlya cao methanol hạt Quách 39 4.4.4 Tác động ức chế nấm Achlya cao nƣớc vỏ Quách 40 4.4.5 Tác động ức chế nấm Achlya cao nƣớc hạt Quách 41 4.4.6 Đánh giá hoạt tính kháng nấm cao chiết vỏ hạt trái Quách nấm Achlya 42 4.5 Kết luận hoạt tính kháng nấm 43 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 48 viii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Dụng cụ, thiết bị sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 3.2: Dung mơi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 3.3: Nồng độ mẫu thử tiến hành khảo sát hoạt tính ức chế nấm Fusarium oxysporum 22 Bảng 3.4: Nồng độ mẫu thử tiến hành khảo sát hoạt tính ức chế nấm Colletotrichum sp 22 Bảng 3.5: Nồng độ mẫu thử tiến hành khảo sát hoạt tính ức chế nấm Achlya 22 Bảng 4.1: Kết định tính thành phần hóa học có cao methanol ethanol vỏ hạt trái Quách 23 Bảng 4.2: Kết định tính thành phần hóa học có cao nƣớc vỏ hạt trái Quách 24 Bảng 4.3: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Fusarium oxysporum cao methanol vỏ Quách 25 Bảng 4.4: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Fusarium oxysporum cao ethanol vỏ Quách 26 Bảng 4.5: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Fusarium oxysporum cao methanol hạt Quách 27 Bảng 4.6: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc vỏ Quách 28 Bảng 4.7: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc hạt Quách 29 Bảng 4.8: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Colletotrichum sp cao methanol vỏ Quách 31 Bảng 4.9: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Colletotrichum sp cao ethanol vỏ Quách 32 Bảng 4.10: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Colletotrichum sp cao methanol hạt Quách 33 Bảng 4.11: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Colletotrichum sp cao nƣớc vỏ Quách 34 Bảng 4.12: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Colletotrichum sp cao nƣớc hạt Quách 35 Bảng 4.13: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Achlya cao methanol vỏ Quách 37 Bảng 4.14: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Achlya cao ethanol vỏ Quách 38 ix Bảng 4.15: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Achlya cao methanol hạt Quách 39 Bảng 4.16: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Achlya cao nƣớc vỏ Quách 40 Bảng 4.17: Nồng độ, bán kính phát triển phần trăm ức chế nấm Achlya cao nƣớc hạt Quách 41 x Khảo sát diện tanin Phụ lục 1.10 Thuốc thử Gelatin mặn A-mẫu đối chứng B-mẫu thử Phụ lục 1.11 Thuốc thử Stiany A-mẫu đối chứng B-mẫu thử 51 Phụ lục 2: Bán kính phát triển nấm Fusarium oxysporum qua lần thực nghiệm Phụ lục 2.1: Tác động ức chế cao methanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 30 60 120 240 480 Lần 38,5 34,5 27 22 10 Bán kính phát triển (mm) Lần 38,5 35,5 28,5 23 11 Lần 38 35,5 27,5 23,5 10,5 Phụ lục 2.2: Tác động ức chế cao ethanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 35 70 140 280 560 Lần 39,5 34,5 27 19 10,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 33,5 28 20,5 11 Lần 39,5 33,5 27,5 20,5 10,5 Phụ lục 2.3: Tác động ức chế cao methanol hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 20 40 80 160 320 Lần 38,5 33 23 21,5 9,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 33,5 24 22 10 52 Lần 38 33,5 24,5 22 10,5 Phụ lục 2.4: Tác động ức chế cao nƣớc vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 50 100 300 700 1200 1600 Lần 38,5 36 29 19 13 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 36 28,5 19,5 14 8,5 Lần 39 35,5 28,5 18 13,5 8,5 Phụ lục 2.5: Tác động ức chế cao nƣớc hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 50 100 300 700 1200 1600 Lần 38,5 32,5 24 20,5 16 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 33 25 20 15,5 9,5 Lần 39 34 24,5 20 16 9,5 Phụ lục 3: Bán kính phát triển nấm Colletotrichum sp qua lần thực nghiệm Phụ lục 3.1: Tác động ức chế cao methanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 80 160 320 640 1280 Lần 37,5 34 28 21 10,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 38 33,5 26,5 21 9,5 53 Lần 39 33,5 27 20 10 Phụ lục 3.2: Tác động ức chế cao ethanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 90 180 360 720 1440 Lần 37,5 35 27,5 22,5 11 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 33,5 27,5 21 11,5 Lần 39,5 34 27 21,5 11,5 Phụ lục 3.3: Tác động ức chế cao methanol hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 50 100 200 400 800 Lần 40 35,5 28 22 10,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 39,5 35 26,5 21,5 10,5 Lần 38,5 36 27 21,5 10 Phụ lục 3.4: Tác động ức chế cao nƣớc vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 70 140 280 560 1120 2240 Lần 38 35,5 31 26 16 12 Bán kính phát triển (mm) Lần 38,5 36 30 26,5 17 12,5 54 Lần 38 34,5 30,5 26,5 17 12 Phụ lục 3.5: Tác động ức chế cao nƣớc hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 60 120 240 480 960 1920 Lần 39 35,5 34 22,5 18,5 9,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 36,5 34,5 22 19,5 10 Lần 38 37 33 23 19,5 9,5 Phụ lục Bán kính phát triển nấm Achlya qua lần thực nghiệm Phụ lục 4.1: Tác động ức chế cao methanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 20 40 80 160 320 Lần 38,5 30 24 19,5 9,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 39,5 30,5 25,5 19,5 10,5 Lần 39 30,5 25 20 10,5 Phụ lục 4.2: Tác động ức chế cao ethanol vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 40 80 160 320 480 Lần 38,5 30,5 25 16,5 10 Bán kính phát triển (mm) Lần 38 31,5 25,5 16,5 9,5 55 Lần 38,5 31,5 25,5 17 10 Phụ lục 4.3: Tác động ức chế cao methanol hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 15 30 60 120 240 Lần 39 33 29,5 20 10 Bán kính phát triển (mm) Lần 39 32,5 28,5 19 11 Lần 38,5 31,5 29,5 20 10,5 Phụ lục 4.4: Tác động ức chế cao nƣớc vỏ Quách Nồng độ (µg/mL) 50 100 300 500 1000 Lần 37,5 30,5 24,5 19 9,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 38 30,5 23 20 9,5 Lần 38 30 23,5 19,5 Phụ lục 4.5: Tác động ức chế cao nƣớc hạt Quách Nồng độ (µg/mL) 50 100 200 400 800 Lần 37 31 24 19 8,5 Bán kính phát triển (mm) Lần 37,5 31,5 23,5 18,5 8,5 56 Lần 37 30 23,5 18 Phụ lục 5: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao chiết vỏ hạt trái Quách Phụ lục 5.1: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao methanol vỏ Quách 480 g/mL 240 g/mL 120 g/mL 60 g/mL 30 g/mL g/mL Phụ lục 5.2: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao ethanol vỏ Quách 560 g/mL 280 g/mL 140 g/mL 70 g/mL 35 g/mL g/mL 57 Phụ lục 5.3: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao methanol hạt Quách 320 g/mL 160 g/mL 80 g/mL 40 g/mL 20 g/mL g/mL Phụ lục 5.4: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc vỏ Quách 1600 g/mL 1200 g/mL 700 g/mL 300 g/mL 100 g/mL g/mL 58 Phụ lục 5.5: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum cao nƣớc hạt Quách 1200 g/mL 800 g/mL 400 g/mL 200 g/mL 100 g/mL g/mL Phụ lục 5.6: Khả kháng nấm Fusarium oxysporum thuốc RG 68WG 200 g/mL 150 g/mL 100 g/mL 50 g/mL 25 g/mL g/mL 59 Phụ lục 6: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao chiết vỏ hạt trái Quách Phụ lục 6.1: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao methanol vỏ Quách 1280 g/mL 640 g/mL 320 g/mL 1600 g/mL 80 g/mL g/mL Phụ lục 6.2: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao ethanol hạt Quách 1440 g/mL 720 g/mL 320 g/mL 180 g/mL 90 g/mL g/mL 60 Phụ lục 6.3: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao methanol vỏ Quách 800 g/mL 400 g/mL 200 g/mL 100 g/mL 50 g/mL g/mL Phụ lục 6.4: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao nƣớc vỏ Quách 2240 g/mL 1120 g/mL 560 g/mL 280 g/mL 140 g/mL g/mL 61 Phụ lục 6.5: Khả kháng nấm Colletotrichum sp cao nƣớc hạt Quách 1920 g/mL 960 g/mL 480 g/mL 240 g/mL 120 g/mL g/mL Phụ lục 6.6: Khả kháng nấm Colletotrichum sp thuốc Score 125 g/mL 100 g/mL 75 g/mL 50 g/mL 25 g/mL g/mL 62 Phụ lục 7: Khả kháng nấm Achlya cao chiết vỏ hạt trái Quách Phụ lục 7.1: Khả kháng nấm Achlya cao methanol vỏ Quách 320 g/mL 160 g/mL 80 g/mL 40 g/mL 20 g/mL g/mL Phụ lục 7.2: Khả kháng nấm Achlya cao ethanol vỏ Quách 480 g/mL 320 g/mL 160 g/mL 80 g/mL 40 g/mL g/mL 63 Phụ lục 7.3: Khả kháng nấm Achlya cao methanol hạt Quách 240 g/mL 120 g/mL 60 g/mL 30 g/mL 15 g/mL g/mL Phụ lục 7.4: Khả kháng nấm Achlya cao nƣớc vỏ Quách 1000 g/mL 500 g/mL 300 g/mL 100 g/mL 50 g/mL g/mL 64 Phụ lục 7.5: Khả kháng nấm Achlya cao nƣớc hạt Quách 800 g/mL 400 g/mL 200 g/mL 100 g/mL 50 g/mL g/mL Phụ lục 7.6: Khả kháng nấm Achlya thuốc Crente 250 g/mL 200 g/mL 150 g/mL 100 g/mL 50g/mL g/mL 65 ... Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng nấm vỏ hạt trái Quách (Limonia acidissima L.) mong muốn đạt đƣợc mục tiêu sau: - Khảo sát thành phần hóa học vỏ hạt trái Quách - Đánh giá hoạt tính. .. Học Tự Nhiện Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc Bộ Mơn Hóa Học - - Năm học 2016 – 2017 Đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM CỦA VỎ VÀ HẠT TRÁI QUÁCH (Limonia acidissima L.). .. hành khảo sát hoạt tính ức chế nấm Achlya 22 Bảng 4.1: Kết định tính thành phần hóa học có cao methanol ethanol vỏ hạt trái Quách 23 Bảng 4.2: Kết định tính thành phần hóa học