ĐÁNH GIÁ HOẠT LỰC ENZYME PHYTASE, ENZYME XYLANASE TRONG SẢN PHẨM ENZYME THUẦN VÀ TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP KHI SỬ DỤNG RIÊNG LẺ HAY KHI PHỐI HỢP CHUNG

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y ************** KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HOẠT LỰC ENZYME PHYTASE, ENZYME XYLANASE TRONG SẢN PHẨM ENZYME THUẦN VÀ TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP KHI SỬ DỤNG RIÊNG LẺ HAY KHI PHỐI HỢP CHUNG Sinh viên thực hiện: NGUYỄN QUANG VINH Lớp: DH12TY Ngành: THÚ Y Niên khóa: 2012-2017 Tháng 08/2017 i BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NUÔI – THÚ Y ************** NGUYỄN QUANG VINH ĐÁNH GIÁ HOẠT LỰC ENZYME PHYTASE, ENZYME XYLANASE TRONG SẢN PHẨM ENZYME THUẦN VÀ TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP KHI SỬ DỤNG RIÊNG LẺ HAY KHI PHỐI HỢP CHUNG Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp bác sĩ thú y Giáo viên hướng dẫn PGS.TS DƢƠNG DUY ĐỒNG Tháng 08/2017 ii XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN Họ Tên sinh viên thực tập: Nguyễn Quang Vinh Tên khóa luận: “Đánh giá hoạt lực enzyme phytase, enzyme xylanase sản phẩm enzyme thức ăn hỗn hợp sử dụng riêng lẻ hay phối hợp chung” Đã hồn thành khóa luận theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét, đóng góp hội đồng chấm thi tốt nghiệp Khoa ngày…………… Giáo viên hướng dẫn PGS TS Dƣơng Duy Đồng iii LỜI CẢM ƠN Đầu tiên xin gửi lòng biết ơn sâu sắc đến cha mẹ, người nuôi dạy nên người, tạo điều kiện vật chất tinh thần để tơi có ngày hôm Trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu trường đại học Nông Lâm TP.HCM Ban chủ nhiệm khoa Chăn nuôi Thú y, Bộ môn Dinh dưỡng Cùng tồn thể q thầy truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập trường Chân thành biết ơn PGS.TS Dương Duy Đồng tận tình hướng dẫn giúp đỡ thời gian thực đề tài hồn thành khóa luận tốt nghiệp Chân thành cảm tạ Thầy Bộ mơn Dinh dưỡng tồn thể nhân viên Bộ mơn nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện cho thực tốt đề tài Xin cảm ơn Các bạn nhóm đề tài enzyme người bạn chia sẻ, giúp đỡ suốt thời gian qua Sinh viên Nguyễn Quang Vinh iv TÓM TẮT Đề tài “Đánh giá hoạt lực enzyme phytase, enzyme xylanase sản phẩm enzyme thức ăn hỗn hợp sử dụng riêng lẻ hay phối hợp chung” thực phòng thí nghiệm enzyme UAF-SUNHY, Bộ mơn Dinh dưỡng Động vật, Khoa Chăn Nuôi - Thú Y, Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Thời gian từ tháng 04/2016 đến tháng 01/2017 Nội dung thí nghiệm: xác định hoạt lực enzyme phytase, enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp (trong công thức thức ăn) sử dụng riêng lẻ hay phối hợp chung Kết cho thấy: Việc sử dụng kết hợp enzyme xylanase enzyme phytase thức ăn hỗn hợp giúp nâng cao giá trị lượng từ thức ăn, tốt so với sử dụng riêng lẻ Trong đó, hoạt lực enzyme phytase kết hợp với enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp 455 U/kg TAHH, có thấp so với sử dụng riêng lẻ 529 U/kg TAHH nằm mức chấp nhận so với hoạt lực mà nhà sản xuất công bố 500 U/kg TAHH Hoạt lực enzyme phytase đo 7240 U/g E cao so với hoạt lực nhà sản xuất công bố 5000 U/g E Khi trộn enzyme phytase đơn vào thức ăn hỗn hợp hoạt lực enzyme đo 530 U/kg TAHH cao so với hoạt lực lý thuyết 500 U/kg TAHH (với tỷ lệ trộn 100 g E/tấn TAHH) Hoạt lực enzyme xylanase đo 3224 U/g E (hoạt lực nhà sản xuất công bố 30000 XU/g E) Khi sử dụng phối hợp enxyme xylanase enzyme phytase thức ăn hỗn hợp, hoạt lực enzyme xylanase đo 1675 U/kg TAHH tăng 5,37 % so với sử dụng riêng lẻ (với tỷ lệ trộn 500 g E/tấn TAHH) v MỤC LỤC TRANG Trang tựa i Xác nhận giáo viên hướng dẫn ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt .iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách bảng ix Danh sách hình xi Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Chƣơng 2.1 Tình hình sử dụng enzyme phytase enzyme xylanase thức ăn chăn nuôi 2.1.1 Tình hình giới 2.1.2 Tình hình nước 2.2 Tổng quan enzyme 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Đặc điểm 2.2.3 Tính đặc hiệu enzyme 2.2.4 Vai trò enzyme 2.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động enzyme 2.3 Giới thiệu sơ lược Axit phytic phytate 2.4 Tổng quan phytase 2.4.1 Phytase từ thực vật vi 2.4.2 Phytase động vật 2.4.3 Phytase từ vi sinh vật 10 2.4.4 Vai trò phytase thức ăn chăn nuôi 10 2.5 Giới thiệu sơ lược Xylan 11 2.6 Tổng quan xylanase 13 2.6.1 Vai trò xylanase thức ăn chăn ni 13 2.7 Các đơn vị đo hoạt tính enzyme 14 2.8 Một số phương pháp xác định hoạt lực enzyme 15 2.9 Một số lưu ý tiến hành thí nghiệm đo hoạt lực enzyme 16 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Thời gian địa điểm 17 3.2 Đối tượng thí nghiệm 17 3.3 Nội dung nghiên cứu 17 3.3.1 Xác định hoạt lực enzyme phytase 18 3.3.2 Xác định hoạt lực enzyme phytase thức ăn hỗn hợp 19 3.3.3 Xác định hoạt lực enzyme xylanase 20 3.3.4 Xác định hoạt lực enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp 21 3.3.5 Xử lý số liệu 22 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Kết xác định hoạt lực enzyme phytase 23 4.2 Kết xác định hoạt lực enzyme phytase thức ăn hỗn hợp 24 4.3 Kết xác định hoạt lực enzyme phytase thức ăn hỗn hợp có bổ sung enzyme xylanase 25 4.4 Khả giải phóng phospho enzyme phytase thức ăn hỗn hợp 26 4.5 Kết xác định hoạt lực enzyme xylanase 28 4.6 Kết xác định hoạt lực enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp 29 4.7 Kết xác định hoạt lực enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp có bổ sung enzyme phytase 30 4.8 Khả giải phóng xylose enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp 31 vii 4.9 Phân tích mẫu enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp công ty sản xuất thức ăn X sử dụng 33 4.9.1 Kết phân tích hoạt lực mẫu enzyme xylanase công ty sản xuất thức ăn X sử dụng 35 4.9.2 Kết phân tích hoạt lực enzyme xylanase mẫu thức ăn dạng bột dạng ép viên công ty sản xuất thức ăn X sử dụng 36 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Đề nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC 40 viii ix DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nguyên văn Nghĩa tiếng Việt DCP Dicalci Phosphate MCP Monocalci Phosphate NSP Non-starch polysaccharides Đường tinh bột UIB International Union of Biochemistry Hiệp hội Hóa sinh quốc tế Thức ăn hỗn hợp TAHH OD Độ hấp phụ Optical Density x + Hút 0,2 ml dung dịch vừa lọc cho vào ống nghiệm thêm 1,8 ml dd Buffer Đem vortex Hút ml dd Stop Reagent cho vào ống nghiệm Đem vortex + Ủ phút 37 °C Vortex lần ủ thêm 30 phút Sau 30 phút đem vortex Tiếp tục ủ thêm 10 phút + Sau ủ đem ống nghiệm ly tâm tốc độ 3800 vòng/ phút 10 phút + Đo độ hấp phụ máy quang phổ với bước sóng 415 nm Lƣu ý: Sau phân tích xong, chọn giá trị OD (độ hấp phụ đo máy quang phổ) nằm khoảng từ 0,3 - 0,7 (dựa vào khuyến cáo công ty SunHy) để tính hoạt lực 46 Phụ lục Quy trình xác định hoạt lực enzyme xylanase sản phẩm thức ăn hỗn hợp I - Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm hóa chất cần thiết Hóa chất - Acid acetic (CH3COOH, Trung Quốc) - Sodium acetate (CH3COONa, Trung Quốc) - Sodium hydroxide (NaOH, Trung Quốc) - 3,5-dinitrosalicylic acid (Trung Quốc) - Potassium sodium tartrate tetrahydrate (Trung Quốc) - Anhydrous sodium sulfite (Trung Quốc) - Phenol (Trung Quốc) - Xylan (Ấn Độ) - Xylose (Trung Quốc) Thiết bị dụng cụ thí nghiệm - Water bath cài đặt nhiệt độ 37°C - Micro pipet loại 10 - 200 µl, 100 - 1000 µl, - ml - Máy quang phổ T6 New Century (UV/VIS) nguồn gốc Trung Quốc cài đặt bước sóng 540 nm - Máy đo pH hiệu chỉnh ngày lần, đầu dò bảo quản dung dịch bảo quản điện cực - Cân điện tử có độ xác 0,1 mg - Máy li tâm - Máy lắc ổn nhiệt - Máy khuấy từ - Vortex - Đồng hồ bấm - Bếp điện - Tủ sấy, tủ lạnh 47 - Các dụng cụ khác phòng thí nghiệm như: ống nghiệm, bình định mức 100 ml 50 ml, beaker, bình tam giác,… Chuẩn bị dung dịch a) Acid acetic (CH3COOH): 0,1 mol/l Hòa tan 0.6 ml acid acetic với nước cất, định mức thành 100 ml b) Sodium acetate (CH3COONa): 0,1 mol/l Cân 1,36 g CH3COONa hòa tan với nước cất, định mức thành 100 ml c) Acetate-sodium acetate buffer (CH3COOH-CH3COONa): 0,1 mol/l, pH = 5,5 Cân 23,14 g Sodium acetate (CH3COONa) 1,7 ml acid acetic (CH3COOH) cho vào cốc thủy tinh, sau thêm nước cất đến 2000 ml Chuẩn độ dung dịch pH = 5,5 ± 0,01 d) Dung dịch NaOH (200 g/l) Cân 20 g NaOH pha loãng với nước cất đến 100 ml Lưu ý: Khi pha NaOH phải cẩn thận cần đeo găng tay, trang mắt kính e) Dung dịch 3,5 - dinitrosalicylic acid (DNS) Bước 1: Rả đông phenol 70 °C Bước 2: Dùng cốc thủy tinh 1000 ml, cho khoảng 500 ml nuốc cất đặt vào water bath 45 °C khoảng 10 phút Bước 3: Sử dụng cốc thủy tinh cân 3,15 g 3,5-dinitrosalisylic acid, 91 g Potassium sodium tartrate tetrahydrate, 2,5 g Anhydrous sodium sulfite Bước 4: Cho 3,5-dinitrosalisylic acid vào cốc thủy tinh bước 2, khuấy đũa thủy tinh Bước 5: Lấy 100 ml dung dịch NaOH (200 g/l) cho vào, vừa cho vừa khuấy theo dạng phểu Bước 6: Tiếp tục cho Potassium sodium tartrate tetrahydrate vào (vừa cho vừa khuấy) Bước 7: Sử dụng micropipet hút 2,5 ml phenol nhỏ vào (hút lên xuống cho phenol) 48 Bước 8: Cho Anhydrous sodium sulfite vào khuấy Bước 9: Thêm nước cất cho đủ 1000 ml khuấy Bước 10: Lấy để nhiệt độ phòng cho nguội khuấy lên (đợi khoảng - giờ) Sau cho vào bình nâu trữ ngày trước sử dụng Lưu ý: Dung dịch DNS có giá trị 180 ngày f) Dung dịch xylan (10 mg/ml) Bước 1: Cân g xylan 0,32 g sodium hydroxide (NaOH) Bước 2: Cho xylan vào cốc đựng sodium hydroxide, dùng nước cất tráng cốc đựng xylan cho thêm nước cất vào đến 180 ml Bước 3: Khuấy đun hỗn hợp bước máy khuấy từ hỗn hợp tan hoàn toàn có màu vàng suốt Ngưng đun tiếp tục khuấy thêm 30 phút Bước 4: Thêm từ từ khoảng 0,4 ml acid acetic vào dung dịch chuẩn độ dung dịch pH = 5,5 ± 0,01 với acid acetic (0,1 mol/l) sodium acetate (0,1 mol/l) (lưu ý: chuẩn độ từ lên) Bước 5: Chuyển dung dịch sau chuẩn độ vào bình định mức 100 ml, định mức dung dịch đệm buffer (0,1 mol/l, pH = 5,5) để thành 100 ml Lưu ý: dung dịch xylan sau sử dụng dư trữ °C, tránh ánh sáng sử dụng vòng ngày g) Dung dịch gốc xylose (10 mg/ml) Cân g xylose cho vào bình định mức 100 ml định mức dung dịch đệm buffer đến 100 ml Lƣu ý: Xylose trước pha thành dung dịch phải sấy - 105 °C, cho vào bình hút ẩm đem cân dung dịch xylose trước sử dụng phải trộn 49 h) Pha dung dịch xylose chuẩn: với mức nồng độ: 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml Bước 1: Chuẩn bị bình định mức 100 ml, bình tráng dung dịch đệm buffer Sau đánh số từ đến Bước 2: Lần lượt cho dung dịch xylose gốc (10 mg/ml) vào bình định mức theo thứ tự từ bình đến bình với thể tích là: ml, ml, ml, ml, ml, ml, ml Bước 3: Cho thêm dung dịch đệm buffer vào bình định mức cho thể tích dung dịch tất bình 100 ml Sau lắc lên để trộn Xây dựng đƣờng chuẩn Xylose Chuẩn bị 16 ống nghiệm tương ứng với nồng độ cần ống nghiệm (14 ống mẫu) ống trắng, đánh số sau: 1.1; 1.2; 2.1; 2.2;…; 7.1; 7.2 (14 ống mẫu), C1 C2 (2 ống đối chứng) Tiến hành xây dựng đường chuẩn bảng sau: Bƣớc thực Control Sample Dung dịch đệm buffer (0,1 mol/l, pH = 5,5 (ml) 2 Dung dịch xylose chuẩn (ml) Vortex   DNS (ml) 2,5 2,5 Vortex   Đun sôi cách thủy (phút) 5 Làm nguội nhanh ống nghiệm vòi nước   Nước cất (ml) 8 Vortex   So màu máy quang phổ với bước sóng 540 nm (Control: ống đối chứng; sample: ống mẫu) Lƣu ý:Các bước thực phải theo quy trình từ bước đến bước thao tác hút lấy dung dịch phải thật xác ảnh hưởng đến kết đường chuẩn 50 Yêu cầu đường chuẩn lập phải có R2 ≥ 0,99 (R2 hệ số tương quan độ hấp phụ nồng độ đường xylose Làm lại đường chuẩn với lần làm DNS (3,5-dinitrosalisylic acid) DNS vừa đóng vai trò chất làm ngưng phản ứng enzyme với chất (dung dịch xylan) vừa chất tạo màu, nên phần ảnh hưởng đến màu sắc dung dịch mà ta lại dùng phương pháp so màu để xác định hoạt lực enzyme, với màu sắc khác cho kết khác II - Quy trình phân tích hoạt lực enzyme Xylanase Chuẩn bị mẫu Dựa theo bảng gợi ý giá trị cân mẫu, cho vào bình tam giác thêm vào 40 ml dung dịch buffer, lắc 30 phút, sau thêm dung dịch buffer đến 100 ml, giữ dung dịch nơi tối khoảng - (có hay khơng có ủ nơi tối - không sao, bỏ qua bước này) Sau - giờ, hút 30 - 50 ml li tâm khoảng - phút với tốc độ 3.800 vòng/phút, lấy phần chất lỏng phía pha lỗng cho nồng độ nằm phạm vi thích hợp dung dịch buffer (tốt điều khiển hoạt lực enzyme xylanase dung dịch cuối nằm giới hạn từ 0,04 - 0,1 U/ml) Hoạt lực xylanase (U/g U/ml) Lƣợng mẫu (g ml) ≥ 2000 0,1 - 0,2 500 - 1999 0,2 - 0,5 200 - 499 0,5 - 1,0 50 - 199 1,0 - 2,0 10 - 49 2,0 - 5,0 Nguồn: Công ty Sunhy 51 Phân tích mẫu Bước 1: Lấy 10 ml dung dịch xylan cho vào water bath ủ 37 °C 20 phút Bước 2: Lấy 10 ml dung dịch xylanase pha loãng cho vào water bath ủ 37 °C 10 phút Bước 3: Chuẩn bị ống nghiệm với ống làm đối chứng (ống control) ống mẫu (ống sample) cho vào water bath 37 °C Tiến hành xác định hoạt lực xylanase theo bảng Bƣớc thực Control Sample 1 DNS (ml) 2,5 Vortex   Dung dịch xylan ủ 20 phút (ml) 1 Vortex   Ủ 37 °C (phút) 30 30 DNS (ml) 2,5 Vortex   Đun sôi cách thủy (phút) 5 10 Làm nguội nhanh ống nghiệm vòi nước   11 Nước cất (ml) 8 12 Vortex   Dung dịch xylanase ủ 10 phút (ml) So màu máy quang phổ bước sóng 540 nm Lƣu ý: Các bước thực phải theo trình tự từ bước đến bước 12 52  Liều lƣợng sử dụng dùng cho trƣờng hợp mẫu thức ăn có chứa enzyme xylanase 30.000 XU/g, 500 g/tấn thức ăn (độ pha loãng 20 lần) - Cân g mẫu thức ăn hỗn hợp - Cho vào 20 ml dd Buffer lắc 30 phút, tốc độ lắc 100 vòng/phút máy lắc ổn nhiệt - Sau lắc, lọc lấy phần dung dịch vải mỏng cho vào cốc thủy tinh - Ly tâm phần dung dịch lọc với tốc độ 3800 vòng/ phút, phút - Hút ml dung dịch mẫu cho vào ống Control Sample - Đối với ống Control ta cho vào 2,5 ml dung dịch DNS, sau cho ống Control Sample vào Water bath ủ 37 °C 10 phút lấy Vortex - Tiếp tục ủ thêm 30 phút - Sau 30 phút, ta cho 2,5 ml DNS vào ống Sample Vortex lại tất ống - Đun sôi cách thủy ống nghiệm phút lấy làm nguội nhanh vòi nước - Cho ml nước cất vào ống nghiệm Vortex cho - Đo độ hấp phụ máy quang phổ với bước sóng 540 nm Phụ lục Phƣơng pháp phân tích phospho I Chuẩn bị dung dịch tro để phân tích phospho Ngun tắc Chất khống hòa tan dung dịch axit Lọc lấy dung dịch loại bỏ phần khơng tan Hóa chất dụng cụ - Chén sứ - Cốc đun - Axit HCl đđ Tiến hành Thêm khoảng ml axit HCl đđ vào chén sứ có chứa mẫu tro sau phân tích khống tổng số, chuyển sang cốc đun 250 ml 53 Tráng chén sứ nhiều lần với 20 ml nước cất Đun sôi 100 0C cho bay hết khoảng 10 ml Thêm vào 10 ml nước cất đun khoảng 90 0C vài phút Làm lạnh lọc qua giấy lọc vào bình định mức 100 ml Rửa cốc giấy nhiều lần nước cất sau thêm nước cất vào cho đủ 100 ml Dung dịch dung để phân tích Ca P II Phƣơng pháp pân tích phospho Nguyên tắc Ion orthophosphate phản ứng với ammonium molybdate để tạo thành hợp chất phosphor molybdate Dụng cụ hóa chất - Cân phân tích - Máy so màu - Bình định mức - Pipet - H2SO4 10 N: pha 280 ml H2SO4 đđ 720ml nước cất - Ammonium molybdate: hòa tan 12,5 g ammonium molybdate khoảng 100 ml nước cất Rồi them dung dịch vào 150 ml dung dịch H2SO4 10 N bình định mức 500 ml, sau sung them nước cất vào vạch miệng bình Đựng chai màu nâu trữ tủ lạnh - Dung dịch Sodium bisulfite 15 %: hòa tan 15 g sodium bisulfite 100 ml nước cất - Amino – napthol sulfonic acid (ANSA): cân 250 mg (0,25 g) – amino – naphthol – sulfonic acid cho vào cốc Thêm vài giọt sodium bisulfite 15 %, trộn Rồi them 97,5 ml dung dịch sodium bisulfite 15 % 2,5 ml dung dịch sodium sulfite 20 % Nếu amino – napthol sulfonic acid chưa tan hết thêm vào lần 0,5 ml sodium sulfite 20 % tan hồn tồn, khơng nên thêm q nhiều Để lắng qua đêm, lọc đựng chai nâu Tiến hành thực hiên đƣờng chuẩn - Hòa tan 0,4394 g KH2PO4 300 ml nước cất (1) 54 - Axit sulfuric/nước cất theo tỷ lệ 1/35 (6 ml H2SO4 đđ/210 ml nước cất) Lấy 200 ml (2) - (1) + (2) + vài giọt KMnO4 : pha lít Mỗi ml có chứa 0,1 mg P (đây dung dịch mẹ) - Đường chuẩn có chứa 0,01 ; 0,05 ; 0,1 ; 0,2 ; 0,3 ; 0,4 ; 0,5 mg P 50 ml dung dịch, nghĩa lấy 0,1 0,5 ml dung dịch mẹ 0,1 mg P cho vào bình định mức tiến hành làm P bình thường - Ghi lại số liệu để viết phương trình tương quan y = ax với y = A độ đo bước song 650 nm x = C nồng độ P mẫu Tiến hành đo P mẫu - Dùng pipette hút lượng dung dịch tro có chứa khoảng 0,01 – 0,2 mg phospho vào bình định mức 50 ml (trung bình khoảng 0,1 – 0,5 ml) - Thêm khoảng 25 ml nước cất + ml ammonium molybdate, lắc kỹ - Thêm ml ANSA + nước cất đến vạch miệng bình Đậy nắp, lắc kỹ - Đo độ hấp thu phospho độ dài song 650 nm sau thêm ANSA 20 phút - Trong suốt trình tiến hành phải làm mẫu trắng (khơng có dung dịch tro) để tính kết cuối Tính kết - Sau tiến hành đường chuẩn ta đo phương trình tương quan - Kết mẫu tính cách lấy số đo đọc – số đo mẫu trắng sau thay vào phương trình có sẵn để tính kết 55 Phụ lục 4: Kết xử lý thống kê Phụ bảng 4.1: Bảng phân tích hoạt lực enzyme phytase trung bình Descriptive Statistics: HL Phytase Variable HL Phytase N 10 Mean 7240.3 StDev 46.5 CoefVar 0.64 Phụ bảng 4.2: Bảng phân tích hoạt lực enzyme phytase thức ăn hỗn hợp Descriptive Statistics: HL Phytase TAHH Variable HL Phytase TAHH N 10 Mean 529.40 StDev 25.84 CoefVar 4.88 Phụ bảng 4.3: Bảng phân tích hoạt lực enzyme phytase thức ăn hỗn hợp có bổ sung enzyme xylanase Descriptive Statistics: HL Phytase TAHH + Xylanase Variable HL Phytase TAHH + Xylanase N 10 Mean 455.40 StDev 11.17 CoefVar 2.45 Phụ bảng 4.4: Bảng phân tích tỷ lệ giải phóng phospho enzyme phytase sử dụng riêng lẻ kết hợp với enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp Descriptive Statistics: TLGP phospho từ TAHH+P, TLGP phospho từ TAHH+P+X Variable TLGP phospho từ TAHH+P TLGP phospho từ TAHH+P+X N 10 10 Mean 16.949 14.659 StDev 1.198 0.359 CoefVar 7.07 2.45 One-way ANOVA: TLGP phospho versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total S = 0.8845 DF SS MS F P 26.217 26.217 33.51 0.000 18 14.082 0.782 19 40.299 R-Sq = 65.06% R-Sq(adj) = 63.12% Level TAHH+Phytase TAHH+Phytase+Xylanase Level TAHH+Phytase TAHH+Phytase+Xylanase N Mean StDev 10 16.949 1.198 10 14.659 0.359 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 15.0 16.0 17.0 18.0 Pooled StDev = 0.884 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping TAHH+Phytase 10 16.9492 A TAHH+Phytase+Xylanase 10 14.6593 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals 56 All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = TAHH+Phytase subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper TAHH+Phytase+Xylanase -3.1209 -2.2899 -1.4588 Trường hợp TAHH+Phytase+Xylanase -+ -+ -+ -+ -( -* -) -+ -+ -+ -+ 3.0 -2.0 -1.0 0.0 Phụ bảng 4.6: Bảng phân tích hoạt lực enzyme xylanase Descriptive Statistics: HL Xylanase Variable HL Xylanase N 10 Mean 3223.8 StDev 133.0 CoefVar 4.12 Phụ bảng 4.7: Bảng phân tích hoạt lực enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp Descriptive Statistics: HL Xylanase TAHH Variable HL Xylanase TAHH N 10 Mean StDev 1585 38.6 CoefVar 2.43 Phụ bảng 4.8: Bảng phân tích hoạt lực enzyme xylanase thức ăn hỗn hợp có bổ sung enzyme phytase Descriptive Statistics: HL Xylanase TAHH + Phytase Variable HL Xylanase TAHH + Phytase N 10 Mean 1675.1 StDev 40.7 CoefVar 2.43 Phụ bảng 4.11: Bảng phân tích tỷ lệ giải phóng xylose lượng nhờ enzyme xylanase sử dụng riêng lẻ kết hợp với enzyme phytase thức ăn hỗn hợp Descriptive Statistics: TLGP xylose , TLGP xylose , NL xylose từ, NL xylose từ Variable TLGP xylose từ TAHH+X TLGP xylose từ TAHH+X+P NL xylose từ TAHH+X NL xylose từ TAHH+X+P N 10 10 10 10 Mean 16.709 17,660 29.280 30.947 StDev 0.407 0.428 0.713 0.751 CoefVar 2.43 2.43 2.43 2.43 One-way ANOVA: TLGP Xylose versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total S = 0.4178 DF SS MS F P 4.525 4.525 25.92 0.000 18 3.142 0.175 19 7.667 R-Sq = 59.02% R-Sq(adj) = 56.74% Level TAHH+Xylanase TAHH+Xylanase+Phytase N 10 10 Mean 16.709 17.660 StDev 0.407 0.428 Individual 95% CIs For Mean Based on 57 Level TAHH+Xylanase TAHH+Xylanase+Phytase Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+ 16.80 17.20 17.60 18.00 Pooled StDev = 0.418 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping TAHH+Xylanase+Phytase 10 17.6603 A TAHH+Xylanase 10 16.7090 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = TAHH+Xylanase subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper TAHH+Xylanase+Phytase 0.5588 0.9513 1.3438 Trường hợp + -+ -+ -+TAHH+Xylanase+Phytase ( -* -) + -+ -+ -+0.00 0.50 1.00 1.50 One-way ANOVA: NL xylose versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total S = 0.7323 DF SS MS F P 13.889 13.889 25.90 0.000 18 9.652 0.536 19 23.541 R-Sq = 59.00% R-Sq(adj) = 56.72% Level TAHH+Xylanase TAHH+Xylanase+Phytase Level TAHH+Xylanase TAHH+Xylanase+Phytase N Mean StDev 10 29.280 0.713 10 30.947 0.751 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 29.40 30.10 30.80 31.50 Pooled StDev = 0.732 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping TAHH+Xylanase+Phytase 10 30.9465 A TAHH+Xylanase 10 29.2799 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = TAHH+Xylanase subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper TAHH+Xylanase+Phytase 0.9786 1.6667 2.3547 Trường hợp -+ -+ -+ -+ TAHH+Xylanase+Phytase ( * -) -+ -+ -+ -+ 0.00 0.80 1.60 2.40 58 Phụ bảng 4.13: Bảng phân tích hoạt lực enzyme xylanase công ty sản xuất thức ăn X sử dụng Descriptive Statistics: HL Xylanase CTX Variable HL Xylanase CT N 10 Mean 13956 StDev 617 CoefVar 4.42 Phụ bảng 4.14: Bảng phân tích hoạt lực enzyme xylanase mẫu thức ăn dạng bột công ty sản xuất thức ăn X sử dụng Descriptive Statistics: HL Xylanase mẫu A , HL Xylanase mẫu A1, HL Xylanase mẫu B, HL Xylanase mẫu B1, HL Xylanase mẫu C, HL Xylanase mẫu C1 Variable HL Xylanase HL Xylanase HL Xylanase HL Xylanase HL Xylanase HL Xylanase mẫu mẫu mẫu mẫu mẫu mẫu A A1 B B1 C C1 N 10 10 10 10 10 10 Mean 3822.0 3156.0 4134 3312.0 4014.0 3390.0 StDev 183.4 283.1 465 157.0 234.0 198.5 CoefVar 4.80 8.97 11.25 4.74 5.83 5.86 One-way ANOVA: HL Xylanase versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total S = 238.5 DF SS MS F P 2217780 2217780 38.98 0.000 18 1024200 56900 19 3241980 R-Sq = 68.41% R-Sq(adj) = 66.65% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ Mẫu A 10 3822.0 183.4 ( -* -) Mẫu A1 10 3156.0 283.1 ( -* ) + -+ -+ -+ 3000 3250 3500 3750 Pooled StDev = 238.5 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping Mẫu A 10 3822.0 A Mẫu A1 10 3156.0 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = Mẫu A subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper Mẫu A1 -890.1 -666.0 -441.9 + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -900 -600 -300 One-way ANOVA: HL Xylanase versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total DF 18 19 SS 3378420 2169000 5547420 MS 3378420 120500 F 28.04 P 0.000 59 S = 347.1 Level Mẫu B Mẫu B1 N 10 10 R-Sq = 60.90% Mean 4134.0 3312.0 StDev 465.1 157.0 R-Sq(adj) = 58.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ 3150 3500 3850 4200 Pooled StDev = 347.1 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping Mẫu B 10 4134.0 A Mẫu B1 10 3312.0 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = Mẫu B subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper Mẫu B1 -1148.2 -822.0 -495.8 -+ -+ -+ -+ ( -* ) -+ -+ -+ -+ -800 -400 400 One-way ANOVA: HL Xylanase versus Trường hợp Source Trường hợp Error Total S = 217.0 DF SS MS F P 1946880 1946880 41.35 0.000 18 847440 47080 19 2794320 R-Sq = 69.67% R-Sq(adj) = 67.99% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ Mẫu C 10 4014.0 234.0 ( -* ) Mẫu C1 10 3390.0 198.5 ( -* ) + -+ -+ -+ 3250 3500 3750 4000 Pooled StDev = 217.0 Grouping Information Using Tukey Method Trường hợp N Mean Grouping Mẫu C 10 4014.0 A Mẫu C1 10 3390.0 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Trường hợp Individual confidence level = 95.00% Trường hợp = Mẫu C subtracted from: Trường hợp Lower Center Upper + -+ -+ -+Mẫu C1 -827.9 -624.0 -420.1 ( * ) + -+ -+ -+-600 -300 300 60