KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT CAO VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HOÁ CỦA CAO CHIẾT TỪ CĂN HÀNH CÂY THIÊN NIÊN KIỆN (HOMALONEMA SP.)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT CAO VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HOÁ CỦA CAO CHIẾT TỪ CĂN HÀNH CÂY THIÊN NIÊN KIỆN (HOMALONEMA SP.) Họ tên sinh viên: DOÃN TRỌNG THẾ ANH Ngành : BM Cơng Nghệ Hố Học Niên khố :2007-2011 Tháng 08/2011 KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT CAO VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HOÁ CỦA CAO CHIẾT TỪ CĂN HÀNH CÂY THIÊN NIÊN KIỆN (HOMALONEMA SP) Tác giả DOÃN TRỌNG THẾ ANH Khố luận đề trình để đáp ứng u cầu cấp kĩ sư ngành BM Cơng nghệ hố học Giáo viên hướng dẫn PGS.TS Phan Phước Hiền Tháng năm 2011 i CẢM TẠ Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn tới thầy hướng dẫn luận văn em, PGS.TS Phan Phước Hiền , tạo điều kiện, động viên giúp đỡ em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn tới ThS Trịnh Thị Phi Ly, KS Trương Thị Bích Liễu suốt q trình nghiên cứu, kiên nhẫn hướng dẫn, trợ giúp động viên em nhiều Xin cám ơn Viện công nghệ sinh học mơi trường trường ĐH Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cho em làm việc Viện để tiến hành tốt luận văn Tôi xin cảm ơn bạn bè gia đình ln bên tôi, cổ vũ động viên lúc khó khăn để vượt qua hồn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn! Dỗn Trọng Thế Anh ii TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu “Khảo sát quy trình chiết cao khả kháng oxi hoá cao chiết từ hành Thiên Niên Kiện (homalonema sp.)“ thực BM Hố Sinh-Hố Dược, Trường ĐH Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, thời gian từ 01/04/2011 đến 01/08/2011 Kết thu được: Phân tích sơ thành phần hố học, hiệu suất chiết cao khả kháng oxi hoá loại cao chiết iii ABSTRACT Research subjects "Investigation of high extraction process and resistance to oxidation of the plant extracts based Millennium Event (homalonema sp.)" Was performed at the Department of Biological Chemistry-Chemistry and Pharmacy, University of Agriculture and Forestry Ho Chi Minh, the period from 01/04/2011 to 01/08/2011 The results: Preliminary analysis of chemical composition, extraction efficiency and high resistance to oxidation of each type of extracts iv MỤC LỤC Trang tựa i Cảm tạ ii Tóm tắt .iii Abstract……………………………………………………………………….iv Mục lục .v Danh mục hình viii Danh mục bảng ix CHƯƠNG I : MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Nội dung đề tài CHƯƠNG II : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tồng quan Thiên Niên Kiện 2.1.1 Tổng quan họ Ráy 2.1.2 Tổng quan Thiên Niên Kiện 2.1.3 Đánh giá tổng quan tình hình nghiên cứu nước thuộc lĩnh vực đề tài 2.2 Khảo sát sơ thành phần hóa học Thiên Niên Kiện 2.2.1 Các tiêu phân tích 2.2.2 Tổng quan hợp chất thiên nhiên 2.3 Phương pháp phân tích, đo đạt tiêu kháng oxi hoá .14 iv 2.3.1 Khái niệm khả kháng oxi hoá 14 2.3.2 Phương pháp phân tích 14 2.3.3 Giới thiệu chung máy UV – Vis 15 CHƯƠNG III : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 16 3.1 Đối tượng nguyên cứu 16 3.1.1 Nguyên liệu 16 3.1.2 Xác định ẩm độ nguyên liệu .17 3.1.3 Hoá chất .17 3.1.4 Thiết bị .17 3.2 Phân tích sơ thành phần hoá học Thiên Niên Kiện 18 3.2.1 Tạo dung dịch để phân tích sơ thành phần hoá học thực vật 18 3.2.2 Phân tích sơ thành phần hóa học thực vật hành thiên niên kiện 19 3.2.2.1 Xác định chất tan dung dịch ether dầu hoả .19 3.2.2.2 Xác định chất tan dung dịch cồn 19 3.2.2.3 Xác định chất tan nước 20 3.3 Qui trình công nghệ 21 3.3.1 Chiết tách loại cao 21 3.3.1.1 Chiết cao ether dầu hỏa .21 3.3.1.2 Chiết cao ethyl acetat 21 3.3.1.3 Chiết cao nước 21 3.3.1.4 Hiệu suất chiết cao 21 3.4 Thí nghiệm thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hóa loại cao 23 v 3.4.1 Pha thuốc thử 23 3.4.2 Đo mẫu 23 3.4.3 Đo mẫu Xây dựng đường chuẩn với trolox (μM) 23 CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Xác định ẩm độ 25 4.2 Hiệu suất chiết cao .25 4.3 Phân tích sơ thành phần hóa học Thiên Niên Kiện 26 4.4 Khảo sát trình chiết cao .27 4.4.1 Chiết cao với dung môi ether dầu hỏa 27 4.4.2 Chiết cao với dung môi ethyl acetat 28 4.4.3 Chiết cao với dung môi nước 29 4.5 Hoạt tính kháng oxi hóa .30 4.5.1 Đường chuẩn Trolox .30 4.5.2 Cao ether dầu hỏa 31 4.5.3 Cao ethyl acetat .32 4.5.4 Cao nước 33 4.5.5 So sánh tính kháng oxi hố ba loại cao Trolox 34 CH ƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ ĐÊ NGHỊ 35 5.1 Kết luận .35 5.2 Đề nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO .36 PHỤ LỤC 1: Hình phân tích sơ thành phần hố học Thiên Niên Kiện 37 vi PHỤ LỤC 2: Khối lượng cao thu kho sử dụng loại dung môi khác .45 PHỤ LỤC Hoạt tính kháng oxi hóa loại cao 46 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cây Thiên Niên Kiện Homalomena sp .4 Hình 2.2 Cấu tạo DPPH .14 Hình 2.2 Máy UV – Vis hiệu Hp / Aligent 8453 15 Hình 3.1 Quy trình xử lí ngun liệu 16 Hinh 3.2 Chiết cao với ether dầu hỏa .22 Hình 3.3 Quy trình chiết cao với loại dung mơi khác 23 Hình 4.1 Tỷ lệ cao thu với dung môi ether dầu hoả 27 Hình 4.2 Tỷ lệ cao thu với dung môi ethyl acetat 28 Hình 4.3 Khối lượng cao thu với dung môi nước 29 Hình 4.4 Hoạt tính kháng oxi hố Trolox 30 Hình 4.5 Hoạt tính kháng oxi hố cao ether dầu hỏa 31 Hình 4.6 Hoạt tính kháng oxi hoá cao ethyl acetat .32 Hình 4.7 Hoạt tính kháng oxi hố cao nước 33 Hình 4.8 So sánh tính kháng oxi hố ba loại cao với đường chuẩn Trolox 34 iv 4.5.4 Cao nước 80 % kháng oxi hoá 70 60 50 40 30 20 10 0 10 15 20 Nồng độ Hình 4.7 Hoạt tính kháng oxi hố cao nước Nhận xét: Đối với cao nước để đạt giá trị từ 29,25 % đến 65,94 % kháng oxi hố dịch cao nước có nồng độ lớn từ 2,5 mg/ml đến 15 mg/ml Như khả kháng oxi hố cao nước khơng cao cao ether dầu hoả cao ethyl acetat Giá trị IC50 cao nước 7.5 mg/ml 33 4.5.6 So sánh tính kháng oxi hố ba loại cao với đường chuẩn Trolox 100 90 80 Cao ether dầu hoả 70 60 cao ethyl acetat 50 Cao nước 40 Đường chuẩn Trolox 30 20 10 0 10 15 20 Hình 4.8 So sánh tính kháng oxi hố ba loại cao với đường chuẩn Trolox Nhận xét: Từ biểu đồ xác định nồng độ ức chế 50%(IC50)(hay giá trị IC50 mẫu có khả làm 50% màu dung dịch DPPH) loại cao Cao nước 7,5mg/ml, cao ether dầu hoả mg/ml, Trolox 0,4 mg/ml, cao ethyl acetat 0,01 mg/ml Sỡ dĩ cao ethyl acetat có hoạt tính mạnh hồ tan tanin có Thiên Niên Kiện Do tanin có cấu trúc polyphenol nên hoạt tính kháng oxi hố cao Theo ThS Đỗ Tường Hạ (khoa học ứng dụng số 12-2010) IC50 vitamin C nhỏ 10mM Vậy cao ethyl acetat có hoạt tính mạnh hai loại cao lại Trolox 34 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Những thí nghiệm định tính sơ thành phần hóa học đánh giá khả kháng oxi hoá Thiên Niên Kiện Một sở để phát triển loài dược liệu quý Thân Thiên Niên Kiện chiết với phương pháp chiết ngâm dầm, sau chiết với dung mơi eter dầu hỏa, ethyl acetate cho loại cao: cao ether dầu hỏa, , cao ethyl acetate cao nước Trong ba loại dung mơi dung mơi nước đạt hiệu tách hoạt chất nhiều (11.55%) Tiến hành thử nghiệm hoạt tính kháng oxi hố máy đo UV – Vis Đối với hoạt tính kháng oxi hố cao ethyl acetat có khả kháng oxi hố mạnh (so % kháng oxi hóa nồng độ với đường chuẩn Trolox hai loại cao lại) 5.2 Đề nghị : Với hiểu biết kinh nghiệm có giới hạn sinh viên nên kết khơng tránh khỏi thiếu sót Ngồi thời gian kinh phí có giới hạn nên khơng thể phân tích thành phần hóa hoc Vì cần nghiên cứu sâu thành phần hóa học loại cao Phân tích sâu thành phần hố thực vật Tập trung vào nhóm chất tanin So sánh hoạt tính kháng oxi hố loại cao với chất kháng oxi hoá mạnh khác như: vitamin C, BHT,BHA… Sử dụng phương pháp đại sắc kí lỏng…Trong việc phân tích hoạt tính tốt cao 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO • http://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_R%C3%A1y • http://www.nguyenkynam.com/duoclieu/thiennienkien.htm • http://www.kiemlam.org.vn/Desktop.aspx/News/So6/Thien_nien_kien_mot_loai_duoc_lieu_can_duoc_quan_ly/ • http://tangthaoduong.vn/diendan/viewtopic.php?id=262 • http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_Thi%C3%AAn_ni%C3%AAn_ki%E1%BB% 87n • Nguyễn Văn Đàn Nguyễn Viết Tựu, 1985 Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc Nhà xuất Y học • Bộ Y Tế Bộ GD & ĐT, 1998 Bài giảng dược liệu tập 2, Hà Nội • Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, 2001 Bài giảng chiết suất dược liệu Trường Đại học Y Dược Tp.HCM • Giáo trình phương pháp nghiên cứu dược liệu, 2004 Đại học Y Dược TP.HCM • Adams, R P (1995) Identification of essential oil components by gas chromatography/mass spectrometry Carol Stream, IL: Allured Publishing • http://www.scribd.com/doc/52001169/11-13 • http://thietbiysinh.com.vn/forum/archive/index.php?t-2636.html • Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 527 trang 36 PHỤ LỤC 1: Hình phân tích sơ thành phần hoá học Thiên Niên Kiện  Các chất tan dung dịch ether  Tinh dầu:  Chất béo: 37  Carotenoid:  Alkaloid: Thuốc thử Dragendorff  Flavonoid: 38 Thuốc thử Wagner  Các chất tan dung dịch cồn  Tannin:  Saponin: 39  Acid hữu cơ:  Alkaloid: Thuốc thử Dragendorff 40 Thuốc thử Wagner  Flavonoid:  Các chất tan dung dịch nước  Alkaloid: Thuốc thử Dragendorff 41 Thuốc thử Wagner  Flavonoid: 42  Tannin:  Saponin: 43  Acid hữu cơ: 44 PHỤ LỤC 2: Khối lượng cao thu kho sử dụng loại dung mơi khác Cao ether dầu hoả (g) TÌ LỆ DUNG MÔI LẤN (g) LẦN (g) LẦN (g) 1:01 0.0856 0.1339 0.1683 1:02 0.1292 0.091 0.1702 1:03 0.1202 0.2109 0.094 1:04 0.1173 0.1022 0.0477 1:05 0.1179 0.1645 0.1842 Cao ethyl Acetat (g) TÌ LỆ DUNG MƠI LẤN (g) LẦN (g) LẦN (g) 1:01 0.1516 0.1764 0.1512 1:02 0.1333 0.1576 0.1576 1:03 0.22 0.21 0.14 1:04 0.14 0.2 0.19 1:05 0.2048 0.1866 0.2333 Cao nước LẶP LẠI LẤN (g) LẦN (g) Khối lượng 4.2162 4.2978 45 LẦN (g) 4.1442 PHỤ LỤC Hoạt tính kháng oxi hóa loại cao Trolox Trolox DPPH 1.01914 uM V trolox V DPPH Abs TB % Kháng oxi hoá Đc 0.2 0.970 50 0.2 0.818 0.783 1.021 0.874 14.238 100 0.2 0.730 0.817 0.968 0.838 17.746 200 0.2 0.610 0.637 0.559 0.624 38.811 400 0.2 0.448 0.474 0.467 0.463 54.581 600 0.2 0.245 0.211 0.186 0.214 79.002 Cao ether dầu hỏa: Abs DPPH mg/ml V dc (ml) DC 1.158 V % DPPH Abs TB Kháng oxi hóa (ml) 1.01914 0.5 0.2 0.610 0.610 0.592 0.604 40.740 0.2 0.492 0.469 0.522 0.494 51.503 0.2 0.309 0.310 0.283 0.301 70.505 0.2 0.183 0.180 0.200 0.188 81.572 0.2 0.108 0.102 0.122 0.114 88.807 46 Cao ethyl acetat Abs DPPH C (mg/ml) 1.085 V dc V DPPH (ml) DC (ml) Abs TB % Kháng oxi hóa 1.00180 0.0025 0.2 0.726 0.636 0.674 0.679 32.248 0.0050 0.2 0.708 0.606 0.565 0.626 37.479 0.0075 0.2 0.556 0.494 0.454 0.501 49.977 0.0100 0.2 0.603 0.637 0.445 0.562 43.940 0.0150 0.2 0.351 0.404 0.341 0.365 63.556 0.0300 0.2 0.193 0.252 0.210 0.218 78.191 Cao nước DPPH 1.16 C V dc V DPPH mg/ml (ml) (ml) Đc 0.2 0.2 0.733 0.737 0.737 0.736 32.523 0.2 0.615 0.660 0.589 0.621 42.997 7.5 0.2 0.491 0.536 0.568 0.532 51.211 10 0.2 0.436 0.426 0.469 0.444 59.284 0.346 0.334 0.358 0.346 68.250 15 0.2 % Kháng Abs Oxi hóa 1.09 47 TB ... Khảo sát quy trình chiết cao khả kháng oxi hố cao chiết từ hành Thiên Niên Kiện (homalonema sp.) 1.2 Mục đích đề tài: Khảo sát quy trình chiết cao từ thiên niên kiện (Homalonema sp.) Khảo sát. ..KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT CAO VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXI HOÁ CỦA CAO CHIẾT TỪ CĂN HÀNH CÂY THIÊN NIÊN KIỆN (HOMALONEMA SP) Tác giả DOÃN TRỌNG THẾ ANH Khố luận đề trình để đáp ứng u... khả kháng oxi hoá cao chiết từ Thiên Niên Kiện 1.3 Nội dung đề tài: Giới thiệu tổng quan Thiên Niên Kiện Phân tích sơ thành phần hố học Thiên Niên Kiện Xây dựng quy trình chiết cao từ thân Thiên