Phương pháp rửa cột sắc ký lỏng pha đảo

Phương pháp rửa cột sắc ký lỏng pha đảo Trong kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp (HPLC), cột pha đảo (C18, C8, C4, Phenyl…) sử dụng phổ biến nhất, dùng để phân tích chất khơng phân cực chất có khả ion hóa hợp chất ion Sau thời gian sử dụng, cột thường có dấu hiệu bị giảm hiệu năng, gây khó khăn cho q trình phân tích Điều phụ thuộc nhiều vào mẫu pha động sử dụng Những hợp chất không mong muốn mẫu như: muối, dầu, chất béo, protein…đều tạo liên kết vật lý hóa học với cột sắc ký suốt q trình sử dụng Vấn đề đặt là, để giữ tuổi thọ cho cột pha đảo giữ nguyên hiệu chúng Sau giới thiệu với bạn hai cách rửa cột sắc ký lỏng pha đảo hay sử dụng sau Pha động sử dụng HPLC thường có hai phần chính: A (Acetonitril Methanol) B (muối; đệm; acid nhẹ…) Sau kết thúc phân tích, chọn chương trình rửa tăng dần tỉ lệ Acetonitril từ 95 % nước : % Acetonitril (Methanol sử dụng phổ biến hơn) đến 100 % Acetonitril Tái tạo lại cột sắc ký pha đảo Khuyến cáo: Không nên kết nối với đầu dò Tốc độ rửa cột ml/phút Thứ tự dung môi sử dụng để rửa cột nhằm tái tạo lại hiệu cột theo thứ tự sau: Pha động khơng có đệm muối… 100 % Methanol 100 % Acetonitril 75 % Acetonitril : 25 % Iso propanol 100 % Iso-propanol 100 % Dichloromethan 100 % n-hexan 100 % Dichloromethan 100 % Iso-propanol 10 75 % Acetonitril : 25 % Iso-propanol 11 100 % Acetonitril Trong trình tái tạo cột, quan sát áp suất hệ thống để điều chỉnh tốc độ dòng thích hợp, sau nâng dần lên đến 1ml/phút Hình 2: Cột sắc ký lỏng Hình 1: Bảo vệ cột Có nhiều yếu tố để giữ tuổi thọ cho cột sắc ký làm mẫu, lựa chọn pha động phù hợp (ít phải có % dung mơi hữu Methanol Acetonitril pha động),dung môi hữu loại tinh khiết dùng cho sắc ký lỏng… Nhưng hết, cần phải có phận bảo vệ cột tương ứng để loại bỏ chất bẩn trước mẫu vào cột sắc ký định kỳ thay bảo vệ cột  ... tạo cột, quan sát áp suất hệ thống để điều chỉnh tốc độ dòng thích hợp, sau nâng dần lên đến 1ml/phút Hình 2: Cột sắc ký lỏng Hình 1: Bảo vệ cột Có nhiều yếu tố để giữ tuổi thọ cho cột sắc ký. .. làm mẫu, lựa chọn pha động phù hợp (ít phải có % dung môi hữu Methanol Acetonitril pha động),dung môi hữu loại tinh khiết dùng cho sắc ký lỏng Nhưng hết, cần phải có phận bảo vệ cột tương ứng để... Nhưng hết, cần phải có phận bảo vệ cột tương ứng để loại bỏ chất bẩn trước mẫu vào cột sắc ký định kỳ thay bảo vệ cột