Bai giang saponin , hoa duoc 1, hóa dược 1, saponin, thực vật, slide bài giảng hóa dược, chương saponin, hóa dược tập 1, đào tạo dược sĩ đại học, chương trình đại học, dược sĩ, môn dược liệu học, sách đào tạo dược sĩ đại học, đại cương về saponin, dược liệu chứa saponin, phương pháp định lượng saponin, saponin
DƯC LIỆU CHỨA SAPONIN Đại cương GS.TS NGUYỄN MINH ĐỨC Bộ môn Dược liệu ĐẠI HỌC Y-DƯC TP HỒ CHÍ MINH MỤC LỤC I KHÁI NIỆM II DANH PHÁP-PHÂN LOẠI III PHÂN BỐ TRONG TỰ NHIÊN IV SINH NGUYÊN V CẤU TRÚC HOÁ HỌC VI TÍNH CHẤT SAPONIN – ỨNG DỤNG VÀO ĐỊNH TÍNH ĐỊNH LƯNG VII CHIẾT XUẤT SAPONIN VIII TÁC DỤNG SINH HỌC VÀ CÔNG DỤNG ??? Saponin? Saponin? Saponin? Vài dược liệu chứa nhiều saponin thường gặp Bồ kết (Bồ kếp) (Gleditschia spp.) -Caesalpiniaceae Vài dược liệu chứa nhiều saponin thường gặp Quả Bồ (Soap nut) Bồ (Sapindus mukorossi Gaertn.) - Sapidaceae I KHÁI NIỆM Saponin gọi saponoside (sapo = xà phòng) nhóm glycoside gặp rộng rãi thực vật, động vật (Hải sâm, Cá sao) thể tính chất chung sau: + Tạo bọt bền lắc với nước + Có tính phá huyết (làm vỡ hồng cầu) + Độc với cá động vật có máu lạnh + Có thể tạo phức với cholesterol dẫn chất 3-b-hydroxy steroid khác + Có tính kích ứng, gây hắt hơi, đỏ mắt I KHÁI NIỆM Ngoại lệ: số saponin đầy đủ tính chất Ví dụ: Sarsaparilloside loài Smilax tính phá huyết tạo phức với cholesterol Lưu ý số hợp chất khác glycoside tim, protein động & thực vật, terpene glycoside … tạo bọt VI TÍNH CHẤT, ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƯỢNG Đònh lượng saponin (tt): -Phương pháp đònh lượng phổ UV Áp dụng cho saponin hay dẫn chất có phổ hấp thu UV Ví dụ: đònh lượng acid glycyrizic dạng ammoni glycyrizate cách đo UV =285nm, đònh lượng solasodin =235nm Hiện áp dụng không xác - Phương pháp đònh lượng dựa vào sắc ký Cho phép đònh lượng saponin sapogenin đơn chất Rất hiệu thông dụng + Đo vết sắc ký lớp mỏng (TLC densitometry) Dựa vào đậm độ kích thức vết Hiện dùng VI TÍNH CHẤT, ĐỊNH TÍNH & ĐỊNH LƯỢNG Đònh lượng saponin (tt): - Phương pháp đònh lượng dựa vào sắc ký (tt) + Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC): hiệu quả, phù hợp theo yêu cầu GMP (xác đònh hoạt chất chất đánh dấu dược liệu chế phẩm) Thường sử dụng cột pha đảo (RP-18), detector RI, UV + RI, MS … - Ngoài ra, saponin alcaloid steroid đònh lượng phương pháp acid–base hay đònh lượng môi trường khan Một vài saponin triterpen acid đònh lượng phương pháp (Glycyrizin Cam thảo) VII CHIẾT XUẤT SAPONIN Chiết xuất saponin - Đối với saponin: dung môi thường dùng MeOH, EtOH 50-90%, nước (nếu dược liệu có chứa nhiều chất béo, trước loại bỏ cách chiết dược liệu với ether dầu hỏa, hexane…) - Dòch chiết cồn thu đem bốc áp suất giảm để thu hồi dung môi Phần dịch chiết nước đậm đặc thu tiếp tục loại chất béo cách lắc với dung môi phân cực Dịch nước tiếp tục chiết phân đoạn n-BuOH bão hòa nước (lắc nhiều lần đến chiết kiệt) -Cất thu hồi n-BuOH áp suất giảm để saponin thô VII CHIẾT XUẤT SAPONIN Chiết xuất saponin (tt) Để tinh khiết hóa saponin, dùng phương pháp sau: - Phương pháp tủa: tủa saponin lượng lớn ether, acetone, ether-acetone (4:1) - Phương pháp kết tinh: kết tinh hỗn hợp saponin từ tủa thô dung môi thích hợp Phương pháp khó áp dụng saponin khó kết tinh - Phương pháp thẩm thấu điện thẩm thấu: thích hợp để loại muối vô - Phương pháp tạo bọt: dùng khí trơ sục dung dòch nước chứa saponin để tạo bọt tách riêng phần bọt chứa saponin tinh khiết - Phương pháp tạo phức với cholesterol VII CHIẾT XUẤT SAPONIN Chiết xuất saponin (tt) - Phương pháp tạo dẫn chất: Ví dụ: tạo dẫn chất acetyl kết tinh tách riêng - Phương pháp tách phân đoạn sắc ký cột với resin pha đảo (Ví dụ: Diaion HP-20) Rửa cột chứa hỗn hợp saponin với nước, MeOH 10%, 50%, MeOH 100% CH2Cl2, saponin chủ yếu nằm phân đoạn MeOH 100% 50% - Phương pháp sắc ký: áp dụng nhiều hiệu Ngoài việc tinh chế, giúp tách riêng saponin đơn Tuỳ theo đối tượng mục đích dùng kỹ thuật khác sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột, lọc gel (sắc ký gel), sắc ký lỏng hiệu cao… VII CHIẾT XUẤT SAPONIN Chiết xuất sapogenin Thường áp dụng sản xuất sapogenin steroid, dùng acid vơ enzyme, phối hợp hai Thuỷ phân enzyme: xay nhỏ dược liệu, ngâm nước ấm 37-40 oC Thông thường enzyme có sẵn dược liệu thủy phân saponin Đôi người ta cho thêm enzyme để giúp thủy phân nhanh chóng hoàn toàn Thời gian cần thiết cho thủy phân khoảng 48-72 VII CHIẾT XUẤT SAPONIN Chiết xuất sapogenin(tt) Thuỷ phân acid: thường dùng H2SO4 HCl nồng độ từ 2-4 N đun nóng 4-8 Nồng độ thời gian thủy phân tùy loại saponin Sau thủy phân, để nguội Gạn lọc lấy tủa, sấy khô Chiết hỗn hợp sapogenin dung môi hữu ether dầu hỏa, hexane, … Tinh chế tách riêng sapogenin PP kết tinh phân đoạn, sắc ký … VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG Saponin có tác dụng sinh học rộng: Tác dụng chống nấm Khá phổ biến, giúp bảo vệ, chống xâm nhập nấm mốc Các chất chống nấm đáng ý: holotoxin A, B, C loài hải sâm, hợp chất tomatin … Nói chung, saponin steroid có tác dụng chống nấm mạnh saponin triterpene Các monodesmoside có mạch đường gồm 4-5 đơn vò đường có tác dụng mạnh chất có 2-3 đơn vò đường … Tác dụng kháng khuẩn Một số saponin có tác dụng kháng khuẩn đáng kể Ví dụ: asiaticoside có Rau má (Centella asiatica) có tác dụng kháng trực khuẩn Koch Hansen, trước có nghiên cứu lâm sàng để chữa bệnh hủi VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG Một số saponin dạng tiền chất không hoạt động (inactive precusors), tác dụng enzyme phóng thích mô bò tổn thương hay bò vò nát tạo thành chất có tác dụng kháng khuẩn Tác dụng chống viêm Khá phổ biến saponin, saponin steroid Ví dụ: - Glycyrhizin Cam thảo (tác dụng thực nghiệm 1/5 hydrocortisone) - Saponin số dược liệu có chứa acid oleanolic Ngưu Tất, Cỏ xước, Đơn châu chấu - Một số saponin steroid solanin, hecogenin, tigogenin… Các chất sử dụng làm thuốc chống viêm dạng viên, thuốc đạn, thuốc mỡ VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG Tác dụng chống khối u - Một số saponin aescin, cyclamin, primula saponin, a-hederin … có tác dụng chống phân bào in vitro in vivo - Ginsenoside-Rh2 Nhân sâm chứng minh có tác động chống ung thư - Một số saponin steroid nhóm spirostane có đơn vò đường (agavoside D, E, yuccoside E, H…) phân tử thể tính chống ung thư thực nghiệm Tác dụng độc cá số côn trùng - Hỗn hợp boninsaponin Schima mertansiana Cây dùng để thuốc cá - Một số saponin có tác dụng diệt loài thân mềm (nhuyễn thể), vd: acid primulic loài Primula VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG Tác dụng hệ thần kinh trung ương - Araloside A, B, C từ Aralia manshurica có tác dụng kích thích - Saponin Rau má (Centella asiatica) hạt táo có tác dụng an thần - Tác động hệ thần kinh trung ương thay đổi tùy theo loại saponin nói chung có tác dụng kích thích liều nhỏ ức chế liều cao Tác dụng máy & hoạt động sinh dục Một số saponin có tác dụng diệt tinh trùng người chuột thí nghiệm VD: samanin D có Pithecolobium saman, saponin Schefflera capiata Ginsenoside toàn phần từ Nhân sâm (Panax ginseng) có tác dụng hướng sinh dục chột VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG CÔNG DỤNG - Tác dụng long đờm, chữa ho, viêm phế quản… Saponin hoạt chất số dược liệu Cam thảo, Cát cánh, Viễn chí, Lá táo … - Saponin thành phần số dược liệu có tác dụng bổ, tăng lực, đặc biệt dược liệu từ thuốc thuộc Ngũ gia bì (còn gọi họ Nhân sâm Araliaccae) Nhân sâm, Sâm Việt Nam, Tam Thất, Ngũ gia bì gai, Ngũ gia bì chân chim… - Một số dược liệu chứa saponin dùng làm thuốc trò bệnh tim mạch điều hòa nhòp tim, hạ cholesterol máu, điều hòa huyết áp, bảo vệ thành mạch… Ví dụ: số thuốc họ Ngũ gia bì, Ngưu tất … Liên xô (cũ) dùng saponin steroid từ loài Dioscorea để phòng trò cao cholesterol máu, xơ vữa động mạch VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG CÔNG DỤNG (tt) - Tính kháng khuẩn, chống nấm số saponin ứng dụng trò liệu asiaticoside, tomatin… - Một số saponin dược liệu chứa saponin có công dụng lợi tiểu, giải độc, chống viêm, chống phù … Ví dụ: solanin, aescin, acid glycyrthetic, Ngưu tất bắc, Cỏ xước (Ngưu tất nam), Đơn châu chấu, Râu mèo, Rau má, Tỳ giải… VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG CÔNG DỤNG (tt) - Saponin steroid saponin alcaloid steroid dùng làm nguyên liệu bán tổng hợp thuốc steroid (steroid hormone, corticoid) Các chất sử dụng nhiều diosgenin, hecogenin solasodin - Ngoài ra, saponin dùng làm chất phụ gia ngành Dược để làm tăng tính thấm - Do có tác dụng tạo bọt nhũ hóa, saponin dùng nhiều ngành khác kỹ nghệ hóa học, phim ảnh, thực phẩm … VIII TÁC DỤNG & CÔNG DỤNG CÔNG DỤNG (tt) - Tính kháng khuẩn, chống nấm số saponin ứng dụng trò liệu asiaticosid, tomatin… - Một số saponin dược liệu chứa saponin có công dụng lợi tiểu, giải độc, chống viêm, chống phù … Ví dụ: solanin, aescin, acid glycyrthetic, Ngưu tất bắc, Cỏ xước (Ngưu tất nam), Đơn châu chấu, Râu mèo, Rau má, Tỳ giải… ... saponin phân loại saponin trung tính saponin acid Hiện nay, người ta phân loại saponin dựa vào cấu trúc phần aglycone: - Saponin triterpene (triterpenoid saponin) - Saponin steroid (steroid saponin, ... HỌC VI TÍNH CHẤT SAPONIN – ỨNG DỤNG VÀO ĐỊNH TÍNH ĐỊNH LƯNG VII CHIẾT XUẤT SAPONIN VIII TÁC DỤNG SINH HỌC VÀ CÔNG DỤNG ??? Saponin? Saponin? Saponin? Vài dược liệu chứa nhiều saponin thường gặp... (steroid saponin, spirostanol saponin) - Saponin alcaloid steroid (glycoalcaloid, basic steroid saponin, azasteroid) Có thể xếp vào nhóm saponin steroid Một số tác giả xếp saponin alcaloid steroid