GIÁM ĐỊNH BỆNH hại TRÊN cây sứ THÁI tại THỊ xã SA đéc – ĐỒNG THÁP và THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ của VI KHUẨN đối KHÁNG và THUỐC hóa học đối với BỆNH THỐI NHŨN TRONG điều KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG HUỲNH TUẤN VŨ GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY SỨ THÁI Adenium obesum Balt TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC – ĐỒNG THÁP VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ C

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

HUỲNH TUẤN VŨ

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY SỨ THÁI (Adenium obesum Balt)

TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC – ĐỒNG THÁP VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ CỦA VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG VÀ THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI BỆNH THỐI NHŨN (ERWINIA SP.)

TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: HOA VIÊN CÂY CẢNH

CẦN THƠ, 2011

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: HOA VIÊN CÂY CẢNH

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY SỨ THÁI (Adenium obesum Balt)

TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC – ĐỒNG THÁP VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ CỦA VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG VÀ THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI BỆNH THỐI NHŨN (ERWINIA SP.)

TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM

Cán bộ hướng dẫn khoa học: Sinh viên thực hiện:

MSSV: 3073256 Lớp: HVCC K33

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT

Chứng nhận luận văn tốt nghiệp với đề tài:

TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC – ĐỒNG THÁP VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ

CỦA VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG VÀ THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI BỆNH THỐI NHŨN (ERWINIA SP.)

TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM

Do sinh viên Huỳnh Tuấn Vũ thực hiện và đề nạp

Kính trình hội đồng chấm luận văn xem xét

Cần Thơ, ngày …… tháng …… năm 2011

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT

Hội đồng chấm luận văn đã chấp thuận luận văn đính kèm đề tài:

TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC – ĐỒNG THÁP VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ

CỦA VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG VÀ THUỐC HÓA HỌC

ĐỐI VỚI BỆNH THỐI NHŨN (ERWINIA SP.)

TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM

Do sinh viên Huỳnh Tuấn Vũ thực hiện và bảo vệ trước hội đồng ngày … tháng…

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân Các số liệu, kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ luận văn nào trước đây

Tác giả luận văn (ký tên)

Huỳnh Tuấn Vũ LỜI CAM ĐOAN

Họ và tên: Huỳnh Tuấn Vũ

1995 – 1999: Trường Tiểu Học Tân An

1999 – 2004: Trường Trung Học Cơ Sở Tân An

2004 – 2007: Trường Trung Học Phổ Thông Lý Tự Trọng

2007 – 2011: Trường Đại Học Cần Thơ, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Ngành Hoa Viên & Cây Cảnh, khóa 33

TIỂU SỬ CÁ NHÂN

MỤC LỤC

Trang

DANH SÁCH BẢNG iii

DANH SÁCH HÌNH iv

TÓM LƯỢC v

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 2

LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY SỨ THÁI 2

1.1.1 Đặc điểm thực vật 2

1.1.2 Yêu cầu ngoại cảnh 2

1.1.2.1 Nhiệt độ 2

1.1.2.2 Độ ẩm 3

1.1.2.3 Ánh sáng (nắng) 3

1.1.2.4 Đất trồng 3

1.1.2.5 Nước tưới 3

1 2 MỘT SỐ BỆNH HẠI ĐƯỢC GHI NHẬN 3

1.2.1 Bệnh đốm vàng 3

1.2.2 Bệnh thối nhũn 3

1.2.3 Thán thư 4

1.3 ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN ERWINIA SP .4

1.3.3 Vi khuẩn đối kháng dùng trong thí nghiệm 4

1.3.3.1 Vai trò tác động của vi khuẩn đối kháng 4

1.3.3.2 Vai trò của vi khuẩn đối kháng trong phòng trị bệnh cây trồng 5

1.3.3.3 Đặc điểm vi khuẩn dùng trong thí nghiệm 5

1.4 ĐẶC ĐIỂM CỦA CÁC LOẠI THUỐC HOÁ HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM 7

1.4.1 Starner 20 WP 7

1.4.2 Physan 20L 7

1.4.3 Coc 85WP 8

1.4.4 Nước vôi trong 8

CHƯƠNG 2 9

PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 9

2.1 PHƯƠNG TIỆN 9

2.2 PHƯƠNG PHÁP 10

2.2.1 Thời gian và địa điểm điều tra 10

2.2.1 Phương pháp thu mẫu và đánh giá bệnh 10

2.2.3 Phương pháp giám định 10

2.2.6 Khảo sát một số loại tác nhân phòng và trị bệnh đối thối nhũn ở cây Sứ trong phòng

thí nghiệm 13

2.2.6.1 Mục đích của thí nghiệm 13

2.2.6.2 Tiến hành thí nghiệm 13

CHƯƠNG 3 16

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16

3.1 TÌNH HÌNH BỆNH HẠI TRÊN SỨ THÁI TẠI THỊ XÃ SA ĐÉC 16

3.1.1 Tình hình bệnh hại tại thị xã Sa Đéc tỉnh Đồng Tháp 16

3.2 KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH BỆNH TRÊN CÂY SỨ THÁI 18

3.2.1 Bệnh đốm lá (Cercospora Leaf Spot) 18

3.2.2 Bệnh thán thư (Anthracnose) 19

3.2.3 Bệnh đốm đồng tiền 21

3.2.4 Bệnh thối nhũn trên cây sứ Thái 22

3.3 HIỆU QUẢ CỦA VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG BỆNH ĐỐI VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH THỐI NHŨN TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM 25

3.4 HIỆU QUẢ CỦA BA LOẠI THUỐC HÓA HỌC VÀ NƯỚC VÔI ĐỐI VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH THỐI NHŨN TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM26 3.5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 31

3.5.1 Kết luận 31

3.5.2 Đề nghị 31

TÀI LIỆU THAM KHẢO 32

DANH SÁCH BẢNG

Bảng 1.1 Phân cấp mức độ bệnh (Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, ĐHCT) 10 Bảng 2.1 Nồng độ của các loại thuốc sử dụng trong thí nghiệm 15 Bảng 3.1 Mức độ bệnh hại trên cây sứ Thái qua các tháng điều tra tại Phường Tân Quy Đông

- thị xã Sa Đéc - Tỉnh Đồng Tháp 17

Bảng 3.2 Hiệu quả của ba loại vi khuẩn đối kháng đối với vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối

nhũn trên cây sứ Thái trong điều kiện phòng thí nghiệm 25 Bảng 3.3 Hiệu quả của bốn loại thuốc (nồng độ thấp hơn khuyến cáo) đối với vi khuẩn

Erwinia sp gây bệnh thối nhũn trên cây sứ Thái trong điều kiện phòng thí nghiệm 27

Bảng 3.4 Hiệu quả của bốn loại thuốc (nồng độ khuyến cáo) đối với vi khuẩn Erwinia sp gây

bệnh thối nhũn trên cây sứ Thái trong điều kiện phòng thí nghiệm 28

Bảng 3.5 Hiệu quả của bốn loại thuốc (nồng độ gấp đôi khuyến cáo) đối với vi khuẩn Erwinia

sp Gây bệnh thối nhũn trên cây sứ Thái trong điều kiện phòng thí nghiệm 28

Hình 2.1 Sơ đồ giám định bệnh do vi khuẩn 13

Hình 2.2 Sơ đồ thử nghiệm hiệu quả của thuốc đối với tác nhân gây bệnh là vi khuẩn 14

Hình 2.3 Sơ đồ thử nghiệm hiệu quả của thuốc đối với vi khuẩn Erwinia sp 15

Hình 3.1 Triệu chứng và tác nhân Cercospora sp gây bệnh đốm lá trên cây sứ Thái 18

Hình 3.2 Triệu chứng bệnh thán thư do nấm Colletotrichum sp trên cây sứ Thái 20

Hình 3.3 Triệu chứng bệnh đốm đồng tiền trên cây sứ Thái 21

Hình 3.4 Triệu chứng bệnh thối nhũn Erwinia sp trên cây sứ Thái 22

Hình 3.5 Đặc điểm của vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn trên cây sứ Thái 23

Hình 3.6 Triệu chứng thối nhũn trên cây sứ Thái được lây bệnh nhân tạo 24

Hình 3.7 Hiệu quả của vi khuẩn đối kháng đối với vi khuẩn gây bệnh Erwinia sp trên môi trường King’s B ở thời điểm 48 GSC 26

Hình 3.8 Hiệu quả ba loại thuốc hóa học và nước vôi (thấp hơn ½ nồng độ khuyến cáo) thời điểm 48h đối với vi khuẩn Erwinia sp 29

Hình 3.9 Hiệu quả ba loại thuốc hóa học và nước vôi (nồng độ khuyến cáo) thời điểm 48h đối với vi khuẩn Erwinia sp 30

Hình 3.10 Hiệu quả ba loại thuốc hóa học và nước vôi (nồng độ gấp đôi khuyến cáo) ở thời điểm 48h đối với vi khuẩn Erwinia sp 30

DANH SÁCH HÌNH

HUỲNH TUẤN VŨ 2011. Giám định bệnh hại trên cây sứ Thái (Adenium obesum

Balt) tại thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp và Thử nghiệm hiệu quả của vi khuẩn đối

kháng và thuốc hóa học đối với bệnh thối nhũn (Erwinia sp.) trong điều kiện phòng thí

nghiệm Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng Trường Đại Học Cần Thơ Cán bộ hướng dẫn: PGs Ts Trần Thị Thu Thuỷ

Công tác giám định bệnh hại trên cây sứ Thái tại phường Tân Qui Đông, thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp được thực hiện từ tháng 8 đến tháng 12 năm 2010 nhằm mục đích xác định bệnh hại trên cây sứ Thái và đánh giá hiệu quả của vi khuẩn đối kháng

và thuốc hóa học đối với bệnh thối nhũn Kết quả ghi nhận có 4 bệnh hiện diện là thán

thư (Colletotrichum sp.), đốm lá (Cercospora sp.), thối nhũn (Erwinia sp.), đốm đồng tiền (địa y) Trong đó bệnh thối nhũn do vi khuẩn Erwinia sp là gây hại nặng nhất

Thí nghiệm đánh giá hiệu quả của vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17, Bacillus

sp TG19 và Bacillus sp B4-2 cho thấy, vi khuẩn Burkholderia cepacia sp TG19 cho

hiệu quả cao nhất đối với việc hạn chế sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh thối nhũn

Erwinia sp trên cây sứ Thái, vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 cho hiệu quả thấp

hơn và cuối cùng là Bacillus sp B4-2 Thí nghiệm với tác nhân hóa học Starner 20WP,

Physan 20L, Coc 85WP và nước vôi trong cho thấy ở 3 mức nồng độ: thấp hơn khuyến cáo, khuyến cáo, và gấp đôi khuyến cáo thì thuốc Starner 20WP luôn cho hiệu quả cao nhất với bán kính vòng vô khuẩn lớn hơn mức ý nghĩa so với các nghiệm thức còn lại, kế đến là Physan 20L, thuốc Coc 85 WP và nước vôi trong không có hiệu

quả đối với việc hạn chế tác nhân gây bệnh thối nhũn (Erwinia sp.)

TÓM LƯỢC

Ngày nay, do nhu cầu cuộc sống con người ngày càng cao, hoa kiểng giữ vai trò quan trọng, vừa mang lại giá trị tinh thần, vừa mang lại lợi ích về kinh tế Vì vậy, ngành sản xuất hoa cảnh ngày càng được xem trọng, để phục vụ cho thị hiếu người tiêu dùng Nhờ vào trồng hoa, mà nhiều nông dân đã thoát nghèo, trở nên khá giả (Đặng Phương Trâm, 2005) và rất phù hợp với sự chuyển dịch cơ cấu cây trồng của nước ta hiện nay Trong số các loại cây hoa được chọn và trồng nhiều như: hồng, cúc, mai… thì cây sứ Thái (cây sứ sa mạc) cũng được chú trọng trồng và phát triển

Đã hơn 40 năm, từ khi được đưa vào Việt Nam từ nước láng giềng Thái lan, cây sứ Thái, đã ngày càng trở nên phổ biến như một loại cây cảnh trang trí, không chỉ bởi thân cây mang hình dáng đặc thù mà còn bởi cây có hoa đẹp và nhiều loại Cây sứ Thái có giá trị cao và phát triển rất mạnh trên thị trường thế giới, tuy nhiên việc nghiên cứu về bệnh hại trên cây sứ Thái vẫn còn đang rất hạn chế Nhiều nhà vườn, đặc biệt ở thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp, đã bị thiệt hại kinh tế nặng nề

do không nhận biết được tác nhân gây bệnh và cách phòng trị hiệu quả

Do đó đề tài: “Giám định bệnh hại trên cây sứ Thái (Adenium obesum Balt) tại thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp và thử nghiệm hiệu quả của vi khuẩn đối kháng và thuốc hóa học đối với bệnh thối nhũn (Erwinia sp.) trong điều

kiện phòng thí nghiệm” đã được tiến hành nhằm mục đích:

- Xác định bệnh hại chính trên cây sứ Thái tại thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp

- Khảo sát hiệu quả tác nhân phòng trị đối với bệnh thối nhũn trên sứ Thái trong điều kiện phòng thí nghiệm

MỞ ĐẦU

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY SỨ THÁI

1.1.1 Đặc điểm thực vật

Cây sứ Thái (cây sứ sa mạc) là cây hai lá mầm, có tên khoa học là Adenium

obesum Balt thuộc họ Apocynaceae (họ trúc đào) Cây có nguồn gốc từ các nước

thuộc vùng sa mạc Phi châu

Sứ Thái là loại cây bụi, thân mọng, thường xanh, cao khoảng 1-3 m, phần gốc cây phình to Lá mọc thành vòng xoắn, chụm lại thành cụm ở phía trên của ngọn cây, các lá đơn mép nhẵn, cấu trúc bóng như da, dài 5-15 cm và rộng 1-8 cm

Cây có cụm hoa ở đỉnh, xếp sát với lá hay trên cành rụng lá Các hoa hình ống, dài 2-5 cm, với đường kính ngoài của phần trên khoảng 4-6 cm, có 5 cánh, tương

tự như ở các chi có quan hệ họ hàng gần như chi Sứ trắng (Plumeria) và chi Trúc đào (Nerium) Hoa màu đỏ hay hồng, thường là có các mảng màu trắng ở phía trên ống hoa, cánh hoa hợp ở gốc thành ống dạng phễu, trên chia 5 thùy xòe rộng; nhị

có bao phấn có mũi dài 2 - 3cm, có lông Trong một chùm hoa, hoa lớn nở trước hoa nhỏ nở sau, mỗi hoa nở khoảng 8-10 ngày mới tàn, cho nên rất lâu mới nở hết chùm hoa Cây sứ rất nhiều nhánh, nhiều hoa nên hoa nở gần như quanh năm Một cây có thể ghép lên nhiều giống có màu sắc hoa khác nhau, quả đại ít gặp (Phạm Hoàng Hộ, 2001)

1.1.2 Yêu cầu ngoại cảnh

Theo Nguyễn Bảo Toàn và Nguyễn Thị Mai Anh (2010) cây sứ Thái có một số đặc điểm sau:

1.1.2.1 Nhiệt độ

Nhiệt độ cao không hề ảnh hưởng tới cây sứ nhiệt độ có khi lên tới 420C nhưng cây

sứ vẫn sống tốt (tuy nhiên khi nhiệt độ lên cao kết hợp với độ ẩm thấp, cánh hoa dễ

bị cháy)

Ở nhiệt độ thấp cây không phát triển, nhiệt độ tối thiểu là 100c dưới mức này cây

dễ bị đặt nhựa và chết vì mạch dẫn không lưu thông

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

1.1.2.5 Nước tưới

Sứ là cây chịu nắng, điều này rất phù hợp với thời tiết miền Nam, tuy nhiên cũng rất sợ úng nước, cho nên chỉ khi nào nắng khô đất mới tưới Cây sứ vừa mới trồng, mới sang chậu hoặc cắt cành để giâm không nên tưới nhiều nước Tưới nước cho sứ phải dùng vòi phun nhuyễn, bình phun hoặc hệ thống bơm phun

1 2 MỘT SỐ BỆNH HẠI ĐƯỢC GHI NHẬN

1.2.1 Bệnh đốm vàng

Lá sứ khi gặp mưa lớn, hoặc tưới mạnh nước quá bị bầm dập sinh ra nhiều đốm nhỏ trên lá màu vàng hoặc nâu như bị phỏng, rồi lan nhanh cả lá, sau này sẽ khô quéo lại hoặc rụng Có khi ăn vào thân cây làm cây mềm nhũn từ trên cành xuống qua thân khi lan đến gốc cây sẽ chết Bệnh chưa xác định rõ tác nhân (Huỳnh Văn Thới, 2004)

1.2.2 Bệnh thối nhũn

Theo Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng (2005), bệnh thường xuất hiện trên thân, củ sứ Lúc đầu vết bệnh chỉ là những đốm màu xám trắng mộng nước Sau đó, vết bệnh liên kết lại làm thối cả củ lẫn thân Chẻ dọc thân cây và củ có những sọc màu nâu dọc theo mạch gỗ hơi nhũn nước và nhầy nhụa Đặc biệt để nhận dạng

bệnh do vi khuẩn này là có mùi hôi thối rất khó chịu Bệnh do vi khuẩn Erwinia sp

gây ra Vi khuẩn được nuôi cấy trên môi trường nhân tạo cho khuẩn lạc màu trắng sữa, hơi nhầy Vi khuẩn hình que ngắn Gam âm, có nhiều roi xung quanh, kích thước tế bào vi khuẩn là 2 x 1 µm

1.2.3 Thán thư

Bệnh xuất hiện và gây hại phổ biến trên cây sứ Thái, triệu chứng bệnh thường bắt đầu ở hai mép, chóp lá hoặc giữa phiến lá, lúc đầu vết bệnh là những chấm tròn nhỏ màu nâu xám hay nâu vàng có nhiều vòng đồng tâm, giữa vết bệnh hơi lõm xuống, có viền nâu nhạt, kích thước vết bệnh trung bình từ 2 – 5 mm Sau đó vết bệnh lan rộng ra và nhiều vết bệnh liên kết lại làm lá cháy khô thành những mảnh lớn, trên bề mặt vết bệnh có những chấm nhỏ li ti màu đen do sự hình thành dĩa đài của nấm gây bệnh

Bệnh do nấm Colletotrichum spp Bào tử hình bầu dục, không màu, thích thước

từ 8,34 – 16,68 x 2,10 – 3,47 (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

1.3 ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN ERWINIA SP

 Hình thái cấu tạo

Vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh cây trồng là loài nguyên sinh đơn bào không có

diệp lục, dạng hình gậy, hai đầu hơi thon tròn, kích thước nhỏ (0,5 - 1 x 1 - 3,0 µm) có lông roi xung quanh tế bào Ngoài ra có vách tế bào, bên trong là màng tế bào chất, tế bào chất và thể nhân khuếch tán, cấu tạo bởi chuỗi ADN và các cơ quan như ribosome, mesosome, plasmid,…( Vũ Triệu Mân & Lê Lương Tề, 2000)

 Đặc điểm xâm nhiễm

Vi khuẩn Erwinia sp xâm nhiễm vào cây một cách thụ động, xâm nhập chủ

yếu qua các lỗ hở tự nhiên và vết thương cơ học Sau khi vi khuẩn xâm nhập vào cây nó lan theo hệ thống mạch dẫn

Lan truyền của vi khuẩn nhờ gió, mưa, nước tưới, côn trùng và hoạt động của con người, chúng xâm nhập vào cây trồng qua vết thương ở rễ, thân và qua côn trùng như là rệp, bọ nhảy

Vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh có thể lưu tồn ở cây bệnh, rễ cây bệnh thối mục

trong đất Vi khuẩn còn tồn tại trong cơ thể một số loài côn trùng, dụng cụ canh tác, duy trì trên nhiều loài ký chủ ( Vũ Triệu Mân & Lê Lương Tề, 2000)

1.3.3 Vi khuẩn đối kháng dùng trong thí nghiệm

1.3.3.1 Vai trò tác động của vi khuẩn đối kháng

Theo Cock (1982) phòng trị sinh học bệnh cây trồng gồm 3 mục chính:

- Làm giảm mật số tác nhân gây bệnh bằng cách sử dụng vi sinh vật đối kháng

vùng rễ nơi mà chúng thực hiện nghĩa vụ rào cản tác nhân gây bệnh bằng hình thức cạnh tranh, tiết kháng sinh hoặc hạn chế hoạt động kí sinh của tác nhân

- Sử dụng vi sinh vật không gây bệnh để kích thích tính kháng bệnh của cây

trồng hoặc cạnh tranh về nơi cư trú của tác nhân gây bệnh

1.3.3.2 Vai trò của vi khuẩn đối kháng trong phòng trị bệnh cây trồng

Vi khuẩn là nhóm vi sinh vật đơn bào có cấu tạo đơn giản nhưng giữ vai trò hết sức quan trọng, chúng tồn tại khắp nơi trong đất, nước, trên bề mặt cây trồng và có khả năng hạn chế vi sinh vật khác bằng cách tiết ra các kháng sinh (antibiotic) cạnh tranh về dinh dưỡng, nơi ở, do đó chúng góp phần tạo cân bằng sinh thái trong tự nhiên (Mukerji & Garg, 1993 trích dẫn bởi Nguyễn Thị Thu Nga, 2003) đặc biệt trong phòng trị sinh học các tác nhân gây bệnh cây trồng thì vi khuẩn đối kháng giữ vai trò nổi bật (Nguyễn Thị Thu Nga, 2003)

1.3.3.3 Đặc điểm vi khuẩn dùng trong thí nghiệm

 Vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17

Vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 được bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa

Nông Nghiệp, Trường Đại Học Cần Thơ phân lập từ đất ruộng lúa, tại tỉnh Tiền

Giang năm 1997, với tên ban đầu Pseudomonas cepacia, do viện Pasteur Thành Phố

Hồ Chí Minh định danh năm 1999 Đến Năm 2000, vi khuẩn được Viện Nghiên

Cứu Quốc Gia Nông Nghiệp Nhật Bản định danh và chỉnh lại với tên Burkholderia

cepacia (Phạm Văn Kim, 2003)

Vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 là vi khuẩn hiếu khí thuộc Gram âm, có

hình que kích thước 1,5-2,0 x 0,45- 0,5 µm Khuẩn lạc màu vàng sữa trên môi trường King’s B, tròn, nhô và bóng Trên môi trường nuôi cấy trong đĩa petri vi khuẩn này có phạm vi pH là từ 4 đến 8 và tối hảo là 7 Như vậy vi khuẩn này có thể sống tốt trong điều kiện pH của đồng ruộng Đồng Bằng Sông Cửu Long (Nguyễn Thị Thu Nga, 2003)

Vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 có khả năng đối kháng mạnh với nấm

Rhizoctonia solani với bán kính vòng vô khuẩn là 16,5 mm (Phạm Văn Kim và ctv., 2003) Chủng vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 có khả năng hạn chế sự

hình thành hạch nấm Rhizoctonia solani khi cùng chung sống với nấm trong đĩa

petri Dịch trích nuôi cấy vi khuẩn trong môi trường King′s B sau 48 giờ có khả năng ức chế khuẩn ty nấm phát triển, hiệu quả ức chế càng cao khi nồng độ dịch trích càng tăng, cơ chế đối kháng của vi khuẩn là tiết ra chất có khả năng hạn chế sự phát triển của nấm (Nguyễn Thị Thu Nga, 2003)

 Vi khuẩn Bacillus sp TG19

Vi khuẩn Bacillus sp có khả năng đối kháng tốt với nấm Rhizoctonia solani với bán kính vòng vô khuẩn là 14,5 mm (Phạm Văn Kim và ctv., 2003)

Lê Thị Kim Ngữ (2005), trích dẫn bởi Nguyễn Quốc Đạt (2006) cho biết hai

chủng vi khuẩn Burkholderia cepacia TG17 và Bacillus sp TG19 có khả năng đối kháng với 112 chủng nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư trên các loại cây trồng như: dưa leo, cà chua, ớt, xoài và sầu riêng Trong đó, vi khuẩn Bacillus sp

TG 19 có khả năng đối kháng với nấm Colletotrichum spp cao hơn so với chủng vi khuẩn Burkholderia cepacia TG 17 với bán kính vòng vô khuẩn trung bình lần lượt

là 6,8 mm đối với vi khuẩn Bacillus sp TG 19 và 3,4 mm đối với vi khuẩn

Burkholderia cepacia TG 17

Ngoài ra, Biện Phương Đông (2005) còn ghi nhận cả hai vi khuẩn Burkholderia

cepacia TG 17 và Bacillus sp TG 19 có khả năng đối kháng tốt với nấm Rhizoctonia solani gây bệnh trên cây cải bẹ xanh và cải ngọt, trong điều kiện phòng

thí nghiệm thông qua khả năng ức chế sự phát triển của khuẩn ty nấm gây bệnh

Trong điều kiện nhà lưới thì hai chủng vi khuẩn Burkholderia cepacia TG 17 và

Bacillus sp TG 19 đều có hiệu quả giúp giảm bệnh chết cây con trên cây cải xanh

và cải ngọt

 Vi khuẩn Bacillus sp B4-2

Vi khuẩn hình que, có kích thước 1,0 - 1,2 x 3,0 - 5,0 µm, Gram (+), không có

vỏ nhày, hiếu khí, chuyển động, nội bào tử có kích thước từ 1,0 - 1,5 µm Vi khuẩn

Bacillus sp B4-2 ưa nhiệt, có thể sống sót trong những điều kiện khắc nghiệt, có thể

được chọn lọc từ dịch trích trong đất với nước nóng 800C trong vòng 10 phút, hoặc

xử lý đất bằng hơi nước 600C trong 30 phút đối với vi khuẩn hiếu khí (Phạm Thị Ngọc Thu, 2010)

1.4 ĐẶC ĐIỂM CỦA CÁC LOẠI THUỐC HOÁ HỌC DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM

Theo Material Safety Data Sheet (2008) thì :

1.4.1 Starner 20 WP

Hoạt chất: Oxolinic acid 20 % và phụ gia 80%

Tên hoá chất: 5-Ethyl-8-oxo-5,8-dihydro

carboxylic acid hoặc 1,3-dioxolo (4,5-g)

quinoline-7-carboxylic acid 5-ethyl-5,8-dihydro-8-oxo

Công thức hóa học: C13H11NO5

Trọng lượng phân tử: 261,25 g/mol

Tính chất: thuốc có tác dụng nội hấp, tiếp xúc mạnh Thuốc dạng bột, tan hoàn toàn trong nước

Thuốc độc nhóm: LD50 525 mg/kg đối với chuột và LD50 1890 mg/kg đối với chuột nhắt Rất ít độc với người, vật nuôi và môi trường Thời gian cách ly 7 ngày trước khi thu hoạch Không thả vật nuôi vào nơi vừa mới phun thuốc

Sử dụng: đặc hiệu trừ các bệnh vi khuẩn hại cây trồng như bệnh bạc lá lúa

(Xanthomonas oryzae) và các loại bệnh vi khuẩn hại dưa hấu, cà, rau, hành, tỏi, cà chua, khoai tây như bệnh héo xanh, thối nhũn vi khuẩn (Erwinia carotovora), chết

đọt vi khuẩn (Trần Văn Hai, 2000)

1.4.2 Physan 20L

Hoạt chất: Quaternary Ammonium Salts 20% w/v

+ phụ gia 80 % w/v

Tên hoá chất: Quaternary Ammonium Salts

Tính chất: như kháng sinh và thuốc khử trùng

Thời gian cách ly là một ngày trước khi thu hoạch

Sử dụng: đặc trị các bệnh do vi khuẩn, nấm và các

loại rong rêu nhớt, tảo gây hại nhiều loại cây trồng,

đặc biệt là vi khuẩn gây bệnh cháy bìa lá lúa (Trần Văn Hai, 2000)

1.4.3 Coc 85WP

Hoạt chất: Copper Oxychloride

Tên hoá chất: Copper Oxychloride

Công thức hóa học: ClCuO

Tính chất: tác động tiếp xúc, ít tan trong nước, phổ tác dụng rộng

Tính độc: ít hại môi trường và con người Thời gian cách ly là 7 ngày trước khi thu hoạch

Sử dụng: phòng trị nấm bệnh và diệt khuẩn căn bản từ gốc đồng như sương mai hại cà chua, bệnh loét trên cây có múi (Trần Văn Hai, 2000)

1.4.4 Nước vôi trong

Hoạt chất: canxi hyđrôxít

Tên hóa chất: Canxi hydroxit

Công thức hóa học: Ca(OH)2

Tính chất: có tính bazơ trung tính-mạnh, có phản ứng mạnh với các axít và ăn mòn nhiều kim loại khi có sự tham gia của nước

Sử dụng: pha loãng, để lắng xuống lấy phần nước trong phun lên cây bệnh

Hòa vôi bột (vôi quét tường) vào nước với liều lượng 2 kg vôi/16 lít nước, lắng lấy nước trong và phun lên lá lúa lúc mới chớm bệnh do vi khuẩn (2 bình /công) (Trần Thị Thu Thuỷ, 2007) hay có thể rải vôi 60-80 kg/ha (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 2000)

Thời gian: Bắt đầu từ tháng 8 năm 2010 đến tháng 12 năm 2010

Địa điểm: Phòng thí nghiệm Phòng trừ Sinh học và nhà lưới bộ môn Bảo Vệ Thực Vật khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ

2.1 PHƯƠNG TIỆN

* Vật liệu và dụng cụ:

- Đĩa petri, ống nghiệm, giấy thấm, kéo, kẹp…

- Sổ ghi chép, viết, giấy báo, hóa chất phân bón

* Thiết bị:

- Tủ cấy, kính hiển vi, tủ úm…

Các loại môi trường sử dụng trong nuôi cấy và phân lập gồm môi trường PDA, môi trường King’ B, và môi trường Water Agar

 Công thức các loại môi trường sử dụng để phân lập và nuôi cấy

Môi trường PDA (pH= 6,5-6,8) ( Shurfleff và Averre, 1997)

2.2 PHƯƠNG PHÁP

2.2.1 Thời gian và địa điểm điều tra

-Địa điểm: Điều tra trên sáu vườn trồng sứ Thái tại phường Tân Qui Đông, thị

xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp

-Thời gian : Từ tháng 8 - 2010 đến tháng 12 - 2010, định kỳ 1 tháng/lần

2.2.1 Phương pháp thu mẫu và đánh giá bệnh

Mẫu thu tại thị xã Sa Đéc Tỉnh Đồng Tháp trên sáu vườn trồng Sứ Thái có diện tích trên 200 m2 (số cây sứ thái trên 200 cây)

Mẫu bệnh được thu thập phải thật tươi, có vết bệnh còn mới và phần tiếp giáp giữa mô bệnh và mô không bệnh phải rõ ràng Mỗi loại triệu chứng bệnh được thu thập nhiều mẫu và cho vào bao giấy có ghi đầy đủ các chi tiết, thời gian thu mẫu, mức độ bệnh và mô tả triệu chứng bệnh

Đánh giá mức độ bệnh: đối với mỗi bệnh, phải nhìn tổng quát diện tích cây trồng thiệt hại để đánh giá mức độ nhiễm bệnh theo 5 cấp từ không nhiễm bệnh đến rất nặng theo thang đánh giá (Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, Trường Đại Học Cần Thơ)

Bảng 1.1 Phân cấp mức độ bệnh (Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, ĐHCT)

Đối với bệnh mới chưa báo cáo trong nước, thì tiến hành quy tắc Koch gồm 4 bước:

-Bước 1: Phân lập mầm bệnh từ mô bệnh

-Bước 2: Tiêm chủng mầm bệnh đã phân lập vào cây mạnh

-Bước 3: Quan sát lại triệu chứng bệnh xuất hiện so với triệu chứng bệnh ban đầu

-Bước 4: Tái phân lập mầm bệnh So sánh với mầm bệnh ban đầu

Đối với bệnh đã được báo cáo nhiều lần trong nước và trên thế giới chỉ áp dụng bước 1 và 2 của quy tắc Koch

2.2.4 Phương pháp áp dụng khi giám định

Quan sát tác nhân gây bệnh

- Đối với nấm:

+ Quan sát vết bệnh dưới kính lúp để tìm các bộ phận của nấm ở mặt dưới hoặc mặt trên Cạo hoặc làm phẩu thức quan sát dưới kính hiển vi để tìm bào tử, đính bào đài, ổ nấm… Ngoài ra có thể áp dụng phương pháp dán băng keo để quan sát các bộ phận nấm

Trong trường hợp cạo hoặc dán băng keo không tìm thấy cơ quan của nấm, tiến hành làm phẩu thức hoặc ủ vết bệnh Phẩu thức được thực hiện bằng cách dùng lưỡi lam thật bén cắt vết bệnh thành những lát thật mỏng và quan sát dưới kính hiển vi

+ Phương pháp ủ bệnh: được thực hiện trong đĩa petri có lót giấy ẩm, cắt mẫu bệnh thành từng đoạn nhỏ (0,5cm) thanh trùng mặt ngoài với chlorin 3‰ (1 phút), rửa lại bằng nước cất vô trùng (3 lần), ủ mẫu ở nhiệt độ phòng và quan sát ở 3 ngày sau khi ủ

+ Nếu ủ không thấy mầm bệnh phát triển thì phải nuôi cấy mẫu lá bệnh trên môi trường WA Mẫu bệnh được cắt thành từng đoạn nhỏ (5mm), thanh trùng mặt ngoài bằng chlorin 3‰ (30 giây), rửa lại với nước cất vô trùng (3 lần), cấy trên môi trường WA và quan sát dưới kính hiển vi ở 3 - 5 ngày sau khi cấy

- Đối với vi khuẩn:

Cắt mẫu bệnh thành từng đoạn nhỏ khoảng vài mm (từ 3-10 mm), nơi có tiếp giáp giữa mô bệnh và mô khoẻ Sau đó dùng dao cắt thành từng lát mỏng cho vào lame có chứa giọt nước cất, dùng lammelle đậy lại và quan sát nhanh dưới kính hiển

vi Nếu bệnh do vi khuẩn gây ra sẽ tìm thấy dịch vi khuẩn tuôn ra từ vết cắt

Phân lập vi khuẩn: Cắt mẫu bệnh thành những đoạn nhỏ (5mm), thanh trùng mặt ngoài bằng Chlorine3‰ rửa lại nhiều lần bằng nước cất vô trùng Sau đó nuôi cấy trong môi trường King’s B Sau khi nuôi cấy khoảng 24 giờ, vi khuẩn sẽ phát triển xung quanh rìa mô bệnh, tiến hành phân lập vi khuẩn Dùng đũa cấy vi khuẩn

để phân lập vi khuẩn và vạch theo đường zíc-zắc lên đĩa petri có chứa môi trường King’s B

Nhận dạng vi khuẩn dựa vào các đặc điểm như hình dạng (tròn, dẹt…), màu sắc (vàng, trắng, kem sữa,…), đặc điểm bề mặt khuẩn lạc (trơn, nhẵn, bóng,….), đường rìa xung quanh (gợn sóng, thẳng,…), độ nổi của khuẩn lạc (phẳng, nhô,…)

Quan sát hình dạng vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm đơn Mẫu vi khuẩn được nuôi cấy 1-2 ngày, nhuộm với Crystal violet (1-5 phút), rửa nước, để khô và quan sát dưới kính hiển vi có độ phóng đại x100

Khảo sát đặc tính Gram của vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram Vi khuẩn được nuôi cấy trong thời gian từ 18 - 24 giờ Các bước thực hiện như sau: đầu tiên vi khuẩn được nhuộm Ammonium oxalate crystal violet (1-2 phút), rửa nước, nhuộm lugol trong 1 phút, tẩy màu với alcol 950 (cho đến khi màu tím tan hết), rửa nước và để khô tự nhiên trong không khí, nhuộm Carbon fuchsin (1 phút), rửa nước, để khô và quan sát ở vật kính x100 Vi khuẩn Gram âm có màu hồng, vi khuẩn Gram dương có màu tím xanh

Khảo sát chiên mao của vi khuẩn bằng cách nhuộm chiên mao Chọn mẽ vi khuẩn nuôi cấy trong thời gian từ 18-24 giờ, đầu tiên nhuộm với dung dịch Leifson (10 phút), rửa nước, để khô sau đó nhuộm với Methylene blue (5 phút), rửa nước,

để khô và quan sát dưới vật kính x100

2.2.5 Xác định tên tác nhân gây bệnh

- Đối với mầm bệnh là vi khuẩn:

Xác định tên của vi khuẩn căn cứ vào các đặc tính gram, chiên mao theo khóa phân loại của Dowson, 1939 (Hình 2.1)