NGHIÊN cứu ẢNH HƯỞNG của HOÁ CHẤT bảo vệ THỰC vật đến một số hệ IZOZYM ở NGƯỜI TIẾP xúc TRỰC TIẾP

BAO CAO TONG KET DE TAI NGHIEN CUU KHOA HOC Cấp quản lý đề tài: CẤP CƠ SỞ Don vi chủ trì: : KHOA BỆNH NGHỀ NGHIỆP VIỆN Y HỌC LAO ĐỘNG VÀ VỆ SINH MÔI TRƯỜNG Tên đề tài NGHIÊN CỨU ẢNH HUONG CUA ; HOA CHAT BAO VE THUC VAT DEN MOT SO HE IZOZYM Ở NGƯỜI TIẾP XÚC TRUC TIEP Chủ nhiệm đề tài Ths Tạ Thị Bình Cán thực đề tài TS Đặng Minh Ngọc CN Vũ Khánh Vân BS Định Thục Nga MUC LUC SO TRANG v71 53a5 .Ô - 222 S22 2H MỤC TIỂU NGHIÊN CỨU - l 22-22292222 2CEEE22EE2EEvrtEEEErrrtrrrrrrrree CHƯƠNG1-TỔNG QUAN TÀI LIỆU -1.1 Tình hình nhiễm độc rơi -ẶẶĂQ cà HCBVTV 1.2 Đại cương 170ZVm IV 7s ch VÀ H1 nh 1.2.2 Izozym Lactatdehyrogenase - Ăn CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tượng nghiên CỨU -á sóc HH HH HH Ho ri 10 2.2 Phương pháp nghiên cứu .- 5-5 SH HH rưưn 10 CHƯƠNG 3- KẾT QUÁ VÀ BÀN LUẬN - 0222 cv 13 3.1 Các đặc điểm người lao động s22 c+2t2vvcerstrrrrrrrree 13 3.2 Kết điện di enzTm . 2< HH H11 1k rerrerrke 14 3.2.1 Kết phân tích hệ izozym BS5T -cccscrrerererrerrrree 14 3.2.2 Kết phân tích hệ ¡zozym LH -5 ccsesssevssvrsrsex 17 3.3 Kết xét nghiệm hoạt tính enzym ChE máu tồn phần cơng "01 20 3.4 So sánh hoạt tính ChE máu tồn phần số số huyết học với hệ CHO VIET TAT ACh: Acetylcholine AChE: Erythrocyte Cholinesterase PChE: Plasma Cholinesterase Cholinesterase EST: Esterase LDH: Lactatdehydrogenase HCBVTV: Hoá chất bảo vệ thực vật HC: Hồng cầu BC: Bạch cầu Hgb: Huyết sắc tố BCTT: Bạch cầu trung tính DAT VAN DE Việc sử dụng rộng rãi HCBVTV để tiêu diệt sâu hại cỏ dại van dé quan trọng thực tiễn nông nghiệp nước phát triển phát triển có hiệu cao việc tăng sản lượng trồng, bảo vệ giảm thiệt hại trước sau thu hoạch Tuy nhiên, việc sử dụng lan tràn HCBVTV nhiều khơng kiểm sốt dẫn tới làm ô nhiễm môi trường, thay đổi hệ sinh thái ảnh hưởng sâu sắc đến sức khoẻ người, đặc biệt người thường xuyên phải tiếp xúc với nhiều loại thuốc trừ sâu nhiều năm, chí hàng chục năm nghề nghiệp Nước ta có 80% dân số sản xuất nông nghiệp, việc sử dụng HCBVTV vấn đề lớn Hiện nay, việc sản xuất HCBVTV nước ta chủ yếu nhập nguyên liệu gia công pha chế nhập thuốc thành phẩm bao gói lớn sang chai đóng gói thành bao gói nhỏ Cả nước có khoảng 30 cơng ty 20 nhà máy xí nghiệp quốc doanh sản xuất kinh doanh HCBVTV sản lượng sở lớn đạt từ 1000- 1500 tấn/ năm [3] Cùng với việc tăng số người sử dụng HCBVTV nhiều ngành nghề khác nhau, số người trực tiếp sản xuất sở gia cơng đóng gói tăng lên nhanh chóng, điều kiện lao động đa số sở gia cơng đóng gói HCBVTV chưa đảm bảo, hiểu biết độc tính tác hại HCBVTV cơng nhân hạn chế, trang bị bảo hộ lao động thiếu hiệu đẫn đến ảnh hưởng xấu tiểm tàng tới sức khoẻ người lao động, tình hình đáng lưu ý thiếu liệu hậu lâu dài việc tiếp xúc với HCBVTV Hơn nữa, số HCBVTTV tác nhân gây đột biến, ảnh hưởng đến máy di truyền, đến hệ gen, đến enzym chuyển hoá Enzym chất xúc tác sinh học có chất protein Izozym hệ enzym xúc tác đặc hiệu cho phản ứng hoá học, chúng có cấu trúc phân tử khác tính chất lý hố học khác Dưới ảnh hưởng hố chất độc hại trình tự axitamin chuỗi polypeptit bị rối loạn, phân tử protein enzym bị biến dạng làm thay đổi, giảm chí bất hoạt enzym, ảnh hưởng đến q trình chuyển hố theo hướng có hại Với mong muốn phát ảnh hưởng lâu đài HCBVTV đến hoạt động enzym trình trao đổi chất, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng HCBVTV đến số hệ izozym người tiếp xúc thường xuyên nhóm chứng MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Xác định đặc điểm số hệ izozym người bình thường khơng tiếp xúc nghề nghiệp với HCBVTV Đánh giá so sánh đặc điểm hệ ¡zozym người tiếp xúc không tiếp xúc nghề nghiệp với HCBVTV So sánh hoạt tính ChE máu toàn phần số số huyết học với hệ izozym CHUONG TONG QUAN TAI LIEU 1.1 Tinh hình nhiễm độc HCBVTV Lợi ích HCBVTV mang lại thật to lớn, song dùng không quy định lạm dụng, HCBVTV gây lên tác động xấu đến sức khoẻ môi trường sống Trước hết người sử dụng sản xuất HCBVTV Theo WHO trén giới hàng năm số lượng người bị nhiễm độc cấp tính HCBVTV lên đến triệu người, theo Jeyaratnam số phải xấp xi 25 triệu người Mỹ có khoảng triệu cơng nhân nơng nghiệp, hàng năm có 90.000 người bị nhiễm độc [16,19] Sự tiếp xúc lâu dài dẫn đến nhiễm độc mạn tính Nhưng quan trọng tiếp xúc nghề nghiệp suốt trình lao động làm xuất tổn thương di truyền tế bào, tốn thương nhiễm sắc thể [18] Năm 1973, Yoder cộng phát phá huỷ nhiễm sắc thể tăng lên người phun thuốc diệt côn trùng thuốc điệt cỏ vụ mùa [14] Người ta tìm thấy ảnh hưởng lên hệ thống miễn dịch nguyên nhân dicophol, lân hữu triclophol Người ta nhận thấy vô sinh nam giới ảnh hưởng sinh sản khác, số loại HCBV'TV có khả gây ung thu [18] Sự sống trình trao đổi chất liên tục, trao đổi chất ngừng sống khơng cịn tồn Để thực trao đổi chất, thể sống tự tổng hợp cho hệ thống enzym theo nhu cầu thể Ở thể có vắng mặt, thiếu hụt (hoặc số) gen gen bị đột biến khơng hoạt động bình thường tổng hợp enzym tương ứng khơng thực bị giảm sút đi, kết dẫn đến gián đoạn rối loạn trình chuyển hố có liên quan Sự cảm ứng hệ thống enzym oxy hố khử, hệ enzym đóng vai trị quan trọng chuyển hố hơ hấp tế bào, lần thử nghiệm tế bào gan động vật cho chúng tiếp xúc thường xuyên với HCBVTV [4] Sự thay đổi cấu trúc tế bào gan động vật thực nghiệm liên quan đến giảm hoat tinh cha lactac dehydrogenase, gluco 6phosphat dehydrogenase, alanin aminotranferase, malic enzym, esterase va glutation- S transferase [20] Hunter cộng (1971) chứng minh có tăng chuyển hố axit D- Glutamic cơng nhân sản xuất aldrin, dieldrin, endrin [14] Banerjee cho rằng, hoạt động superoxit dismutase, catalase, glutation perosidase, glutation — S transferase va glutamyl transpeptidase thi tang dé glutation giảm người nhiễm độc HCBVTV [15] Theo James Bus, HCBVTV hoá chất lạ xâm nhập vào thể phải trải qua hàng loạt phản ứng chuyển hoá Kết tạo hàng loạt gốc tự dạng hoạt động như: OH*, O,*, H;O, Sự hình thành nhiều gốc tự nguyên nhân gây tổn hại hoạt động chức tế bào chúng có xu hướng kết hợp với đại phân tử axit nucleic, polysacarit, lypit đặc biệt protein enzym [18] Ngày nay, song song với việc tìm biện pháp khống chế sâu hại gây ảnh hưởng tới sức khoẻ người nghiên cứu giới tập trung vào tác hại HCBVTV đến môi trường, người mức độ phân tử Ở Việt nam, số tác giả quan tâm đến ảnh hưởng HCBVTV hệ izozym thực nghiệm Tác giả Trịnh Đình Đạt cộng nghiên cứu ảnh hưởng ô nhiễm mơi trường đến hệ izozym có liên quan đến tính kháng thuốc trừ sâu số quần thé muéi Culex Quinquefasciatus [2] Các tác giả Vũ Thị Loan, Trịnh Đình Đạt nghiên cứu thực nghiệm ảnh hưởng trường diễn thuốc trừ sâu Monitor lên hệ enzym tế bào gan, thận chuột trắng Musculus Kết cho thấy liều trường diễn Monitor làm giảm cách rõ rệt tân số cấu tử điện di hàm lượng esterase tổng số làm tổn thương tế bào gan, thận từ mức thoái hoá hạt đến tan rã, hoại tử tế bào [4] Ở Việt Nam, chưa có nghiên cứu tìm hiểu sâu ảnh hưởng HCBVTV đến hoạt động trao đổi chất khả ảnh hưởng đến hệ gen người tiếp xúc mạn tính Những ảnh hưởng mặt sinh hố địi hỏi việc sử dụng cách có hệ thống test đặc hiệu mà khơng phải lúc sẵn có thường xuyên thực địa Các thử nghiệm tác động tới di truyền đột biến nhiễm sắc thể chí cịn khó khăn đ hỏi trang thiết bị kỹ thuật đại, phức tạp Trong điều kiện phịng thí nghiệm cho phép chúng tơi thăm dò sơ đặc điểm số locus izozym máu toàn phần phương pháp điện di nhầm đánh giá cách khái quát ảnh hưởng HCBVTV lên hoạt động số hệ izozym 1.2 Đại cương ïzozym Khái niệm izozym xuất phát từ việc khám phá tính đa dạng (polymorphism) hàng loạt enzym khác thể động vật, thực vật vi sinh vật Để định nghĩa xác tên gọi izozym điều khó khăn Nhiều tác giả định nghĩa cho thuật ngữ Markert Moller Khái niệm họ đưa lần vào năm 1959 Nhưng định nghĩa Albert L.Leninger (1968) phổ biến cả: “Izozym protein khác xúc tác cho phan img “ Sự da dang cia phan tử enzym nhiều nguyên nhân: Những dạng phân tử vốn có đặc điểm cấu tạo thể, dạng phân tử đột biến gen cấu trúc, dạng phân tử phát sinh cấu tạo polyme đơn vị hợp thành phân tử enzym tạo đồng phân hình dạng khơng gian Với trình độ khoa học kỹ thuật ngày phát triển có nhiều phương pháp để nghiên cứu tính đa hình izozym Từ phương pháp đơn giản như: phương pháp kết tủa, phương pháp pha loãng, phương pháp đo độ nhớt, phương pháp làm hoạt tính nhiệt độ , đến phương pháp phức tạp như: phương pháp sắc kí (Chromatography), phương pháp điện di (Electrophoresis) phương pháp ghi hình (Scanning) Tuy nhiên, phương pháp phổ biến sử dụng để phát dạng phân tử enzym phương pháp điện di nhiều loại chất giá khác (màng acetat cellulose, gel tỉnh bột gel polyacrylamid) Nguyên tắc phương pháp đặt chất liệu nghiên cứu chất giá điện đi, dùng tác dụng đòng điện để phân tách dạng phân tử enzym đưới điều kiện thích hợp với chất giá điện di loại enzym, điện áp, cường độ đồng điện, thời gian chạy điện di Sau kết thúc trình điện di, phải tiến hành phản ứng để phát enzym đồ Các dung dịch phản ứng phải bao gồm chất tuỳ loại phải có thêm coenzym chất ốn định, chất hoạt hố, ngồi phải có thuốc nhuộm thích hợp làm hình băng hoạt tính để phát enzym đồ [5] Từ hiểu biết izozym người ta đánh giá tầm quan trọng việc nghiên cứu chúng để phục vụ cho nhiều lĩnh vực khác như: phân loại động thực vật, xác định mối quan hệ loài, nghiên cứu tính đa hình truyền, nghiên cứu q trình sinh lý, sinh hố thể sinh vật Trên sở tìm hiểu chế kháng thuốc, người ta xác định số enzym có liên quan đến việc làm hiệu số HCBVTV như: malathion, nhóm lận hữu cơ, carbamat Nhiều nơi Thế giới đưa biện pháp thay chủng loại HCBVTV cách sử dụng hỗn hợp chất hoá học với thuốc thảo mộc, thuốc sinh học nhờ góp phần làm giảm nhiễm mơi trường ảnh hưởng đến sức khoẻ người Những nghiên cứu izozym lĩnh vực y học đạt kết triển vọng Hiện xuất hàng loạt cơng trình nghiên cứu hố sinh lâm sàng biến đổi ¡zozym huyết bệnh nhân có ý nghĩa chẩn đoán phân biệt Stark Waether Shock (1962) phát thấy phân bố loại izozym LDH có chiều hướng tăng theo thời gian khối u số quan, phân tích hệ izozym amylase huyết có ý nghĩa chẩn đốn bệnh Ngồi ra, nghiên cứu izozym cịn dùng để xác định thành phần nhân chủng số tộc người Việt nam góp phần đưa thơng số sinh học người Việt Nam 1.2.1 Izozym esterase Esterase thuộc lớp hydrolase xúc tác cho phản ứng phân giải tổng hợp este theo sơ đồ: ROOR,+ HOH «— RCOOH + R,OH Thuc nghiém cho thay cé nhém esterase: Arylesterase (A.esterase); Aliesterase (B.esterase) va Cholinesterase (ChE)(C.esterase) Cholinesterase cé tác dụng mạnh cholineste thuỷ phân este mạch thẳng este thơm không dễ dàng hai nhóm Phân tích phổ Izozym esterase đánh giá đặc tính di truyền lồi C esterase có hai loại ⁄ mau: ... ảnh hưởng đến q trình chuyển hố theo hướng có hại Với mong muốn phát ảnh hưởng lâu đài HCBVTV đến hoạt động enzym trình trao đổi chất, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng HCBVTV đến số hệ izozym người. .. việc tiếp xúc với HCBVTV Hơn nữa, số HCBVTTV tác nhân gây đột biến, ảnh hưởng đến máy di truyền, đến hệ gen, đến enzym chuyển hoá Enzym chất xúc tác sinh học có chất protein Izozym hệ enzym xúc. .. hại gây ảnh hưởng tới sức khoẻ người nghiên cứu giới tập trung vào tác hại HCBVTV đến môi trường, người mức độ phân tử Ở Việt nam, số tác giả quan tâm đến ảnh hưởng HCBVTV hệ izozym thực nghiệm