Ứng dụng kỹ thuật REALTIME PCR trong chẩn đoán bệnh sốt mf ở người do vi khuẩn ORIENTIA TSUTSUGAMUSHI

BỘ GIÁO DỤ DỤC VÀ ĐÀO TẠ TẠO VIỆ VIỆN ĐẠ ĐẠI HỌ HỌC MỞ MỞ HÀ NỘ NỘI VŨ NGỌ NGỌC LIÊN ỨNG DỤ DỤNG KỸ KỸ THUẬ THUẬT REALTIME PCR TRONG CHẨ CHẨN ĐOÁN BỆ BỆNH SỐ SỐT MÒ Ở NGƯỜ NGƯỜI DO VI KHUẨN ORIENTIA TSUTSUGAMUSHI Chuyên ngành: Công nghệ nghệ sinh họ học Mã số số:60420201 LUẬ LUẬN VĂN THẠ THẠC SĨ SĨ Hướng dẫn khoa học: học: TS TS Lê Thị Hội HÀ NỘ NỘI 2016 LỜI CẢ CẢM ƠN Trước hết xin bày tỏ lòng tri ân sâu sắc tới TS.Lê Thị Hội người thầy, người hướng dẫn khoa học, tận tình giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập, trực tiếp hướng dẫn thực nghiên cứu, góp ý sữa chữa luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - Ban Giám hiệu phòng Đào tạo Sau Đại học Viện Đại học Mở Hà Nội - Ban Giám đốc Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương - Khoa Xét nghiệm, Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương Đã tạo điều kiện tốt giúp đỡ suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy cô, đồng nghiệp, động viên giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn tới cha mẹ người thân gia đình, đặc biệt chồng trai cảm thơng chia sẻ hết lòng tơi sống đường nghiên cứu khoa học Hà Nội, ngày 15 tháng 12 năm 2016 Vũ Ngọ Ngọc Liên LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình ngun cứu tơi hướng dẫn thầy cô hướng dẫn Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình Tác giả giả luậ luận văn Vũ Ngọ Ngọc Liên DANH MỤ MỤC CÁC CHỮ CHỮ VIẾ VIẾT TẮ TẮT DNA - Deoxyribonucleotid acid dNTP - Dideoxynucleosid triphosphate ELISA - Enzyme Linked Immunosorbent Assay -Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch gắn men IgG - Immunoglobulin G IgM - Immunoglobulin M IIP - Indirect Immunoperoxidase– Xét nghiệm kháng thể miễn dịch oxy hóa gián tiếp kDa - Kilo Dalton O tsutsugamushi - Orientiatsusugamushi PCR - Polymerase Chain Reaction - Phản ứng khuếch đại chuỗi gen RFA - Rapid Flow Assay -Xét nghiệm thẩm thấu nhanh r56 - Kháng nguyên 56kDa tái tổ hợp MỤC LỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỀ LỊCH SỬ BỆNH SỐT MÒ 1.3 TÁC NHÂN GÂY BỆNH SỐT MÒ: VI KHUẨNORIENTIA TSUTSUGAMUSHI 1.4 DỊCH TỄ HỌC BỆNH SỐT MÒ 1.4.1 Nguồn bệnh 1.4.2 Trung gian phương thức truyền bệnh 1.5 SINH BỆNH HỌC CỦA BỆNH SỐT MÒ 11 1.6 BIỂU HIỆN LÂM SÀNG 12 1.6.1 Thời gian ủ bệnh 12 1.6.2 Thời kỳ khởi phát bệnh 12 1.6.3.Thời kỳ toàn phát 12 1.6.4.Thời kỳ hồi phục 15 1.7 ĐIỀU TRỊ VÀPHÒNG BỆNH 15 1.7.1 Điều trị đặc hiệu 15 1.7.2 Điều trị hỗ trợ 17 1.7.3 Phòng bệnh 17 1.8 XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN 17 1.8.1 Các phương pháp nuôi cấy phân lập Orientia 17 1.8.2 Các phương pháp chẩn đoán huyết học 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 26 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 26 2.1.3 Tiêu chuẩn chọn mẫu 26 2.2 VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Dụng cụ, trang thiết bị 28 2.2.2 Hóa chất 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.3.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 2.3.2 Tách chiết lớp tế bào máu đơn nhân ngoại vi (PBMC) 30 2.3.3 Tách chiết DNA 31 2.3.4.Thiết kế cặp mồi probe 32 2.3.5 Thành phần phản ứng (Master mix) 33 2.3.6 Chu kỳ nhiệt phản ứng Realtime PCR 34 2.3.7 Nhận định phân tích kết 34 2.3.8 Phương pháp xác định độ đặc hiệu phản ứng 34 2.3.9 Phương pháp xác định độ nhạy phản ứng 35 2.3.10 Phương pháp đánh giá hiệu chẩn đoán phương pháp mẫu bệnh phẩm lâm sàng 35 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 36 3.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC CỦA BỆNH SỐT MÒ 36 3.1.1 Tuổi giới bệnh nhân nghi ngờ nhiễm sốt mò 36 3.2 Phân bố bệnh nhân nghi ngờ sốt mò theo tháng 38 3.2 XÂY DỰNG QUY TRÌNH REALTIME PCR XÁC ĐỊNH O TSUTSUGAMUSHI 40 3.1.2.Độ nhạy phản ứng RT-PCR DNA tổng số tách từ chủng vi khuẩn Orientia tsutsugamushi nuôi cấy 40 3.1.3 Độ đặc hiệu phản ứng 43 3.3 ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP REALTIME PCRXÁC ĐỊNH VI KHUẨN O TSUTSUGAMUSHITRỰC TIẾP TỪ MẪU BỆNH PHẨM 45 3.1.1 Tách chiết DNA 45 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 51 CHƯƠNG 5: KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Bảng phân loại bệnh Ricketssia [3], [14], [26], [29], [31] Bảng 2.1: Các máy thiết bị 28 Bảng 2.2: Trình tự mồi probe sử dụng cho kỹ thuật Realtime PCR 33 Bảng 3.1: Phân bố bệnh nhân theo giới 36 Bảng 3.2: Phân bố bệnh nhân sốt mò theo lứa tuổi 37 Bảng 3.3 Phân bố bệnh nhân nghi ngờ sốt mò theo tháng 38 Bảng 3.4: Nồng độ độ tinh DNA 40 Bảng 3.5: Độ nhạy phản ứng RT-PCR plasmid tách dòng 43 Bảng 3.6: Độ đặc hiệu phản ứng Realtime PCR 44 Bảng 3.7 Tỷ lệ bệnh nhân nghi ngờ sốt mò sử dụng phương pháp Realtime PCR 46 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1:O tsutsugamushi (dấu mũi tên) tiêu nhuộm Diff-Quick Hình 1.2: Chu kỳ lây nhiễm bệnh sốt mò 10 Hình 1.3:Hình ảnh tín hiệu huỳnh quang sau chu kỳ Real-time PCR 24 Hình 2.1 : Kit tách chiết DNA 29 Hình 3.1: Phân bố bệnh nhân theo giới 37 Hình 3.2: Phân bố bệnh nhân nghi ngờ nhiễm sốt mò theo lứa tuổi 38 Hình 3.3: Phân bố bệnh nhân nghi ngờ sốt mò theo tháng 39 Hình 3.4: Đường chuẩn Realtime-PCR từ DNA tổng số tách chiết từ chủng vi khuẩn Orientia tsutsugamushi nuôi cấy 41 Hình 3.5: Đồ thị khuếch đại mẫu vi khuẩn nuôi cấy pha lỗng 42 Hình 3.6: Kết xác định độ đặc hiệu phản ứng Realtime-PCR 44 Hình 3.7: Tỷ lệ bệnh nhân nghi sốt mò sử dụng phương pháp Realtime PCR 46 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 56-ric 03 57-ric 03 58-ric 03 59-ric 03 60-ric 03 61-ric 03 62-ric 03 63-ric 03 64-ric 03 65-ric 03 66-ric 03 67-ric 03 68-ric 03 69-ric 03 70-ric 03 71-ric 03 72-ric 03 73-ric 03 73*-ric 03 74-ric 03 74*-ric 03 75-ric 03 77-ric 03 78-ric 03 79-ric 03 80-ric 03 81-ric 03 82-ric 03 83-ric 03 84-ric 03 115-ric 03 117-ric 03 118-ric 03 119-ric 03 120-ric 03 121-ric 03 123-ric 03 32 31.4 17.8 17.7 32.3 17.9 32.2 17.8 30.2 19.2 22.5 25.7 19.8 17.2 25.6 33.1 17.6 19.6 27.4 30.1 28.9 19.5 23.6 18.7 22.6 23.6 30.1 17.7 32.1 31.2 22.9 18.6 23.4 19.7 17.7 22.4 31 1,79 1,80 1,81 1,82 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,89 1,90 1,91 1,92 1,81 1,82 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,89 1,90 1,91 1,92 1,93 1,94 1,95 1,96 1,87 1,88 1,89 1,90 1,91 1,92 1,71 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 124-ric 03 125-ric03 126-ric03 126*-ric03 85-ric03 86-ric03 87-ric03 88-ric03 90-ric03 91-ric03 92-ric03 94-ric03 95-ric03 96-ric03 97-ric03 98-ric03 99-ric03 100-ric03 101-ric03 102-ric03 103-ric03 104-ric03 127-ric03 127*-ric03 128-ric03 129-ric03 131-ric03 132-ric03 133-ric03 134-ric03 135-ric03 135*-ric03 136-ric03 136*-ric03 137-ric03 137*-ric03 138-ric03 31.2 26.8 22.9 28.4 29.1 18.6 17.9 26.5 26.9 22.5 33.1 32.2 26.4 18.1 19.6 22.5 24.7 17.7 19.5 18.6 20.6 21.9 23.5 26.9 17.56 19.8 20.3 25.6 29.5 32.2 27.7 17.63 22.3 17.65 32.5 29.8 17.8 1,72 1,73 1,74 1,75 1,76 1,77 1,78 1,82 1,80 1,81 1,82 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,89 1,90 1,91 1,81 1,82 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,80 1,81 1,82 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 138*-ric03 139-ric03 140-ric03 141-ric03 141*-ric03 143-ric03 144-ric03 145-ric03 146-ric03 147-ric03 148-ric03 149-ric03 150-ric03 152-ric03 153-ric03 154-ric03 155-ric03 156-ric03 157-ric03 158-ric03 161-ric03 162-ric03 163-ric03 164-ric03 165-ric03 166-ric03 167-ric03 168-ric03 169-ric03 170-ric03 171-ric03 172-ric03 173-ric03 174-ric03 175-ric03 177-ric03 178-ric03 18.2 19,4 32.1 33.1 18.2 18.93 22.5 30.2 17.5 22.5 32 21.9 23.5 26.9 17.6 19.2 17.8 25.6 29.5 32.2 27.7 17.7 22.3 17.2 32.5 29.8 17.9 18.2 19.4 32.1 33.5 18.2 18.6 22.5 30.2 17.5 31 1,89 1,90 1,91 1,92 1,93 1,94 1,95 1,96 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1.82 1.82 1.82 1.82 1.82 1.82 1,86 1,94 1,79 1,82 1,79 1,84 1,86 1,85 1,88 1,90 1,87 1,88 1,99 1,80 1,81 1,82 1,83 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 176-ric03 179-ric03 181-ric03 182-ric03 183-ric03 184-ric03 185-ric03 186-ric03 187-ric03 188-ric03 189-ric03 191-ric03 192-ric03 193-ric03 194-ric03 195-ric03 196-ric03 197-ric03 198-ric03 199-ric03 200-ric03 22.5 24.7 17.7 19.5 18.6 20.6 21.9 23.5 26.9 17.56 19.8 20.3 25.6 29.5 32.2 27.7 17.63 22.3 17.65 32.5 29.8 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,89 1,90 1,91 1,92 1,93 1,94 1,95 1,96 1,97 1,83 1,84 1,85 1,86 1,87 1,88 1,89 DANH SÁCH BỆ BỆNH NHÂN Patient logbook ID 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Patients name Trần Thị T Nguyễn Thị Ph Lê Thị Thanh B Nguyễn Thị L Ngô Văn Th Nguyễn Thị Th Trần Thị H Nguyễn Thị Th Bùi Thị T Trần Thị L Lăm Ph Trần Thị L Nguyễn Thị M Nguyễn Thị T Phạm Ngọc H Lương Thị M Nguyễn Thị Bích Ng Nguyễn Đức Tr Nguyễn Thị L Phạm Thị D Trịnh Văn H Phạm Thị H Nguyễn Văn H Nguyễn Thị L Nguyễn Ngọc M Lê Thị Kim Th Vũ Thị Ch Cao Thị Ng Phùng Đạt Tr collection date Age 8/1/2016 13/1/2016 1/3/2016 13/5/2016 13/5/2016 11/5/2016 12/5/2016 12/5/2016 18/5/2016 19/5/2016 19/5/2016 19/5/2016 24/5/2016 24/5/2016 27/5/2016 30/5/2016 58 51 46 55 18 61 1957 1963 76 37 1973 1979 26 53 62 1960 Sex F F F F M F F F F F M F F F M F 47 AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT DT DT DT DT DT DT 31/5/2016 31/5/2016 26 26 63 56 24 56 24 76 27 39 63 71 22 F M F F M F M F M F F F M AT DT DT DT DT DT AT DT DT AT DT DT AT 31/5/2016 19/5/2016 25/5/2016 22/6/2016 22/6/2016 28/6/2016 7/7/2016 8/7/2016 6/7/2016 13/7/2016 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 Đặng Thị M Lò Thị Ph Nguyễn Thị Th Phạm Thị S Nguyễn Thị Kh Nguyễn Thị B Đỗ Thị Ph Phùng Thị S Phạm Thị M Vũ Thị H Lê Văn Đ Võ Thị Ph Nguyễn Thị C Đinh Ngọc Th Hoàng Thị L Lê Thị H Nguyễn Thị Ng Vũ Thị Ch Nguyễn Cát S Trịnh Hồng C Ngô Văn C Nguyễn Duy V Đỗ Thị Nh Vũ Thị H Nguyễn Thị L Trần Thị S Hồ Bá C Phạm Thị Sang A Nguyễn Thị H Nguyễn Việt Th NguyỄN Ngọc Á Trương Thị H Dương Thị G Nguyễn Xuân Th Phạm Minh Q Đinh Hoàng A Nguyễn Thị Y 20/7/2016 20/7/2016 21/7/2016 27/7/2016 18/8/2016 22/8/2016 9/9/2016 13/9/2016 14/9/2016 4/10/2016 4/10/2016 4/10/2016 10/10/2016 14/10/2016 14/10/2016 20/10/2016 3/11/2016 14/11/2016 20/3/2015 5/4/2015 20/4/15 20/4/15 24/4/15 4/5/2015 16/5/2015 26/5/15 20/5/15 22/5/15 26/5/15 2/6/2015 5/6/2015 8/6/2015 2/7/2015 2/7/2015 19/7/15 25/8/115 28/8/15 50 27 81 81 60 81 1939 50 1959 1958 46 78 83 1937 1964 1972 1962 69 36 76 68 33 50 22 63 55 37 36 42 33 74 37 48 20 29 53 M F F F F F F F F F M F F F F F F F M M M M F F F F M F F M F F F M F M F AT AT AT DT DT DT DT AT AT AT AT AT DT DT AT AT DT AT AT AT AT AT DT AT AT DT AT AT AT AT DT AT DT DT AT AT DT 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 Hoaàng Thị H Nguyễn Thị Tr Đỗ Thị Th NguyỄN Hồng Q Nguyễn Quang Đ Choong Nhí M Hồng THị D Hoàng Thế L Ứng Quang Th Nguyễn Đăng S Nguyễn Thị Đ Nguyễn Phúc Th Trần Văn Ngh Nguyễn Văn C Đặng Thị L Lê Quang Đ Nguyễn Minh K Phạm Thị Ng Trương Thị L Nguyễn Thị Đ Đinh Văn Đ Nguyễn Văn H Bùi Sỹ D Lê Minh T Võ Thị H Hoàng Thị Mỹ H Lê Anh V Phạm Minh Đ Tạ Thị S Trần Việt Ph Đinh Công M Lê Tuấn Th Bùi Thị Thanh Th Trần Thị Đ Lê Thị H Lương Văn M Lê Thanh H 31/8/15 9/9/2015 30/9/15 12/10/2015 21/10/15 9/10/2015 9/10/2015 4/11/2015 11/11/2015 11/11/2015 18/11/15 18/11/15 18/11/15 25/11/15 6/8/2015 7/8/2015 14/8/2015 17/8/2015 11/12/2015 5/1/2016 15/1/2015 5/2/2016 7/2/2016 7/2/2016 22/2/2016 8/3/2016 11/8/2016 21/3/2016 23/3/2016 1/4/2016 4/4/2016 17/4/2016 19/4/2016 23/4/2016 53 75 67 58 58 33 46 44 37 42 67 67 52 73 70 33 44 54 58 52 44 88 31 76 56 36 60 54 39 16 46 31 81 54 33 46 F F F M M F F M M M F M M M F M M F F F M M M M F F M M F M M M F M F M M AT DT AT DT DT AT AT AT AT AT DT DT AT AT AT AT AT DT AT DT AT DT DT DT DT AT DT DT DT AT DT AT DT DT DT DT AT 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 Nguyễn Hương G Phùng Xuân Kh Đỗ Trung Th Nguyễn Thiện R Phạm Linh Ch Trần Thị M Nguyễn Văn B Phạm Thị T Phùng Thị Á Hoàng Thị T Lê Văn T Đặng Xuân Tr Phạm Anh T Lương Trung Th Phạm Hùng Ph Nguyễn Minh H Đỗ Thị S Hà Thị Nh Đoàn Văn K Vàng A Ch Nguyễn Mạnh C Nguyễn Thi S Đáng Mùi D Nguyễn Thị L Ngô Văn Th Cấn Thị M Khuất Duy Đ Nguyễn Đức H Nguyễn Thanh H Nguyễn Đăng K Ngơ Đức C Hồng Quốc B Trần Nhật A Nguyễn Thị P Nguyễn Thị H Trần Đức B Lê Thị Nh 27/4/2016 11/5/2016 25/5/2016 25/5/2017 6/4/2016 6/6/2016 6/6/2016 9/6/2016 9/6/2016 15/6/2016 15/6/2016 17/6/2016 21/6/2016 19/7/2016 26/7/2016 27/8/2016 31/8/2016 3/9/2016 6/9/2016 7/9/2016 10/9/2016 13/9/2016 3/10/2016 3/10/2016 3/10/2016 21/10/2016 27/10/2016 21/10/2016 13/11/2016 30/3/15 9/4/2015 20/4/15 20/4/15 20/4/15 20/4/15 22/4/15 7/5/2015 86 34 62 25 67 55 76 49 20 65 32 24 35 34 44 76 34 50 19 48 61 16 57 60 68 52 76 57 28 31 59 45 67 53 52 32 F M M M F F M F F F M M M M M F F F M M M F M F M F M M F M M M M F F M F DT AT AT DT AT AT AT AT DT DT DT DT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT DT DT AT AT DT DT AT AT AT AT AT DT AT DT DT 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 Phạm Ngọc H Phan Thị C Lại Duy U Khuất Anh T Nguyễn Văn Ng Bùi Tố H Đỗ Văn Th Trần Thanh B Nguyễn Thị H Nguyễn Văn L Hoàng Văn H Trần Thị Ch Nguyễn Văn D Nguyễn Th Nguyễn Thị T Trần Đình L Bùi Thị Th Hà Văn Q Trịnh Thị Phương A Nguyễn Xuân H Nguyễn Văn V Đỗ Văn H Trần Văn C Nguyễn Thị Km O Nguyễn Đình Ch Nguyễn Cao B Vương Thị Ph Phạm Tiến S Phạm Văn V Nguyễn Thanh B Nguyễn Thị Than B Đỗ Trọng Th Nguyễn Văn D Mai Thị T Phạm Xuân H 12/5/2015 25/5/15 25/5/15 25/5/15 26/5/15 26/5/15 28/5/15 28/5/14 28/5/15 11/6/2015 11/6/2015 15/6/15 15/6/15 15/6/15 15/6/15 15/6/15 29/6/15 29/6/15 46 43 89 34 36 49 57 61 32 28 27 67 29/6/15 43 29/6/15 29/6/15 29/6/15 9/7/2015 10/7/2015 10/7/2015 10/7/2015 16/7/15 16/7/15 16/7/15/ 20/7/15 60 47 50 59 26 81 23 76 26 42 38 20/7/15 57 20/7/15 20/7/15 20/7/15 21/7/15 56 60 61 66 36 47 33 46 42 M F F M M M M M M M M F M M F M F M AT AT AT AT DT AT AT AT AT DT AT AT AT AT AT AT AT DT F M M M M F M M M M M F DT AT AT AT DT AT AT AT AT AT DT AT F F F F F AT AT AT AT AT 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 Trần Đình T Phạm Thị B Nguyễn Minh Đ Nguyễn Thị K Nguyễn Thị X Nguyễn Thị Th Nguyễn Thị T Đoàn Văn Q Nguyễn Bá Th Nguyễn Văn M Triệu văn S Nguyễn Văn L Dương Văn A Trần Thị D Lam Thị M Nguyễn Trọng C Vũ Ngọc O Trần Công L Tạ Đặng C Trần Văn L Nguyễn Thị M Đoàn VănT Trần Toàn S Nguyễn Thị T Tạ Thùy Ng Nguyễn Thị Q Nguyễn Văn K Trần Thị L Dương Thị H Lê Đức V Nguyễn Thị N Nguyễn Đức H Nguyễn Minh X Hoàng Mạnh Th Vũ Thị H Nguyễn Thị L Đỗ Văn T 21/7/15 21/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27/7/15 27.7.15 30/7/15 30/7/15 30/7/15 31/7/15 31/7/15 31/7/15 3/8/2015 3/8/2015 3/8/2015 3/8/2015 3/8/2015 3/8/2015 4/8/2015 3/8/2015 4/8/2015 3/8/2015 4/8/2015 4/8/2015 6/8/2015 6/8/2015 6/8/2015 6/8/2015 7/8/2015 10/8/2015 10/8/2015 10/8/2015 72 57 30 51 51 58 35 21 42 54 31 29 26 54 49 29 63 65 63 66 65 46 54 55 20 62 58 38 56 61 35 19 52 42 37 42 47 M F M F F F F M M M M M M F F M F M M M F M M F F F M F F M F M M M F F M AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT DT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 Đỗ Thị L Cù Văn Tr Nguyễn Thị H Nguyễn Văn H Lê Thị D Lê Thị L Lê Thị Đ Phạm Văn T Xuân Thị B Nguyễn Thị N Lâm Thị Nh Bùi Văn Ng Ngơ Tiến H Mạc Văn Th Cao Chính B Nguyễn Thị H Dương Thị H Trần Ngọc T Lâm Văn H Nguyễn Thị Vân A Đoàn Thị H Nguyễn Xuân T Đào Văn T Trần Thị T Phan Văn Th Quách Thị Th Nguyễn Thị Th Nguyễn Thị X Phạm Quốc H Nguyễn Thị Th Vũ Quang Tr Nguyễn Đức Th Nguyễn Đình T Nguyễn Đức M Đào Huy Th Chu Quang Th Nguyễn Văn D 14/10/15 16/10/15 16/10/15 20/10/15 20/10/15 21/10/15 23/11/15 23/11/15 27/11/15 27/11/15 30/11/15 11/8/2015 11/8/2015 11/8/2015 11/8/2015 13/8/2015 13/8/2015 13/8/2015 14/8/2015 17/8/2015 17/8/2015 18/8/2015 18/8/2015 18/8/2015 19/8/2015 19/8/2015 19/8/2015 20/8/2015 20/8/2015 14/1/2016 16/3/2016 16/3/2016 16/3/2016 18/3/2016 21/3/2016 29/3/2016 29/3/2016 27 29 36 38 62 63 65 68 58 62 35 79 41 27 59 47 56 65 36 35 34 52 34 63 38 62 33 52 42 53 26 34 33 54 58 30 55 F M F M F F F M F F F M M M M F F M M F F F F F M F F F M F M M M M M M M AT DT AT AT DT DT AT AT DT AT DT AT AT AT DT AT AT AT DT DT DT DT AT DT DT AT DT DT AT DT AT AT AT AT AT DT AT 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 Nghiêm Thị L Trần Thị H Lê Tuấn Th Phạm Văn Th Vũ Quốc Kh Vũ Thị L Phạm Đình Th Trần Thị Quỳnh Tr Phạm Trọng H Nguyễn Thị H Vương Trọng A Tống Thị H Nguyễn Văn Kh Tòng Thị X Trần Triệu H Đỗ Thị T Nguyễn Văn Tr Hoàng Tuấn Đ Lê Thị Y Phạm Thanh Y Phạm Thị Ph Nguyễn Văn L Nguyễn Việt D Phạm Bá Ph Nguyễn Văn Tr Nguyễn Thị Ch Trần Văn H Đinh Thị H Lê Thanh B Trịnh Thị H Nguyễn Thị S Phạm Thị K Dương Ngô Kh Phạm Thị B Lê Thị M Trần Văn D Nguyễn Ngọc Á 29/3/2016 1/4/2016 4/4/2016 4/4/2016 7/4/2016 12/4/2016 12/4/2016 7/4/2016 12/5/2016 4/5/2016 14/3/2016 4/5/2016 4/5/2016 4/5/2016 4/5/2016 5/5/2016 5/5/2016 9/5/2016 9/5/2016 9/5/2016 10/5/2016 16/5/2016 16/5/2016 16/5/2016 18/5/2016 18/5/2016 20/5/2016 24/5/2016 25/5/2016 25/5/2016 25/5/2016 27/5/2016 29/5/2016 29/5/2016 31/5/2016 31/5/2016 31/5/2016 56 57 46 26 46 56 40 38 34 59 59 39 27 23 72 51 33 27 39 42 20 42 21 61 39 47 44 20 27 35 55 54 42 63 31 51 57 F F M M M F M M M F M F M F M F M M F F F M M M M F M F F F F F M F F M F DT AT AT AT AT AT AT DT AT AT AT AT AT AT AT AT AT AT DT AT AT AT AT AT DT DT AT DT DT AT AT DT DT DT AT AT AT 287 288 289 290 291 292 293 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 Vũ Thị L Vũ Văn H Nguyễn Thị H Vũ Văn Th Lưu Văn L Dương Văn Kh Trần Thủy S Phùng Văn Ph Phan Đức H Nguyễn Văn Tr Phạm Văn V Đào Quyết Th Nguyễn Văn T Trần Thị T Nguyễn Văn B Đỗ Thị H Trường Trường Th Nguyễn Thị L Hàn Thị Hải Y Trần Văn B Nguyễn Văn H Ma Văn Th Trần Thị H Trần Quang V Nguyễn Văn T Nguyễn Văn H Phạm Thị H Trần Ngọc Q 3/6/2016 2/6/2016 3/6/2016 3/6/2016 6/6/2016 7/6/2016 7/6/2016 7/6/2016 8/6/2016 10/6/2016 13/6/2016 13/6/2016 13/6/2016 21/6/2016 23/6/2016 27/6/2016 26 49 50 20 50 46 45 67 45 49 58 48 65 58 46 48 F M F M M M M M M M M M M F M F AT AT DT AT AT AT AT DT AT AT DT AT AT DT DT AT 27/6/2016 27/6/2016 4/7/2016 4/7/2016 4/7/2016 17/8/2016 22/8/2016 22/8/2016 29/8/2016 29/8/2016 28/9/2016 28/9/2016 74 72 31 29 54 61 52 32 45 46 56 54 M F F M M M F M M M F M DT DT AT AT DT DT DT AT AT DT AT AT ... DỤNG KỸ THUẬ THUẬT REALTIME PCR TRONG CHẨ CHẨN ĐOÁN BỆ BỆNH SỐ SỐT MÒ Ở NGƯỜ NGƯỜI DO VI KHUẨN ORIENTIA TSUTSUGAMUSHI TSUTSUGAMUSHI” HI” với mục tiêu sau: Xây dự dựng quy trình kỹ kỹ thuậ thuật. .. ca bệnh nghi nghờ sốt mò lớn, nhiên chưa có phương pháp xác định xác vi khuẩn Orientia tsutsugamushi gây bệnh sốt mò áp dụng bệnh vi n sở y tế Do tính cấp thiết vậy, tiến hành đề tài: ỨNG DỤ DỤNG... RealReal-time PCR xác đị định vi khuẩ khuẩn Orientia tsutsugamushi Áp dụ dụng kỹ kỹ thuậ thuật RealReal-time PCR xác xác đị định vi khuẩ khuẩn Orientia tsutsugamushi trự trực tiế tiếp từ từ bệnh phẩ