Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu thử nghiệm Kit chuẩn đoán bệnh Gumboro trên đàn gà nuôi tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN TR NG I H C NÔNG LÂM NGUY N TH KI U TRANG Tên tài: NGHIÊN C U TH NGHI M KIT CH N OÁN B NH GUMBORO TRÊN ÀN GÀ NUÔI T I THÁI NGUYÊN KHÓA LU N T T NGHI P H t o: Chính quy Chun ngành: Ch n ni thú y Khoa: Ch n ni - Thú y Khố: 2011 – 2015 Thái Nguyên, 2015 IH C I H C THÁI NGUYÊN TR NG I H C NÔNG LÂM NGUY N TH KI U TRANG Tên tài: NGHIÊN C U TH NGHI M KIT CH N OÁN B NH GUMBORO TRÊN ÀN GÀ NI T I THÁI NGUN KHĨA LU N T T NGHI P H IH C t o: Chính quy Chun ngành: Ch n ni thú y L p: K43 - CNTY Khoa: Ch n nuôi - Thú y Khoá: 2011 – 2015 Gi ng viên HD: GS TS Nguy n Quang Tuyên ThS Bích Du Thái Nguyên, 2015 i L IC M N Trong su t trình h c t p rèn luy n t i tr ng i h c Nông Lâm Thái Nguyên c ng nh th i gian th c t p t t nghi p t i phòng thí nghi m B môn Công ngh Vi sinh - Vi n Khoa h c s s ng - i h c Thái Nguyên Em nh n c s quan tâm, h ng d n giúp t n tình c a th y, cô giáo Ban giám hi u nhà tr ng, Ban ch nhi m Khoa tồn th th y giáo khoa ã t n tình gi ng d y dìu d t em su t th i gian qua L i u tiên em xin c bày t lòng bi t n sâu s c n Ban giám hi u nhà tr ng, Ban ch nhi m khoa th y, giáo, cán b phòng thí nghi m B môn Công ngh Vi sinh - Vi n Khoa h c s s ng - i h c Thái Nguyên ã t o m i i u ki n giúp em hồn thành khóa lu n c bi t, em xin chân thành c m n sâu s c t i th y giáo GS.TS Nguy n Quang Tuyên, Th.s Bích Du ã tr c ti p giúp , h ng d n em hồn thành khóa lu n Qua ây em c ng xin bày t lòng bi t n sâu s c n gia ình, ng i thân, b n bè ng nghi p ã giúp , ng viên, dành nh ng tình c m vơ q báu giúp em hồn thi n khóa lu n t t nghi p Cu i em xin kính chúc th y, giáo tr ng th y cô khoa Ch n nuôi Thú y luôn m nh kh e, h nh phúc, t nhi u thành tích công tác nhi u thành công nghiên c u khoa h c gi ng d y Em xin chân thành c m n ! Thái Nguyên, ngày tháng n m 2015 Sinh viên Nguy n Th Ki u Trang ii DANH M C CÁC B NG Trang B ng 4.1 Xác nh hi u giá huy t n ng kháng nguyên t i u cho ph n ng ELISA (S/N) 45 B ng 4.2 K t qu OD450 ph n ng ELISA t i th i i m kháng th khác 46 B ng 4.3 K t qu OD450 ph n ng ELISA t i th i i m anti-bovine IgG:HRPO khác 47 B ng 4.4 Giá tr OD450 n ng B ng 4.5 K t qu th c hi n kháng th khác 49 a ELISA v i th i gian r a kháng th khác 50 B ng: 4.6 K t qu th c hi n ph n ng ELISA v i th i gian conjugate khác 52 B ng: 4.7 K t qu th c hi n a ELISA v i th i gian r a conjugate khác 53 B ng 4.8 K t qu ph n ng ELISA B ng 4.9 K t qu xác B ng 4.10 K t qu nh m c nh h xác nh nh y c hi u 54 l p l i k t qu ph n ng ELISA 55 ng c a nhi t th i gian n nh y c hi u c a KIT ELISA 58 iii DANH M C HÌNH Trang Hình 2.1: Hình thái c a virus Gumboro Hình 2.2: C u trúc phân t virus Gumboro Hình 2.3: H gen c a virus Gumboro Hình 2.4: Bi u hi n gà b nhi m virus Gumboro 11 Hình 2.5: Túi Fabicius m t nang lympho 14 Hình 2.6: Xu t huy t c ng c, c ùi 15 Hình 2.7 : Xu t huy t gi a d dày n d dày c 16 Hình 2.8: B nh tích phơi gà 20 Hình 2.9: Hình nh minh h a cho ph n ng ELISA 26 Hình 3.1 S a ph n ng ELISA xác Hình 3.2 S b trí thí nghi m nh hi u giá kháng th 40 xác nh th i gian r a kháng th phù ch n oán b nh Gumboro b ng KIT ELISA ch t o 41 h p Hình 3.3 S b trí thí nghi m xác Hình 3.4 S b trí thí nghi m xác nh th i gian conjugate 41 nh th i gian r a conjugate phù h p ch n oán b nh Gumboro b ng KIT ELISA ch t o 42 Hình 4.1 K t qu o OD450 ph n ng ELISA t i th i i m huy t khác 47 Hình 4.2 K t qu o OD450 ph n ng ELISA t i th i i m anti-bovine IgG:HRPO khác 48 Hình 4.3 th kh o sát n ng kháng th 49 iv DANH M C CÁC T VI T T T Ab : Antibody Ag : Antigen CAM : chorioallantic mem brance Cs : C ng s EIA : Enzyme Immuno Assay ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay Gs : Group Specific IB : Infecttious Brochitis IBDV : Infectious bursal disease virus Nxb : Nhà xu t b n ORF : overlapping open reading frame PCR : polymerase Chain Reaction RdRp : RNA dependent RNA polymerase RIA : Radio Immuno Assay Se : Sensitivity Sp : Specificity Ts : Type-Secific VP : Viral Protein v M CL C Trang L I C M N i DANH M C CÁC B NG ii DANH M C HÌNH iii DANH M C CÁC T VI T T T iv U Ph n 1: M 1.1 tv n 1.2 M c tiêu c a tài 1.3 Ý ngh a c a tài 1.3.1 Ý ngh a khoa h c 1.3.2 Ý ngh a th c ti n Ph n 2: T NG QUAN NGHIÊN C U 2.1 C s khoa h c 2.1.1 T ng quan v b nh Gumboro 2.1.2 T ng quan v ph ng pháp Enzym Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) 24 2.2 Tình hình nghiên c u ngồi n c 30 2.2.1 Tình hình nghiên c u th gi i 30 2.2.2 Tình hình nghiên c u n Ph n 3: IT c 32 NG, N I DUNG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 35 3.1 it 3.2 a i m th i gian ti n hành 35 3.2.1 ng nghiên c u 35 a i m 35 3.2.2 Th i gian 35 3.3 N i dung nghiên c u 35 vi 3.4 Ph ng pháp nghiên c u ch tiêu theo dõi 35 3.4.1 Nguyên li u 35 3.4.2 Thi t b hóa ch t 35 3.4.3 Ph ng pháp nghiên c u 36 3.4.4 Ph ng pháp x lý s li u 44 Ph n 4: K T QU VÀ TH O LU N 45 4.1 K t qu xác nh i u ki n s n xu t KIT ch n oán huy t h c t kháng nguyên Gumboro 45 4.1.1 Xác nh hàm l ng kháng ngun pha lỗng kháng th thích h p cho ph n ng ELISA 45 4.1.2 Xác nh s nh h ng c a th i gian kháng th n k t qu ph n ng ELISA 46 4.1.3 Xác nh th i gian a ELISA v i kháng th c hi u c a virus Gumboro anti-bovine IgG: HRPO 47 4.1.4 Xác nh ch n oán b nh Gumboro pha loãng kháng th phù h p b ng KIT ELISA ch t o 48 4.1.5 Xác ch n oán b nh Gumboro nh th i gian r a kháng th phù h p b ng KIT ELISA ch t o 50 4.1.6 Xác nh th i gian conjugate phù h p ch n oán b nh Gumboro b ng KIT ELISA ch t o 51 4.1.7 Xác nh th i gian r a conjugate phù h p ch n oán b nh Gumboro b ng KIT ELISA ch t o 53 4.2 ánh giá nh y, 4.2.1 K t qu ánh giá c hi u c a KIT ELISA ch t o 54 nh y, 4.2.2 Xác nh m c 4.3 ng c a nhi t nh h c hi u c a KIT ELISA ch t o 54 l p l i c a k t qu ph n ng 55 th i gian b o qu n n nh y, c hi u c a KIT ELISA ch t o 56 vii Ph n 5: K T LU N VÀ NGH 59 5.1 K t lu n 59 5.2 ngh 59 TÀI LI U THAM KH O PH L C Ph n M 1.1 U tv n Ch n nuôi gà ngh s n xu t truy n th ng lâu i chi m v trí quan tr ng th hai sau ch n nuôi l n ngành ch n nuôi c a Vi t Nam, h ng n m cung c p kho ng 350 - 450 nghìn t n th t h n 2,5 - 3,5 t qu tr ng Tuy nhiên, ch n ni gà nu c ta v n tình tr ng s n xu t nh , phân tán, n ng su t th p, d ch b nh nhi u, s n ph m hàng hố nh Bình quân s n l ng th t x , tr ng ch t 4,5 - 5,4 kg/ngu i/n m 35 tr ng/ ngu i/ n m Trong vài th p k qua, m c dù công tác ch n gi ng ã c i thi n m t cách k thành tích s n xu t ch n nuôi gà nh t ng tr ng nhanh, hi u qu s d ng th c n cao, kh n ng s n xu t th t t t, t l th t ng c cao h n nh ng s t ng nhanh v n ng su t s n xu t ã i v i vi c t ng d ch b nh, d n n gà b m c nhi u b nh v r i lo n chuy n hóa m c nhi u b nh truy n nhi m, t l ch t cao Trong ó có th k n b nh Gumboro m t l virus thu c h Birnaviridae, serotype 1, chúng có kh n ng phá hu túi Fabracius, ó làm gi m kh n ng mi n d ch c a gà Nhi u báo cáo khoa h c ã cho bi t gà giai an t - 12 tu n tu i, nh t giai an - tu n tu i u có kh n ng m c b nh Gà nh h n tu n tu i m c b nh không bi u hi n tri u ch ng nh ng s làm gà suy gi m mi n d ch T l m c b nh 100%, t l ch t t 10 – 50% ho c cao h n n u k t h p v i b nh khác Do tính ch t gây b nh c tr ng c a virus lây lan r t nhanh không th ki m sốt b ng hóa ch t hay b t k ph ng thu c mà ch có th kh c ph c b ng bi n pháp phòng tr Vì v y thi t h i b nh Gumboro gây ... hi u nhà tr nuôi Thú y - Tr ng nêu trên, ng, Ban ch nhi m khoa Ch n i h c Nông Lâm Thái Nguyên, em ã th c hi n tài Nghiên c u th nghi m KIT ch n oán b nh Gumboro àn gà nuôi t i Thái Nguyên 1.2...I H C THÁI NGUYÊN TR NG I H C NÔNG LÂM NGUY N TH KI U TRANG Tên tài: NGHIÊN C U TH NGHI M KIT CH N OÁN B NH GUMBORO TRÊN ÀN GÀ NUÔI T I THÁI NGUYÊN KHÓA LU N T T NGHI P... c a ph n t nh Thái Nguyên, s d ng 100 m u huy t gà thí nghi m, ó có: 57 m u d K t qu nh y d ng kháng nguyên ông tan i u ch Gumboro gà kháng nguyên nh Các m u huy t gà gây nhi m Gumboro 54 03