Nghiên cứu chiết xuất dầu dừa tinh khiết bằng phương pháp enzym

Như vậy trong phổi dừa enzym đã được hình thành và thể hiện hoạt tính sớm hơn trong cơm dừa, Kết quả này cóthể góp phần trong lý giải về nguồn gốc của các enzym này trong quả dừa.. Kết q

* Quả chín khô

n: số mẫu, Min: trị số nhỏ nhất, Max: trị số lớn nhất, STDEV: Độ lệch

chuẩn, cv%: Hệ số biến sai

Biểu đồ 3.1: Tỉ lệ % các hợp phần của quả dừa

51

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH - HÓA HỌC VÀ sự HÌNH THÀNH CHAT BÉO TRONG CƠM DỪA

3.1.1 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SỈNH HÓA HỌC CỦA QUẢ DỪA.

Bảng 3.1: Trọng lượng quả và các bộ phận của quá *

ũ 2

Theo kết quả khảo sát (bảng 3.1, biểu đồ 3.1), quả đừa Ta xanh có trọng lượng trungbình là 1.620g, trong đó phần vỏ xơ nặng 565g, gáo 235g, nước dừa 410g và cơm dừa tươi410g Tỉ lệ cơm dừa chiếm khoảng 25% trọng lượng quả, thấp hơn đa sô" các giông dừa laitạo, đặc biệt là giống dừa cao của An Độ (33%) [106]

về thành phần câu tạo của cơm dừa, kết quả phân tích (bảng 3.2) cho thây ngoàithành phần chủ yếu là dầu (34,19 ± 0,72%), trong cơm dừa còn có những chất có giá trịdinh dưỡng khác là protein (4,19 ± 0,18%) và đường (đường tổng sô" 3,80 ± 0,17%).Thành phần polysaccharide không tan được xác định theo thực nghiệm là 10,71+0,69%

Qua khảo sát những thay đổi thành phần cơm dừa theo tuổi quả (bảng 3.3), có thể xácđịnh tuổi ưưởng thành của quả dừa là 1 ỉ tháng vì ở giai đọ an này hàm lượng chất khô củacơm dừa đạt mức cao nhất (53,94 ± 2,46%) Sự tổng hợp protein của cơm dừa giảm dầntheo tháng tuổi, nhưng đối với dầu thì ngược lại Hàm lượng dầu trong cơm dừa tăng đầnđến mức cao nhất (63,38 ± 1,34%) vào lúc quả dừa đạt 11 tháng; do đó trong khai thác dầudừa, cần thu hái quả ở giai đoạn thích hợp nhất là 11 tháng tuổi

Bảng 3.2: Kết quả phân tích thành phẩn hóa học của cơm

Về màu sắc vỏ quả, kết quả khảo sát (hình 3.1) cho thấy quả dừa có vỏ màu xanh lácây ở giai đoạn còn non đến 8, 9 tháng tuổi Được 10 tháng trên vỏ quả bắt đầu xuất hiệnđốm nâu vết nâu loang đần và phủ gần kín quả ở giai đoan quả ỉ 1 tháng, Đến 12 thángtuổi thì vỏ quả khô hoàn toàn

Bảng 3.3: Sự thay đổi thành phần cơm dừa theo tuổi quả

Tuổi quả dừa (tháng) Chất khô (%) Protein (% chất khô) Dầu

Hình 3.1: Sự thay đổi màu sắc của vỏ quả theo tháng tuổi

(Tuổi quả theo thứ tự từ trên xuống và từ trái qua: 8, 9, 10, 11, 12 tháng)

Hình 3.2: Ảnh bố' dọc quả dừa 8 -> 12 tháng tuổi

(Tuổi quả theo thứ tự từ trên xuống và từ trái qua: 8, 9, 10, 11, 12 tháng)

3.1.2 KHẢO SÁT CÁC THẢNH PHAN CỬA DẦU

Để xác định các thành phần acid béo của dầu dừa, chúng tôỉ đã tiến hành trích ly dầu,methyl ester hóa và phân tích bằng máy sắc ký khí Kết quả được biểu thị trong biểu đồ3.2, bảng 3.4

Biểu đồ 3.2: Sự phân bô" các acid béo trong cơm dừa

Đã có nhiều báo cáo về thành phần acid béo của dầu dừa tronơ đó có giông dừa Ta xanh [8], [94], [124], [135] Trong nghiên cứu này chúng tôi khảo sát chi tiết thành phần

Bảng 3.4: Thành phần acid béo của dầu dừa

(1994)[135]

" Lớp vỏ nâu (10-1 lmm)

acid béo tại các vị trí khác nhau trong quả dừa Khi lây mẫu phân tích, cơm dừa được táchthành 3 lớp: lớp vỏ nâu ở ngoài cùnơ lớp tronơ cùng tiếp xúc với nước dừa và lớp trunggian còn lại Theo Pascual và Cunanan [93], dầu vỏ nâu giàu acid béo không bão hòa hơn

dầu của cơm dừa trắng Kết quả khảo sát đối với giống dừa Ta xanh Bến Tre cũng cho thấy

có sự khác biệt về thành phần acid béo ở các vị trí khác nhau của cơm dừa (biểu đồ 3.2).Tổng lượng các acid béo không bão hòa giảm dần từ vùng vỏ nâu bao ngoài cơm dừa(12,84%) vào trong (5,21%); hàm lượng các triglyceríd mạch ngắn đến trung bình (C6 đến

02) thì biến thiên theo hướng ngược lại: cao nhất ở vùng trong (63,28%), và thấp nhất ở

vùng vỏ nâu của cơm dừa (52,86%) Kết quả này đặc biệt có ý nghĩa trong sử dụng và khaithác hợp lý nhằm nâng cao giá trị kinh tế của quả dừa vì thành phần aciđ béo là yếu tô"quan trọng tạo nên tính chất và giá trị của dẫu dừa

Dầu dừa có độ bão hòa cao, tổng các acid béo bão hòa chiếm 87,18% đến 94,79%

Độ bão hòa cao đã tạo nên tính bền của dầu dừa so với các loại dầu thực vật khác nênthường được ứng dụng rộng rãi trong công nshiệp chế biến các thực phẩm cần có thời gianbảo quản lâu (các loại bánh crackers, bánh cookies, sữa bột, sữa đặc ), các thực phẩmchiên rán, snack [124]

Sư khác nhau chủ yếu giữa các acid béo là chiều dài của chuỗi carbon Kết quả phântích cho thấy dẫu dừa chứa một tỉ lệ đáng kể các acid béo mạch ngắn đến trung bình C6 - 02(52,86% đến 63,28%) Các acid béo mạch ngắn có trọng lượng phân tử nhỏ nên cơ thể dễđồng hóa và hấp thu, tạo năng lượng tốt hơn các chất béo nhóm triglyceride bão hòa mạch

dài [124] Khi nghiên cứu về khả năng tiêu hóa và hâp thu chất béo của cơ thể con người,

các nhà khoa học đã nhận ra rằng các acid béo mạch dài khó tiêu hóa và hiệu quả hấp thugiảm trong những tuần lễ đầu của trẻ sơ sinh Ngược lại, các chất béo có chuỗi carbon ngắnhoặc trung bình (rất giàu trong chất béo của dừa) thì được hấp thu rất tốt, nuay cả đốì với

các cơ thể trẻ sinh non [124] Vì vậy người ta đã sử dụng những công thức pha trộn dầu

thực vật trong sản xuất các sản phẩm dinh dưỡng dành cho trẻ em để cung cấp thành phần

acid béo tương tự như trong sữa mẹ Hiện nay dầu dừa là nguồn cung cấp MCT (MediumChain Triglycerid) chủ yếu trong các công thức sữa, các sản phẩm dinh dưỡng đặc biệt[74]

Acid béo chủ yếu của dầu dừa là acỉd lauric (C12) chiếm 44 - 50% Điều này chothấy tầm quan trọng của dầu dừa đôi với công nghệ sản xuất mỹ phẩm và chất tẩy rửa vìchính acỉd béo này là chất tạo bọt cho xà phồng

Kêt quả nghiên cứu của Nguyễn Trung Phong và cộng sự [13] với 2 giống dừa côngnghiệp là dừa PB121 và dừa Ta, thu thập ở Bến Tre và Long An, cho thấy không có sự khácbiệt đáng kể về thành phần acid béo giữa các giông dừa được khảo sát Padolina và cộng

sự [90] cũng đã khảo sát 4 giông dừa của Philippines và cũng được kết quả tương tự

3.2 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐlỂiM ENZYM CỦA CƠM DỪA VÀ PHổI DỪA

5.2.1 KHẢO SÁT Sự HÌNH THÀNH PHổỉ DỪA:

Quả dừa thuộc loại quả hạch, cấu tạo từ ngoài vào trong có vỏ và hạt

Phần phôi nhũ có phôi nhũ lỏng là nước dừa và phồi nhũ đặc là cơm dừa Phôi

của quả dừa trưởng thành có hình trụ, nằm trong cơm dừa, dưới lỗ mẫm Lúc nảy

mầm, vùng ở đầu gần lá mầm mọc dài ra, kéo chồi và rễ mầm chui ra ngoài lỗ

mầm, phần còn bên trong quả sẽ phát triển thành một khôi hành gọi là phổi dừa

Phổi dừa có vaỉ trò hấp thu chất dinh dưỡng để nuồi cây con Đó là một thể xốp,

phát triển thể tích rất nhanh theo sự phát triển của chồi [135] Kết quả khảo sát mối tương quan giữa chiều cao chồi và kích thước phổi dừa (bảng 3.5, hình 3.3,

3.4, 3.5, 3.6) cho thây phổi dừa phát triển đầy đủ (chiếm hết thể tích khoang) khi chiều cao chồi đạt 30 cm.

T h ể t í c h

p h ổ i d ừ a ( c m 3 )

Hình 3.3: Thể tích khoang quả và

phối dừa, chồi cao 7cm

Hình 3.4: Thể tích khoang quả và phổi

dừa, chồi cao 15cm

Hình 3.5: Thể tích khoang quả và Hình 3.6: Thể tích khoang quả và phổi phổi dừa, chồi cao 30cm dừa, chồi cao 60cm

3.2.2 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN HÒA TAN TRONG CƠM DỪA VÀ PHỔI DỪA: bảng 3.6

Kết quả khảo sát hằm lượng protein hòa tan trong cơm dừa và phổi dừa của quả dừa nảy mầm đo bằng phương phápLowry (bảng 3.6) cho thấy hàm lượng protein hòa tan trong cơm dừa cao hơn trong phổi dừa Trong cơm dừa, hàm lượngprotein hòa tan tăng dần theo sự phát triển của chồi, đạt cao nhất (9,25 mg/g chất khô) vào giai đoạn chồi cao 30 - 40cm,sau đó giảm Trong phổi dừa, hàm lượng protein hòa tan cũng tăng dần, đạt 7,96 mg/g chất khô khi chồi cao 60 - 70cm

3.2.3 KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ ENZYM CELLULASE VÀ HEMICELLULASE TRONG CƠM DỪA VÀ PHổI DỪA:

Kết quả khảo sát hoạt độ enzym cellulase và hemicellulase trong cơm dừa và phổi dừa được trình bày trong bảng3.7

Qua khảo sát quả dừa Ta xanh đang nảy mầm, chúng tôi nhận thây kết quả như sau:

- Hoạt độ cellulase và hemicellulase của phổi dừa (58,1 lUI/g chất khô và 45,47UI/g chất khô) cao hơn hoạt độcellulase và hemicellulase của cơm dừa (1,37 Ul/g chất khô và 5,98 Ưl/g chất khô)

- Hoạt độ cellulase và hemicellulase của phổi dừa cao nhất ở giai đoạn

chồi dừa cao 15 - 20cm; sau đó giảm dần khi chồi dừa phát triển cao hơn

- Hoạt độ celỉulase và hemicellulase của cơm dừa cao nhất ở giai đoạn

chồi dừa cao 30 - 40cm; sau giai đoạn này hoạt độ cellulase và hemiceỉlulase

2Ĩảm thấp

Bảng 3.6: Hàm lượng protein hòa tan trong cơm dửa và phối dừa

Giai đoạn

Chiều cao chồi (cm)

Hàm lượng protein hòa tan (mg/g chất khô)

Như vậy trong phổi dừa enzym đã được hình thành và thể hiện hoạt tính sớm hơn trong cơm dừa, Kết quả này cóthể góp phần trong lý giải về nguồn gốc của các enzym này trong quả dừa Theo những nghiên cứu gần đây củaSugimura và Murakami [107], có 3 khả năng giải thích nguồn gốc các enzym thủy phân

vách tế bào cơm dừa Có thể chúng được tổng hợp bởi phôi và được tiết vào cơm dừa, hoặc được tổng hợp trong cơm dừakhi có dấu hiệu cảm ứng của phôi, hoặc đã hiện diện và dự trữ trong cơm dừa, sau đó được hoạt hóa bởi thông tin điều hòaphát ra từ phôi Quá trình tiêu hóa cơm dừa của phổi dừa được thực hiện dần từng lớp, đầu tiên phân hủy vách và màng tếbào, tiếp đến là sử dụng các thành phần tế bào chất Lớp biểu bì của phổi dừa được xem là tầng sinh các enzym [140].Chúng tôi thấy rằng ở những vùng tiếp xúc với phổi dừa thì cơm dừa mỏng dần và tiết ra nhiều dầu ở dạng tự do DeMason và cộng sự (trích dẫn bởi [ỉ35]) khi nghiên cứu trên cây chà là cũng đã có kết luận tương tự rằng chính phôi đã làmhoạt hóa và kích thích việc giải phóng endo-í3-D-hemicellulase dự trữ trong tế bào của nội nhũ

Theo kết quả nghiên cứu của Frédérique Bertrand trên giông dừa GOA thì cơm dừa của quả dừa nảy mầm không cóhoạt tính ceỉlulase, hoạt độ hemicelỉuỉase là 1,8 Ul/g Trong phổi dừa thì hoạt độ celluỉase ỉà 15 Ul/g, hoạt độ hemicelluỉase

là 10 Ul/g [135] Điều này chứng tỏ rằng có một đặc điểm chung của các giông dừa là hoạt độ enzym cellulase vàhemicellulase của phổi dừa cao hơn hoạt độ enzym cellulase và hemicellulase của cơm dừa

3.3 NGHIÊN CỨU THƯ NHẬN ENZYM CYTOLASE TỪ CƠM DỪA VÀ PHỔI DỪA

Trong thiên nhiên, enzym celluỉase và hemicelỉulase không tồn tại ở dạng tinh khiết mà thường ở dạng kết hợp vớinhau Phức hợp enzym này tham gia vào việc thủy phân vách tế bào thực vật nên được gọi chung là cytolase [11] Các kết

quả nghiên cứu nêu trên đã khẳng định quả dừa Ta xanh trong quá trình nảy mầm cũng sản sinh ra hệ enzym cytoỉase để

thủy phân vách tế bào nội nhũ, cung cấp

các chất đinh dưỡng nuôi cây con Nguồn nguyên liệu có thể thu nhận enzym cytolaseđược xác định là cơm dừa và phổi dừa.

Vách các tế bào thực vật có bản chất polysaccharide và có câu trúc xơ Sự hiện diệncủa các chất xơ ỉàm cản trở quá trình chiết xuất dầu và protein có trong cơm dừa Cácnghiên cứu của Niwa, Chandrasekaran, King, Rao và cộng sự (trích dẫn bởi [135]) vềphương pháp chiết xuất protein trong bà dừa bằng con đường enzym đều dựa trên giả

thuyết rằng thành phần chính của cơm dừa là cellulose Tuy nhiên, một số công trình khác

của Rao, Mukherjee, Balasubramaniam và cộng sự (trích dẫn bởi [135]) đã chứng minh

rằng trong c ơ m dừa còn có một lượng lớn hemicellulose, Theo Balasubramaniam [35], ở

giai đoạn quả chín, thành phần các polysaccharides của cơm dừa có 61% galactomannane,26% mannane và chỉ có 13% cellulose Theo Rinaudo [142], các polysaccharides trungtính của bã dừa có câu tạo gồm 30% cellulose và 70% hemicellulose Vì hemicellulose làthành phần cấu tạo chủ yếu của vách tế bào cơm dừa nên trong ứng dụng chiết tách dầudừa, chúng tôi sẽ đặt trọng tâm vào chọn lựa điều kiện thích hợp để đạt được hiệu quả thunhận chế phẩm tủa có hoạt tính hemicellulase cao nhất

3.3 L NGHIÊN cứu THƯ NHẬN CHẾ PHAM TỦA ENZYM CYTOLASE TỪ CƠM DỪA.

3.3.1.1 K h ả o s á t ả n h h ư ở n g của (NH^SO^ kết quả trong bảng 3.8.

Phương pháp kết tủa enzym thông dụng nhất là sử dụng các loại muôi nhưammonium sulphate [(NH4)2S041, là loại muôi hòa tan tốt trong nước và hầu như khôngảnh hưởng đến hoạt tính của các enzym [27] Kết quả thí nghiệm với nguyên liệu cơmdừa cho thấy phải đến nồng độ (NH4)2S04 70% bão hòa mới tủa được phân đoạn protein

có hoạt tính hemicellulase Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về hoạt độ của cácchế phẩm Ec khi tủa ở 2 nồng độ 70% và 80% bão hòa của (NH4)2S04 (42,87 Ul/g Ec và42,36 Ul/g Ec) Tuy nhiên tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từ cơm dừa khi tủa

ở nồng độ (NH4)?S04 80% bão hòa là 3,69 Ul/g Cd, cao hơn có ý nghĩa thông kê so vớikhi tủa ở nồng độ (NH4)2S04 70% bão hòa (3,37 Ưl/g Cd).

Như vậy đối với tác nhân kết tủa là (NH4)2S04 thì nồng độ 80% bão hòa cho hiệu quả thu nhận hemicellulase tốt nhất Ở nồng độ này, chế phẩm Ec có hoạt độ hemicellulase là 42,36 Ul/g, hoạt độ celỉulase là 9,73 Ưĩ/g

3*3.1.2 Khảo sẩt ảnh hưởng của NaCl: kết quả trong bảng 3.9

NaCl là loại muôi thực phẩm, gỉá rẻ và sử dụng an toàn Kết quả thử nghiệm sử dụngmuôi này để kết tủa enzym cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa thông kê về tổng đơn

vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từ cơm dừa giữa các thí nghiệm nồng độ NaCl khác nhau,

về hoạt độ của chế phẩm Ec sau khi tủa, kết quả cũng tương tự (khác biệt khồng đáng kểgiữa các thí nghiệm) Do đó nồng độ NaCl được chọn trong trường hợp này là 60% độ bãohòa

Chế phẩm Ec tủa ở nồng độ NaCl 60% bão hòa có hoạt độ hemiceìỉulase là 6,49UI/g,hoạt độ celìulase là l,17ƯI/g

3.3.1.3* Khảo sát ảnh hưởng của C2H5OH: kết quả trong bảng 3.10

Bảng 3.9: Ẩnh hưông của nồng độ NaCl đến hiệu quả thu nhận chế phẩm Ec

Ec

Dung mồi hữu cơ cũng là một trong những tác nhân làm ảnh hưởng đến tính hòa tan của enzym do làm giảm hằng số điện môi của môi trường [18], [129] Những dung môi thường được dùng nhất để kết tủa enzym là C 2 H 5 OH (ethanol) và acetone [129] Tuy nhiên, vì acetone khá đắt tiền, không phù hợp cho nghiên cứu ứng dụng nên chúng tôi chỉ thí nghiệm với 1 loại dung môi là ethanol 96° Quá trình kết tủa enzym bằng ethanol được thực hiện ở điều kiện nhiệt độ lạnh 4°c.

Theo kết quả thí nghiệm, hiệu suất thu nhận enzym tăng dần theo nồng độ ethanol; tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từ cơm dừa cao nhất ở nồng độ ethanol 72% (1.21UI /g Cd), nhưng sau đó giảm (khác biệt có ý nghĩa thống kê) Khi tủa bằng ethanol 72% thì hoạt độ hemicelluỊase của chế phẩm Ec cũng cao nhất (20,95

UI /g Ec) Các nồng độ ethanol thấp hơn chưa tủa được hoàn toàn những phân đoạn có hoạt tính enzym nên hoạt độ của chế phẩm Ec thấp Tuy nhiên ethanol là loại dung môi

dễ làm giảm hoạt tính enzym [39], [130], nến chế phẩm Ec tủa ở nồng độ cao hơn 72% cóhoạt độ giảm thấp (khác biệt có ý nghĩa thống kê)

Bảng 3.10: Ẩnh hưởng của nồng độ ethanol đến hiệu quả thu nhận chế phẩm

Như vậy nồng độ ethanol thích hợp để tủa Ec được xác định là 72% Chế phẩm Ec khitủa với ethanol 72% có hoạt độ hemicellulase là 20,95 Ưl/g và hoạt độ cellulase là 8,73 ưl/g

33.1.4 So sánh hiệu quả của các phương pháp kết tủa: bảng 3.11

So sánh hiệu quả của các phương pháp kết tủa Ec, có thể kết luận như sau:

- Trong điều kiện thí nghiệm, tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từ cơm dừa đạt

cao nhất khi kết tủa bằng (NH4)2S04 ở nồng độ 80% độ bão hòa;

Bảng 3.11: Hiệu quả của các phương pháp kết tủa Ec

hemicellulase thu nhận từ hemicellulase của

3.3.2 NGHIỀN cứu THƯ NHẬN CHẾ PHAM TỦA EN2YM CYTOLASE TỪ PHỔỈ DỪA.

3.3.2.I Khảo sát ảnh hưởng của (NH4)2S04: kết quả trong bảng 3.12

Bảng 3.12: Ẩnh hưởng của nồng độ (NH4)2S04đến hiệu quả thu nhận chế

phẩm Ep

Đối với nguyên liệu phổi dữa (Pd), kết quả thí nghiệm cho thấy khi tăng nồng độ(NH4)2S04 thì hoạt độ hemicellulase tăng; tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từphổi dừa (8,82 UI /g Pd) và hoạt độ hemicellulase của

chế phẩm Ep (45,72 UI /g Ep) đạt cao nhất khi tủa ở nồng độ (NHị^SO,; 80% độ bão hòanhưng không khác biệt có ý nghĩa thống kê so với tủa ở nồng độ (NH4)2S04 70% độ bão hòa(tổng đơn vị hoạt độ hemìcelỉulase thu nhận từ phổi dừa là 7,33 UI /g.Pd và hoạt độhemicellulase của chế phẩm Ep là 39,36 UI /g Ep)

Như vậy nồng độ (NH4)2S04 thích hợp để tủa Ep được chọn là 70% độ bão hòa, thấp hơn so với nồng độ (NH4)2S04 dùng để tủa Ec (80% bão hòa)

Chế phẩm Ep thu nhận bằng phương pháp tủa (NH4)2S04 ở nồng độ 70% bão hòa có hoạt độ hemicellulase là 39,36 UI /g và hoạt độ cellulase 29,07 UI /g

3.3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng của NaCl: bảng 3.13

Với tác nhân kết tủa là NaCl, chúng tôi đã thử nghiệm các nồng độ NaCI từ 60 đến 90% độ bão hòa Kết quả cho thấy giữa các nồng độ này không có sự

Bảng 3.13: Ẩnh hưởng của nồng độ NaCl đến hiệu quả thu nhận chế phẩm Ep

Chế phẩm Ep thu nhận bằng phương pháp tủa bởi NaCl nồng độ 60% bão hòa

có hoạt độ hemicellulase là 32,57 ƯI /g và hoạt độ cellulase là 9,06 UI /g.

3.3.23 Khảo sát ảnh hưởng của C 2 H 5 OH: bảng 3.14

Kết quả thí nghiệm với các nồng độ ethanol khác nhau cho thây tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase đạt cao nhất (0,99 UI /g Pd) khi tủa ở nồng độ ethanol

Bảng 3.14: Ẩnh hưởng của nồng độ ethanol đến hiệu quả thu nhận chế phẩm _Ẹfi

64% Khi nồng độ ethanol tăng thêm thì khôi lượng Ep tăng nhưng hoạt độ

hemicelỉulase giảm (khác biệt có ý nghĩa thống kê)

Hoạt độ hemicellulase của chế phẩm Ep sau khi tủa đạt cao nhất (6,80 ƯI /g Ep) ởthí nghiệm với nồng độ ethanol 57,6% và giảm dần khi nồng độ ethanol tăng (khác biệt có ýnghĩa thông kê)

Với những kết quả này, nồng độ ethanol được đề nghị sử dụng là 64% để có thể thunhận từ phổi dừa tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase cao nhít

Chế phẩm Ep tủa ở nồng độ ethanol 64 % có hoạt độ hemiceilulase là 5,52 ƯI /g và

hoạt độ cellulase là 12,14 UI /g

3.3.2A So sánh hiệu quả của các phương pháp kết tủa: bảng 3.15

So sánh hiệu quả của các phương pháp kết tủa Ep, có thể kết luận như sau:

Bảng 3.15: Hiệu quả của các phương pháp kết tủa Ep

Phương pháp kết tủa

Tổng đơn vị hoạt độhemicellulase thu nhận từphổi dừa (Ưl/gPd)

Hoạt độ hemicelỉulase củachế phẩm Ep(UI /g Ep)

- Trong điều kiện thí nghiệm, tổng đơn vị hoạt độ hemicellulase thu nhận từ phổi dừađạt cao nhất khi kết tủa bằng (NH4)2S04 ở nồng độ 70% độ bão hòa; phương pháp kết tủabằng ethanol ở nồng độ 64% cho kết quả thu nhận enzym thấp nhất (khác biệt có ý nghĩathống kê)

- Chế phẩm Ep thu nhận bởi phương pháp kết tủa bằng (NH^SOị ở nổng độ 70% độbão hòa có hoạt độ hemicelỉuỉase cao nhất; chế phẩm Ep thu nhận bởi phương pháp kết tủabằng ethanol ở nồng độ Ố4% có hoạt độ hemicellulase thấp nhất Những sự khác biệt này có

ý nghĩa thông kê

Từ những kết quả nghiên cứu nêu trên, có thể kết luận rằng có thể thư nhận enzym

cytolase từ nguyên liệu cơm dừa và phổi dừa của quả dừa Ta xanh nảy mầm, Một đặc điểm

chung được phát hiện là nồng độ của các tác nhân được thử nghiệm như (NH4)2S04, ethanol,dùng để tủa enzym từ nguyên liệu cơm dừa cao hơn nồng độ của những chất này dùng đểtủa enzym từ nguyên liệu phổi dừa, chứng tỏ Ec khó tủa và ít nhạy cầm với các tác nhân tủahơn so với Ep Đốì với phổi dừa, việc sử dụng tác nhân kết tủa là NaCl cũng mang lại hiệuquả Hoạt độ chế phẩm Ep tủa bằng NaCl cao hơn hoạt độ chế phẩm Ep tủa bằng ethanoltrong khi đối VỚI Ec thi kết quả ngược lại Giải thích điều này có thể liên quan đến đặcđiểm của nguyên liệu Dịch chiết cơm dừa có thành phần chất khô và độ nhớt cao nên khảnăng hòa tan của NaCl trong môi trường này kém và hiệu quả kết tủa thấp hơn so trườnghợp nguyên liệu phổi dừa

Phương pháp kết tủa enzym hiệu quả nhất là dùng (NH4)2S04 nồng độ 80% bão hòađôi với nguyên liệu cơm dừa và 70% bão hòa đốì với nguyên liệu phổi dừa Ngoài tác dụn^tạo nên sản phẩm tủa có hoạt tính cao, (NH4)2S04 còn góp