Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)Khảo sát quá trình trích ly thu nhận Flavonoid từ củ cải trắng (Luận văn thạc sĩ)
I H C BÀ R VI N K THU T - KINH T BI N ÁN T T NGHI P KH O SÁT Q TRÌNH TRÍCH LY THU NH N FLAVONOID T C C I TR NG GVHD: ThS Ph m Th Kim Ng c Sinh viên: Lê Th Ánh Nguy t o: H o: ih c Chính quy Khóa: 2013 - 2017 L p: DH13TP MSSV: 13030202 C NG HOÀ XÃ H I CH NGHIÃ VI T NAM VI N K THU T c l p - T - H nh phúc KINH T BI N NHI M V ÁN H tên sinh viên: Lê Th Ánh Nguy t Gi i tính: N 10/02/1995 -VT Chuyên ngành: Cơng ngh Th c ph m Khố: 2013 - 2017 1- tài: Kh o sát q trình trích ly thu nh n Flavonoid t c c i tr ng 2- Nhi m v án: - Kh o sát thông s c a q trình trích ly thu nh n flavonoid t c c i tr ng g m: lo i dung môi, n dung môi, t l dung môi nguyên li u, nhi trích ly, th i gian trích ly - T u ki n phù h p nh nh n flavonoid t c c i tr ng 3- Ngày giao nhi m v : 19/02/2017 4- Ngày hoàn thành nhi m v : 21/06/2017 5- ng d n: ThS Ph m Th Kim Ng c SINH VIÊN TH C HI N (Ký ghi rõ h tên) NG B MÔN (Ký ghi rõ h tên) (Ký ghi rõ h tên) VI NG (Ký ghi rõ h tên) thu L I CAM uc is ng d n c a Th.S Ph m Th Kim Ng c Các n i dung nghiên c u, k t qu s li u trung th c Nh ng s li u b ng bi u ph c v cho vi c phân tích, nh n c thu th p t ngu n khác có ghi rõ ph n tài li u tham kh o N u phát hi n có b t k s gian l n xin hoàn toàn ch u trách nhi m L IC án này, xin chân thành c Bà R ng d y, truy y cô ih c t cho nh ng ki n th c, kinh nghi m su t th i gian qua t o m u ki tơi có th th c hi n t án t t nghi p c bi t xin g i l n Th.S Ph m Th Kim Ng , tr c ti p ch b o, góp ý h tr n tình giúp ng d n su án Trong th i gian làm vi c v i Cơ, ngồi vi c ti p thu thêm nhi u ki n th c b ích, tơi h c t c tinh th n làm vi qu nghiên c u khoa h c nghiêm túc, hi u u r t c n thi t cho trình h c t p làm vi c sau ng th i, xin g i l i c n Th y ph trách phòng thí nghi u ki n thu n l i nh t v phòng thí nghi tơi có th hồn thành t o ng c , thi t b án t t nghi p Xin ghi nh n s nhi t tình c a b n sinh viên khoá DH13TP dành cho tơi q trình th c hi án Do th i gian nghiên c u h n h p, ki n th c h n ch nên v n nhi u thi u sót q trình th c hi quý báu c a quý th hồn thi án Tơi kính mong nh c ý ki án t t nghi p Tôi xin chân thành c 2017 Sinh viên Lê Th Ánh Nguy t M CL C DANH M C HÌNH III DANH M C B NG IV DANH SÁCH T L IM VI T T T V U .1 NG QUAN .2 1.1 Gi i thi u v c c i tr ng .2 1.1.1 Ngu n g c, phân lo m sinh h c 1.1.2 Thành ph n hóa h c giá tr ng 1.1.3 Các h p ch t th c p c c i tr ng 1.1.4 Công d ng c a c c i 1.2 H p ch t flavonoid 1.2.1 Khái ni m 1.2.2 Phân lo i .7 1.2.3 Tính ch t lý hóa 1.2.4 Giá tr sinh h c c a flavonoid n flavonoid 12 T LI U 15 m th i gian nghiên c u 15 2.2 Nguyên li u, d ng c thi t b hóa ch t .15 2.2.1 Nguyên li u .15 2.2.2 D ng c , thi t b hóa ch t 15 u 16 2.3.1 N i dung nghiên c u 16 2.3.2 B trí thí nghi m 16 18 T QU - TH O LU N 25 3.1 Kh o sát ng c u ki n trích ly 25 3.1.1 ng c a lo i dung môi 25 3.1.2 ng c a n 3.1.3 dung môi 26 u .27 3.1.4 ng c a nhi 3.1.5 ng c a th i gian 30 3.2 T 29 c c i tr ng b m t ng SRM 31 T LU N VÀ KI N NGH .36 4.1 K t lu n 36 4.2 Ki n ngh 36 Tài li u tham kh o 37 PH L C 40 K t qu x lý ANOVA cho thí nghi m 40 Kh o sát dung mơi trích ly .40 Kh o sát n trích ly .42 Kh o sát t l nguyên li u dung môi 44 Kh o sát nhi trích ly .46 Kh o sát th i gian trích ly 48 DANH M C HÌNH Hình 1.1 C c i tr ng n c a flavonoid .8 Hình 1.3 Các phân nhóm c a flavonoid c ch c a catechol v i g c t peroxy .11 Hình 1.5 Các v trí c a flavonoid có th liên k t v i ion kim lo i .11 Hình 2.1 B t c c i 17 Hình 2.2 N i dung nghiên c u 18 Hình 2.3 ng chu nh TFC .21 Hình 2.4 Ph n ng t o màu xây d ng chu n quercein 21 Hình 2.5 Ph n ng t o màu xây d ng chu n galic 23 Hình ng chu Hình 2.7 ng chu nh TPC 24 nh kh ABTS* 23 Hình 3.1 ng c a dung mơi trích ly 28 Hình 3.2 ng n Hình 3.3 ng t l : dung mơi trích ly 30 Hình 3.4 ng nhi Hình 3.5 ng c a th i gian trích ly .33 dung môi trích ly .29 trích ly .32 Hình 3.6 Mơ hình b m mơi nhi ng c a t l nguyên li u/dung n TFC 37 Hình 3.7 Mơ hình b m mơi, nhi ng th hi n th i gian trích ng th hi n ng c a t l nguyên li u/dung n TFC 38 DANH M C B NG B ng 1 Giá tr B B ng 2.2 K t qu ng 100g c a c i c xây d ng chu n acid galic 22 ng chu n galic 24 B ng 2.3 Quá trình xây d ng ng chu n v i dung d ch trolox chu n 23 B ng 3.1 K t qu thí nghi m kh o sát lo i dung môi .27 B ng 3.2 K t qu thí nghi m kh o sát n dung mơi 29 B ng 3.3 K t qu thí nghi m kh o sát t l dung mơi:ngun li u 31 B ng 3.4 K t qu thí nghi m kh o sát nhi 32 B ng 3.5 K t qu thí nghi m kh o sát th i gian .33 B ng 3.6 Các y u t dung SRM 35 B B ng 3.8 Phân tíc t qu 35 ng sai c a mơ hình h i quy 36 DANH SÁCH T ABTS: Kh VI T T T g c t ABTS (mmol TEAC/g ch t khô) TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity): Kh SRM: Reponse Surface Methods ng flavonoid t ng (mg QE/g ch t khô) ng phenolic t ng (mg GAE/g ch t khơ) Hình 3.7 Mơ hình b m mơi, nhi ng th hi n th ng c a t l nguyên li u/dung n TFC K T LU N VÀ KI N NGH 4.1 K t lu n Sau trình kh thu nh nd ch chi t giàu ho t tính ch ng oxy hóa t b t c c i tr ng (Raphanus sativus L c k t qu sau: u ki n thích h p cho q trình trích ly là: Dung mơi s d ng: ethanol dung môi: ethanol 750 N T l dung môi : nguyên li u : 1:30 (g/ml) trích ly: 600C Nhi Th Mơ hình tồn ph thu ng b h b g ph ng pháp h uy n h sau: Y = 8,099 + 0,370X1 + 0,253X2 ng TFC thu nh 0,612X12 0,585X22 0,386X32 c th c nghi m là: 8,115 mg/g l nguyên li u: 610C dung môi 1:32 (g/ml), 4.2 Ki n ngh Nên nghiên c u s d d ng lo i trình trích ly h p ch t flavonoid c c i tr t hi u qu a t tính sinh h c c a h p ch t flavonoid tr ng nh danh m t s h p ch t khác c c i tr c li u c a ách chi t t c c i Tài li u tham kh o ng Liên, Phan Th Bích Trâm Hà Thanh Tồn, nh ng polyphenol kh hóa t u nành, T p chí Khoa h ng oxy ih cC Nguy n Minh Th ng, Polyphenol ho c ch m t s serine proteinase t thân, h t g vang (caesalpinia sappan l.) m t s thu c khác, lu n i h c qu c gia Hà N i 2009 , Stress oxi hóa ch t ch ng oxi hóa t L i Th Ng nhiên, t p chí khoa h c phát tri n 2009 T t L i, Nh ng thu c v thu c Vi t Nam, NXB y h c 2004 Bích Trâm Hà Thanh Tồn, ng polyphenol kh hóa t u nành, T p chí khoa h Nguy n Thu H ng, Bài gi ng oxi ih cC c li u ch a flavonoid Nguy n Kh c Qu nh Chi, Nguy n Tu ih nh t xu t c li u, NXB c, TP.H Chí Minh Ph ng, N.K.P., p h p ch t h c gia Tp.HCM Thu, N.V and T Hùng, c li u h c 2011, Nhà xu t b n Y h c, B Y t Stress oxi hóa ch t ch ng oxi hóa t nhiên 10 t p chí Khoa h c Phát tri n 2013, 2009 7(5): p 667-677 11 Dai, J and R.J Mumper, Plant Phenolics: Extraction, Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties Molecules 2010 15: p 7313-7352 12 Gulcin, Antioxidant activity of food constituents: an overview Arch Toxicol, 2012 86: p 345 391 13 J.B Harborne and C.A Williams, review: Advances in flavonoid research since 1992 Phytochemistry, 2000 55: p 481 -504 14 ệzỗelik, B., et al., Antimicrobial Activity of Flavonoids against Extended- -Producing Klebsiella pneumonia Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2008 7(4): p 1151-1157 15 Segovia, R.G., et al., Effect of the flavonoid quercetin on inflammation and lipid peroxidation induced by Helicobacter pylori in gastric mucosa of guinea pig J Gastroenterol 2008 43: p 441-447 16 Nishioka, T., et al., -glucosidase inhibitor from Scutellaria baicalemis II Journal of Natural Products, 1998 61: p 1413-1415 17 Susanti, D., et al., Antioxidant and cytotoxic flavonoids from the flowers of Melastoma malabathricum L Food Chemistry, 2007 103: p 710-716 18 Biochermistry of phenolic compounds London and New york, 1964 19 Sanaa T El-Sayed, Purification and characterization of Raphanin, a neutral protease,from raphanus sativus leaves, Pakistan journal of Biological sciences, 4, pp.564-568, 2001 20 Perry, M.L.,Medicinal Plants of East and Southeast Asia, MIT Press, Cambridge, 1980 21 A Lugasi & J Hovari, Flavonoid aglycons in foods of plant origin I Vegetables,Acta Aliment, vol 29, pp 345-352, 2000 22 Consolacion Y Ragasaa, Ma Carmen S Tanb, Marissa G Noelb and ChienChang Shenc, Isothiocyanates, sterol and triglycerides from Raphanus sativus,Der PharmaciaLettre, vol.17, pp 293-296, 2015 23 Consolacion Y Ragasaa, Ma Carmen S Tanb, Marissa G Noelb and ChienChangShenc, Isothiocyanates, sterol and triglycerides from Raphanus sativus, Der PharmaciaLettre, vol.17, pp 293-296, 2015 24 Kerry Hosmer Caffall and Debra Mohnen, The structure, function, and biosynthesis ofplant cell wall pectic polysaccharides, Carbohydrate Research, vol.344, pp.1879-1900, 2009 25 Zhang Y., Li S.F., Wu X.W., 2008 Pressurized liquid extraction of flavonoid from Houttuynia cordata Thunb Separation and Purification Technology, 58: 305-310 26 Meejung Ahn Taekyun Shin, Gi Ok Kim, Sang Un Park, Biological activity of variousradish species, Orient Pharm Exp Med, vol 15, pp 105-111, 2015 27 Yeung, H.C.Handbook of Chinese Herbs and Formulas, Institute of Chinese Medicine, Los Angeles, 1985 28 M Pieroth, D Strack, H Scharf & V Sharma, Tissue distribution of phenylpropanoidmetabolism in cotyledons of Raphanus sativus L, Planta, pp 507-511, 1985 29 Rosa Martha Perez Gutierrez and Rosalinda L Perez, Raphanus sativus (Radish):Their Chemistry and Biology, The Scientific Word journal, vol 4, pp 811-837, 2004 30 Ghasemzadeh, A., et al., Flavonoid compounds and their antioxidant activity in extract of some tropical plants Journal of Medicinal Plants Research 2012 6(13): p 2639-2643 31 Shin, T., et al., Biological activity of various radish species Orient Pharm Exp Med 2015 15: p 105-111 32 Singh, P and J singh, Medicinal and therapeutic utilities of Raphanus sativus Internationa Journal of plant, animal and environmental sciences, 2013 3(2): p 103-105 33 Jahan, M.G.S., et al., Correlation between â-amylase activity and starch content in different cultivars of radish (Raphanus sativus L.) Biotechnology, 2014 9(7): p 298-302 34 Jahan, M.G.S., et al., Screening of some enzyme and nutrients in radish (Raphanus sativus L.) root Philiip J Anim Sci., 2011 37: p 89-100 35 24: p 23-27 36 El-sayed, S.T., Purification and characterization of Raphanin, a neutral protease, from raphanus sativus leaves Pakistan journal of Biological sciences, 2001 4(5): p 564-568 37 Strack, D., et al., Tissue distribution of phenylpropanoid metabolism in cotyledons of Raphanus sativus L Planta, 1985 164(507-511) 38 https://en.wikipedia.org/wiki/Radish 39 https://vi.wikipedia.org/wiki/Flavonoid PH L C K t qu x lý ANOVA cho thí nghi m Kh o sát dung mơi trích ly K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between i lo i dung môi F-Ratio P-Value 82.28 0.0000 Square 91.1199 30.3733 Within groups 2.95317 0.369146 Total (Corr.) 11 groups 94.073 So sánh s khác bi t gi a lo i dung môi cho TPC DM phe Count Mean Homogeneous Groups chlorofom 0.261117 X etylacetat 1.46391 X methanol 5.80265 X 90 6.73296 X K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between 26.276 F-Ratio P-Value 4.11 0.0488 Square 8.75868 Within groups 17.0493 2.13117 Total (Corr.) 11 groups 43.3254 i lo i dung môi So sánh s khác bi t gi a lo i dung môi cho TFC DM fla Count Mean Homogeneous Groups chlorofom 0.157987 X etylacetat 1.08333 X methanol 2.85128 XX 90 3.94966 X K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between 19.2473 i lo i dung môi F-Ratio P-Value 129.72 0.0000 Square 6.41578 Within groups 0.395654 0.0494567 Total (Corr.) 11 groups 19.643 So sánh s khác bi t gi a lo i dung môi cho ABTS DM ABTS Count Mean Homogeneous Groups chlorofom 0.63482 X etylacetat 1.77403 X 90 3.28704 X methanol 3.85664 X Kh o sát n trích ly K t qu Source in Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 45.49 0.0000 Square 10.4127 2.60317 groups Within groups 0.572228 10 0.0572228 Total (Corr.) 14 10.9849 So sánh s khác bi t gi a n cho TPC Ndo phe Count Mean Homogeneous Groups 5.52877 X 25 6.12114 X 100 6.43513 X 50 7.05987 X 75 7.96298 X K t qu Source in Sum of Df Mean Squares Between 9.64869 P-Value 7.25 0.0052 Square 2.41217 groups Within groups 3.3272 10 0.33272 Total (Corr.) 14 12.9759 F-Ratio So sánh s khác bi t gi a n cho TFC NDo fla Count Mean Homogeneous Groups 2.66707 X 50 2.93003 XX 25 3.08027 XX 100 3.83157 X 75 4.8834 X K t qu Source in Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 8.95 0.0024 Square 9.26539 2.31635 groups Within groups 2.58787 10 0.258787 Total (Corr.) 14 11.8533 So sánh s khác bi t gi a n cho ABTS Ndo abts Count Mean Homogeneous Groups 1.98733 X 25 2.26367 X 50 2.455 XX 100 3.287 XX 75 4.137 X Kh o sát t l nguyên li u dung môi K t qu c gi i t l nguyên li u dung môi Source Sum of Df Mean Squares Between 3.48394 F-Ratio P-Value 6.14 0.0180 Square 1.16131 Within groups 1.5141 0.189262 Total (Corr.) 11 groups 4.99804 So sánh s khác bi t gi a t l nguyên li u:dung môi cho TPC TL phe Count Mean Homogeneous Groups 1:10 7.09918 X 1:20 7.40179 X 1:30 8.29441 X 1:40 8.31865 X K t qu c gi i t l nguyên li u:dung môi Source Sum of Df Mean Squares Between P-Value 14.36 0.0014 Square 6.79135 2.26378 Within groups 1.26159 0.157699 Total (Corr.) 11 groups 8.05294 F-Ratio So sánh s khác bi t gi a t l nguyên li u:dung môi cho TFC TL fla Count Mean Homogeneous Groups 1:10 3.26137 X 1:20 4.12537 X 1:40 5.06727 X 1:30 5.0694 X K t qu c gi i t l nguyên li u:dung môi Source Sum of Df Squares Between Mean F-Ratio P-Value 12.53 0.0022 Square 16.7498 5.58326 Within groups 3.56416 0.44552 Total (Corr.) 11 groups 20.3139 So sánh s khác bi t gi a t l nguyên li u:dung môi cho ABTS TL AB Count Mean Homogeneous Groups 1:10 149.165 X 1:20 184.49 X 1:40 260.634 X 1:30 311.37 X Kh o sát nhi trích ly K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between i nhi F-Ratio P-Value 6.24 0.0088 Square 5.31902 1.32975 groups Within groups 2.13248 10 0.213248 Total (Corr.) 14 7.45149 So sánh s khác bi t gi a nhi cho TPC ND phe Count Mean Homogeneous Groups 40 7.73168 X 50 8.23247 X 60 9.11556 X 80 9.17019 X 70 9.17348 X K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between 10.11 F-Ratio P-Value 4.86 0.0195 Square 2.5275 groups Within groups 5.20596 10 0.520596 Total (Corr.) 14 15.316 i nhi So sánh s khác bi t gi a nhi cho TFC TG fla Count Mean Homogeneous Groups 2h 4.473 X 2.5h 5.771 XX 3h 6.40067 X 3.5h 6.63167 X 4h 6.65367 X K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between i nhi F-Ratio P-Value 18.97 0.0001 Square 13.8121 3.45302 groups Within groups 1.82054 10 0.182054 Total (Corr.) 14 15.6326 So sánh s khác bi t gi a nhi cho ABTS TG abts Count Mean Homogeneous Groups 2h 3.54633 X 2.5h 4.31433 X 3h 5.76633 X 3.5h 5.83833 X 4h 5.86767 X Kh o sát th i gian trích ly K t qu c gi Source Sum of Df Mean Squares Between 10.11 i th i gian F-Ratio P-Value 4.86 0.0195 Square 2.5275 groups Within groups 5.20596 10 0.520596 Total (Corr.) 14 15.316 So sánh s khác bi t gi a th i gian cho TFC TG fla Count Mean Homogeneous Groups 2h 4.473 X 2.5h 5.771 XX 3h 6.40067 X 3.5h 6.63167 X 4h 6.65367 X K t qu Source c gi Sum of Df Mean Squares Between 8.81666 F-Ratio P-Value 8.97 0.0024 Square 2.20417 groups Within groups 2.45657 10 0.245657 Total (Corr.) 14 11.2732 i th i gian So sánh s khác bi t gi a th i gian cho TPC TG phe Count Mean Homogeneous Groups 2h 7.45033 X 2.5h 8.072 X 3h 9.17867 X 3.5h 9.24033 X 4h 9.384 X K t qu c gi Source Sum of Df Mean Squares Between i th i gian F-Ratio P-Value 18.97 0.0001 Square 13.8121 3.45302 groups Within groups 1.82054 10 0.182054 Total (Corr.) 14 15.6326 So sánh s khác bi t gi a th i gian cho ABTS TG abts Count Mean Homogeneous Groups 2h 3.54633 X 2.5h 4.31433 X 3h 5.76633 X 3.5h 5.83833 X 4h 5.86767 X ... Lo i dung mơi Thơng s q trình trích ly Kh o sát q trình trích ly thu nh n Flavonoid t c c i tr ng N dung môi T l NL : DM Nhi T i q trình trích ly trích ly Th i gian trích ly Hình 2.2 N i dung nghiên... 40 Kh o sát dung mơi trích ly .40 Kh o sát n trích ly .42 Kh o sát t l nguyên li u dung môi 44 Kh o sát nhi trích ly .46 Kh o sát th i gian trích ly ... ly thu nh n Flavonoid t c c i tr ng 2- Nhi m v án: - Kh o sát thơng s c a q trình trích ly thu nh n flavonoid t c c i tr ng g m: lo i dung môi, n dung môi, t l dung mơi ngun li u, nhi trích ly,