Nghiên cứu tinh xác định tiềm chống ung thư Piperine từ Hồ tiêu đen (Piper nigrum L.) Nguyễn Thị Thu Hương Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn ThS Chuyên ngành: Di truyền học; Mã số: 60 42 01 21 Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hồng Vân Năm bảo vệ: 2013 Abstract: Thu dịch chiết tổng số Methanol, định tính, định lượng tinh thành công Piperine từ Hồ tiêu đen (Piper nigrum L.) phương pháp sắc ký mỏng, sắc ký cột HPLC với hiệu suất tinh từ 85 – 85% độ tinh cao (> 90%) từ mẫu Hồ tiêu đen thu số khu vực Việt Nam Nghiên cứu, kiểm tra đánh giá tiềm chống ung thư dịch chiết tổng số Hồ tiêu Piperine số dòng tế bào ung thư bao gồm dòng tế bào ung thư cổ tử cung Hela dòng tế bào ung thư vú MCF – phương pháp thử độc tính MTT Kết cho thấy, dòng tế bào MCF – 7, dịch chiết tổng số Hồ Tiêu Piperine gây chết (IC50 > 50 μg/ml) Tuy nhiên nồng độ thấp có khả kích thích tăng sinh tế bào Đối với dòng tế bào Hela, mẫu bắt đầu ảnh hưởng đến tế bào từ nồng độ thấp, đặc biệt, mẫu dịch chiết tổng số có tác động mạnh nồng độ 10μg/ml, Piperine có số IC50 > 70 μg/ml Keywords: Di truyền học; Hồ tiêu đen; Ung thư; Piperine Content: MỞ ĐẦU Trong số bệnh nan y, ung thư coi bệnh nguy hiểm hàng đầu Hàng năm số ca mắc bệnh tử vong ung thư giới ngày tăng cao Thực tế đặt áp lực cho ngành y tế khoa học cần cấp thiết tìm biện pháp hữu hiệu để phòng tránh điều trị bệnh ung thư Những biện pháp điều trị ung thư phổ biến phẫu thuật, xạ trị hóa chất; có khả chữa bệnh hiệu không cao gây đau đớn di chứng nặng nề cho bệnh nhân Do vấn đề đặt tìm biệt dược phương pháp chữa trị hiệu để hạn chế thấp ảnh hưởng nguy hiểm Một hướng mà nhà khoa học giới nghiên cứu sử dụng hợp chất tự nhiên có sẵn lồi thực vật nhằm kìm chế tiêu diệt tế bào ung thư [8, 21] Ngay từ thời cổ đại, người biết sử dụng loại cỏ tự nhiên để chữa số bệnh thơng thường bệnh ngồi da, cầm máu, ho, sốt… Nền y học cổ truyền phát triển, kèm theo phát nhiều các loại thảo dược khám phá hàng loạt công dụng chúng sáng tạo hàng trăm ngàn thuốc chữa bệnh dựa vào phối hợp loại thảo dược Tuy nhiên, phần l n thuốc cổ truyền xuất phát từ kinh nghiệm dân gian, chưa dựa sở khoa học đầy đủ tác dụng đặc hiệu thuốc Bên cạnh đó, lồi thảo dược hầu hết có thành phần phức tạp, bao gồm thành phần có hoạt tính sinh học chất khơng có hoạt tính sinh học, chí chứa thành phần gây độc Do đó, hiệu chữa bệnh thảo dược tự nhiên hạn chế Để khắc phục nhược điểm này, chương trình sàng lọc thuốc tiến hành dựa việc phân tích thành phần thảo dược, từ tìm thành phần có hoạt tính, đích tác dụng cụ thể tinh biến chúng thành loại thuốc tân dược khác [3,6] Mới có khoảng 1% lồi thực vật nhiệt đới nghiên cứu tiềm dược phẩm, khả tìm kiếm loại hợp chất từ loài nhiệt đới để ứng dụng cho việc sàng lọc thuốc lớn [32] Điều cho thấy tiềm khai thác dược phẩm Việt Nam, nước nhiệt đới có mức độ đa đạng thực vật cao, khả quan Hồ tiêu đen (Piper nigrum L.) loài thực vật nhiệt đới trồng rộng rãi Việt Nam với thành phần Piperine Trên giới có nhiều đề tài nghiên cứu tác động Hồ tiêu đen nói chung Piperine nói riêng dòng tế bào ung thư khác Dựa mục đích tiềm năng, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu tinh xác định tiềm chống ung thư Piperine từ Hồ tiêu đen (Piper nigrum L )” Mục tiêu đề tài tinh hợp chất Piperine từ Hồ tiêu đen, thử hoạt tính số dòng tế bào ung thư, xác định mức độ tác động hợp chất lên phát triển tế bào, từ bước đầu đánh giá tiềm chống ung thư Piperine TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học, Hà Nội Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2009), Cơ sở Di truyền học Phân tử Tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2007), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Lê Đình Sáng (2006), Bệnh học ung thư, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Như Hiền (2005), Di truyền tế bào, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Phan Quốc Kinh (2011), Giáo trình hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học, NXB Giáo dục Việt Nam, Hà Nội Phan Tuấn Nghĩa (2012), Giáo trình Hóa sinh học thực nghiệm, NXB Giáo dục, Hà Nội Phùng Phướng, Nguyễn Văn Cầu, Nguyễn Trần Thúc Huân (2009), Đại cương ung thư, NXB Y học, Hà Nội Trần Quốc Hùng (2005), Y dược học cổ truyền, NXB Hà Nội, Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh 10 Adelia G., Marcela T., Mário A N , Rodrigo F C., Maurício P., José D F (2012), “The combined action of phytolarvicides for the control of dengue fever vector Aedes aegypti”, Revista brasileira farmacognosia, Vol.22, No 3, pps.126 – 132 11 Addison A (1998), Techniques ADN experiments for organic chemistry, University science books, USA 12 Anand A., Kunnumakara AB, Sundaram C, Harikumar KB, Tharakan ST, Lai OS, Sung B, Aggarwal BB (2008), “Cancer is a preventable disease that requires major lifestyle changes” , Pharmaceutical research, Vol.25, No.9, pps.2097 – 2116 13 Arshad C (2004), Cell Culture, The science creative quarterly, USA 14 Batts H., Denise W.(2010), Hela cancer cells lilled Henrietta Lacks Then they made her immortal, The virginian pilot, USA 15 Berger S , Sicker D (2009), Classics in Spectroscopy - Isolationand Structure Elucidation of Natural Products 1st, Wiley VCH , Germany 16 Bezerra D.P., Castro F.O., Alves A.P.N.N , Pessoa C , Moraes M.O., Silveira E.R , Lima M.A.S , Elmiro F.J.M , Costa L.V (2006), “In vivo growth-inhibition of Sarcoma 180 by piplartine and piperine, two alkaloid amides from Piper”, Brazilian journal of medical and biological research, Vol.39, No.6, pps.801 – 807 17 Berridge M V., Herst P M (2005), “Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction”, Biotechnology Annual Review, Vol.11, pps.127-152 18 Chiang A C., Massagué J (2008), “Molecular basis of metastasis”, The new England journal of medicine, Vol.359, pps.2814 – 2823 19 Daniel P.B., Cla´udia P., Manoel O.M., Edilberto R.S., Limab M.A., Elmirob F.J., CostaLotufoa L.V (2005), “Anti proliferative effects of two amides, Piperine and Piplartine, from Piper Species”, A department of physiology and pharmacology, Vol.60, pps.539 – 543 20 Do M.T., Kim H.G., Choi J.H, Khanal T., Park B.H., Tran T.P., Jeong T.C., Jeong H.G (2013), “Antitumor efficacy of piperine in the treatment of human HER2-overexpressing breast cancer cells”, Food Chemistry, Vol.141, Issue 3, pps 2591–2599 21 Douglas H., Robert A Weinberg J (2011), “Hallmarks of Cancer: The Next Generation”, Cell, Vol.41, Issue 5, pps.646 – 674 22 Drews J (2010), “Drug discovery: A Historical Perspective”, Science, Vol.287, No.5460, pps.1960 – 1964 23 Dudhatra G.B., Mody S.K., Awale M.M., Patel H.B., Modi C.M., Kumar A., Kamani D.R., Chauhan B.N (2012), Isolation of piperine from black pepper, The scientific world journal, Vol 2012, Issue 10, pp 33 24 Epstein B., William W (1993)“Isolation of piperine from black pepper”, Journal of chemical education, Vol.70, Issue 7, pps.598 25 Girija R., Vilas G.G (2002), “Microwave-Assisted Extraction of Piperine from Piper nigrum”, Industrial and engineering chemical research, Vol.41, Issue 10, pps.2521 – 2528 26 Graeme J.P., Daniel B., Ruers T (2007), Textbook of Surgical Oncology, Informa healthcare, USA 27 Gulati A.P., Domchek S.M (2008), “The clinical management of BRCA1 and BRCA2 mutation carriers”, Current oncology reports, Vol.10, Issue 1, pps.47 – 53 28 Harry W.L., Christopher J.M (1989), Experimental organic chemistry: principles and practice, Illustrated education, USA 29 Hongbo H , Nam-Shik A , Yang X, Lee Y., Kang K.(2002), “Ganoderma lucidum extract induces cell cycle arrest and apoptosis in MCF-7 human breast cancer cell”, International journal of cancer, Vol.102, Issue 3, pps.250 – 253 30 Igarashi M., Miyazawa T (2010), “Newly recognized cytotoxic effect of conjugated trienoic fatty acids on cultured human tumor cells”, Cancers letter, Vol.148, Issue 2, pps.173 – 179 31 Jemal A., Murray T., Ward E., Samuels A., Tiwari R.C., Ghafoor A., Feuer E.J., Thun M.J (2005), “Cancer statistics”, A Cancer Journal for Clinicians, Vol.55, Issue 1, pps.10 – 30 32 Jonasch E., Kumar U.N., Linette G.P., Hodi F.S., Soiffer R.J., Ryan B.F., Sober A.J., Mihm M.C., Tsao H., Langley R.G., Cosimi B.A., Gadd M.A., Tanabe K.K., Souba W.,Haynes H.A., Barnhill R., Osteen R., Haluska F.G (2000), “Adjuvant high-dose interferon alfa-2b in patients with high-risk melanoma”, Cancer Journal, Vol.6, Issue 3, pps.139 – 145 33 Klein C.A (2009), Parallel progression of primary tumours and metastases, Nature Review Cancer, Vol.9, pps.302 – 312 34 Lindsay S., Kealey D (1992), High performance liquid chromatography, Analytical chemistry by open learning, USA 35 Liu Z., Liu M., Li J.009), “Methylanthraquinone from Hedyotis diffusa WILD induces Ca2+ - mediated apoptosis in human breast cancer cells”, Toxicology in vitro, Vol.24, Issue 1, pp.142 – 147 36 Madhuri K., Dean E B., Hasan K., Connie C., Karim T., Christophe G., Liu S., Gabriela D., Wicha S (2006), “Targeting breast stem cells with the cancer preventive compounds curcumin and piperine”, Breast cancer research and treatment, Vol.122, Issue 3, pps.777 – 785 37 Pagano M (2005), Cell cycle – Materials and methods, Springer lab manual, USA 38 Pradeep C R., Kuttan G (2002), “Effect of piperine on the inhibition of lung metastasis induced B16F-10 melanoma cells in mice”, Clinical and experimental metastasis, Vol.19, Issue 8, pps.703 – 708 39 Morgan S J.; Darling D C (1993), Cell culture models of biological bariers: in – vitro test systems for drug absorption and delivery, Iniversitas saraviensis, USA 40 Mosmann A., Tim C.(1983), “Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays”, Journal of immunological methods, Vol.65, Issue – 2, pps 55 – 63 41 Nakatani N., Inatani R., Ohta H., Nishioka A (1986), “Chemical constituent of Peppers (Piper spp.) and application to food preferation: Naturally occurring antioxidative compounds”, Environmental health perspectives, Vol 67, pp 135 – 142 42 Okwute S.K., Egharevba H.O.(2013), “Piperine type amides: Review of the chemical and biological characteristic”, International Journal of Chemistry, Vol.5, No.3, pps.1224 – 1229 43 Patrick D B , Paula A M., Peter D S (2006), “Asymmetric routes to substituted piperidines”, Chemical communication, Vol.6, Issue 6, pps 633-640 44 Paul B Y., Carolyn D D., Mark W., David W H (2012), “Piperine impairs cell cycle progression ADN causes reactive oxygen species-dependent apoptosis in rectal cancer cells”, Experimental and molecular pathology, Vol.94, Issue 1, pps.109–114 45 Paul M D (2007), Medicinal natural products: A biosynthesis approach 3rd edition, School of harmaceutical Sciences University of Nottingham, UK 46 Raphael I (1991), Natural products – a laboratory guide, Academic Press Limited, UK 47 Rulla M T., Susan E H., Wendy Y C., Bernard R., Graham A C (2006), “Combined estrogen and testosterone use and risk of breast cancer in postmenopausal women”, Archives of Internal Medicine, Vol.166, No.14, pps.483 – 1489 48 Scott I.M., Puniani E., Jensen H., Livesey J.F., Poveda L., Sanchez P., Durst T., Arnason J.T (2005), “Analysis of Piperaceae Germplasm by HPLC and LCMS: A method for isolating and identifying unsaturated amides from Piper spp Extracts”, Jounal of agricultural and food chemistry, Vol.53, No.6, pps.1907 – 1913 49 Thiard F., Tất T.T., Nguyễn T.T., Nguyễn H.N., Nguyễn D.L.H., Nguyễn K.P.P, Nguyễn N.H., Hồ H.T.D (2005), “Antiproliferation activity of Vietnamese medicinal plants on Hela human cervix cancer cell line”, Science and technology development, Vol.11, No.6, pps.74 50 Vtllalón M , Quesada J “High performance liquid chromatography , LÓpez H determination , Serrana of furanic G (1992), compounds in commercial brandies ADN caramels”, Journal of liquid chromatography, Vol.15, Issue 3, pps.513 – 524 51 Wickramasinghe M B (2006), Quality Control, Screening, Toxicity, ADN Regulation of Herbal Drugs, Modern phytomedicine: turning medicinal plants into drugs, USA 52 William W.E., David F.N., Jimmy L.S (2003), “ Isolation of piperine from black pepper”, Journal of chemistry education, Vol.70, Issue 7, pps.598 – 599 ... khác Dựa mục đích tiềm năng, thực đề tài: Nghiên cứu tinh xác định tiềm chống ung thư Piperine từ Hồ tiêu đen (Piper nigrum L )” Mục tiêu đề tài tinh hợp chất Piperine từ Hồ tiêu đen, thử hoạt tính... nigrum L.) loài thực vật nhiệt đới trồng rộng rãi Việt Nam với thành phần Piperine Trên giới có nhiều đề tài nghiên cứu tác động Hồ tiêu đen nói chung Piperine nói riêng dòng tế bào ung thư khác... Hồ tiêu đen, thử hoạt tính số dòng tế bào ung thư, xác định mức độ tác động hợp chất lên phát triển tế bào, từ bước đầu đánh giá tiềm chống ung thư Piperine TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng