đại cương về miễn dịch học

9/13/2012 Chƣơng ĐẠI CƢƠNG VỀ MIỄN DỊCH HỌC Các khái niệm  Tên gọi tiếng Anh “immunity”  Tiếng Latinh “immunitas” có nghĩa miễn trừ Thucydides 9/13/2012 “Tính miễn dịch”  Trung Quốc thời phong kiến : ngƣời dân có tập tục cho ngƣời dân hít chất bột làm từ da ngƣời bị đậu mùa khỏi để phòng ngừa bệnh “Tính miễn dịch”  Edward Jenner - thầy thuốc người Anh - ông lấy dịch từ vết thƣơng ngƣời bị đậu mùa (bò) tiêm cho đứa trẻ tuổi sau hồi phục khơng mắc bệnh đậu mùa 9/13/2012  “Vaccination” (chủng ngừa) (vaccination bắt nguồn từ tiếng Latinh “vacca” nghĩa bò cái)  Thế giới năm 1890 cho bệnh đậu mùa bệnh giới bị loại trừ nhờ vào công tác chủng ngừa Miễn dịch (immunity) Là khả bảo vệ thể chống lại tác nhân gây bệnh xâm nhập từ bên ngoài: yếu tố truyền nhiễm nhƣ vi sinh vật,cơn trùng,kí sinh trùng,các protein lạ gây độc cho thể Miễn dịch học (immunus hay immunology) Là môn học nghiên cứu hệ thống miễn dịch đáp ứng hệ thống trƣớc tác nhân gây bệnh xâm nhập vào thể 9/13/2012 Hệ thống miễn dịch (Immune system) Là tập hợp tế bào, mô phân tử tham gia vào trình đề kháng chống nhiễm trùng Đáp ứng miễn dịch (Immune Response) Bao gồm nhận biết tác nhân gây bệnh chất lạ, phản ứng nhằm loại bỏ chúng khỏi thể Miễn dịch không đặc hiệu miễn dịch đặc hiệu (Innate and Adaptive Immunity)  Hệ miễn dịch khơng đặc hiệu (còn gọi miễn dịch tự nhiên) bao gồm chế đề kháng tồn thể chƣa có nhiễm trùng sẵn sàng đáp ứng nhanh vi sinh vật xâm nhập 9/13/2012 Các thành phần miễn dịch bẩm sinh  Các hàng rào vật lý hoá học nhƣ da, niêm mạc, chất kháng khuẩn đƣợc tiết bề mặt Các thành phần miễn dịch bẩm sinh  Các tế bào thực bào (tế bào trung tính, đại thực bào) tế bào NK (tế bào giết tự nhiên – Natural Killer Cells) 10 9/13/2012  Các protein máu, bao gồm thành phần hệ thống bổ thể chất trung gian khác phản ứng viêm 11 Các thành phần miễn dịch bẩm sinh  Các protein gọi cytokines có vai trò điều hồ phối hợp hoạt động tế bào hệ miễn dịch bẩm sinh 12 9/13/2012 13 Miễn dịch đặc hiệu Miễn dịch dịch thể (humoral immunity)  Đƣợc thực qua kháng thể,  Đƣợc sản xuất tế bào lymphô B  Là chế đề kháng chủ yếu chống lại vi sinh vật ngoại bào  Kháng thể phân tử đƣợc chun mơn hố, tạo nhiều chế loại bỏ kháng nguyên khác  Một số kháng thể khác kích thích tế bào bạch cầu sản xuất chất trung gian phản ứng viêm 14 9/13/2012 Miễn dịch đặc hiệu Miễn dịch qua trung gian tế bào (cellmediated immunity)  Là kiểu đáp ứng đƣợc thực qua trung gian tế bào lymphô T  Do vi sinh vật : virus số vi khuẩn không chịu tác động trực tiếp kháng thể lƣu động máu 15 16 9/13/2012 MIỄN DỊCH TẾ BÀO Các quan lympho trung ƣơng Các quan lympho ngoại biên Miễn dịch chủ động thụ động 9/13/2012 Tính đặc hiệu đa dạng  Thành phần kháng nguyên đƣợc gọi định kháng nguyên hay epitop  Opsonin hoá : kháng thể chuẩn bị vi khuẩn để TB thực bào dễ bắt giữ  Tính đặc hiệu : màng tế bào lymphơ có thụ thể riêng để nhận diện cấu trúc kháng nguyên khác 20 10 9/13/2012 Miễn dịch ngƣng kết (agglutination) Ưu điểm phương pháp đơn giản, cần trang bị máy quang phổ kế đo bước sóng 340 nm ủ nhiệt 37oC Khuyết điểm hạn chế số thử nghiệm độ nhạy chất phát thấp Miễn dịch kết tủa (IMMUNOPRECIPITATION) Dựa nguyên tắc kết hợp KN KT tạo kết tủa mơi trường thích hợp (như polyethylene glycol), lượng KT nhiều tạo thành độ đục đo bước sóng UV (340nm) 9/13/2012 Miễn dịch kết tủa (Immunoprecipitation) Miễn dịch khuyếch tán đơn (single radial imminodifusion, RID) 9/13/2012 Đường chuẩn dùng kỹ thuật Mancini Kỹ thuật Mancini • Kháng huyết hòa tan vào thạch đun lỏng • Hỗn hợp thạch-kháng huyết đổ rải • Đục lỗ tròn thạch cho huyết cần đo huyết chứng vào • Kháng nguyên khuyếch tán theo hướng ly tâm từ lỗ vùng thạch có chứa kháng huyết • Vòng tủa 48 ổn định=>tương đối 10 nhạy (->5 mg/lít) đáng tin cậy 9/13/2012 Miễn dịch khuyếch tán kép thạch (Double diffusion in two dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony) Kỹ thuật dựa hình thành cấu trúc mạng lưới agarose Các phân tử có trọng lượng nhỏ 200 kDa khuếch tán dễ dàng agarose, phân tử có trọng lượng lớn di chuyển chậm khó khăn 11 Miễn dịch khuyếch tán kép thạch 12 9/13/2012 Căn vào đường kết tủa có trường hợp xảy + Các giếng chứa kháng nguyên đồng tương ứng với kháng thể đường kết tủa gặp nối liền => tượng hai kháng nguyên đồng + Hai giếng chứa kháng nguyên có phần tương ứng với phần khác kháng thể xuất hai đường kết tủa cắt => hai kháng nguyên không đồng + Hai giếng chứa kháng nguyên có liên quan phần với kháng thể (cùng có chung epitop A), tạo hai đường kết tủa gặp nhau, đường dài đường ngắn 13 14 9/13/2012 15 Miễn dịch Enzyme (ELISA: enzyme linked immuno sorbent assay) Nguyên tắc kết hợp KN KT phát (định lượng) chất đánh dấu enzyme (alkaline phosphataze peroxidaza) ELISA thuộc hệ thống kỹ thuật MD enzyme pha rắn (giá đỡ KN hay KT) Pha rắn điều kiện cần thiết cho thành công phản ứng, phản ứng MD xảy Tùy theo yêu cầu kỹ thuật pha rắn là: Bề mặt polystyrol, polyvinylchlorid, chất dẽo… Các thành phần phản ứng hấp phụ vật lý Cellulose, agarose… Các thành phần phản ứng gắn liên kết hóa học 16 9/13/2012 Đo mật độ quang Cơ chất Máy ủ Máy rửa Cộng hợp Kháng nguyên Kháng IgM Máy ño quang Phản ứng gồm giai đoạn Kết hợp KN KT (giai đoạn 1) Kết hợp chất đánh dấu (conjugate enzyme) vào phức hợp KN KT (g.đoạn 2) Giai đoạn màu đọc kết (giai đoạn 3) 18 9/13/2012 Miễn dịch vi hạt (MEIA) (micro-particle enzyme immuno assay) phương pháp cải tiến dựa ELISA Cải tiến từ kỹ thuật ELISA: pha cứng (solid phase) phản ứng (KN hay KT) gắn vi hạt treo lơ lững dung dịch, đem đến ưu điểm sau : + Tăng diện tích tiếp xúc KN KT, làm tăng độ nhạy, giảm thời gian ủ, giảm thời gian làm phản ưng + Giúp tự động hóa kỹ thuật rửa, giúp rửa 19 Miễn dịch huỳnh quang (FIA) (fluoro immunoassay) Kỹ thuật thực bao gồm giai đoạn kỹ thuật ELISA, ngoại trừ điểm sau: Thay chất đánh dấu chất phát huỳnh quang Phát (định lượng) chất đo quang kế huỳnh quang (fluorometer) Khuyết điểm vấn đề nhiễu: chất phát huỳnh quang diện tự nhiên Do tín hiệu huỳnh quang phát phải cao hẳn so với nhiễu, nên độ nhạy thử nghiệm không cao.20 10 9/13/2012 Miễn dịch huỳnh quang (FIA) (fluoro immunoassay) KT gắn FITC Kháng thể (KT) Tiêu tế bào nhiễm bệnh Miễn dịch phóng xạ (RIA) (radio immuno assay) Kỹ thuật thực bao gồm giai đoạn kỹ thuật ELISA, ngoại trừ điểm sau: + Chất đánh dấu đồng vị phóng xạ nguyên tố I125 hay Co63 + Phát (định lượng) chất đo máy đếm phóng xạ (Geiger Meter) Phương pháp có độ nhạy tốt, tốc độ phản ứng chậm cần nhiều thời gian để đếm xạ phát 22 11 9/13/2012 Tạo Ag phóng xạ miễn dịch cạnh tranh 24 12 9/13/2012 25 Miễn dịch Hóa phát quang trực tiếp (DCLIA) (Direct-chemiluminescense immuno assay) Chất đánh dấu phân tử khả phát quang thay đổi pH môi trường (Acridinium Ester ) Phức hợp KN-KT sau rửa thêm vào chất acid, sau cho vào chất kiềm, vòng giây phân tử Acridinium Ester phát quang Để định lượng ánh sáng phát ra, cần dùng buồng nhân quang (luminometer) buồng tối, lượng ánh sáng phát tỉ lệ với nồng độ chất cần phân tích có mẫu thử 26 13 9/13/2012 PP gắn trực tiếp PP gắn cạnh tranh Kháng thể pha rắn gắn vào KN HT bệnh nhân, sau gắùn vào chất liên kết kháng thể mang acridium KN cần đo chất đánh dấu mang acridinium gắn cạnh tranh vào KT pha rắn 27 Miễn dịch Điện hóa phát quang (ECLIA) (Electro-chemiluminescense immuno assay) Dựa sử dụng phức hợp Ru(bry)32+ (Ruthemium (II) tris (bipyridyl) TPA (Tripropylamine) Hoạt động có khởi động điện Phản ứng xảy tác dụng điện áp Khi đặt điện lên điện cực buồng đo, phức hợp ruthenium kích hoạt tín hiệu phát quang hình thành 28 14 9/13/2012 29 Máy điện hóa phát quang 30 15 9/13/2012 TPA e- H+ TPA ** TPA * e- Điện cực [Ru(bpy)33+] [Ru(bpy)32+] e[Ru(bpy)32+] Photon (620nm) NỘI DUNG NẮM BẮT KIẾN THỨC PHƯƠNG PHÁP MIỄN DỊCH Miễn dòch ngưng kết độ đục Các hệ thống máy Sinh hóa tự động bán tự động CÁC XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯNG Apo A1 , Apo B , C3 , C4 , CRP, Ferritin IgA, IgG, IgM, Microalbumin… Miễn dòch men (ELISA, MEIA) Các hệ thống ELISA thủ công bán Các hormon: LH, Prolactin, Abbott (AxSYM) Thyroglobulin, Insulin, Testosteron, BioMerrieux (Vidas, MiniVidas) Progesteron… Miễn dòch huỳnh quang Các điểm ung thư: CEA, PAS, Hóa phát quang trực tiếp Abbott (Architect i2000 ) Bayer (ACS:180SE, ADVIA centaur) Điện hóa phát quang Roche (Elecsis 1010, Elecsis 2010) FT4, FSH, tự động Abbott (iMX, AxSYM) FT3, TSH, TBG, AFP, NSE… Các XN viêm gan siêu vi: Anti HAV, 5HBV, Anti HCV… Các chất khác : Troponi I, TroponinT, Ferritin… 32 16 9/13/2012 KẾT THÚC CHƢƠNG 33 17 ... ứng miễn dịch đặc hiệu 37 KIẾN THỨC CẦN NHỚ  Khái niệm miễn dịch  Phân biệt miễn dịch: đặc hiệu không đặc hiệu  Phân loại nhóm loại miễn dịch  Các đặc tính miễn dịch  Hệ thống miễn dịch. .. 11 Các thành phần miễn dịch bẩm sinh  Các protein gọi cytokines có vai trò điều hồ phối hợp hoạt động tế bào hệ miễn dịch bẩm sinh 12 9/13/2012 13 Miễn dịch đặc hiệu Miễn dịch dịch thể (humoral... dung nạp dẫn đến đáp 28 ứng miễn dịch kháng nguyên thân (tự kháng nguyên) hình thành bệnh tự miễn 14 9/13/2012 29 HỆ THỐNG MIỄN DỊCH Hình: Hệ thống vị trí quan miễn dịch người 30 *gut-associated