PHÁT HIỆN GEN ĐỘC LỰC stx1, stx2, eae, hly CỦA ESCHERICHIA COLI NHÓM STEC VÀ GEN rfbE, fliC CỦA SEROTYPE O157:H7 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP TP. Hồ Chí Minh 07102009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BÙI THỊ THU TRANG PHÁT HIỆN GEN ĐỘC LỰC stx1, stx2, eae, hly CỦA ESCHERICHIA COLI NHÓM STEC VÀ GEN rfbE, fliC CỦA SEROTYPE O157:H7 Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 62 50 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS. TS. NGUYỄN NGỌC TUÂN TP. Hồ Chí Minh 07102009 i PHÁT HIỆN GEN ĐỘC LỰC stx1, stx2, eae, hly CỦA ESCHERICHIA COLI NHÓM STEC VÀ GEN rfbE, fliC CỦA SEROTYPE O157:H7 BÙI THỊ THU TRANG HỘI ĐỒNG CHẤM LUẬN VĂN 1. Chủ tịch: PGS.TS. TRẦN ĐÌNH TỪ Hội Thú Y Việt Nam 2. Thư ký: TS. NGUYỄN THIÊN THU Công Ty Thuốc Thú Y Trung Ương 2 3. Phản biện 1: PGS.TS. TRẦN THỊ DÂN Đại Học Nông Lâm TP. HCM 4. Phản biện 2: TS. NGUYỄN TẤT TOÀN Đại Học Nông Lâm TP. HCM 5. Ủy viên: PGS.TS. NGUYỄN NGỌC TUÂN Đại Học Nông Lâm TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH HIỆU TRƯỞNG ii LÝ LỊCH CÁ NHÂN Họ và tên: Bùi Thị Thu Trang Ngày sinh: 20021981 Nơi sinh: Tiền Giang Họ tên Cha: Bùi Văn Khiến Họ tên Mẹ: Lê Thị Siêng Quá trình học tập Năm 1999: Tốt nghiệp phổ thông trung học tại trường PTTT Cái Bè, Tiền Giang Năm 2004: Tốt nghiệp ngành Bác sỹ thú y tại Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh Năm 2005: Học Cao học thú y tại Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh Tình trạng gia đình: chưa Địa chỉ liên lạc Email: buithithutranggmail.com Điện thoại: 0907 133110 iii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tác giả iv LỜI NÓI ĐẦU Mấy năm cao học đã trôi qua, với hơn 15 tháng thực tập đề tài. Trong những tháng ngày này, tôi đã học hỏi được rất nhiều kiến thức chuyên môn lẫn trong cuộc sống. Tôi vui mừng khi biết mình thêm khôn lớn. Để có được như ngày hôm nay làm sao con quên được công ơn của Cha Mẹ, người đã sinh con ra và vất vả nuôi con ăn học nên người. Một lần nữa, cho con được khắc ghi lòng kính trọng và nhớ ơn Thầy Nguyễn Ngọc Tuân, người Thầy thật đáng kính như một người Cha Thành kính ghi ơn BGH Trường ĐHNL TP. HCM, BCN Khoa CNTY, Quý Thầy Cô trong Khoa luôn hết lòng vì học trò. Chân thành cảm tạ Viện CNSH MT, phòng thực tập KNTS MTSKVN luôn tạo điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành đề tài. Cho em được gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô Hồ Thị Kim Hoa, Cô luôn tận tình chỉ dạy và cũng hay chê em nhiều nhất, nhưng em biết mỗi lần chê là một lần Cô mong em thêm tiến bộ. Sự biết ơn xin được giữ lại trong lòng với rất nhiều người mà tôi không kịp kể tên, những anh chị, bạn bè, em út thật dễ thương và vô cùng tốt bụng mà tôi đã may mắn được gặp trong suốt những tháng ngày học tập. Bùi Thị Thu Trang v TÓM TẮT Đề tài “Phát hiện gen độc lực stx1, stx2, eae, hly của Escherichia coli nhóm STEC và gen rfbE, fliC của serotype O157:H7” được thực hiện từ tháng 082007 đến 112008 tại trường Đại Học Nông Lâm TP. HCM. Quá trình nghiên cứu bao gồm thu thập và xử lý 238 mẫu phân bò, phân lập vi khuẩn E. coli, PCR để phát hiện gen, thử phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính, và giải trình tự nucleotide một số sản phẩm PCR. Kết quả thu được: (1) Tỷ lệ phát hiện gen độc lực của nhóm STEC có liên quan đến tuổi, tình trạng tiêu chảy, giống và mùa. Cụ thể, tỷ lệ phát hiện gen độc lực của E. coli trên phân bò luôn cao hơn trên phân bê, trong phân tiêu chảy cao hơn phân bình thường, giống bò sữa cao hơn bò ta, và mùa mưa luôn cao hơn mùa nắng. Đặc biệt, đã phân lập được 2 gốc vi khuẩn E. coli có mang gen rfbE và fliC mã hóa kháng nguyên thân O157 và kháng nguyên lông H7. Đồng thời, chúng cho kết quả dương tính với bộ kháng huyết thanh của serotype O157:H7. (2) Hai gốc vi khuẩn O157:H7 được phân lập có độ tương đồng cao về gen eae, rfbE, và fliC (>96%); tương đồng rất thấp về gen stx2 và gen hly (96%); tương đồng thấp gen stx2 gen hly (