ĐỀ CƯƠNG MÔN VSV ĐẠI CƯƠNG 2014

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y ĐỀ CƢƠNG ÔN THI HẾT HỌC PHẦN MÔN: Vi Sinh Vật Đại Cƣơng Trình b ày đặc điếm củ a vi khuấn? - Vk (Bacteria) vi sinh vật mà thể gồm tế bào - Không có màng nhân - Kích thước dài : 1-10mcromet, rộng: 0,2-1,5 micromet - Vk có hình thái riêng, đặc tính s/học riêng, đa số sống hoại sinh tự nhiên, số có k/ n sinh kháng sinh, số có k/n gây bệnh cho người, đv - Có thể nuôi cấy mt nhân tạo quan sát hình thái chúng kính hiển vi quang học thơng thường - Vk có hình thái định màng vk định - Dựa vào bề chia vk làm loại + Cầu khuẩn + Xoắn khuẩn + Trực khuẩn + Phẩy khuẩn + Cầu trực khuẩn Trì nh b ày c ác d ạng hì nh thá i c ủ a c ầ u khuấ n? - Là loại vk phần lớn có hình cầu, bầu dục hình nến VD : Lậu cầu - Neisseia gonorrhoeiae hình bầu dục - Đường kính khoảng 0,5-1 micromet - Tùy theo lối phân chia, mặt phẳng phân cách, đặc tính rời dính sau phân chia mà cầu khuẩn chia thành giống sau: a Vi cầu khuẩn (Micrococcus) - cầu khuẩn đứng riêng rẽ tế bào - sống hoại sinh đất, nước, khơng khí - mơ, quan cá tươi : Micrococcus agilis b Song cầu khuẩn (Diplococcus) - phân chia cầu khuẩn pphân cắt theo mắt pphẳng xđ dính lại với thành đôi - đa số sống hoại sinh tự nhiên - số có khả gây bệnh : + Lậu cầu khuẩn : Neisseia gonorrhoeae + Phế cầu khuẩn : Diplococcus pneumonia + Não cầu khuẩn : Neisseia meningitidis c Liên cầu khuẩn (Streptococcus) - cầu khuẩn pphân cắt theo mắt pphẳng xđ dính liền với thành chuỗi dài Chiều dài chuỗi phụ thuộc mt nuôi cấy - Một số có k/n gây bệnh cho người, đv : + Liên cầu khuẩn gây mủ : streptococcus pyogenes + Liên cầu khuẩn gây bệnh viêm hạch truyền nhiễm ngựa : Streptococcus equi SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y d Tụ cầu khuẩn(Staphylococcus) - Cầu khuẩn pphân cắt theo măt pphẳng dính với thành đám chùm nho - đa số sống hoại sinh - số kí sinh da, niêm mạc miệng , mũi người - có k/n gây bệnh cho người đv Staphylococcus aureus e Tứ cầu khuẩn( Tetracoccus) - cầu khuẩnpphân cắt theo mătpphẳng trực giao, tb dính với thành nhóm - Thường sống hoại sinh - có số lồi có k/n gây bệnh cho động vật : tetracoccus homari f Bát cầu khuẩn (Sarcina) - cầu khuân pphân cắt theo mătpphẳng trực giao, 8-16 tb dính với thành nhóm - khơng khí thường gặp Sarcina lutea, aurantiaca - mơ, cá gặp : Sarcina alba, flava Trì nh b ày cá c d ạng hì nh thái c ủ a tr ực khua n? - tên chung vk có hình que, gậy - kích thước 0,5-1 x 1- micromet - trực khuẩn chia loại sinh ko sinh nha bào * Trực khuẩn sinh nha bào có giống: Bacillus Clostridium a Bacillus : trực khuẩn Gram +, sống hiếu khí Sinh nha bào, chiều ngang nha bào nhỏ chiều ngang vk nên vk mang nha bào => ko biến dạng VD: Trực khuẩn nhiệt thán : Bacillus anthracis b Clostridium : trực khuẩn Gram + , sống yếm khí Sinh nha bào chiều ngang nha bào lớn thân vk =>khi mang nha bào bị biến đổi hình dạng VD: Trực khuẩn uốn ván : Clostridium tetani * Trực khuẩn không sinh nha bào a Bacterium : vk Gram - ko sinh nha bào, có lơng quanh thân, sống hiếu khí VD : Escherichia coli, Salmonella typhi, shigella b Corybactetium : trực khuẩn sống hiếu khí tùy tiện, khơng có lơng VD: Trực khuẩn đóng dấu lợn : Erysipelothrix rhusiopathiae c Pseudomonas : trực khuẩn sống hiếu khí, khơng sinh nha bào , Gram - sinh sắc tố, có đơn mao tùng mao, có nhiều đất ,nước, phần lớn ko gây bệnh số có kn gây bệnh cho người, đv VD : trực khuẩn mủ xanh : Pseudomonas aeruginosa Trình bày hình thá i c ủ a c ầ u tr ực khua n, xoắ n khua n, phay khua n.? a Ca u trực khua n ( Coccobactetium) - vk trung gian cầu khuẩn trực khuẩn - hình trứng hình bầu dục - Kích thước : 0,25 - 0,4 x 0,4 - 1,5 micromet SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y - sống hiếu khí, bắt màu Gram Vd: vk gây tụ huyết trùng : Pasteurella multocida Vk gây bệnh sảy thai truyền nhiễm : brucella abortus b Xoắ n khuẫ n ( Spirilium) - gồm loại vk dai, mềm mại, có vòng xoắn trở lên - di động nhờ co rút thân - sống rải rác tự nhiên, đa số ko gây bệnh số có kn gây bệnh Tùy cách xếp vòng xoắn -> có giống sau: + Borrelia : vòng xoắn thưa, ko đều, ko có quy tắc, VD : xoắn khuẩn gây tăng sinh bạch cầu gà : Borrelia gallinarum + Treponema : nhiều vòng xoắn sát , sx đặn, có quy tắc VD :xoắn khuẩn gây bệnh giang mai : treponema pallidum + Leptospira : vòng xoắn sát nhau, xếp lộn xộn, đầu uốn cong móc câu VD: Xoắn khuẩn chó : Leptospira canicola c Phây khuẫ n ( Vi b rio) - vk có hình que, uốn cong lên dấu phảy, có lơng hđ mạnh, phần lớn sống hoại sinh, số có kn gây bệnh VD : phảy khuẩn gây bệnh thổ tả, Vibro cholerae Hi ểu b i ết cấ u tạo tế b o vi khuẫn? - Tế bào vk có tính chất khác với tế bào động, tv - nhân ko có màng nhân, nhiễm sắc thể - khơng có máy phân bào, lưới nội hạt, ty lạp thể, lục lạp, ko có chuyển động dòng tb Đi từ ngồi vào tế bào vk có cấu tạo sau: Màng tế bào a Đăc điểm: s Bao học quanh vk sát màng NSC s Chiếm từ 10-40% trọng lượng khô tb s Gồm nhiều lớp khác tùy loài : Vk gram + màng dày 15-30 nm Gồm nhiều lớp glucopeptit , acid teichoit Vk Gram - màng dày 8-12nm Gồm nhiều lớp , màng ngồi có LPS, glucopeptit chiếm 5-10 % b Chức năng: s Giúp vk có hình dáng ổn định s Chịu áp suất thẩm thấu nội bào s Bảo vệ tb khỏi số chất có hại s Là nòng cốt kháng nguyên thân O vk loại kháng nguyên quan trọng để xđ phân loại chúng s vk gây bệnh có vai trò định tới khả gây bệnh vk s Có vai trò định tính bắt màu vk nhuộm Màng nguyên sinh chất SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y a Đăc điểm: s Nàm phía màng tế bào Bao bọc khối NSC cấu trúc 50-100 Ao s Lớp màng lớp protit , lớp phospholipid , phân bố PL ko tạo thành lỗ hổng màng cho chất qua cách chọn lọc chứa Pr vận chuyển b Chức năng: s Vai trò lớn hđ sống tế bào s Duy trì áp suất thẩm thấu tb s Hấp thu thải chất chọn lọc s Đảm bảo việc chủ động tích lũy chất dinh dưỡng thải sp TĐC s Là nơi tổng hợp enzym ngoại bào s Là nơi chưa số enzym đặc biệt enzym chuyển hóa hơ hấp số quan tử tế bào mezoxome, riboxome s Là nơi xảy trình sinh tổng hợp số tb s Tham gia vào trình phân chia tế bào Nguyên sinh chất s Nguyên sinh chất tế bào vk khối keo chứa 80-90% H2O, chủ yếu pioproteit s Khi tb non nhuộm màu ta thu màu đồng cấu tạo tb cấu tạo đồng s Trong Nguyên sinh chất tb trưởng thành người ta thấy có nhiều quan tử mezoxome, riboxome, ko bào, hạt dự trữ, sắc tố cấu trúc nhân nên nhuộm màu ko Nguyên sinh chất gồm quan tử Mezoxome riboxome Thể nhân Thể nhân phận chứa đựng máy di truyền tb vk có nhiều AND vk nhân ko phân hóa thành khối, ko có màng nhân nen khó quan sát, nhiễm sắc thể , sợi AND xoắn, có dạng vòng tròn đóng kín, mở vòng xoắn , sợi AND dài thêm khoảng 1mm có nhiễm sắc thể nên phân chia vk phân chia đơn giản cách cắt đôi Chức : đk việc sinh tổng hợp protein, di truyền tc tb cho hệ sau Các cấu trúc khác : ngồi cấu trúc vk có giáp mơ, nha bào, lơng vi khuẩn 6.Gi p mơ củ a vi khuấ n (vị trí, cấ u tạo, ch ức năng)? - Ở số loài vk , bên màng tb bao bọc lớp vỏ gọi giáp mô hay vỏ nhày - Giáp mơ có loại + Macrocapsule dày 0,2 - 20 micromet + Macrocapsule dày < 0,2 micromet - hóa học giáp mơ chủ yếu Polysaccharide chứa 98% nước * Chức củ a gi p mô : - Bảo vệ vk chống lại yto bất lợi : học, hóa chất gây hại - vk gây bệnh làm tăng kn gây bệnh giảm kn thực bào thể kí SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y chủ - nơi tích lũy chất dự trữ số chất cần thiết - giúp vk dễ dàng gắn vào giá thể - giáp mơ gây hại cho cn sx thực phẩm, làm biếnđổi chất lượng - Làm tích lũy chất nhày thiết bị lọc 7.S ức đ ề ng củ a nha b o? Tại s a o nha b o có s ức đ ề ng cao? *Sức đề kháng nha bào a.Nha bào : số loại vk gđ định hình thành tế bào cấu trúc đặc biệt có hình cầu, bầu dục gọi nha bào Nha bào thường sinh đk khó khăn mt thiếu TĂ, nhiệt độ, độ pH ko phù hợp, mt tích lũy nhiều sp trao đổi chất bất lợi - hình thức sống tiềm sinh vk giúp nóvượt qua đk sống bất lợi ngoại cảnh Chỉ có nhóm trực khuẩn - nha bào có sức đề kháng cao nhân tố vly, hóa shocj, nhiệt độ, tia cực tím, áp suất chất sát trùng Trong đk tự nhiên tồn lâu => nguồn gây bệnh nguy hiểm nhiệt thán, uốn ván b Nha b o có s ức đ ề ng ca o l d o cá c nguyên nhân s a u : - Nước nha bào phần lớn trạng thái liên kết => ko làm biến tính protit tăng nhiệt - Enzyme chất hđ sinh học khác nha bào tồn dạng ko hđ - Trong nha bào có lượng lớn icon Ca2+ loại acid dipicolinic protit tb kết hợp với Ca2+ => phức chất protein dipicolinat canxi có tính ổn định cao với nhiệt độ - Sự có mặt acid amin chưa lưu huỳnh Cystein làm nha bào kháng với tia cực tím - Khi gặp đk thuận lợi nha bào hít nước trương lên màng nứt tạo thành vk Sự nảy mầm làm đổi nâng cao sức sống tb vk Nha bào thường gặp số giống vk Bacillus, Clostridium Hình thá i củ a x khua n? Va i trò củ a x khua n tự nhiên đ òi s ố ng.? a Hình thái xa khuẩn - Xạ khuẩn nhóm vsv đơn bào phân bố rộng rãi tự nhiên chí chất mà vk nấm mốc ko phát triển - Xạ khuẩn loại vsv trung gian nấm vk - Kích thước xạ khuẩn tương tự kích thước vk Nhân giống nhân vk - Xạ khuẩn có cấu tạo dạng sợi , phát triển phân nhánh thành sợi nhỏ dài gọi khuẩn ty - Mỗi khuẩn ty tế bào, tập hợn khuẩn ty gọi khuẩn ty thể - Khuẩn ty ko có vách ngăn, có hình que - Bắt màu Gram + - Khuẩn ty có đường kính từ 0.2-1.5 micromet SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y - Khi già xạ khuẩn trở nên giòn , dễ dãy thành đoạn nhỏ b Vai trò xa khuẩn tư nhiên đời sống Xạ khuẩn phân bố rộng tự nhiên, có vai trò quan trọng nhiều mặt Hì nh thành tạo độ phì nhiêu đất P hân giải nhiều hợp chất hữu phức tạp : Xenlulozo, chất mùn kitin, keratin - Xạ khuẩn dùng rộng rãi ngành công nghiệp sản xuất :Enzym, Vitamin, Acid hữu cơ, acid amin - Đặc điểm quan trọng bậc xạ khuẩn có tới 70% số xạ khuẩn phân lập có khả tiết kháng sinh + xạ khuẩn streptomyces griceus tiết streptomycin + xạ khuẩn Actinomyces rimosus tiết tetracycline - Tuy nhiên số xạ khuẩn lại có hại gây bệnh khó chữa người động vật Actiomycosis VD : Bệnh xạ khuẩn bò Actinomyces bovis gây phủ tạng nhiều cục viêm , mưng mủ Tiế t độc tố ức chế vsv có ích đất, ức chế phát triển cây, Hì nhthá i củ a nấ m mố c? Va i trò củ a nấ m mố c tự nhiên đ òi s ố ng? a Hình thái nấm mốc Nấm mốc tên chung dùng để tất nhóm nấm ko phải nấm men, ko phải nấm lớn có mũ nấm rơm, nấm gỗ Chúng vi nấm dạng sợi - Nấm mốc nhóm vsv có tế bào hồn chỉnh , kích thước lớn, đơn bào đa nhân đa bào đơn nhân - Nấm mốc có phận khuẩn ty bào tử + Khuẩn ty hay sợi nấm : có cấu tạo dạng sợi phân nhánh, sợi sinh trưởng đỉnh gọi khuẩn ty Cả đám gọi khuẩn ty thể hay sợi nấm Khuẩn ty sinh từ bào tử, chiều ngang 3-10 micromet gấp 10 lần xạ khuẩn Tùy loại khuẩn ty hình xo, xoắn ốc, vợt, sừng hươu, lược, Sợi nấm có loại sợi nấm có vách ngăn sợi nấm ko có vách ngăn Phầ ,ớn loại nấm mốc , sợi nấm có vách ngăn nên chúng có cấu tạo đa bào, số loại sợi nấm bậc thấp ko có vách ngăn , toàn hệ sợi nấm coi tế bào phân nhánh gọi thể đa nhân - Nấm mốc có loại khuẩn ty, Khuân ty chất, khuẩn ty khí sinh, khuẩn ty sinh sản + Bào tử quan sinh sản chủ yếu nấm mốc Khi nấm mốc trưởng thành , khuẩn tinh sinh sản sinh sản bào tử Bào tử hình thành hình thức sinh sản vơ tính hữu tính b Vai trò nấm mốc tư nhiên đời sống Nấm mốc phân bố rộng rãi tự nhiên có nhiều tính chất có ích Góp phần SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y quan trọng khép kín vòng tuần hoàn vật chất mạnh mẽ hợp chất hữu phức tạp chế phẩm sinh học Enzym, Kháng sinh - Tổng hợp chất hữu quan : cồn, acid lactic Một số nấm có khả tích lũy vitamin : B2 Sản xuất nước chấm lên men : tương, xì dầu, í Ạ _ • r p _ _ 1 Ạ Ạ 1 ' Ạ Ặ ' Ậ , _ Ạ Ả _ ~ Ạ Ạ i _ Phân giải Sản xuất Ại r _ _ _ _ _ _ _ _ • / — \ Tuy nhiên số mốc gây lên số tác hại: Gây số bệnh phổ biến khó chữa người động vật VD: Nấm gay hắc lào dermantophytes Lang ben malasseria fufu Gia súc, gia cầm có : aspergillus fumigatus 10 Hì nhthá i củ a nấ m men? Va i trò củ a nấ m men tự nhiên đ òi s ố ng ? a Hình thái nấm men - Nấm men nhóm vsv đơn bào - Có cấu tạo hồn chỉnh - Kích thước tế bào lớn 3-5 x 5-10 micromet - Nấm men có nhiều hình thái s Hình cầu - giống torula s Hình tam giác - Giống s Hình trứng , bầu dục - giống Trigonopsis saccharomyces s Hình dạng sợi phân nhánh s Hình ống - giống pichia Giống candida b Va i trò củ a nấ m men tự nhiên đ òi s ố ng - Phân bố rộng rãi tự nhiên có vai trò quan trọng nhiều mặt - Tham gia khép kín vòng tuần hồn vật chất - Hầu hết nấm men ko sinh chất độc gây hại cho người, động vật => ứng dụng rộng rãi : Chế tạo chất hữu quan trọng : cồn, axetol Chế biến thực phẩm : rượu, bia, Nước chấm - Sản xuất protein đơn bào - Dùng nấm men lên men trực tiếp thức ăn cho gia súc Tuy nhiên số nấm men có hại : Gây bệnh cho người gia súc candida albicus Làm hỏng thực phẩm hoa 11 Hì nh thức sinh sản củ a vi khuấ n nấ m men? Nấm men có hình thức sinh sản - sinh sản vơ tính - sinh sản hữu tính a Sinh sản vơ tính : SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y - Bằngpphương thứcpphân cắt : vk tế bào dài sau hình thành cách ngăn đặc biệt phân cắt thành nhiều tế bào - Bằngpphươngppháp chồi.: hình thức ss phổ biến nấm men Khi trưởng thành nảy chồi nhỏ, lớn lên phần nhân mẹ truyền qau sau tách thành nhân hình thành vách ngăn tế bào mẹ giúp tế bào tách ko tiếp tục nảy sinh tế bào - Bằng cách hình thành bào tử vơ tính : hình thành bào tử vơ tính tế bào riêng rẽ ko qua tiếp hợp b Sinh sản hữu tính: - số loại nấm men bào tử hình thành tiếp hợp tế bào Các bào tử hình thành túi tiếp hợp tế bào Đầu tiên xuất mấu lồi chỗ tiếp xúc sau màng bị phân hủy để tạo thành hợp tử nhân phân chia thành 2,4,8 phần nhân kết hợp với phần nguyên sinh chất bao bọc phần màng tạo bào tử, nhiều bào tử bao bọc màng túi bào tử, đk thuận lợi , màng túi bào tử bị phá bào tử giải phóng sau phát triển thành tế bào 12 Hì nh thức sinh sản củ anấm mố c? Có hình thức sinh sản - sinh sản vơ tính - sinh sản hữu tính a Sinh sản vơ tính củ a nấ m mốc có nhi ều hì nh thức - Trực phân : giống vi khuẩn - Nảy chồi : giống nấm men - Khúc khuẩn ty : Trên thể nấm mốc, khuẩn ty đứt rừng đoạn , đoạn phát triển thành thể nấm Hì nh nh b o tử v t ính gồm: + bào tử nỗn: giống sinh sản hữu tính + bào tử màng dày : đoạn khuẩn ty sinh sản xuất tế bào hình tròn màng dày bao bọc hình thành bào tử + bào tử nang: đầu khuẩn ty sinh sản phình to hình thành bọc gọi nang bào tử nang vỡ bào tử giải phóng + bào tử trần: b Sinh sản hữu tính : + bào tử nỗn: đỉnh sợi nấm sinh nỗn khí chứa nhiều nỗn cầu thùng khí gần nỗn khí Nỗn khí buồng khí tiếp xúc thùng khí thụ tinh noãn cầu => noãn bào từ Noãn bào tử bao bọc màng nhày sau time phân chia giảm nhiễm tạo khuẩn ty + bào tử tiếp hơp: khuẩn ty sinh sản khác giới tiếp giáp mọc mấu lồi gọi nguyê khối nang mấu lòi xuất vách ngăn tạo tế bào đa nhân bế bào mấu lồi tiếp hợp tạo thành hợp tử đa nhân có màng nhày bao bọc bào tử tiếp hợp + bào tử túi: Luồng khí túi giao tử tiếp hợp hình thành túi chứa bào tử SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y 13 Đ ặ c đ i ểm củ a tảo? Va i trò củ a tảo tự nhiên đ òi s ố ng? a Đăc điểm tảo - Tảo hiển vi nhóm vi sinh vật tự dưỡng quang - Sống chủ yếu nước nơi có độ ẩm cao Nơi có a/s mặt trời mặt đất, thân cây, tường ẩm - Tảo gồm ngành với khoảng 1500-2000 loài Ngành tảo lam Cyanophyta hay vi khuẩn lam ( cyanobacteria) Ngành Glaucophyta Tảo đỏ Rhodophyta Tảo lục Chlorophyta Tảo mắt Eugleuophyta Tảo rãnh Dinophyta Tảo roi khơng Heterokontophyta Ngành có lớp + Tảo vàng ánh + tảo silic + tảo vàng + tảo động bào tử có điểm mắt + tảo nâu Ngành tảo có phần bám Trong ngành , tảo lam có nhân chưa hồn chỉnh nên gọi vi khuẩn lam Số lại có cấu tạo tế bào hồn chỉnh có nhân thật Eukaryota b Vai trò tảo tư nhiên đời sống - Tảo vk lam phân bố rộng rãi tự nhiên - đa số sống nước ngọt, tảo đỏ, tảo silic sống nước mặn nước lợ , số khác sống cộng sinh bèo hoa dâu - thời gian hệ ngắn 1-3 ngày, tạo nên nguồn hữu lớn cho đất, nước - nguồn dinh dưỡng tảo đơn giản, CO2, muối khống - tảo có khả quang hợp hấp thu CO2, O2 làm khoáng khí mơi trường - Tảo có giá trị dinh dưỡng cao protein tảo cao 40-50% vật chất khô Acid amin ko thay - Hàm lượng vitamin A,B,K chất sinh trưởng cao => nguồn thức ăn tốt cho động vật thủy sinh Tuy nhiên có số lồi tảo độc tiết độc tố gây độc nguồn nước gây hại đv thủy sinh => gây hại người Độc tố tảo có nhóm Độc tố tan, độc tố thần kinh, độc tố tiêu chảy 14 Trình b ày đặc điếm củ a virus? s Có kích thước vơ nhỏ bé từ hàng chục đến hàng trăm nanomet s Muốn quan sát phải sử dụng kính hiển vi điện tử s Khơng có cấy tạo tế bào s Thành phần hóa học đơn giản bao gồm protein loại acid nucleic s Do cấu trúc đơn giản nên vius ko có kn sinh sản mơi trường dinh dưỡng tổng hợp SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y s Sống kí sinh nội bào bắt buộc ko có hệ thống enzym Nếu tác khỏi tế bào kí chủ ko thể tồn s Một số loại virus có kn tạo thành tinh thể 15 Trình bày hình thái, kích thƣớc củ a virus? - Một virus thành thục có cấu trúc hồn chỉnh, có khả gây nhiễm goijlaf hạt virus hay virion Virus có nhiều dạng khác *** Virus có nhiều hình dang khác a Dang hình cầu : Bao gồm phần lớn virus gây bệnh cho người động vật virus cúm, virus quai bị, virus gây ung thư người gia cầm Loại có kích thước khoảng 108-158 nanomet b Dang hình que : bao gồm virus đốm thuốc lá, đốm khoai tây loại có kích thước chiều rộng khoảng 15 nanomet, chiều dài 250 nanomet c Dang hình khối : Gồm virus hình khối đa diện có nhiều cạnh virus đậu, enterovirus, adenovirus, reovirus, papilomavirus người động vật: Kích thước vào khoảng 30-358 nanomet d Dang đăc biêt: có hình giống tế bào sinh dục đực - tinh trùng, đặc trưng cho virus kí sinh tế bào vk gọi thực khuẩn thể hay bacterphage kích thước biến động khoảng 47-104 đến 10 - 225 nanomet *** Kích thƣớc s Phân tử albumin lòng trắng trứng : 10nm s virus lở mồm long móng 10-20 nm s virus viêm não nhật B 22nm s virus viêm tủy xám : 27nm s virus dại : 250nm s virus đậu mùa 260x300nm s vi khuẩn : 750 nm s tế bào hồng cầu : 7500 nm 16 Trình b ày cấu trú c củ a virus? Virus có cấu trúc đơn giản , virus có vỏ protit acid nucleic a Vỏ protit ( Ca px it) vỏ trực tiếp bao bọc virus có chất protit có cấu tạo: - Đơn vị cấu trúc : ptu protein có phân tử lượng 18000-38000 - Đơn vị hình thái : Các đơn vị cấu trúc tập hợp lại với thnafh đơn vị có phân tử lượng cao gọi capxome hay đơn vị hình thái Cuối capxome lại lk với => vỏ Protit bao bọc nhân virus Tùy theo cách sx capxome mà capxit chia thành kiểu cấu trúc: + Cấu trúc xoắn : thuốc nhóm virus có cấu trúc xoắn bao gồm virus đốm thuốc lá, Virus sởi, Virus cúm, Virus Newcastle, Virus quai bị Capxit cấu trúc ống rỗng, thành ống gồm nhiều capxome lk với => nhiều vòng xoắn vòng xoắn gắn chặt với tạo ống dài Bên ống phân tử Acid nucleic nhân virus => dạng cấu trúc khiến đa số virus SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y có hình que + Cấu trúc đối xứng khối : capxit bao gồm nhiều capxome ghép lại với , trường hợp capxit khối đa diện có nhiều góc cạnh đối xứng rõ rệt nhân acid Nucleic nằm Các capxome lk chặt chẽ => khối đa diện bao xung quanh + Cấu trúc phức tạp : Kiểu cấu trúc bao gồm virus đậu mùa đặc biệt thực khuẩn thể T2 vk E.coli có dạng tinh trùng bao gồm đầu , cổ, Đ u : có dạng lăng trụ cạnh, vỏ protein, nhân AND xoắn kép Cổ : nối đầu Có hình xoắn quanh sợi rỗng nhờ ptu AND Phage thâm nhập vào tế bào vk Đu i: ống rỗng có cấu tạo phức tạp, ptu protein có khả đàn hồi có ống trụ Đầu mút có cấu trúc cạnh gọi đĩa gốc, đĩa gốc có gai đuôi sợi protein dài lông , quan cảm nhận màng tế bào vk để virus bám vào => Chức củ a Ca pxit : ^ Bao quanh acid nucleic tạo lớp vỏ bảo vệ nhân khỏi bị phá hủy ^ Giữ cho virus có hình thái, kích thước ổn định o Tham gia vào hấp phụ virus lên tế bào cảm thụ ^ Quyết định tính kháng nguyên đặc hiệu virus b Nhân củ a virus l a ci d nucl eic s Các virus chứa loại ADN ARN Acid nuclein chuỗi đơn chuỗi kép s Các virus gây bệnh thực vật có nhân ARN s Các bacteriophage thường có nhân ADN s Các virus gây bệnh cho người động vật có nhân ADN ARN * Chức nhân virus : s Mang mật mã di truyền đặc trưng cho virus s Quyết định khả gây nhiễm virus s Quyết định khả tái tạo virus tế bào cảm thụ s Mang tính bán kháng nguyên đặc hiệu virus c Cá c cấ u tr ủ c c có liên qua n đ ến virus s Vỏ bọc s Tiểu thể bao hàm s Enzym 17 Có phƣơng phá p n i cấy virus? Trì nh b ày phƣơng pháp n i cấy virus đ ộ ng vật câm thụ ? - Virus sv kí sinh nội bào nên bắt buộc phải nuôi cấy vào tổ chức sống - Hiện có phương pháp ni cấy sau: s Nuôi cấy virus môi trường tế bào tổ chức s Nuôi cấy phôi thai gà phát triển S Ni cấy động vật thí nghiệm * Phƣơng phá p nuô i cấy virus đ ộ ng vật câm thụ > phương pháp cổ điển sử dụng với mục đích phân lập virus SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y nghiên cứu bệnh lý, chế tạo vaxin kháng nguyên phục vụ chẩn đoán > Nhược điểm : time, tốn tiền, gây ô nhiễm, dễ lây lan bệnh > Tiến hành nuôi cấy : Đem mẫu bệnh phẩm nghi ngờ nghiền thành huyễn dịch , lọc , ly tâm lấy phần nước , xử lý kháng sinh để diệt tạp chất tiêm cho dv cảm thụ có biểu lâm sàng bệnh tích đặc trưng để xác định có mặt virus > Để tiến hành gây bệnh, tùy loại virus mà chọn đv thí nghiệm phù hợp > VD : Virus Newcastle chọn gà giò, Virus cúm dùng sóc, Virus dịch tả lợn dùng lợn choai Tùy đăc tính gây bênh virus mà chon đường đưa vào khác ^ Virus đường hô hấp : nhỏ mũi, tiêm khí quản ^ Virus hướng thần kinh : Tiêm vỏ não ^ Virus hướng nội bì : sát, khía da ^ Virus hướng tạng : Tiêm xoang bụng 18 Có phƣơng phá p n i cấy virus? Trì nh b ày phƣơng pháp n i cấy virus phôi đ a ng phát tri ển? - Virus sv kí sinh nội bào nên bắt buộc phải nuôi cấy vào tổ chức sống - Hiện có phương pháp ni cấy sau: s Nuôi cấy virus môi trường tế bào tổ chức s Nuôi cấy phôi thai gà phát triển S Ni cấy động vật thí nghiệm Phƣơng phá p nuô i cấy virus phô i đ a ng phát tri ến > Nuôi cấy phôi gà phát triển > Đa số virus có kn phát triển thích nghi phơi gà, phương pháp ứng dụng rộng rãi để phân lập, kiểm nghiệm , định loại virus chế tạo kháng nguyên loại vacxin > Ưu điểm thuận lợi, xác, nhanh, tiết kiệm, lúc cấy virus hàng loại vào phôi gà thu lượng lớn virus > Để nuôi cần chuẩn bị hỗn dịch chứa virus, trứng có phơi đạt tiêu chuẩn, đem ấp đến tuổi phôi cần tiêm, soi trứng chọn phôi khỏe > Tùy loai virus mà chon tuổi cho pphù hơp > Ví dụ : virus dại phôi ấp ngày tuổi, virus newcastle phôi 9-11 ngày tuổi > Tùy loai virus mà chon đường tiêm vào tổ chức khác củapphơi > Ví dụ : virus dại tiêm vào túi lòng đỏ, virus newcastle tiêm vào xoang niệu, virus đậu gà tiêm vào màng niệu đệm > Ngồi đường tiêm phải chọn liều phù hợp có liều tiêm > Liều thực tế 0,2ml/phơi Liều cần thiết phụ thuộc số gây chết LD50 > Tiến hành tiêm Sau tiêm ấp tiếp, hàng ngày theo dõi thời gian virus gây chết phôi Phôi chết giữ nhiệt độ 4-6 Cuối mổ trứng quan sát bệnh tích phơi Mỗi loại virus gây bệnh tích đặng trưng phơi xuất huyết, phù phơi, còi cọc, dựa vào người ta đánh giá diện virus SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y 19 Có phƣơng phá p n i cấy virus? Trì nh b ày phƣơng pháp nuô i cấy virus mô i trƣờng tế b o? - Virus sv kí sinh nội bào nên bắt buộc phải nuôi cấy vào tổ chức sống - Hiện có phương pháp nuôi cấy sau: s Nuôi cấy virus môi trường tế bào tổ chức s Nuôi cấy phôi thai gà phát triển s Nuôi cấy động vật thí nghiệm * Phƣơng phá p n i cấy virus mô i trƣờng tế b o - Là phương pháp khoa học, tiên tiến, phổ biến - Trước tiên cần tạo tế bào sống, phát triển môi trường - Dùng tế bào lấy từ mô quan người, động vật cho vào mt dinh dưỡng để nhiệt độ thích hợp Các tế bào ống sinh trưởng sau phân chia tạo lượng lớn tế bào Người ta sử dụng tế bào để gây nhiễm virus - Khi virus gây xâm nhập tb nuôi chúng gây bệnh cho tế bào có tc đặc trưng Những biến đổi bệnh lý đặc trưng gọi bệnh tích hay hủy hoại tế bào CPE CPE xác định qua kính hiển vi quang học vào xác định kết ni cấy CPE có dạng sau : Dung bào: tế bào bị tan rã hoàn toàn Biến dạng : tế bào co tròn, nguyên sinh chất tan rã, nhân tế bào Tạo lên hợp bào : nhân tế bào taoapj trung lại bao bọc màng chung tạo tế bào đa nhân khổng lồ Tạo nên tiểu thể bao hàm nhân nguyên sinh chất 20 Interferon gì? Cơ chế tá c đ ộ ng củ a Interferon? a Khá i niêm s Interferon chất tế bào động vật sản sinh có kích thích nguồn thơng tin ngoại lai virus , vi khuẩn, độc tố vi khuẩn, ricketsia s Là yếu tố miễn dịch ko đặc hiệu thể b Cơ chế t c đ ộ ng củ a interferon s Sau tế bào bị nhiễm virus sinh interferon s Interferon phần lại tế bào, phần ngấm sang tế bào bên cạnh chưa nhiễm virus , interferon hoạt hóa đoạn gen tế bào tổng hợp protein kháng virus AVP - Anti viral protein s Chính AVP cản trở tổng hợp ARNm virus s Khi khơng có ARNm ko có trình tổng hợp khác virus o interferon có tác dụng gián tiếp lên virus tác dụng tế bào o Nhờ có tượng cảm nhiễm mà tiêm vacxin virus nhược độc cho động vật , trạng thái miễn dịch thành lập nhanh chóng xuất interferon ^ Trong thực tế , ứng dụng tượng để ngăn chặn dịch cách tiêm thẳng vacxin vào ổ dịch SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y 21 Vẽ giải thích đƣò*ng cong sinh trƣởng củ a vi khuan đ i ều kiên ni cấy tĩnh? Giâi thích đ ƣò*ng cong sinh trƣò*ng a Gi a i đ oạn phát tri ển chậm — pha ti ề m tà ng — pha lag s Giai đoạn tính từ lúc bắt đầu cấy đến vk đạt tốc độ sinh trưởng cực đại s Đặc điểm pha : số lượng tb ko tăng Thể tích tăng lên rõ rệt s Nguyên nhân : Lúc vk chưa phân chia chúng phải trải qua thời gian thích nghi với đk sống , chuyển từ trạng thái nghỉ => trạng thái hoạt động s Độ dài pha phụ thuộc vào tuổi giống vk, dinh dưỡng , nhiệt độ s Giai đoạn biến động từ 3-5h b Gi a i đoạn tăng đ ều — pha log s Trong pha vk sản sinh với tốc độ nhanh chóng thời gian hệ số rút ngắn, vk sản sinh theo cấp số nhân s Số tế bào tính theo cơng thức N= No x s Tế bào có kích thước điển hình , sức đề kháng cao s Độ dài pha phụ thuộc, tuổi giống vk, môi trường dinh dưỡng, nhiệt độ s Biểu đồ lên rõ c Gia đ oạn ổn đ i nh Đường biểu diễn gần // trục hoành Số lượng tb vk sinh gần = số chết Sinh khối tb ổn định Nguyên nhân : số lượng tb vk lớn, cạnh tranh dinh dưỡng, đồng thời sản phẩm độc q trình TĐC tích lũy ngày nhiều Giai đoạn kích thước tế bào ko đồng d Gi a i đoạn suy vong Trong gđ tế bào vk giảm theo lũy thừa , đường biểu diễn xuống Số vk sinh nhỏ nhiều số vk chết Nguyên nhân: mt cạn chất dinh dưỡng sp TĐC độc nhiều, vk ko kn sinh sản Một số loại vk biến đổi hình thức sống = nha bào 22 Ý nghĩa củ a b i ểu đ đ ƣò*ng cong sinh trƣởng vi khuẫ n sân xuất đ òi s ố ng? Ý nghĩa : nắm quy luật sinh trưởng phát triển vsv từ có ứng dụng thực tiễn ^ Điều trị bệnh truyền nhiễm : phải phát kịp thời , can thiệp sớm, có hiệu ^ Xác định thời gian cấy chuyển thích hợp giữ giống nhân giống vsv tạo đk cho vsv phát triển nhanh ổn định đặc tính sinh học ^ Trong sản xuất vacxin chế biến chế phẩm sinh học: xác định thời gian thu hoạch vacxin thích hợp giai đoạn ^ Trong nuôi cấy giữ giống vsv : cần dùng giống trẻ để có chất lượng cao nên phải rút ngắn giai đoạn chuyển nhanh sang gđ để thu số lượng lớn Xác định thời gian thu hoạch, cấy chuyển vsv thích hợp tạo vsv phát triển nhanh ổn định đặc tính sinh học ^ Trong nghiên cứu hình thái , hoạt động vsv cần phải thu hoạch vsv gđ2 • SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y ^ Trong bảo quản nguyên liệu thức ăn : cần ngăn chặn chúng thâm nhập kìm hãm phát triên chúng Có thể kéo dài pha tiềm sinh = cách sấy khô nhiệt độ thấp, chiếu xạ ^ Trong phòng bệnh điều trị bệnh truyền nhiễm : cần tác động procaryota hóa lý thích hợp làm giảm sống lượng vsv trị bệnh cần phát sớm điều trị 23 Hi ểu b i ết vi sinh vật tự d ƣỡng cacbon? Là vsv sử dụng nguồn cacbon vô CO2 Muối cacbonat Dựa vào nuồn cung cấp lượng người ta chia kiểu tự dưỡng cacbon làm loại Vsv tự d ƣỡng C qua ng năng: Có sắc tố quang hợp Có kn chuyển hóa trực tiếp lượng asmt thành lượng hóa học tích lũy ATP Sử dụng lượng để chuyển cacbon vô thành cacbon hữu cần thiết cho thể 24 Hi ếu b i ết vi sinh vật tự d ƣỡng amin? ^ vsv tự dưỡng amin loại vsv có khả sử dụng nguồn nito vơ hợp chất nito hữu đơn giản acid amin, protein, ure để tạo nên acid amin chứa nito tế bào o Đối với N2 vsv có khả cố định nito sử dụng được.Loại vsv có hệ enzym Nitrogennaza phong phú loại có loại s VSV cố dịnh nito ko cộng sinh vk Azotobacte, vk Beijerinskii, vk Clostridium s VSV cố định nito cộng sinh vk nốt sần họ đậu, vk lam Các vsv tự dưỡng amin có vai trò quan trọng chu trình chuyển hóa đạm tự nhiên Nhờ có vsv lượng đạm tự nhiên ln chuyển hóa từ dạng sang dạng khác để sv hấp thu trì sống • 25 Yếu tố nhiệt đ ộ ảnh hƣởng nhƣ nà o đ ến hoạt đ ộ ng s ố ng củ a vi sinh vật • • o • • o • o ? 26 Tia c c ảnh hƣ ng nhƣ th n o n hoạt ng s ng c vi sinh vật? 27 nh hƣ ng c PH n hoạt ng s ng c vi sinh vật? • o • o • • • o o • o o • • 28 Ảnh hƣởng củ a Clo, forma l d ehyt kim loại nặ ng đ ến hoạt đ ộ ng s ố ng củ a vi sinhvật? SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y 29 T c ng c c c ch t o h , etanol, CaO n hoạt ng s ng c vi sinh vật? a Các chất oxy hóa s Là chất mà tự cung cấp O2 gây giải phóng O2 từ hợp chất khác s Các chất oxy hóa dùng làm chất sát trùng H2O2, KmnO4, Ca(Ocl)2 s Tác dụng chất oxy hóa oxy hóa mạnh oxy giải phóng làm bất hoạt enzym có chứa nhóm SH tb vsv b Các etanol s Là chất khử trùng mạnh s Cơ chế: hòa tan lipid màng tb đơng vón protein nst tác dụng khử trùng phụ thuộc vào trọng lượng phân tử, CH3OH hiên tương tính kháng thuốc kháng sinh vsv Q trình hình thành tính kháng thuốc kháng sinh vsv phụ thuộc vào nhiều yếu tố s nồng độ chất kháng sinh s cách sử dụng thời gian tác động s SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y chế tác dụng kháng sinh s đặc tính vsv Có chế gây nên tính kháng thuốc : + biến đổi máy di truyền vsv + xuất yếu tố kháng thuốc resistance plasmit o Những vk có chứa resistance plasmid có khả kháng lại kháng sinh Đ ể đ ố i phó vói tính ng thuố c ng sinh củ a vsv p d u ng cá c b iên pháp sau: s Tìm kiếm loại kháng sinh nghiên cứu sử dụng phối hợp nhiều loại kháng sinh điều trị s Làm thay đổi chất plasmid ngăn ngừa tái sinh truyền plasmid tế bào vk s Chỉ dùng kháng sinh để điều trị bệnh vk gây s Chọn kháng sinh theo kết kháng sinh đồ, ưu tiên kháng sinh có hoạt phổ hẹp có tác dụng đặc hiệu lên vk gây bệnh s Dùng đủ liều liệu trình s Thường xuyên giám sát kháng kháng sinh vk 33 Phƣơng phá p l m tiêu b ản vi sinh vật đ ể qua n s át vi sinh vật chết? B1: Chuẩn bi phiến kính s Chọn phiến kính sáng, sẽ, mỏng Trước dùng phải vô trùng (bằng cách hơ lửa đèn cồn) s Dung bút viết kính đánh dấu diện tích phiết vi sinh vật mặt sau phiến kính B2: Phiết vi sinh vât - Lấy vi sinh vât từ môi trường lỏng : trước lấy ta phải lắc nhẹ để vi sinh vật hòa ống đựng mơi trường, dùng que cấy vô trùng lấy giọt canh khuẩn, nhỏ lên diện tích mà ta đánh dấu dàn mỏng - Lấy vi sinh vât từ môi trường đăc : dùng que cấy vô trùng, lấy giọt nước sinh lý, nhỏ lên diện tích phiết vi sinh vật mà ta đánh dấu, sau dùng que cấy vơ trùng lấy “một ít” khuẩn lạc (chạm nhẹ), trộn với nước sinh lý, dàn mỏng - Lấy vi sinh vât từ bênh pphẩm : +chuẩn bị phiến kính vơ trùng + nhỏ lên đầu phiến kính 1: giọt máu + đặt cạnh phiến kính thứ lên giọt máu nghiêng 45 độ giọt máu dàn nhẹ lên cạnh phiến kính 2, sau đó, lướt nhẹ phiến kính phiến kính để máu dàn phiến kính Dàn mỏng, ta xem rõ B3: Cố đinh vi sinh vât: + Dùng nhiệt cố định: cách hơ cao lửa đèn cồn + Dùng hóa chất: dùng cồn tuyệt đối, axeton, metanol B4: Nhuộm màu vi sinh vât: SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y Có cách nhuộm nhuộm đơn nhuộm kép tùy thuộc vào loại vsv mục đích nghiên cứu chọn cách nhuộm phù hợp 34 Phƣơng phá p nhuộ m đ ơn l gì? Cá ch nhuộ m.? a Đ i nh nghĩa : phương pháp nhuộm vsv sử dụng loại thuốc nhuộm tồn q trình nhuộm Dùng thuốc nhuộm mà vsv bắt màu thuốc nhuộm VD : đỏ fucsin, xanh metylen, tím gentian b Cá ch nhuộ m: s Nhuộm đơn tiêu nấm men đỏ fucsin s Nhỏ dung dịch thuốc nhuộm ngập tiêu để 2-5p đổ thuốc nhuộm đi, Rửa nước, vảy khơ soi kính 35 Phƣơng ph p nhu m k p l g ? C ch nhu m Gram.? a Đinh nghĩa : phương pháp nhuộm mà trình làm sử dụng từ thuốc nhuộm trở lên b Cách nhuôm Gram : s Bước : nhỏ dung dịch tím gentian lên chỗ cố định vk , để 1-2p rửa nước, vảy khô s Bước : nhỏ dung dịch lugol để 1-2p rửa nước , vảy khô s Bước : Tảy màu cồn acetol 96 độ 20-30s chảy qua thật nhanh chỗ phiết vk , rửa nước, vảy khô s Bước : Nhỏ dung dịch đỏ fucsin lỗng để 1-2p , rửa nước, vảy khơ Kết quả: s VK gram - bắt màu hồng vách tế bào mỏng s Vk gram + bắt màu tím vách tế bào có iod thành phần nguyên sinh chất nên cố định lugol 36 Phƣơng phá p nhuộ m kép l ? Cá ch nhuộ m Giemsa.? a Đinh nghĩa : phương pháp nhuộm mà trình làm sử dụng từ thuốc nhuộm trở lên b Cách nhuôm Giemsa *Tiêu máu gà Nhỏ giọt máu lên phiến kính dùng phiến kính khác đè lên giọt máu nghiêng góc 30-45 độ kéo lướt nhẹ phiến kính ta tiêu máu gà s Nhuộm tiêu máu gà S Tiêu máu để khô s Cố định cồn 10p , rửa nước , vảy khô s Nhỏ dung dịch giemsa để 20-30o , rửa nước, vảy khơ s Đem soi kính hiển vi ta thấy: + Hồng cầu : NSC bắt màu hồng, nhân bắt màu tím + Bạch cầu : NSC bắt màu xanh, nhân bắt màu tím _ rri_ > _ ^ < > Ạ f -»•••''■ _ A_ £ • i _ r _ Ạ» •I AJo 37 Tr nh qu tr nh i u ch môi trƣ ng nuôi c vi sinh vật.? a Khái niệm: Bao gồm chất dinh dưỡng cần thiết phối hợp theo SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y yêu cầu sinh trưởng, phát triển vi sinh vật cho phù hợp với điều kiện hồn cảnh sống b Quy trình điều chế mơi trường gồm có bước B1: Phối hợp hòa tan ngun liêu Mỗi mơi trường có nguyên liệu tỷ lệ định, không tự ý thay đổi thành phần, số lượng, phẩm chất Ví dụ: Chế mơi trường nước thịt có thành phần sau: - Nước thịt: 1000 ml - Pepton: 10g - Muối NaCl: 5g B2: Đo điều chỉnh đô pH môi trường - Môi trường nuôi cấy nấm men: pH:5-6 Trong điều chế môi trường cần phải điều chỉnh độ pH cho thích hợp (dùng máy để đo pH, dùng NaOH HCl để điều chỉnh pH) B3: Loc môi trường, chia môi trường vào dung cu thủy tinh - Lọc môi trường để tạo môi trường suốt dễ quan sát - Chia môi trường chai, lọ, bình, ống nghiệm (khơng q 2/3 dung lượng vật đựng để khử trùng) B4: Khử trùng - Các môi trường thường khử trùng 120oC/ 15 phút - Một số môi trường không khử trùng nhiệt độ cao môi trường đường, mơi trường gelatin đường gelatin bị hỏng khử trùng nhiệt độ khoảng 100oC/20- 30 phút B5: Kiểm tra vô trùng - Lấy ngẫu nhiên số ống môi trường, đem nuôi cấy tủ ấm 37oC/24-48h để kiểm tra vô khuẩn, vi khuẩn mọc mơi trường tốt B6: Bảo quản Môi trường sau khử trùng cần bảo quản nhiệt độ thấp, tốt bảo quản tủ lạnh, không để lâu 38 Cá ch xá c đ ị nh khả lên men đ ƣờng củ a vi khuấ n SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y a Nguyên lý: s Mỗi loại vi khuẩn có khả lên men số loại đường định, làm pH môi trường thay đổi Để ta xác định ta dùng thị màu để nhận biết s Trong trình lên men số vi sinh vật có khả sinh (H2, CH4, CO2) Để xác định ta dùng ống duynh han ống thủy tinh nhỏ đầu bịt kín đầu hở s Phản ứng lên men đường thực môi trường đặc môi trường lỏng b Tiến hành phản ứng lên men đường môi trường lỏng * Thànhpphần mơi trường gồm có: s Mơi trường nước pepton s Cho thị màu (vd: bromothymol blue -có màu xanh) s Cho ống duynh han vào đáy ống nghiệm chứa môi trường, úp đầu hở xuống s Các loại đường glucoza, lactoza, saccaroza, mantoza, mannit, levuloza, * Tiến hành: s Cấy giống vi khuẩn cần chẩn đốn vào ống mơi trường pepton có chứa loại đường khác trên, nuôi cấy tủ ấm 37oC /24h, lấy xem kết * Đoc kết quả: s Nếu vi khuẩn khơng sinh acid môi trường không thay đổi màu Màu vàng dùng thị andrade, màu tím lơ dùng thị tía bromocresol, màu xanh lơ dùng thị bromothymol bleu s Nếu vi khuẩn sinh acid mơi trường đổi màu, màu trở nên đỏ dùng thị màu andrae, màu vàng dùng thị tía bromocresol thị xanh bromothymol bleu, dùng thị đỏ phenol (thì từ hồng chuyển vàng) s Nếu có sinh thấy ống duynh han, mực nước ống duynh han giảm xuống đẩy ra, ống duynh han đẩy lên lên 39 Cá ch xá c đ ị nh khả sinh H2S củ a vi khua n a Nguyên lý: s Một số vi khuẩn có khả làm phân giải số acid amon chứa lưu huỳnh (S) xystein metyonin có chất hữu môi trường làm sản sinh H2S Để xác định khả người ta nuôi cấy vi khuẩn mơi trường có chứa axetat chì (thường gọi mơi trường thạch chì) ^ H2S + Pb(CH3COO)2 □ PbS + 2CH3COOH b Cá ch ti ến hà nh: mơ i trƣòng lỏng hoặ c đ ặ c *Thành phần môi trường: s môi trường thạch - nước thịt pepton 200ml ^ Na2S2O3 0,5g s Dung dịch axetat chì 10% 1ml s Đun sơi cho chảy thạch thêm Na2S2O3 sau đótrộnđều, khử trùng 120oC/20 phút Lấy để nguội đến 45oC cho vào mơi trường cách vơ trùng 1ml axetat chì 10%, sau chia vào ống mơi trường để đơng dạng thạch đứng SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y * Tiến hành đoc kết quả: s Dùng que cấy thẳng lấy vi khuẩn cấy chích sâu vào ống nghiệm đựng môi trường, nuôi cấy 37oC 24 - 48h Nếu sinh H2S dọc đường cấy có màu đen rõ s Dùng môi trường lỏng nuôi cấy vi khuẩn vào nút ống nghiệm băng giấy lọc (1-4cm) tẩm chì axetat 20%, ni cấy tủ ấm 37oC 24-48h, băng giấy lọc chuyển màu đen có sinh H2S s Ví dụ: E.coli (-); Sal, Đóng dấu lợn (+) 40 Cá ch xá c đ ị nh khả sinh Ind ol củ a vi khuấ n a Nguyên lý: s Một số loại vk có chứa men tryptophanaza có khản phân giải tryptophan thành indol s Để kiểm tra có mặt in dol nhỏ vài giọt thuốc thử kowas vào mơi trường, thuốc thử kowas có chất para dimetyl aminobenzandehyt p/ứ với indol tạo thành rosindol có màu hồng đỏ b Tiến hành s Ni cấy vk vào môi trường trypton, pepton, nước thịt 37 đô C 1-2 ngày Sau lấy mơi trường nhỏ vào kowas phản ứng dương tính xuất vòng tròn màu đỏ o Vk có khả sinh indol SV: KHUẤT MINH THANH K58TYA ... vsv có hệ enzym Nitrogennaza phong phú loại có loại s VSV cố dịnh nito ko cộng sinh vk Azotobacte, vk Beijerinskii, vk Clostridium s VSV cố định nito cộng sinh vk nốt sần họ đậu, vk lam Các vsv. .. giữ giống vsv : cần dùng giống trẻ để có chất lượng cao nên phải rút ngắn giai đoạn chuyển nhanh sang gđ để thu số lượng lớn Xác định thời gian thu hoạch, cấy chuyển vsv thích hợp tạo vsv phát... tự d ƣỡng amin? ^ vsv tự dưỡng amin loại vsv có khả sử dụng nguồn nito vơ hợp chất nito hữu đơn giản acid amin, protein, ure để tạo nên acid amin chứa nito tế bào o Đối với N2 vsv có khả cố định