NGHIÊN cứu họ dơi lá mũi (CHIROPTERA RHINOLOPHIDAE) ở VIỆT NAM TT

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HOÀNG TRUNG THÀNH NGHIÊN CỨU HỌ DƠI LÁ MŨI (CHIROPTERA: RHINOLOPHIDAE) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Động vật học Mã số: 62420103 DỰ THẢO TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2017 Công trình đƣợc hồn thành tại: Bộ mơn Động vật có xương sống, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN Người hướng dẫn khoa học: - PGS TS Vũ Đình Thống - PGS TS Nguyễn Xuân Huấn Phản biện: Phản biện: Phản biện: Luận án bảo vệ trước Hội đồng cấp Đại học Quốc gia chấm luận án tiến sĩ họp vào hồi ngày tháng năm 20 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam; - Trung tâm Thông tin - Thư viện, Đại học Quốc gia Hà Nội MỞ ĐẦU Bô Dơi thú bao gô m ng loa i thú có khả bay thực Với khả bay, dơi nhóm thú có khả phát tán tốt [Kunz & Pierson, 1994] Dơi có vai trị đặc biệt quan trọng “dịch vụ” hệ sinh thái tư nhiên, thụ phấn phát tán nhiêu loa i thực vật; go p phân quan trọng việc trì tái sinh rừng tư nhiên sau bị tàn phá Măt kha c, dơi săn bắt tiêu thụ số lượng lớn côn trùng nh ng động vật c nh ; đồng thời, chúng thức ăn số lồi chim, bị sát thú [Kunz (ed.), 2009] Bên cạnh nh ng vai trò quan trọng hệ sinh thái, nhiều loài dơi xác định vật chủ trung gian truyền số bệnh, có nh ng bệnh nguy hiểm loài động vật người bệnh Nipah, Ebola, SARS, tiêu chảy [Li, 2005; Calisher, 2006; Chu, 2008] Một số loài dơi xác định có mang chủng thuộc nhóm coronavirus gây bệnh SARS, có lồi R pearsoni, R pusillus, R macrotis [Li, 2005], R sinicus [Lau, 2005; Wang, 2006] Cho đến nay, họ Dơi mũi Rhinolophidae xác định hai họ dơi có số lượng loài nhiều Việt Nam, với 19 loài tổng số 123 loài dơi ghi nhận nước ta [Furey cộng sự, 2009; Kruskop, 2013; Gorfol cộng sự, 2014; Nguyen Truong Son cộng sự, 2015; Vuong Tan Tu cộng sự, 2015, 2017] Mặc dù có số nghiên cứu dơi nói chung dơi mũi nói riêng, chưa có nghiên cứu đầy đủ dơi mũi Việt Nam, chưa có nghiên cứu kiểm chứng thơng tin tồn số lồi dơi mũi nước ta nghiên cứu trước chưa đủ sở để khẳng định Ngoài ra, có số thơng tin đặc điểm nhận dạng, phân bố, đặc điểm sinh học trạng số loài Trước thực tế đó, đề tài "Nghiên cứu họ Dơi mũi (Chiroptera: Rhinolophidae) Việt Nam" thực nhằm làm rõ vị trí phân loại số taxon cịn nghi ngờ mặt phân loại học, sở kết hợp phương pháp định loại so sánh hình thái, di truyền phân tử siêu âm Bên cạnh việc xác định xác thành phần lồi, nghiên cứu cung cấp thông tin đặc điểm nhận dạng, số đặc điểm sinh học sinh thái học, phân bố, trạng nh ng loài có giá trị bảo tồn, … Kết nghiên cứu hy vọng cung cấp nh ng thông tin cần thiết cho nghiên cứu sau nghiên cứu thành phần loài, nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái học, xây dựng kế hoạch quản lý bảo tồn kiểm sốt dịch bệnh có liên quan số loài dơi mũi Mục tiêu luận án Xem xét đánh giá đa dạng loài dơi thuộc họ Dơi mũi Việt Nam; Kiểm định/tu chỉnh vị trí phân loại lồi cịn nghi ngờ dựa đặc điểm phân loại hình thái, di truyền phân tử siêu âm; Bổ sung dẫn liệu sinh học, sinh thái học trạng bảo tồn số loài thuộc họ Dơi mũi Việt Nam Nội dung nghiên cứu Xác định thành phần loài, đánh giá trạng phân loại họ Dơi mũi (Rhinolophidae) Việt Nam; mơ tả lồi xây dựng khóa định loại cho lồi thuộc họ Dơi mũi biết Việt Nam; Đánh giá khả định loại loài thuộc họ Dơi mũi di truyền phân tử, phân tích đặc điểm di truyền phân tử, xác định khoảng cách di truyền, quan hệ phát sinh gi a loài ghi nhận; Đánh giá khả định loại loài dơi mũi siêu âm, xác định đặc điểm siêu âm họ Dơi mũi Việt Nam, phân tích mối tương quan gi a tần số siêu âm với số số hình thái, kích thước; Xác định vùng phân bố, đặc điểm phân bố địa lý loài thuộc họ họ Dơi mũi Việt Nam Đánh giá trạng số loài dơi mũi Việt Nam có giá trị bảo tồn Ý nghĩa khoa học thực tiễn Luận án cung cấp nhiều dẫn liệu đầy đủ tính đa dạng trạng phân loại; khả sử dụng di truyền phân tử siêu âm định loại; đặc điểm di truyền phân tử siêu âm họ Dơi mũi Việt Nam; bổ sung dẫn liệu sinh học, sinh thái học trạng số loài thuộc họ Dơi mũi Việt Nam có giá trị bảo tồn Kết nghiên cứu luận án cung cấp nh ng thông tin cần thiết cho nghiên cứu sau nghiên cứu thành phần loài, nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái học, xây dựng kế hoạch quản lý bảo tồn kiểm soát dịch bệnh có liên quan số lồi dơi mũi Việt Nam Những đóng góp luận án Đã xác định danh sách gồm 20 loài thuộc họ Dơi mũi Rhinolophiadae Việt Nam Đã thức bổ sung thêm lồi R osgoodi vào thành phần lồi dơi Việt Nam, thức khẳng định có mặt lồi R pusillus, làm rõ có mặt lồi R siamensis, góp phần bổ sung dạng loài vào thành phần loài dơi mũi nước ta, gồm dạng loài R affinis; dạng loài R malayanus, dạng loài R thomasi, dạng loài R macrotis, dạng loài R paradoxolophus dạng lồi R marshalli Đã mơ tả đặc điểm nhận dạng xây dựng khóa định loại chi tiết cho loài dạng loài kể Lần có nghiên cứu đầy đủ tần số siêu âm sử dụng tần số siêu âm định loại họ loài thuộc họ dơi mũi Việt Nam Trong đó, lần cơng bố thức tần số siêu âm lồi R osgoodi R subbadius; đánh giá tương quan gi a tần số siêu âm với kích thước thể chiều cao tai loài thuộc họ Dơi mũi Việt Nam Lần sử dụng di truyền phân tử định loại hầu hết loài thuộc họ Dơi mũi Việt Nam; đánh giá quan hệ phát sinh xác định khoảng cách di truyền gi a loài Trên sở đó, xác định khoảng cách di truyền trình tự gene COI gi a lồi; xác định nhóm quan hệ di truyền họ Dơi mũi Việt Nam Lần có phân tích đặc điểm phân bố địa lý loài dơi mũi Việt Nam theo vùng địa lý sinh vật: Đông Bắc, Tây Bắc, Bắc Trung Bộ, Nam Trung Bộ, Nam Bộ Đã đánh giá trạng số lượng, phân bố số lồi dơi mũi có giá trị bảo tồn Việt Nam Cấu trúc luận án Luận án gồm 149 trang, chia thành chương với bảng, 49 hình, 219 tài liệu tham khảo Phần phụ lục gồm Phụ lục, cung cấp thêm thông tin chi tiết, số liệu bổ sung thông tin mẫu vật sử dụng nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 KHÁI QUÁT VỀ BỘ DƠI CHIROPTERA Bộ Dơi (Chiroptera) gồm nh ng lồi thú có khả phát tán tốt hai thú có số lượng lồi nhiều Chúng thường tạo thành nh ng tập hợp cá thể lớn thú có số lượng cá thể phong phú số thú có Trái đất Bơ Dơi bao gồ m nh ng loà i thú có khả bay lượn thực Khả bay góp phần làm tăng tính đa dạng đặc điểm sinh học sinh thái học dơi tính đa dạng thức ăn, tập tính ngủ nghỉ, chiến lược sinh sản tập tính xã hội dơi [Kunz & Pierson, 1994] Dơi phân bố tất lục địa giới khơng có mặt vùng cực số đảo đại dương bị cách ly [Kunz & Pierson, 1994] 1.2 KHÁI QUÁT VỀ HỌ DƠI LÁ MŨI RHINOLOPHIDAE 1.2.1 Tính đa dạng phạm vi phân bố Theo Csorba cộng [2003], họ Dơi mũi Rhinolophidae có giống Rhinolophus Cho đến nay, nhà khoa học xác định 95 loài dơi mũi thc 23 nhó m lồ i biết toàn giới [Csorba cộng hiên sự, 2003; Simmons, 2005; Yoshiyuki & Lim 2005; Soisook cộng sự, 2008; Sun cộng sự, 2008; Wu cộng sự, 2008, 2009; Zhou cộng sự, 2009; Wu & Vu Dinh Thong 2011, Chattopadhyay cộng sự, 2012; Taylor cộng sự, 2012; Benda & Vallo, 2012; Peterhans cộng sự, 2013; Soisook cộng sự, 2015, 2016] Họ Dơi mũi phân bố rộng khắp cựu lục địa, từ Tây Âu châu Phi đến Đông Nam Á, Nhật Bản, Philippine, New Guinea Australia [Corbet & Hill 1992; Csorba cộng sự, 2003] Dơi mũi chủ yếu phân bố vùng nhiệt đới, số lồi chịu đựng nhiệt độ thấp vùng ôn đới cách ngủ đông, đặc điểm gặp nh ng loài dơi nhiệt đới [Altringham, 1996] 1.2.2 Đặc điểm hình thái Một nh ng đặc điểm đặc trưng họ Dơi mũi chúng có mũi, gồm số chóp da kỳ dị, phức tạp phần da phần mũi mở rộng tạo thành hình móng ngựa bao quanh hai lỗ mũi Các nếp da chia làm ba phần, gồm mũi trước (horseshoe), mũi gi a (sella) mũi sau (lancet) Hình dạng xếp mũi thay đổi tùy thuộc vào nhóm lồi lồi khác [Nowak, 1994] 1.2.3 Đặc điểm siêu âm Họ Dơi mũi Rhinolophidae có hệ thống thu phát âm mang tính đặc trưng giúp chúng có khả phát thu âm đồng thời Các mũi phức tạp xoang mũi rộng liên quan đến việc phát truyền tín hiệu, vành tai lớn cấu tạo ốc tai giúp chúng thu nhận tín hiệu hồi âm [Csorba cộng sự, 2003] Tín hiệu âm dơi mũi đặc trưng đoạn ổn định CF (constant-frequency), đoạn khởi đầu iFM (initial frequencymodulated) đoạn kết thúc tFM (terminal frequency-modulated) (hình 1.2) [Altringham, 1996; Csorba cộng sự, 2003] 1.3 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI 1.3.1 Nghiên cứu phân loại học họ Dơi mũi giới Họ Dơi mũi Rhinolophidae gồm loài thuộc giống Rhinolophus [Csorba cộng sự, 2003] Giống đề xuất sử dụng Lacépède vào năm 1799, thuộc họ Vespertilionidae [Servent cộng sự, 2003] Năm 1825, Gray chia họ Vespertilionidae thành phân họ, có phân họ Rhinolophina Năm 1907, Miller nâng bậc phân loại phân họ Rhinolophinae Phyllorhininae thành bậc họ Trong đó, họ Rhinolophidae có giống Rhinolophus Bên cạnh việc mơ tả nhiều lồi dạng thuộc giống Rhinolphus, Andersen [1905b-e], vào số đặc điểm như: kích thước hình dạng mũi, kích thước hình dạng tai, chiều dài cái, chiều dài tương đối xương ngón tay, đốt ngón để chia giống Rhinolophus thành nhóm lồi (group) khác Sau đó, có nhiều tác giả bổ sung, phân chia lại xếp lại nhóm lồi sở xếp ban đầu Andersen, khơng có thay đổi nhiều [Servent cộng sự, 2003] 1.3.2 Nghiên cứu di truyền phân tử Bên cạnh việc sử dụng nh ng phương pháp phân loại dựa vào đặc điểm hình thái, nh ng năm gần đây, nhiều cơng trình nghiên cứu kết hợp sử dụng phương pháp phân loại di truyền phân tử nghiên cứu phân loại nhóm sinh vật nói chung nhóm dơi họ Dơi mũi nói riêng Trong xu đó, DNA ty thể sử dụng công cụ quan trọng nghiên cứu phân loại học dơi Nh ng phương pháp góp phần bổ trợ cho phương pháp phân loại hình thái việc định loại loài, xác định vị trí phân loại số taxon có vị trí phân loại chưa rõ ràng [Thomas, 2000; Clare cộng sự, 2006; Li cộng sự, 2006; Soisook cộng sự, 2008; Puechmaille cộng sự, 2014; Ith cộng sự, 2015], phát nh ng loài ẩn sinh tổ hợp lồi có hình thái kích thước gần tương tự phân biệt nh ng lồi có quan hệ họ hàng gần [Li cộng sự, 2006; Clare cộng sự, 2006 ; Sun cộng sự, 2008, 2009; Boston cộng sự, 2014], mô tả loài cho khoa học [Mucedda cộng sự, 2002; Zhou cộng sự, 2009; Chattopadhyay cộng sự, 2012; Taylor cộng sự, 2012; Benda Vallo, 2012; Peterhans cộng sự, 2013; Gorfol cộng sự, 2014; Soisook cộng sự, 2015, 2016] Các kỹ thuật di truyền phân tử áp dụng nhiều nghiên cứu sinh thái học bảo tồn số loài [Rossiter cộng sự, 2000, 2007; Francis cộng sự, 2010; Bilgin, 2012, 2016; Dool cộng sự, 2016] 1.3.3 Nghiên cứu siêu âm Cho đến nay, nhà khoa học xác định có khoảng 70% số lồi dơi sử dụng siêu âm [Surlykke & Moss 2000] khoảng 1.270 loài dơi biết [Herkta cộng sự, 2016] Các tần số sử dụng siêu âm dơi thường nằm khoảng gi a 11 kHz (thí dụ lồi Euderma maculatum) [Fullard Dawson, 1997] 210 kHz (loài Coelops frithii) [Vu Dinh Thong, 2011] đến 212 kHz (loài Cloeotis percivali) [Fenton Bell, 1981] Hiện nay, nh ng nghiên cứu dơi giới thường sử dụng siêu âm nghiên cứu thành phần loài, định loại mơ tả lồi [Sun cộng sự, 2008; Soisook cộng sự, 2008, 2010, 2015, 2016; Kruskop cộng sự, 2010; Ith cộng sự, 2011; 2015; Nesi cộng sự, 2011; Chattopadhyay cộng sự, 2012; Taylor cộng sự, 2012; Zamora-Gutierrez cộng sự, 2016]; mô tả đặc điểm tiếng kêu siêu âm loài [Ing cộng sự, 2016; Morni cộng sự, 2016]; tập tính siêu âm dơi [Surlykke & Moss, 2000; Fenton cộng sự, 2011]; sinh học thần kinh tiếng kêu siêu âm [Moss cộng sự, 2003; Covey, 2005; Ulanovsky & Moss, 2008], tiến hóa thích nghi tiếng kêu siêu âm dơi [Fenton cộng sự, 1995, 2012; Russo cộng sự, 2007; Puechmaille cộng sự, 2014; Jacob & Bastian, 2016] 1.4 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU Ở VIỆT NAM 1.4.1 Tình hình nghiên cứu phân loại học họ Dơi mũi Việt Nam Trong khoảng thời gian từ đầu kỷ XX trở trước, nh ng nghiên cứu có liên quan đến dơi Việt Nam nói chung Dơi mũi nói riêng khơng nhiều Dơi Rhinolophus affinis có lẽ lồi dơi mũi ghi nhận Việt Nam, vào năm 1878, Dobson cơng bố kết phân tích mẫu vật dơi sưu tập Bảo tàng Lịch sử Tự nhiên Paris Sau lồi ghi nhận nhiều nghiên cứu khác: Thomas [1928], Osgood [1932], Delacour [1940] Từ đến có nhiều cơng bố tác giả ngồi nước nghiên cứu khu hệ thú khu hệ dơi nói chung, có nhắc đến lồi dơi mũi [Pousargues, 1904; Kloss 1921; Thomas, 1925; Kloss, 1926, Osgood, 1932; Van Peenen, 1969; Đào Văn Tiến, 1985; Đặng Huy Huỳnh cộng sự, 1994; Hendrichsen cộng sự, 2001; Lê Vũ Khôi, 2001; Đặng Ngọc Cần cộng sự, 2008], nghiên cứu vê dơi mũi [Sanborn, 1939; Bourret, 1951; Hill 1972b; Topal, 1974; Hill & Topal, 1990; Csorba Jenkins, 1998; Soisoook cộng sự, 2008; Nguyễn Trường Sơn cộng sự, 2010] Đến năm 2013, Kruskop cho họ Rhinolophidae Việt Nam có 19 lồi, tổng số 120 lồi dơi có Việt Nam Có thể nói, nghiên cứu đầy đủ đến thời điểm lồi dơi Việt Nam nói chung, có họ Dơi mũi nói riêng, với thơng tin đặc điểm định loại, phân bố, đặc điểm sinh học sinh thái học loài 1.4.2 Tình hình nghiên cứu di truyền phân tử Trong nh ng năm gần đây, Việt Nam có số nghiên cứu sử dụng phương pháp nghiên cứu di truyền phân tử kết hợp với phương pháp hình thái nghiên cứu phân loại học, mơ tả lồi mới, nghiên cứu địa lý phát sinh, quan hệ phát sinh loài dơi Việt Nam khu vực lân cận [Borisenko cộng sự, 2008; Vuong Tan Tu cộng sự, 2014, 2015; 2017] Việc sử dụng phương pháp sinh học phân tử kết hợp với phương pháp phân tích hình thái tiến hành số nghiên cứu khác nhà khoa học nước phối hợp với nhà khoa học nước phát thêm loài dơi [Gorfol cộng sự, 2014], phân biệt nh ng lồi có quan hệ họ hàng gần [Ith cộng sự, 2011], phân biệt dạng khác loài [Ith cộng sự, 2015] nghiên cứu thành phần loài [Vuong Tan Tu cộng sự, 2015] 1.4.3 Tình hình nghiên cứu siêu âm Nghiên cứu siêu âm dơi – mảng quan trọng nhà khoa học giới quan tâm từ vài chục năm trước, đến thực Việt Nam với số nghiên cứu ban đầu đặc điểm tiếng kêu siêu âm số lồi [Vũ Đình Thống cộng sự, 2007, 2011, 2012 a, b; Vu Dinh Thong, 2011, 2014a, b, 2015; Nguyễn Viết Thịnh cộng sự, 2015; Nguyen Truong Son cộng sự, 2015] Trong nh ng năm gần đây, nhiều taxon cơng bố, nhiều lồi ần sinh họ dơi ghi nhận nhiều phương pháp nghiên cứu khác Ở Việt Nam, phương pháp phân loại dơi nói chung dơi mũi nói riêng chủ yếu dựa vào so sánh hình thái, số tác giả gần kết hợp phương pháp phân loại hình thái với phân tích di truyền phân tử siêu âm Mặc dù có số nghiên cứu dơi nói chung dơi mũi nói riêng, chưa có nghiên cứu đầy đủ họ Dơi mũi Việt Nam Đặc biệt, chưa có nghiên cứu kiểm chứng thông tin tồn số loài thuộc họ Việt Nam nghiên cứu trước chưa đủ sở để khẳng định Ngồi ra, có số thơng tin đặc điểm nhận dạng, phân bố, đặc điểm sinh học trạng số loài Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU Trong giai đoạn 2013 – 2017, đợt khảo sát dơi mũi tiến hành riêng rẽ kết hợp với nghiên cứu khác 15 địa điểm sử dụng mẫu vật thu thập từ trước từ 39 địa điểm khác 2.2 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU Mẫu vật : Mẫu vật nghiên cứu gồm 1.140 mẫu dơi mũi lưu tr lưu tr Phịng Động vật học có xương sống Phòng Bảo tàng Động vật, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Bảo tàng Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Trình tự di truyền: 21 trình tự gene COI từ nghiên cứu 67 trình tự gene COI loài dơi mũi cơng bố GenBank Danh sách trình tự di truyền trình bày phụ lục luận án Tín hiệu siêu âm: 300 file tín hiệu siêu âm loài dơi mũi Việt Nam 2.3 CÁC PHƢƠNG PHÁP THU MẪU VÀ THU THẬP SỐ LIỆU 2.3.1 Bẫy bắt xử lý mẫu vật Mẫu thu bẫy thụ cầm lưới mờ Bẫy thụ cầm sử dụng có kích thước 1.6x1.8 1.8 x 2.0m với bốn dàn cước đặt song song, khoảng cách gi a sợi cước 2.5 cm Lưới mờ sử dụng gồm kích thước: x 4m; x 6m, x 9m, x 12 m Phương pháp đặt bẫy thụ cầm lưới mờ theo Nguyễn Trường Sơn & Csorba [2007]; Kunz (ed.) [2009]; Vu Dinh Thong [2011] 2.3.2 Ghi tín hiệu tiếng kêu siêu âm Tiếng kêu siêu âm dơi thu trạng thái: cầm tay,bay bay (cao 2m x rộng 4m x dài 4m) trạng thái đậu cố định vách Tiếng kêu siêu âm thu loại thiết bị khác nhau: Hệ thống PCTape, phần mềm Batman sản xuất Trườ ng Đai hoc Tổ ng Tuebingen, hơp CHLB Đứ c; máy dò siêu âm Pettersson D-240 (Pettersson Elecktronik, Thụy Điển); máy ghi siêu âm Echometer EM3 máy ghi siêu âm Song Meter SM2BAT (Wildlife Acoustics, Hoa Kỳ), tùy đợt thực địa 2.3.3 Đo số hình thái ngồi, sọ-răng - Các số hình thái ngồi: (dùng thước kẹp cầm tay với độ xác đến 0.1mm) Các số đo sử dụng định loại loài dơi mũi, theo Bates Harrison [1997], Csorba cộng [2003] 2.3.4 Tách chiết DNA, nhân dịng đọc trình tự gene Mẫu để tách chiết DNA mô cơ, lấy từ mô ngực mẫu vật Việc tách chiết DNA, nhân dòng gene phản ứng PCR thực phòng thí nghiệm Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Sản phẩm sau tinh gửi cho cơng ty 1st Base Company (Singapore) để đọc trình tự 2.4 CÁC PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LOẠI, PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 2.4.1 Định loại hình thái Tất mẫu vật lưu gi , kết hợp với ảnh chụp tương ứng, định loại theo nh ng tài liệu cơng bố khu hệ dơi nói chung dơi mũi nói riêng Việt Nam nước lân cận Các tài liệu bao gồm công bố Corbet & Hill [1992], Bates & Harrison [1997], Csorba cộng sự, [2003], Borissenko & Kruskop [2003], Simmons [2005], Francis [2008], Kruskop [2013] 2.4.2 Phân tích thống kê Nh ng khác biệt hình thái, đặc biệt số kích thước ngồi kích thước sọ-răng gi a taxon xác định Phân tích Thành phần (Principle Components Analysis – PCA) thực phần mềm PAST v3.14 (PAlaeontological Statistics) [Hammer cộng sự, 2001] 2.4.3 Phân tích tiếng kêu siêu âm Sau hoàn thành việc ghi âm, file âm chuyển vào máy tính Nh ng file ghi Hệ thống PCTape, Echometer EM3, Song Meter SM2BAT phân tích phần mềm Avisoft SASLab Pro (Avisoft Bioacoustics, CHLB Đức) Nh ng file ghi máy dị siêu âm Peterson D240 phân tích phần mềm Wavesurfer (KTH Royal Institute of Technology, Thụy Điển) Sử dụng đồ họa ảnh phổ để xác định tần số ổn định (constant frequency) mức lượng cực đại (Frequency of maximum energy ST T Nguồn thông tin Tên loài Tên Việt Nam 18 Dơi quạt 19 Dơi ma san Tình trạng bảo tồn Các Nghiên IUCN nghiên SĐVN cứu Red List 2007 cứu 2017 trƣớc 2, 9, 10, VU x 11, 13 (D1) Tên khoa học R paradoxolophus s.s [n = 22] R cf paradoxolophus [n = 1] x R cf marshalli [n = 38] x R cf marshalli [n = 2] x 4, 6, 10, 11, 13 "trifoliatus“ group 5, 7, 10, 11, 13 x : kết nghiên cứu này; - Osgood [1932]; - Bourret [1951]; - Topal [1974]; - Hill & Topal [1990]; - Topal & Csorba [1992]; - Csorba & Topal [1994]; - Đặng Huy Huỳnh cộng [1994]; - Csorba & Jenkins [1998]; - Eger & Theberge [1999]; 10 Hendrichsen cộng sự, [2001]; 11 - Đặng Ngọc Cần cộng [2008]; 12 - Furey cộng [2010]; 13 - Kruskop [2013]; 14 - Ith cộng [2015]; 15 – Nguyen Truong Son cộng [2016]; 16 - Corbet & Hill [1992]; 17 – Vuong Tan Tu cộng (2016) 20 Dơi lớn R luctus [n = 5] x Năm 1969, Van Peenen cho mẫu vật phân lồi R blythi calidus cơng bố Osgood (1932) thuộc loài R cornutus Loài cho khác với R pusillus thùy liên kết dài, hình tam giác hẹp, hình dạng giống-sừng [Csorba cộng sự, 2003; Kruskop, 2013] Tuy nhiên, đặc điểm hình dạng thùy liên kết biến đổi nhiều lồi R pusillus [Bates Harrison, 1997; Vũ Đình Thống, 2014b] Thơng tin lồi R cornutus sau Đặng Huy Huỳnh cộng [1994] kế thừa Theo Csorba cộng [2003], Sano Amstrong [2010], lồi R cornutus có Nhật Bản Kruskop [2013] đề nghị đưa loài kh i danh sách loài dơi Việt Nam Trong nghiên cứu chưa phát mẫu vật giống mơ tả đặc điểm lồi R cornutus, chúng tơi khơng đưa lồi vào danh sách loài dơi mũi ghi nhận Việt Nam Chúng đồng ý với quan điểm Kruskop [2013], đề nghị đưa R cornutus kh i danh sách loài dơi Việt Nam chưa có chứng rõ ràng có mặt loài Ngoài ra, theo Soisook cộng [2015], lồi R francisi thuộc nhóm lồi “trifoliatus”, lồi cho khoa học mơ tả năm 2015 có phân bố Việt Nam Nhận định đưa sở so sánh hình ảnh sọ phân tích trình tự gene công bố genebank [Soisook, 2015] Tuy nhiên, cần nghiên cứu thêm đặc điểm chi tiết số mẫu vật 11 thu Việt Nam, đồng thời so sánh với đặc điểm mẫu chuẩn loài R francisi để làm rõ nhận định 3.1.2 Cơ sở khoa học ghi nhận 3.1.2.1 Dơi gút R osgoodi Lồi Dơi Ơ gút Đặng Huy Huỳnh cộng xếp vào danh lục loài thú Việt Nam (1994) dựa công bố năm 1986 Solokov, Đặng Huy Huỳnh cộng Tuy nhiên, công bố năm 1994, tác giả đặt dấu h i có mặt lồi Việt Nam khơng có thơng tin nơi lưu tr vật mẫu [Đặng Huy Huỳnh cộng sự, 1994] Kết phân tích tiếng kêu siêu âm cho thấy tần số siêu âm R osgoodi thấp so với R lepidus (90-90.9 kHz so với 94 kHz) Đây lần thức có cơng bố lồi Việt Nam sở mẫu vật kiểm chứng Ngồi ra, lần thứ hai thức có ghi nhận R osgoodi, sau thời gian dài nhà khoa học khơng có thêm thơng tin lồi ngồi thơng tin mẫu sử dụng để mô tả Osgood [1932] Sanborn [1939] 3.1.2.2 Dơi nâu R subbadius Kết phân tích hình thái so sánh gi a R subbadius R pusillus kiểm chứng băng phân tích thành phần (PCA) số kích thước sọ-răng mẫu R subbadius công bố Hill [1962], mẫu R subbadius công bố Osgood [1932], mẫu R subbadius nghiên cứu này, 31 mẫu R pusillus Kết cho thấy, PC1 (giải thích cho 70,05% tổng phương sai) thể khác biệt kích thước sọ cách có ý nghĩa gi a hai loài Dựa PC cho thấy có hai nhóm: (1) mẫu R subbadius công bố Hill (1962), mẫu R subbadius công bố Osgood [1932], mẫu R subbadius nghiên cứu này, (2) mẫu R pusillus Trong nhóm thứ nhất, mẫu R subbadius cơng bố Hill [1962], mẫu R subbadius công bố Osgood [1932], mẫu R subbadius nghiên cứu có phần trùng khơng có phân tách Kết phân tích tiếng kêu siêu âm cho thấy tần số siêu âm mẫu R subbadius cao so với tần số siêu âm R pusillus (107 – 112 kHz so với 99 – 106.8 kHz) Như vậy, sau thời gian dài khơng cơng nhận, lồi dơi nâu lại thức ghi nhận Việt Nam Nếu kể mẫu vật công bố Osgood (1932) Dao Van Tien (1978), lần thứ ba loài dơi nâu ghi nhận phạm vi lãnh thổ Việt Nam 3.1.2.3 Dơi đuôi R cf affinis R cf affinis Kết nghiên cứu ghi nhận lồi Dơi R affinis Việt Nam có dạng lồi khác nhau, tạm gọi R affinis s.s., R cf affinis R cf affinis Các dạng loài khác đặc điểm hình thái, kích thước sọ, tần số siêu âm khoảng cách di truyền Trong đó, R affinis s.s (dạngphổbiến thường gặp Việt 12 Nam, phân bố rộng nước) mang đặc điểm đặc trưng loài với mũi trước rộng có dạng hình móng ngựa; mũi gi a có đầu mút khum trịn nhơ phía trước, hai cạnh bên có dạng thắt eo gi a tạo nên hình dạng đặc trưng cho lồi; thùy liên kết cao khum trịn; mũi sau có hình tam giác, cao nhọn Tần số siêu âm R affinis s.s nằm khoảng 85-88 kHz Trong đó, R cf affinis (phân bố Lâm Đồng) có mũi trước rộng, trịn, mũi gi a hẹp với phần chóp nh , phần gốc phình to, tần số siêu âm 81 – 82 kHz R cf affinis (phân bố Lào Cai, Sơn La) có mũi trước nh , trịn, mũi gi a hẹp với hai cạnh gần song song, tần số siêu âm 87 – 88 kHz Về mặt di truyền, dạng loài khác với khoảng cách di truyền từ 2,4 % đến 7% Trong đó, R cf affinis khác biệt với dạng loài khác, với khoảng cách di truyền từ 4,1% đến 7% Nh ng khác biệt kể cũngphù hợp với kết so sosánh số kích thước sọ-răng gi a mẫu vật đại diện cho dạng lồi dựa vào phân tích thành phần (principle component analysis – PCA) Kết phân tích thành phần (PCA) 11 số kích thước sọ-răng 14 mẫu R affinis s.s., mẫu R cf affinis 16 mẫu R cf affinis thể khác biệt rõ ràng gi a dạng loài Dựa PC cho thấy ba dạng lồi tách hẳn thành ba nhóm riêng biệt Trong đó, R affinis s.s khác R cf affinis hầu hết số, trừ IOW AMSW; R cf affinis khác R cf affinis tất số so sánh; R affinis s.s khác R cf affinis hầu hết số so sánh, trừ IOW, PL C1-C1 Ngồi ra, d liệu cơng bố Genbank cho thấy Hồng Liên Sơn, Lào Cai cịn cho thấy có số mẫu vật thuộc lồi R affinis mang trình tự di truyền tương đối khác biệt so với dạng nêu trên, với khoảng cách di truyền so với dạng nêu từ 2,6 – 5,6 % Điều cho thấy cịn tồn dạng khác n a loài R affinis Việt Nam, đặc biệt Hồng Liên Sơn có tồn R cf affinis dạng chưa biết 3.1.2.4 Tổ hợp loài R siamensis, R macrotis s.s R cf macrotis Trước đây, tổ hợp loài R macrotis Việt Nam cho có lồi – R macrotis [Đặng Huy Huỳnh 1994; Đặng Ngọc Cần 2008] Kruskop [2013] cho tổ hợp lồi Việt Nam có R macrotis R siamensis.Nhận định đưa sở tham khảo công bố Hendrichsen cộng năm 2001[Kruskop, 2013] Theo Francis [2008], phân biệt hai lồi dựa vào kích thước thể, kích thước sọ tần số siêu âm Dựa kết phân tích hình thái, siêu âm di truyền, chúng tơi cho tổ hợp lồi R macrotis Việt Nam có ba dạng lồi khác nhau, xác định R siamensis, R macrotis s.s R cf macrotis Trong đó, R siamensis có chiều dài cẳng tay nằm khoảng 38-42 mm, tần số siêu âm khoảng 63 – 71.7 kHz; R macrotis s.s có chiều dài cẳng tay 43-45 mm, tần số siêu âm 52-54 kHz; R cf macrotis có chiều dài cẳng tay 47.6 – 49.5 mm, tần số siêu âm 44.5 kHz 13 Phân tích thành phần (PCA) thực số kích thước sọ-răng 24 mẫu R siamensis, 11 mẫu R macrotis s.s., mẫu R cf macrotis, mẫu R m topali công bố Csorba Bates [1995], mẫu type R episcopus mẫu type R e caldwelli công bố Allen [1923], mẫu type R siamensis mẫu R m macrotis trong công bố Gyldenstolpe [1917], mẫu paratype R siamensis công bố Hendrichsen cộng [2001] Kết phân tích PCA cho thấy mẫu tách thành nhóm khác nhau: (1) nhóm gồm mẫu chuẩn (types), đồng chuẩn (paratype) R siamensis mẫu R siamensis nghiên cứu này; (2) gồm R m topali, R m macrotis, R episcopus, R macrotis s.s nghiên cứu này; (3) gồm mẫu R cf macrotis Riêng R e caldwelli nằm tương đối tách biệt với nhóm cịn lại tương đồng với nhóm R macrotis xét theo thành phần PC tương đối khác xét theo thành phần PC Về bản, mẫu vật thuộc R siamensis nghiên cứu có kích thước sọ lớn so với mẫu chuẩn loài công bố Gyldenstolpe [1917] tương đồng với mẫu đồng chuẩn (paratype) công bố Hendrichsen cộng [2001] Trong nhóm thứ hai, R macrotis s.s gần với R m topali Taxon tương đồng với R m macrotis xét theo thành phần PC 1, tương đối khác xét theo thành phần PC Như vậy, R macrotis s.s chưa xác định thuộc phân loài chắn thuộc lồi R macrotis Các kết phân tích ủng hộ cho nhận định đưa phần trên: tổ hợp loài R macrotis Việt Nam chắn có hai lồi R siamensis R macrotis, R macrotis có hai dạng loài khác R macrotis s.s R cf macrotis Theo quan điểm chúng tôi, hầu hết nh ng ghi nhận lâu loài R macrotis Việt Nam, với nh ng mẫu vật có chiều dài cẳng tay nằm khoảng 38 – 42 mm xác định thuộc R siamensis Loài xác định phổ biến với có số lượng nhiều hơn, có phân bố rộng Việt Nam Trong đó, cá thể mang đặc điểm R macrotis s.s phát Lào Cai, Sơn La, Thanh Hóa, Nghệ An, Phú Thọ, với số lượng ít, nơi phát vài cá thể Kết cho thấy, mẫu thuộc R cf macrotis tách riêng thành nhóm, có kích thước lớn hẳn Về kích thước thể, taxon tương đồng với kích thước R episcopus (mới ghi nhận Trung Quốc) mô tả Allen [Allen, 1923] khác số sọ Do R episcopus cho synonym R macrotis [Corbet Hill, 1992; Csorba cộng sự, 2003; Simmons, 2005],.nên tạm thời xếp R cf macrotis dạng loài R macrotis Tuy nhiên, thời gian tới cần có nh ng nghiên cứu sâu vị trí phân loại taxon này, xác định 14 khác với nhóm cịn lại kích thước thể, kích thước hình thái sọ, siêu âm (như phân tích trên), đặc điểm di truyền 3.1.2.5 Dơi mã lai R malayanus s.s R cf malayanus R cf malayanus – taxon ghi nhận, khác với R malayanus s.s – dạng phổ biến lồi Việt Nam - chỗ chúng có mũi gi a hẹp, hai cạnh song song với phần gốc to phần chóp nh , R malayanus s.s có mũi gi a tương đối rộng với hai cạnh song song [Csorba cộng sự, 2003] Phân tích thành phần (PCA) thực số kích thước sọ-răng 29 mẫu R malayanus s.s., mẫu R cf malayanus số kích thước mẫu chuẩn (holotype) R malayanus công bố Soisook cộng [2008] Kết cho thấy có hai hai nhóm khác biệt: nhóm (1) mẫu R cf malayanus, nhóm (2) gồm mẫu R malayanus s.s mẫu chuẩn lồi Trong phân tích này, đặc điểm sọ mẫu thuộc R cf malayanus nh so với mẫu R malayanus s.s cách có ý nghĩa, thể rõ số chiều dài xương (PL), chiều dài xương hàm (ML), chiều dài dãy hàm (CM3L) chiều dài dãy hàm (CM3L) Về di truyền, trình tự gen Cytochrom Oxydase I (COI) mẫu R cf malayanus khác với mẫu R malayanus s.s với khoảng cách di truyền 2,3% – 2,7% (chi tiết mục 3.3), nằm khoảng khác biệt di truyền bậc loài họ Dơi mũi (1,5% – 15%) [Servent cộng sự, 2003] 3.1.2.6 Dơi tô ma R thomasi s.s R cf thomasi Kết nghiên cứu xác định loài Dơi tơ ma, ngồi dạng điển hình R thomasi s.s., Việt Nam cịn có số cá thể thuộc taxon với nh ng khác biệt định hình thái, kích thước, siêu âm đặc điểm di truyền, tạm gọi R cf thomasi Trong hai dạng lồi này, R thomasi s.s.có kích thước nh (dài cẳng tay 42,5 – 47,5); mũi tương đối m ng với mũi trước tròn, mũi sau ngắn thấp; sử dụng tín hiệu siêu âm tần số 80 kHz (cá thể đực), 86 kHz (cá thể cái) R cf thomasi có kích thước lớn (chiều dài cẳng tay 44.6 – 51.2 mm), với mũi tương đối dày mũi trước thuôn đều, mũi sau dài, nhọn có hai cạnh lõm; sử dụng tín hiệu siêu âm tần số 77 kHz (cá thể cái) Phân tích thành phần (PCA) thực 13 số kích thước sọrăng 12 mẫu R sinicus, 31 mẫu R thomasi s.s., 15 mẫu R cf thomasi với mẫu chuẩn (type) R thomasi R sinicus mô tả Andersen [1905b] Kết cho thấy mẫu phân tích kể tạo thành ba nhóm khác nhau: nhóm (1) gồm mẫu R thomasi s.s mẫu chuẩn lồi, nhóm (2) gồm mẫu R sinicus mẫu chuẩn loài Nhóm (3) gồm mẫu R cf thomasi (hình 3.6) Có thể thấy, số kích thước sọ, R cf thomasi gần với R sinicus với R thomasi s.s Tuy nhiên, hình thái (chi tiết mục 3.4) di truyền (chi tiết trongmục 3.3), chúng có quan hệ gần gũi với R cf thomasi Cần có nghiên 15 cứu kỹ để khẳng định xác vị trí phân loại taxon này, đặc biệt R cf thomasi 3.1.2.7 Dơi ma san R cf marshalli R cf marshalli Cho đến phát Việt Nam nói riêng khu vực tồn hai dạng khác biệt loài Dơi ma san, tạm gọi R cf marshalli R cf marshalli Cả hai dạng có hình thái giống với đặc điểm R marshalli theo mô tả Thonglongya [1973], Hill Topal [1990], Csorba cộng [2003], Vu Dinh Thong [2012], Kruskop [2013], khác khác với mẫu chuẩn loài cách có ý nghĩa số hình thái ngồi, kích thước hình thái sọ (hình 3.7, 3.8) Trong đó, R cf marshalli dạng phổ biến dơi ma san ghi nhận từ trước đến R cf marshalli ghi nhận nghiên cứu Phân tích thành phần (PCA) thực số hình thái 15 mẫu R cf marshalli 1, mẫu R cf marshalli mẫu chuẩn R marshalli type mô tả Thonglongya [1973] Kết quả, PC cho thấy: kích thước thể, R cf marshalli hoàn toàn giống với mẫu chuẩn R marshalli tạo thành nhóm riêng tách biệt có kích thước nh so với R cf marshalli Trong đó, PC khơng thể khác biệt hình dạng thể gi a mẫu Phân tích thành phần (PCA) thực số kích thước sọ-răng mẫu Kết quả, cho thấy, R cf marshalli 1, R cf marshalli R marshalli type tạp thành nhóm riêng biểu đồ Trong đó, PC (phản ánh đặc điểm kích thước) cho thấy: kích thược sọ - răng, R cf marshalli nh hẳn so với R cf marshalli 2, tạo thành hai nhóm tách biệt biểu đồ Trong đó, PC chothấykhơngcósự khácbiệt kích thước sọ gi a R cf marshalli với R marshalli type PC (phản ánh đặc điểm hình thái) cho thấy: hình thái sọ, R cf marshalli R cf marshalli khơng vó khác biệt, hai dạng khác nhiều so với R marshalli type Kết phân tích di truyền cho thấy R cf marshalli R cf marshalli tạo thành hai nhánh gần quan hệ chủng loại phát sinh với khoảng cách di truyền khoảng 0,6 - 1% Về tiếng kêu siêu âm, R cf marshalli Việt Nam sử dụng tần số siêu âm cao hẳn so với R cf marshalli (42-45.2 kHz so với 34.5 kHz) Tần số 42 – 45kHz ghi nhận loài R marshalli có Lào [Francis, 2008], Thái Lan [Soisook, số liệu cá nhân] Kết hợp với kết phân tích di truyền phân tử cho thấy R cf marshalli phổ biến Việt Nam khu vực lân cận Các kết cho thấy, không Việt Nam, dơi ma san R marshalli khu vực khơng lồi mà tổ hợp loài với nhiều dạng loài, với nh ng khác biệt rõ ràng hình thái, siêu âm khác biệt phần di truyền phân tử Cần có nghiên cứu chi tiết hình thái, siêu âm, di truyền phạm vi rộng để xác định rõ đặc điểm phân loại học loài Dơi masan 16 3.1.2.8 Loài dơi quạt R paradoxolophus s.s R cf paradoxolophus Kết nghiên cứu ghi nhận Việt Nam hai dạng loài khác Dơi quạt R paradoxolophus, tạm gọi R paradoxolophus s.s R cf paradoxolophus Trong hai dạng loài này, R paradoxolophus s.s dạng phổ biến loài Dơi rẻ quạt Việt Nam, với tai lớn, mũi sau ngắn, khum tròn, bị che khuất phần khác, thùy liên kết thấp, mũi gi a lớn có dạng với nếp da bên gốc phát triển Phần đài gian mũi phát triển với mũi phụ lớn tạo thành hình cốc xịe rộng R cf paradoxolophus đặc điểm hình thái tương tự có kích thước lớn (chiều dài cẳng tay 56,8 mm so với trung bình 53 mm R paradoxolophus s.s.), mũi sau dài nhô cao so với mẫu điển hình R paradoxolophus s.s Về tiếng kêu siêu âm, R paradoxolophus s.s sử dụng tiếng kêu siêu âm có tần số 27.3 – 31.9 kHz, R cf paradoxolophus sử dụng tiếng kêu siêu âm có tần số thấp hơn, 25 kHz Về kích thước, R cf paradoxolophus lớn hẳn R paradoxolophus s.s tương đương với kích thước R rex, mơ tả Allen [1923], lồi cho có phân bố Trung Quốc [Csorba cộng sự, 2003] Tuy nhiên, việc xác định R paradoxolophus R rex thuộc loài hai lồi riêng biệt vấn đề cịn nhiều tranh luận [Csorba cộng sự, 2003] Trong số tác giả cho chúng hai loài riêng biệt [Thonglongya, 1973; Csorba cộng sự, 2003; Eger Fenton 2003] số tác giả cho chúng thuộc lồi [Corbet Hill, 1992; Simmons, 2005] Hai lồi có hình dạng ngồi giống nhau, phân biệt kích thước [Csorba cộng sự, 2003] Để kiểm tra quan hệ mặt phân loại học gi a R paradoxolophus s.s., R cf paradoxolophus R rex, sử dụng phương pháp phân tích thành phần số hình thái ngồi đặc điểm kích thước sọ-răng gi a mẫu vật hai taxon với mẫu R rex Trung Quốc, kể so với mẫu chuẩn công bố Allen (1923) Ngồi ra, chúng tơi so sánh trình tự di truyền (gene COI) số mẫu vật đại diện Kết phân tích PCA số hình thái 11 mẫu R paradoxolophus s.s., mẫu R cf paradoxolophus, 12 mẫu R rex (gồm mẫu chuẩn) cho thấy, khơng có khác biệt đáng kể số hình thái ngồi gi a R paradoxolophus R rex (PC PC giải thích 38,0% 26,9% phương sai), khơng có yếu tố thể khác biệt rõ ràng gi a hai lồi Kết phân tích PCA 10 số kích thước sọ-răng 12 mẫu R paradoxolophus s.s., mẫu R cf paradoxolophus, 16 mẫu R rex (gồm mẫu chuẩn) cho thấy có khác biệt có ý nghĩa gi a R paradoxolophus R rex (PC PC giải thích 63,0% 7,9% phương sai) Tuy nhiên, số 10 số kích thước sọ phân tích, khơng có yếu tố thể khác biệt rõ ràng gi a hai loài Các kết hoàn toàn phù hợp với nhận định Csorba cộng sự, (2003) cho rằng: “khơng có khác biệt đáng kể 17 đặc điểm hình thái ngồi đặc điểm sọ-răng quan sát hay đo lường gi a hai loài này” [Csorba cộng sự, 2003] Kết phân tích PCA số kích thước sọ-răng cho thấy mẫu R cf paradoxolophus thuộc nhóm tương đồng với mẫu thuộc R rex, mẫu R paradoxolophus s.s lại nằm tương đối tách biệt với loài Tuy nhiên, kết phân tích di truyền (trình tự gen COI) cho thấy khoảng cách di truyền gi a mẫu vật R cf paradoxolophus thuộc nhánh riêng, mẫu thuộc R paradoxolophus s.s R rex lại thuộc nhánh Khoảng cách di truyền gi a R cf paradoxolophus với R paradoxolophus s.s R rex 2,6-2,8% 2,8% Trong khoảng cách di truyền gi a R paradoxolophus s.s R rex 0-0,4% Từ kết nêu trên, khẳng định Việt Nam tồn hai dạng loài khác loài R paradoxolophus Hai dạng lồi khác hình thái, kích thước, đặc điểm siêu âm di truyền Ngoài ra, gi a R paradoxolophus R rex có nh ng đặc điểm chồng chéo, khó phân biệt, kể hình thái, kích thước di truyền Cần có nghiên cứu sâu để xác định rõ quan hệ vị trí phân loại học hai lồi 3.2 ĐẶC ĐIỂM TIẾNG KÊU SIÊU ÂM CỦA CÁC LOÀI DƠI LÁ MŨI Ở VIỆT NAM 3.2.1 Tần số siêu âm loài dơi mũi Việt Nam Kết phân tích tiếng kêu siêu âm 25 dạng loài dơi mũi Việt Nam cho thấy, tất taxon có tiếng kêu siêu âm đặc trưng họ dơi mũi Rhinolophidae, với tín hiệu gồm ba thành phần: thành phần khởi đầu có tần số biến điệu iFM (initial frequency-modulated), thành phần có tần số ổn định CF (constant frequency) dài thành phần kết thúc có tần số biến điệu tFM (terminal frequency-modulated) (cấu trúc iFM-CF-tFM) [Csorba cộng sự, 2003] Theo Neuweiler cộng [1987] loài dơi mũi thường sử dụng hai họa âm, họa âm thứ hai họa âm trội, phần lớn lượng tập trung họa âm [Furey cộng sự, 2009b] Đây tần số siêu âm tiếng kêu dơi mũi [Kingston Rossiter, 2004], công cụ h u hiệu định loại lồi dơi sử dụng tín hiệu CF [Furey cộng sự, 2009b; Vu Dinh Thong, 2011] với độ xác đến 89,1 % [Furey cộng sự, 2009b] Trong nghiên cứu này, thành phần có tần số ổn định họa âm thứ hai (CF2) loài dơi mũi Việt Nam nằm khoảng 24 kHz (R paradoxolophus form 2) đến 112 kHz (R subbadius) Nhìn chung, lồi dơi mũi thuộc nhóm lồi "pusillus" có tần số siêu âm cao (88 – 112 kHz), tiếp đến nhóm lồi "megaphyllus" (70 – 100 kHz), nhóm lồi "rouxii" (76.5 – 85 kHz) Nhóm lồi "pearsonii" "euryotis" có tần số thuộc loại trung bình (lần lượt 53 – 66 kHz 64.6 – 68.6 kHz) Tần số siêu âm thấp thuộc nhóm lồi "philippinensis" (24 – 54 kHz) (ngoại trừ 18 R siamensis có tần số siêu âm cao hẳn (63 – 71.7 kHz)) "trifoliatus" (33 kHz) Tần số siêu âm loài dơi mũi nghiên cứu so với taxon tương ứng công bố dơi Việt Nam khu vực lân cận tương đối đồng (thể R affinis, R chaseni, R stheno, R microglobosus, R sinicus, R thomasi, R acuminatus, R shameli, R pearsonii, R siamensis, R macrotis, R marshalli 3.2.2 Tƣơng quan tần số siêu âm với số số hình thái ngồi Trong nghiên cứu này, chúng tơi xác định mối tương quan gi a số tần số siêu âm, kích thước thể (biểu thị chiều dài cẳng tay) chiều cao tai Kết cho thấy, số loài dơi mũi nghiên cứu, tần số siêu âm có tương quan tuyến tính âm với kích thước thể chiều cao tai Trong đó, tần số siêu âm số lồi dơi mũ Việt Nam có tương quan âm với kích thước thể mức độ trung bình có tương quan âm với chiều cao tai mức độ tương quan chặt Trong đó, chiều cao tai dơi có tương quan tuyến tính dương với kích thước thể mức độ tương quan chặt (r = 0,8) Có thể thấy, kích thước loài dơi tăng lên, tần số siêu âm mà chúng sử dụng thấp (theo phương trình hồi quy tuyến tính Y = 134.700 - 1.227*X (r = -0,49) Tương tự, chiều cao tai loài dơi tăng lên, tần số siêu âm mà chúng sử dụng thấp đi, theo phương trình hồi quy tuyến tính Y = 135.936 2.955*X (r = -0,76) Như vậy, nhìn chung, loài dơi mũi, nh ng loài có kích thước nh sử sụng tần số siêu âm cao nh ng lồi có kích thước lớn, nh ng lồi có tai nh sử dụng tần số siêu âm cao nh ng lồi có tai lớn Kết phù hợp với nghiên cứu công bố [Heller Helversen, 1989; Jones cộng sự, 1992; Bogdanowicz cộng sự, 1999; Feng cộng sự, 2002; Zhao cộng sự, 2006] Các mối tương quan gi a tần số siêu âm với kích thước thể, tần số siêu âm với chiều cao tai, gi a chiều cao tai với kích thước thể phân hóa tạo nên tính đa dạng tiếng kêu siêu âm dơi, góp phần làm giảm khả bị chồng chéo tần số siêu âm sử dụng gi a loài, đặc biệt nh ng lồi có vùng phân bố [Russo cộng sự, 2007] Sự phân hóa đa dạng tần số siêu âm cho phép nh ng lồi dơi có kích thước tương đương tránh phải cạnh tranh với nhau, đặc biệt cạnh tranh thức ăn [Feng cộng sự, 2002] 3.3 QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ LOÀI DƠI LÁ MŨI VIỆT NAM 3.3.1 Khoảng cách di truyền Khoảng cách di truyền gi a taxon xác định phân tích mơ hình Kimura-2-parameter (K2P) Kết cho thấy, khoảng cách di truyền trình tự gene COI gi a loài nghiên cứu phổ biến từ 2,3 % (R stheno – R microglobosus) đến 22,0% (R acuminatus – R affinis), trừ cặp R macrotis - R siamensis có khoảng cách di truyền 0-1,2%, vị trí phân loại hai lồi 19 chưa rõ ràng [Sun cộng sự, 2008; Zhang cộng sự, 2009; Francis cộng sự, 2010] Trong đó, 88% (15/17) số lồi khác với lồi khác 2%, thấp so với tỷ lệ 95% nghiên cứu Francis cộng [2010] Nhìn chung, khoảng cách di truyền nh ghi nhận gi a nh ng lồi nhóm Trong đó, khoảng cách di truyền lớn ghi nhận gi a lồi thuộc nhóm lồi khác Khoảng cách di truyền gi a loài nhóm lồi có chênh lệch lớn gi a nhóm Khoảng cách di truyền gi a lồi nhóm lồi megaphyllus lớn dao động lớn nhất, từ 2,3% (R stheno – R microglobosus) đến 21.2% (R affinis – R malayanus) Ngược lại, khoảng cách di truyền gi a loài nhóm lồi philippinensis nh (0 – 5.1%) Trong đó, khoảng cách di truyền gi a lồi nhóm lồi pusillus tương đối lớn ổn định (9.3 – 15.1%) Khoảng cách di truyền thấp nhóm lồi philippinensis (đặc biệt, gi a R macrotis R siamensis từ – 1,2%) liên quan đến tính phân ly di truyền thấp nhóm lồi [Vuong Tan Tu cộng sự, 2017] Mức độ biến dị di truyền thấp gi a loài nhóm lồi phân ly nhánh khơng hồn tồn tính đa hình tổ tiên, chúng kết nh ng kiện hình thành lồi xảy gần đây, có nhập gen (introgression) gi a lồi có quan hệ gần gũi [Berthier Ruedi, 2006; Mao cộng sự, 2010] 3.3.2 Quan hệ phát sinh loài dơi mũi Việt Nam Cây quan hệ phát sinh xây dựng theo phân tích Maximum Likelihood thể hình 3.16 Chỉ số gốc nhánh giá trị bootstrap với 1.000 vòng lăp ngẫu nhiên Mức độ tin cậy đánh giá theo giá trị ML bootstrap sau: mức độ tin cậy cao: > 85%; mức độ tin cậy trung bình: 65-85%; mức độ tin cậy thấp: