NGHIÊN CỨU TẦM SOÁT, KHUẾCH ĐẠI VÀ GIẢI TRÌNH TỰ VÙNG GENE TẠO HƯƠNG AAT CỦA LAN VANDA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC DÂN LẬP VĂN LANG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU TẦM SOÁT, KHUẾCH ĐẠI VÀ GIẢI TRÌNH TỰ VÙNG GENE TẠO HƢƠNG AAT CỦA LAN VANDA Giảng viên hƣớng dẫn: TS Trần Hoàng Dũng Sinh viên thực tập: Đặng Thị Hồng Oanh (Trƣởng nhóm) Nguyễn Thị Kim Oanh Đặng Hoàng Nhi Nguyễn Văn Vạn Tháng 09/2013 ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC DÂN LẬP VĂN LANG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU TẦM SOÁT, KHUẾCH ĐẠI VÀ GIẢI TRÌNH TỰ VÙNG GENE TẠO HƢƠNG AAT CỦA LAN VANDA Giảng viên hƣớng dẫn: TS Trần Hoàng Dũng Sinh viên thực tập: Đặng Thị Hồng Oanh (Trƣởng nhóm) Nguyễn Thị Kim Oanh Đặng Hoàng Nhi Nguyễn Văn Vạn Tháng 09/2013 iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ABI Applied Biosystems Incorporated BLAST Basic Local Alignment Search TooL bp base pair cDNA complementary Acid Deoxyribo Nucleic CSDL CTAB Cetyltrimethylammonium bromide ddNTP dideoxynucleotide dNTP deoxynucleotide DNA Acid Deoxyribo Nucleic EDTA Ethylendiamin Tetraacetic Acid EST Expressed Sequence Tag F Forward GDPS gene genaryl diphosphate synthase ITS Internal transcribed spacer IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry MMDB Molecular Modeling Database NCBI National Center for Biotechnology Information ORF open reading frame PCR Polymerase Chain Reaction R Reverse iv RNA Ribonucleic acid Taq Thermus aquaticus TBE Tris/Borate/EDTA Tm Melting Temperature VMPAAT Vada mini palmer alcohol acyltransfase UV Ultraviolet v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Một số loại lan Vanda Hình 2.2 Vanda có hình trụ tròn Hình 2.3 Vanda có dẹp phẳng Hình 2.4 Sơ đồ tóm tắt phƣơng pháp hóa học Maxam Gilbert 15 Hình Error! No text of specified style in document Hình ảnh mô tả cấu trúc dNTP ddNTP 16 Hình 2.6 Nguyên lý phƣơng pháp dideoxynucleotide 17 Hình 2.7 Sơ đồ tóm tắt quy trình giải trình tự máy tự động 18 Hình 3.1 Các mẫu lanVanda đƣợc thu thập nghiên cứu 23 Hình 4.1 Mẫu lanVanda sau xử lý 34 4.2 Vanda 36 4.3 - Vanda 37 4.4 -AAT củ Vanda 37 4.5 - Vanda 38 Hình 4.6 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh mạch 39 Hình 4.7 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh mạch 40 Hình 4.8 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh hai mạch 41 Hình 4.9 Kết gióng cột thẳng hàng SeaView 42 Hình 4.10 Kết so sánh trình tự Genebank 42 Hình 4.11 Kết dò tìm trình tự tƣơng đồng công cụ Blast 43 Hình 4.12 Cây phát sinh loài xây dựng phần mềm MEGA 5.2.2 43 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Các dụng cụ sử dụng nghiên cứu 25 Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 26 Bảng 3.3 Các dụng cụ sử dụng nghiên cứu 27 Bảng 3.4 Thông tin mồi đƣợc sử dụng phản ứng PCR 30 Bảng 3.5 Các thành phần phản ứng PCR 31 Bảng 3.6 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 31 Bảng 4.1 Thông tin mẫu lan đƣợc thu thập 33 4.2 -AAT 37 4.3 -AAT 38 vii MỤC LỤC CHƢƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu 1.4 Giới hạn đề tài CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung phong lan 2.2 Vanda 2.3 Tổng quan vùng VMP-AAT 2.4 Kỹ thuật PCR 10 2.5 Kỹ thuật giải trình tự 14 2.6 Kỹ thuật hiệu chỉnh trình tự 19 2.7 Tình hình nghiên cứu nƣớc 20 2.7.1 Các nghiên cứu nƣớc 20 2.7.2 Các nghiên cứu nƣớc 21 CHƢƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 23 3.2 Vật liệu nghiên cứu 23 3.3 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 25 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 3.4.1 Phƣơng pháp xử lý mẫu lan 28 viii 3.4.2 Tách chiết DNA tổng số 28 3.5 Định tính DNA 29 3.6 Phản ứng khuếch đại 30 3.7 Hiệu chỉnh trình tự 31 3.8 So sánh với sở liệu GeneBank 32 33 4.1 4.2 Kết 33 ế 35 4.3 36 4.3.1 - Vanda, 36 4.3.2 - Vanda 38 4.4 Kết giải trình tự 4.5 Phân tích kết 4.5.1 So sánh trình tự mẫu nghiên cứu với ngân hàng GenBank 4.5.2 Trình tự đoạn gene có hƣơng CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 5.2 Kiến nghị CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong năm gần kinh tế nƣớc ta lên để hội nhập vào kinh tế khu vực giới Hiện với nhiều mặt hàng nông nghiệp xuất nhƣ: cà phê, tiêu, điều, cao su, gạo… sản xuất nông nghiệp đóng góp phần quan trọng kinh tế quốc dân, với thành tựu to lớn đạt đƣợc sản xuất nông nghiệp, ngành sản xuất hoa lan có bƣớc tiến đáng kể Ở số nƣớc giới ngành trồng hoa cảnh nói chung hoa lan nói riêng đƣợc sản xuất quy mô công nghiệp đem lại hiệu kinh tế cao Hoa lan thực trở thành sản phẩm nông nghiệp có giá trị kinh tế cao, thúc đẩy ngành sản xuất kinh doanh phát triển mạnh mẽ số nƣớc nhƣ: Thái Lan, Singapore, Malaysia, Indonesia… Thái Lan có kim ngạch xuất hoa lan cắt cành năm 1987 21 triệu USD, năm 1990 26 triệu USD, năm 1991 30 triệu USD, Singapore thu lợi nhuận từ hoa cắt cành năm 10 triệu USD Việt Nam năm gần đây, với phát triển nhanh chóng kinh tế, xã hội… Nhu cầu sử dụng hoa nói chung hoa lan nói riêng tăng nhanh, không dùng dịp lễ tết nhƣ trƣớc mà nhu cầu hoa sống thƣờng ngày ngƣời dân lớn, bên cạnh nhu cầu số lƣợng, chất lƣợng cành hoa đòi hỏi ngày cao, số liệu thống kê cho thấy loài hoa có chất lƣợng cao xuất thị trƣờng chủ yếu nhập từ Đài Loan, Thái Lan, Trung Quốc chủ yếu đƣợc tiêu thụ nhiều đô thị, thành phố lớn Điều cho thấy sản xuất hoa Việt Nam chƣa đáp ứng đƣợc nhu cầu thị hiếu ngƣời dân.Trong năm gần đây, số loài lan lai đƣợc nhập nội ngày nhiều vào nƣớc ta (Catteya, Phalaenopis, Dendrobium, Vanda…) với chất lƣợng ngày cao, màu sắc đa dạng đƣợc tiêu thụ mạnh Tuy nhiên, với phát triển kinh tế, nhu cầu hoa lan ngƣời thƣởng thức đẹp vẻ bên mà ngƣời ta ý đến mùi hƣơng đa dạng hƣơng hoa Thực tế việc đánh giá hoa lan cho mùi hƣơng đƣợc thực năm 1989 Liên hoan hoa lan quốc tế Grand Prix, Nhật Bản Kể từ đó, lễ hội hoa lan khác châu Âu, New Zealand, Bắc Mỹ tiến hành theo hƣớng đánh giá bao gồm hƣơng thơm vào lĩnh vực họ đánh giá phong lan Thông qua hội nghị lễ hội, ngƣời ta tìm kiếm để chọn giống hoa lan cho mùi hƣơng hấp dẫn với vẻ đẹp hình ảnh chúng Vì năm trở lại đây, có quan tâm trở lại việc tìm loài hoa lan toàn mĩ: nhìn phải đẹp ngửi thơm Vấn đề thu hút ý nhà sản xuất nƣớc hoa ngƣời yêu hoa lan - việc tìm kiếm mùi hƣơng Ở loài lan có hƣơng, hoa chúng thƣờng có nhƣợc điểm đƣờng kính hoa nhỏ mau tàn Hiện nay, giống lan thƣơng phẩm hầu hết đƣợc lai tạo nên cho kích thƣớc hoa to màu sắc rực rỡ nở Khi vẻ đẹp cánh hoa lan ngày trở nên hấp dẫn ngƣời thƣởng thức mùi hƣơng nguyên thủy chúng lại dần biến Ở nơi hoang dã, tinh dầu loài hoa lan có hƣơng đƣợc lƣu trữ cánh đài hoa Tinh dầu đƣợc giải phóng môi trƣờng tiếp xúc với không khí Mùi hƣơng đƣợc chúng sử dụng để thu hút côn trùng thụ phấn Một điều đáng tiếc trình lai giống nhà trồng lan thƣơng mại trọng mục đích muốn tăng kích thƣớc hoa để giữ cho lâu tàn nên chúng đƣợc đƣa vào trồng chăm sóc nhà kính, chúng mùi hƣơng thiên nhiên đặc trƣng giữ đƣợc đầy đủ màu sắc Điều đáng lƣu ý loài lan có hƣơng, phần lớn chúng tỏa hƣơng hoa nhƣng lại không biểu phận khác.Vậy gen loài lan này, đoạn gen quy định biểu mùi hƣơng chúng? Với đề tài: “Nghiên cứu tầm soát, khuếch đại giải trình tự vùng gene tạo hương AAT lan Vanda” Chúng tin đề tài bƣớc đột phá lớn lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật,từ tạo tiền đề cho hƣớng nghiên cứu mới, khai thác ứng dụng đặc tính quý loài thực vật nói chung lan nói riêng để áp dụng vào lĩnh vực khác đời sống.Chẳng hạn nhƣ việc cung cấp sở liệu cho ngƣời chơi lan đặc tính tạo hƣơng lan… 32 CHƢƠNG 4.1 Mẫu sau thu thập vƣờn lan Thủ Đức phòng thí nghiệm đƣợc xử lý với nƣớc cất cồn 70%, sau bảo quản - 5oC để phục vụ cho việc tách DNA Dƣới bảng tổng kết chi tiết loài lan thu thập đƣợc Bảng 4.1 Thông tin mẫu lan đƣợc thu thập STT Tên mẫu Kí hiệu Địa điểm thu thập Vanda Thủ Đức V1 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V2 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V3 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V4 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V5 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V6 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Thủ Đức V7 Vƣờn lan Thủ Đức Vanda Tan Chay Yan V8 Vƣờn lan Nhà Bè Vanda Nhà Bè V9 Vƣờn lan Nhà Bè 10 Vanda Nhà Bè V10 Vƣờn lan Nhà Bè Trên bảng thông tin chi tiết mẫu lan thu thập Bên dƣới hình ảnh mẫu xử lý 10 mẫu lan Vanda thu thập đƣợc thành phố Hồ Chí Minh 33 A B C D E F G 34 H I J Hình 4.1 Mẫu lanVanda sau xử lý (A) – Vanda Thủ Đức 1, (B) – Vanda Thủ Đức 2, (C) – Vanda Thủ Đức 3, (D) – Vanda Thủ Đức 4, (E) – Vanda Thủ Đức 5, (F) – Vanda Thủ Đức 6, (G) – Vanda Thủ Đức 7, (H) – Vanda Tan Chay Yan, (I) – Vanda Nhà Bè 1, (J) – Vanda Nhà Bè 4.2 Kết ế 4.2 cho thấy trình tách chiết DNA tổng số 10 mẫu dƣơng tính Các băng mẫu có độ sáng khác gel soi dƣới tia UV 35 4.2 Vanda V1 đến V10 ậ ệ nhiều Lƣợng DNA mẫu không tƣơng đồng với bị smear nhiều Để nghiên cứu đƣợc thuận lợi, pha loãng mẫu DNA cho kết tất mẫu tƣơng ƣớng với nhau, có tƣơng đƣơng kích thƣớc độ sáng dùng làm mẫu cho phản ứng khuếch đại bƣớc nghiên cứu 4.3 - 4.3.1 - lan Vanda - : 36 4.2 STT -AAT (µL) Taq DNA pol 2x-preMix -F (10 µM) -R (10 µM) H2O DNA khuôn 10 0.5 0.5 20 1500bp 4.3 - 1500bp 1400bp 4.4 Vanda (V1- V6) -AAT lan Vanda (V7 – V10) 37 Sản phẩm PCR đƣợc kiểm tra điện gel agarose 1% qua xuất băng DNA với kích thƣớc mong muốn đặt soi UV Sản phẩm PCR mẫu đƣợc tải vào giếng với giếng chứa DNA ladder Sau điện di, băng sáng xuất giếng tải DNA marker dùng làm thang đo cho sản phẩm PCR Mỗi băng sáng biểu diễn cho đoạn DNA có khối lƣợng phân tử khác Hai băng sáng liên tiếp cách khoảng 100 bp, băng nhỏ (nằm dƣới cùng) có kích thƣớc 100 bp, băng lớn có kích thƣớc 1500 bp (1,5 kb) Sau 10 8.2 Vanda - 1400 Tuy nhiên, DNA mẫu V8.2 đƣợc pha V8.2 loãng 10 lần nên xuất vệt sáng mờ V8.1 (mẫu DNA gốc) hƣơng 8.1 4.3.2 l - 4.3 -AAT STT (µL) Taq DNA pol 2x-preMix 10 -F (10 µM) 0.5 -R (10 µM) 0.5 H2O DNA khuôn 20 38 1500bp pp 1400bp p 4.5 - Vanda Kích thƣớc vùng gen AAT đƣợc khuếch đại với cặp mồi VMPAAT-F VMPAAT-R khoảng 1400bp nên đối chiếu với DNA marker, sản phẩm nằm ngang với băng DNA có kích thƣớc 1400bp DNA marker băng DNA sáng rõ, chiều rộng băng lớn xem nhƣ phản ứng khuếch đại thành công sử dụng sản phẩm PCR để giải trình tự Vanda quang D : 39 Trƣờng hợp 1: Cả mạch DNA sử dụng để hiệu chỉnh A = denine, T = Thymine, C = Cytosine, G = Guanine Hình 4.6 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh mạch Đây nhóm có tín hiệu huỳnh quang rõ hai kết đọc mồi xuôi mồi ngƣợc hỗ trợ để suy trình tự xác cho đoạn DNA khuếch đại (Hình 4.6) 40 Trƣờng hợp 2: Chỉ mạch có sử dụng để hiệu chỉnh A = Adenine, T = Thymine, C = Cytosine, G = Guanine Hình 4.7 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh mạch Nhóm có tín hiệu rõ kết đọc với mồi nhƣng lại có tín hiệu xấu kết mồi lại (Hình 4.7) Ví dụ, mạch giải trình tự với mồi xuôi có đỉnh huỳnh quang phân biêt đƣợc, tín hiệu trùng lấp lên nhƣng mạch đƣợc giải mồi ngƣợc lại cho tín hiệu rõ ràng nên thu đƣợc trình tự xác nhờ vào hiệu chỉnh mạch Để thu đƣợc cách xác, cần giải lại trình tự cho mạch tín hiệu huỳnh quang xấu 41 Trƣờng hợp 3: Cả mồi không giải đƣợc A = Adenine, T = Thymine, C = Cytosine, G = Guanine Hình 4.8 Trƣờng hợp trình tự DNA hiệu chỉnh hai mạch Nhóm có tín hiệu huỳnh quang không rõ ràng hai kết đọc mồi xuôi mồi ngƣợc (Hình 4.8) Các đỉnh tín hiệu chồng lấp lên toàn trình tự nên phân biệt đƣợc base Đồ thị Dot plot không tạo đƣợc đƣờng chéo phản ánh tƣơng đồng hai kết giải trình tự Với mẫu hoàn toàn hiệu chỉnh đƣợc, dùng đẻ phân tích cần đƣợc loại bỏ Các mẫu rơi vào trƣờng hợp phải cho giải lại trình tự hai mồi xuôi ngƣợc Nếu cần thiết phải thực lại phản ứng PCR để thu thêm sản phẩm Đối với trƣờng hợp này, mẫu phải đƣợc đem gửi để giải trình tự lại với hai mồi xuôi ngƣợc cần cẩn thận thao thác lấy mẫu trƣớc đem giải trình tự để kết đƣợc tốt 42 Nguyên nhân trƣờng hợp tín hiệu bị nhiễu sản phẩm PCR bi nhiễm tạp mồi không đƣợc tinh Kết sau chỉnh trình tự, từ phản ứng, thu đƣợc trình tự liên ứng dài 1408 nucleotide Các trình tự đƣợc gióng cột thẳng hàng phần mềm SeaView Hình 4.9 Kết gióng cột thẳng hàng SeaView So sánh trình tự tƣơng đồng Genbank công cụ Blast cho thấy gene khuếch đại giải mã thuật gene AAT Vanda Hình 4.10 Kết so sánh trình tự Genebank 43 Sử dụng trình tự nucleotides thu đƣợc, dịch mã sang protein sử dụng bảng mã tiêu chuẩn, trình tự amino acid thu đƣợc đƣợc dò tìm trình tự tƣơng đồng công cụ Blast cho thấy trình tự thu đƣợc mã hóa cho protein giả định thuộc họ transferrase Hình 4.11 Kết dò tìm trình tự tƣơng đồng công cụ Blast Phân tích phát sinh chủng loài dựa trình tự amino acid cho thấy trình tự thật AAT Vanda Cây phát sinh chủng loài dựng trình tự amino acid suy luận từ trình tự nuclotides thu đƣợc phầm mềm MEGA 5.2.2 gi|356535404|ref|XP 003536235.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Glycine max 100 70 gi|356500043|ref|XP 003518844.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Glycine max gi|133874202|dbj|BAF49304.1| putative acyltransferase Clitoria ternatea 100 gi|502123158|ref|XP 004498016.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Cicer arietinum gi|217074394|gb|ACJ85557.1| unknown Medicago truncatula 100 25 100 gi|388496638|gb|AFK36385.1| unknown Medicago truncatula gi|508718393|gb|EOY10290.1| Benzoyl coenzyme A: Benzyl alcohol benzoyl transferase Theobroma cacao gi|57471999|gb|AAW51125.1| putative alcohol acyl-transferases Cucumis melo 35 46 100 gi|449466689|ref|XP 004151058.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Cucumis sativus gi|254771941|gb|ACT82248.1| alcohol acyltransferase Vasconcellea cundinamarcensis gi|49798480|gb|AAT68601.1| benzoyl coenzyme A: benzyl alcohol benzoyl transferase Petunia x hybrida 71 27 100 100 gi|75150383|sp|Q8GT20.1|BEBT TOBAC RecName: Full Benzyl alcohol O-benzoyltransferase AltName: gi|1171577|emb|CAA64636.1| hsr201 Nicotiana tabacum 61 gi|460395857|ref|XP 004243496.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Solanum lycopersicum 99 46 gi|460395855|ref|XP 004243495.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Solanum lycopersicum gi|84578877|dbj|BAE72881.1| benzoyl CoA benzoic acid benzoyltransferase Verbena x hybrida 100 gi|161089458|gb|ABX57719.1| acyltransferase Vanda hybrid cultivar VAAT-Vietnamn-BobotIntronOgiua no comment gi|357146914|ref|XP 003574156.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Brachypodium distachyon 99 gi|414870838|tpg|DAA49395.1| TPA: 10-deacetylbaccatin III 10-O-acetyltransferase Zea mays 100 100 gi|514815870|ref|XP 004982683.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase-like Setaria italica gi|548831981|gb|ERM94783.1| hypothetical protein AMTR s00011p00264170 Amborella trichopoda gi|225427540|ref|XP 002266420.1| PREDICTED: benzyl alcohol O-benzoyltransferase Vitis vinifera 0.05 Hình 4.12 Cây phát sinh loài xây dựng phần mềm MEGA 5.2.2 44 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết thu đƣợc đƣa số kết luận nhƣ sau: - Thành thạo số thao tác sinh học phân tử nhƣ: kỹ thuật lấy mẫu bảo quản mẫu, tách chiết DNA, điện di, kỹ thuật PCR, số phƣơng pháp giải trình tự hiệu chỉnh trình tự - Đã tách thu nhận đƣợc DNA tổng số 10 mẫu lan - Nhân thành công phần đoạn gene AAT lan Vanda Tan Chay Yan phƣơng pháp PCR sử dụng cặp mồi VMPAAT-F/VMPAAT-R - Giải trình tự hai chiều thành công mẫu Vanda Tan Chay Yan - Phân tích phát sinh chủng loại cho thấy trình tự gene giải thực gene AAT Vanda 5.2 Kiến nghị - Vì đề tài thực thời gian ngắn nên giải thành công trình tự lan Vanda Tan Chay Yan Nếu có thêm thời gian giải lại trình tự lan Vanda Tan Chay Yan để có kết tốt giải trình tự mẫu lan lại - Nếu có thời gian thu thập thêm mẫu nhiều loại lan khác để nghiên cứu nhiều đoạn gene tạo hƣơng lan - Nên tách chiết DNA từ mẫu sau thu nhận đƣợc để đảm bảo chất lƣợng DNA thu đƣợc tốt - Cần cẩn thận hạn chế sai sót thao tác thực để hạn chế tối đa việc nhiễm bẩn lẫn tạp sản phẩm thu đƣợc - Mở rộng thêm hƣớng nghiên cứu khác ứng dụng gene có hƣơng lan nhƣ: cấy ghép đoạn gene có hƣơng vào vi sinh vật, thực nhân dòng thu sinh khối để phục vụ cho công nghiệp mỹ phẩm, công nghiệp chế tạo mùi hƣơng nhân tạo… 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang, 1999 Di truyền phân tử Nhà xuất Nông nghiệp Tp Hồ Chí Minh, 279 trang Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng, 2002 Sinh học phân tử Nhà xuất Giáo dục, 301 trang Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng, 2011 Thực hành Sinh học phân tử Nhà xuất Đại học Khoa Học Tự Nhiên Tp Hồ Chí Minh, 36 trang Khuất Hữu Thanh, 2006 Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội, 221 trang Nguyễn Hoàng Lộc, Lê Việt Dũng Trần Quốc Dung, 2009 Giáo trình công nghệ DNA tái tổ hợp Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh, 243 trang Nguyễn Thị Lang, 2002 Phương pháp nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất Nông nghiệp Tp Hồ Chí Minh, 219 trang Trần Hợp, 1993 Phong lan có hương thơm Nhà xuất khoa học kỹ thuật PGS TS Nguyễn Hoàng Lộc, TS Trần Thị Lệ - ThS Hà Thị Minh Thi, 2007 Giáo trình Sinh học phân tử.Nhà xuất Đại học Huế TÀI LIỆU TIẾNG ANH Chen G, Hackett R, Walker D, Taylor A, Lin Z, Grierson D, 2004 Indentification of a specific isoform of tomato lipoxygenase (TomloxC) involved in the generation of fatty acid-derived flavor compounds Plant Physiol 136:2641-2651 Ha SB, Lee BC, Lee DE, Kuk YI, Lee AY, Han O, Backm K, 2002 Molecular characterization of the gene encoding rice allene oxide synthase and its expression Biosci Biotechnol Biochem,66:2719-2722 Tijet N, Schneider C, Muller BL, Brash AR, 2001 Biogenesis of volatile aldehydes from fatty acid hydroperoxides: molecular cloning of a hydeoperoxide lyase (CYP74C) with specificity for both the 9- and 13-hydroperoxides of linoleic and linolenic acids Arch Biochem Biophys,386:281-289 Verdonk JC, Haring MA, van Tunen AJ, Schuurink RC, 2005 Odorant regulates fragrance biosynthesis in petunia flowers Plant Cell, 17:1612-1624 Tholl D, Kish CM, Orlova I, Sherman D, Gershenzon J, Pichersky E, Dudareva N, 2004 Formation of monoterpenes in Antirrhinum majus and Clarkia breweri 46 flowers involves heterodimeric geranyl diphosphate synthases Plant Cell, 16(4):977992 Uniprot [http://www.ebi.ac.uk/uniprot/] TAIR [http://www.arabidopsis.org/help/helppages/go_slim_help.jsp] taiwanorchid_1 [http://bioinfo.taiwanorchid.net/~paxton/est/keyword.php] taiwanorchid_2 [http://bioinfo.taiwanorchid.net/~paxton/est/index2.html] 10 Interpro [http://www.ebi.ac.uk/interpro] 11 PaL [http://www.taiwanorchid.net/PaL/]