1. Trang chủ
  2. » Cao đẳng - Đại học

Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn cacbon và một số nguyên tố khoáng đến quá trình tạo màng biocellulose từ môi trường bổ sung dịch tảo xoắn spirulina

50 368 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 50
Dung lượng 1,39 MB

Nội dung

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH – KTNN ====== NGUYỄN THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CACBON VÀ MỘT SỐ NGUYÊN TỐ KHOÁNG ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TỪ M

Trang 1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA SINH – KTNN

======

NGUYỄN THỊ HUYỀN

NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CACBON

VÀ MỘT SỐ NGUYÊN TỐ KHOÁNG ĐẾN QUÁ TRÌNH

TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TỪ MÔI TRƯỜNG

BỔ SUNG DỊCH TẢO XOẮN SPIRULINA

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Chuyên ngành: Vi sinh vật học

Người hướng dẫn khoa học

PGS.TS ĐINH THỊ KIM NHUNG

HÀ NỘI - 2017

Trang 2

LỜI CẢM ƠN

Bằng tất cả tấm lòng kính trọng, em xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu

sắc đến PGS.TS Đinh Thị Kim Nhung, người đã tận tình hướng dẫn giúp

đỡ em hoàn thành khóa luận này

Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 và Ban chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu

Cuối cùng em xin được cảm ơn gia đình, bạn bè và người thân đã quan tâm giúp đỡ, động viên em trong suốt thời gian qua

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày … tháng 05 năm 2017

Sinh viên

Nguyễn Thị Huyền

Trang 3

LỜI CAM ĐOAN

Đề tài được thực hiện dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Đinh Thị Kim

Nhung, em xin cam đoan những gì viết trong khóa luận này đều là sự thật

Đây là kết quả nghiên cứu của riêng em Đề tài này không trùng với bất cứ đề tài nào đã từng được công bố

Nếu sai em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm

Hà Nội, ngày … tháng 05 năm 2017

Sinh viên

Nguyễn Thị Huyền

Trang 4

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

1 Lí do chọn đề tài 1

2 Mục đích nghiên cứu 2

3 Nội dung nghiên cứu 2

4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 3

6 Điểm mới của đề tài 3

NỘI DUNG 4

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 Giới thiệu về tảo xoắn Spirulina 4

1.1.1 Lịch sử 4

1.1.2 Phân loại tảo Spirulina 4

1.1.3 Đặc điểm sinh học của tảo Spirulina 5

1.1.4 Nghiên cứu ứng dụng 7

1.2 Vị trí và đặc điểm phân loại Gluconacetobacter trong sinh giới 7

1.2.1 Vị trí phân loại của Gluconacetobacter trong sinh giới 7

1.2.2 Đặc điểm phân loại của Gluconacetobacter 7

1.3 Nhu cầu dinh dưỡng của vi khuẩn Gluconacetobacter 9

1.3.1 Ảnh hưởng của nguồn cacbon 9

1.3.2 Nguồn dinh dưỡng khoáng 10

1.4 Biocellulose 10

1.4.1 Cấu trúc 10

1.4.2 Một số tính chất 11

1.4.3 Cơ chế tổng hợp 12

1.4.4 Chức năng của cellulose đối với vi khuẩn Gluconacetobacter 13

Trang 5

1.5 Mặt nạ dưỡng da ( Biocellulose mask) 14

1.6 Tình hình nghiên cứu và sản xuất Biocellulose hiện nay 15

1.6.1 Trên thế giới 15

1.6.2 Tại Việt Nam 15

Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17

2.1 Đối tượng nghiên cứu và hóa chất 17

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17

2.1.2 Thiết bị và hóa chất 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

2.2.1 Phương pháp vi sinh 18

2.2.2 Phương pháp hóa sinh 21

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn cacbon đến khả năng tạo màng Biocellulose 22

2.2.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng đến sự hình thành màng Biocelluose 23

2.2.5 Thử nghiệm khả năng tạo màng Biocellulose trên môi trường lựa chọn 23

2.2.6 Phương pháp xác định trọng lượng tươi của màng Biocellulose 23

2.2.7 Phương pháp thống kê và xử lí số liệu 23

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25

3.1 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng tạo màng Biocellulose trên môi trường tảo xoắn Spirulina 25

3.1.1 Phân lập vi khuẩn axetic trên môi trường tảo xoắn Spirulina 25

3.1.2 Tuyển chọn chủng có khả năng tạo màng Biocellulose 28

3.2 Ảnh hưởng của nguồn cacbon tới khả năng tạo màng Biocellulose của Gluconacetobacter xylinus T3 31

Trang 6

3.3 Ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng đến sự hình thành màng

Biocellulose của Gluconacetobacter xylinus T3 32

3.3.1 Ảnh hưởng của KH2PO4 32

3.3.2 Ảnh hưởng của MgSO4.7H2O 34

3.4 Thử nghiệm khả năng tạo màng Biocellulose trên môi trường lựa chọn 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37

1 Kết luận 37

2 Kiến nghị 37

TÀI LIỆU THAM KHẢO 38

Trang 7

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Hình dạng tảo Spirulina quan sát dưới kính hiển vi 5

Hình 1.2 Sợi cellulose của thực vật 11

Hình 1.4 Con đường chuyển hóa cacbon trong vi khuẩn Gluconacetobacter

13

Hình 3.1 Mẫu lên men tự nhiên dịch tảo Spirulina 25

Hình 3.2 Khuẩn lạc vi khuẩn axetic của mẫu phân lập 25

Hình 3.3 Hình thái tế bào học của 2 chủng Gluconacetobacter T3 và T5 (×

1000) 29 Hình 3.4 Hoạt tính catalase 30

Hình 3.5 Ảnh hưởng của hàm lượng glucose đến sự hình thành màng

Biocellulose của chủng vi khuẩn G xylinus T3 32

Hình 3.6 Ảnh hưởng của hàm lượng KH2PO4 đến sự hình thành màng

Biocellulose của chủng vi khuẩn G xyinus T3 34

Hình 3.7 Ảnh hưởng của hàm lượng MgSO4.7H2O đến sự hình thành màng

Biocellulose của chủng vi khuẩn G xylinus T3 35

Hình 3.8 Màng Biocellulose thu được ở môi trường lựa chọn (MT3) 36

Trang 8

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá của chủng vi khuẩn Gluconacetobacter 9

Bảng 3.1 Đặc điểm hình thành màng cellulose của 3 chủng

Bảng 3.4 Ảnh hưởng của hàm lượng KH2PO4 đến khả năng tạo màng

Biocellulose của chủng G xylinus T3 33

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của hàm lượng MgSO4.7H2O đến khả năng tạo màng

Biocellulose của chủng G xylinus T3 34

Trang 9

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

cs : Cộng sự

g/l : gam trên lít

G xylinus : Gluconacetobacter xylinus

G xylinus T3 : Gluconacetobacter xylinus T3

mm n : milimet

stt : số thứ tự

BC : Biocellulose

Trang 10

1

MỞ ĐẦU

1 Lí do chọn đề tài

Màng Biocellulose được tổng hợp từ một số loài vi khuẩn, có bản chất là

cellulose được liên kết với các tế bào vi khuẩn, màng này vừa có cấu trúc và đặc tính cơ học rất giống với cellolose của thực vật, nhưng lại có một số tính chất hóa lí đặc biệt như: độ bền cơ học và khả năng thấm hút nước cao, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, khả năng polymer hóa lớn

Trên thế giới, màng Biocellulose đã được ứng dụng rất nhiều trong các

lĩnh vực công nghệ khác nhau: như dùng làm màng phân tách cho quá trình

xử lí nước, chất mang đặc biệt cho pin và năng lượng cho tế bào, làm môi trường cơ chất sinh học, màng bọc thực phẩm Đặc biệt trong lĩnh vực y học,

màng Biocellulose đã được ứng dụng làm da tạm thời thay thế da trong quá

trình diều trị bỏng, loét da, làm mạch máu nhân tạo điều trị các bệnh tim mạch, làm mặt nạ dưỡng da cho con người [5]

Ở Việt Nam, việc nghiên cứu và ứng dụng màng Biocellulose còn là vấn

đề khá mới mẻ, chỉ được quan tâm gần đây Các nghiên cứu và công bố về vấn đề này còn rất khiêm tốn Các nghiên cứu hiện nay mới dừng ở nghiên

cứu quá trình tạo màng Biocellulose ứng dụng trong sản xuất thạch dừa, làm

giá thể gắn kết tế bào vi khuẩn và làm màng trị bỏng [12]

Trên thế giới việc nghiên cứu Gluconacetobacter và quá trình sinh tổng

hợp BC cũng như ứng dụng của BC bắt đầu từ rất sớm Những nghiên cứu đầu tiên là của Brown A.J và cộng sự năm (1886) Trải qua hơn 1 thế kỷ

nhưng cho đến nay Gluconacetobacter và màng BC vẫn đang thu hút được

sự chú ý của rất nhiều nhà khoa học trên thế giới

Nguyên liệu dùng để nuôi Gluconacetobacter rất đa dạng: nước dừa già,

rỉ đường, nước mía, nước vo gạo Các loại môi trường này đã được nghiên cứu khá nhiều Tuy nhiên môi trường dinh dưỡng tảo xoắn dùng để nuôi

Trang 11

2

Gluconacetobacter chưa được nghiên cứu Tảo xoắn Spirulina là loại tảo có

nhiều giá trị về dinh dưỡng, được ứng dụng trong các sản phẩm về chăm sóc sắc đẹp và sức khỏe cho con người Nhằm bổ sung những hiểu biết về

Gluconacetobacter và quá trình tạo màng BC định hướng nhu cầu nghiên

cứu và ứng dụng màng BC làm mặt nạ dưỡng da, tôi lựa chọn đề tài: “Ảnh hưởng của nguồn cacbon và một số nguyên tố khoáng đến quá trình tạo

màng Biocellulose từ môi trường bổ sung dịch tảo xoắn Spirulina”

2 Mục đích nghiên cứu

Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn cacbon và một số nguyên tố khoáng

đến quá trình hình thành màng Biocellulose trong môi truờng bổ sung dịch tảo xoắn Spirulina Từ đó tìm được nguồn cacbon và nguồn khoáng thích hợp cho quá trình tạo màng Biocellulose trong môi trường bổ sung tảo xoắn

Spiruina

3 Nội dung nghiên cứu

3.1 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng tạo màng Biocellulose trên nguồn nguyên liệu tảo xoắn Spirulina

3.2 Ảnh hưởng của nguồn cacbon tới khả năng tạo màng của

Gluconacetobacter

3.3 Ảnh hưởng của một số nguyên tố khoáng tới khả năng tạo màng của

Gluconacetobacter

3.3.1 Ảnh hưởng của hàm lượng KH2PO4

3.3.2 Ảnh hưởng của hàm lượng MgSO4.7H2O

4 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

4.1 Đối tượng nghiên cứu

Chủng vi khuẩn G xylinus T3 có khả năng tạo màng Biocellulose phân

lập từ môi trường tảo xoắn

Trang 12

3

4.2 Phạm vi nghiên cứu

Ảnh hưởng của nguồn cacbon và một số nguyên tố khoáng đến khả

năng tạo màng Biocellulose của chủng G xylinus T3 đã tuyển chọn

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

5.1 Ý nghĩa khoa học

Tìm hiểu sự đa dạng của các chủng Gluconacetobacter có khả năng tạo màng BC trên nguồn nguyên liệu mới, qua đó nghiên cứu đặc tính sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn G xylinus T3 có khả năng lên men tạo màng

Biocellulose trên môi trường tảo xoắn Spirulina Kết quả nghiên cứu là dữ

liệu bổ sung cho các nghiên cứu và ứng dụng của chủng vi khuẩn G xylinus

trong đời sống

5.2 Ý nghĩa thực tiễn

Tìm ra hướng đi mới trong công nghệ sản xuất màng BC từ nguồn

nguyên liệu tảo xoắn Spirulina ứng dụng trong sản xuất mặt nạ dưỡng da

6 Điểm mới của đề tài

Tìm được nguồn cacbon và nguồn khoáng thích hợp cho quá trình lên

men tạo màng Biocellulose dai, mỏng và nhẵn trong môi trường có bổ sung tảo xoắn Spirulina là Glucose 10 (g/l); KH2PO4 1,0 (g/l); MgSO4.7H2O 1,0 (g/l)

Trang 13

4

NỘI DUNG Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Giới thiệu về tảo xoắn Spirulina

1.1.1 Lịch sử

Spirulina do nhà tảo học Deurben (người Đức) đặt năm 1827, dựa trên

hình thái của tảo là dạng sợi xoắn ốc (spiralis) [29]

Cũng vào năm 1827, Turpin lần đầu tiên phân lập được tảo Spirulina từ

nguồn nước tự nhiên Năm 1963, giáo sư Clement (người Pháp) đã nghiên

cứu thành công việc nuôi Spirulina ở qui mô công nghiệp Do hình dạng “lò

xo xoắn” với khoảng 5-7 vòng đều nhau không phân nhánh dưới kính hiển vi

nên được gọi là Spirulina với tên khoa học là tảo Spirulina platensis (bắt

nguồn từ chữ spire, spiral có nghĩa là “xoắn ốc”) và trước đây được coi là

thuộc chi Spirulina Thực ra đây không phải là sinh vật thuộc tảo (algae) vì tảo thuộc sinh vật có nhân thật (Eukaryota) Spirulina thuộc vi khuẩn lam

(Cyanobacteria) nên chúng thuộc sinh vật nhân sơ hay nhân nguyên thủy (Prokaryote) [29]

Năm 1973, Tổ chức Nông lương Quốc tế (FAO) và Tổ chức Y tế Thế

giới (WHO) đã chính thức công nhận tảo xoắn Spirulina là nguồn dinh dưỡng

và dược liệu quý, đặc biệt trong chống suy dinh dưỡng và chống lão hóa Năm

1977, Viện sinh vật học là nơi tiên phong trong việc nuôi trồng Spirulina ở

Việt Nam theo mô hình ngoài trời, không mái che, có sục khí CO2 [29]

1.1.2 Phân loại tảo Spirulina

Trang 14

5

1.1.3 Đặc điểm sinh học của tảo Spirulina

Tảo Spirulina có dạng xoắn lò xo khoảng 5-7 vòng đều nhau không phân

nhánh Đường kính xoắn khoảng 35-50 micromet, bước xoắn 60 micromet,

chiều dài thay đổi có thể đạt 0,25mm Nhiều trường hợp tảo xoắn Spirulina có

kích thước lớn hơn Tảo là trung gian giữa vi khuẩn và tảo nhân thực Người

ta cho rằng tảo Spirulina giống với vi khuẩn hơn, do đó tảo Spirulina còn có

tên là vi khuẩn lam

Tảo có khả năng vận chuyển theo hình thức trượt xung quanh trục của chúng Vận tốc vận chuyển của chúng có thể đạt 5 micron/giây [29]

Hình 1.1 Hình dạng tảo Spirulina quan sát dưới kính hiển vi

1.1.3.1 Đặc điểm cấu tạo tế bào của tảo Spilurina

Là tảo lam đa bào dạng sợi, gồm nhiều hình trụ xếp không phân nhánh Mỗi tế bào của sợi có chiều rộng 5 micromet, dài 2 mm Không có lục lạp mà chỉ chứa thylacoid phân bố đều trong tế bào Không có không bào Không có nhân điển hình, vùng nhân không rõ, trong đó có chứa DNA (Hedeskog và Hifsten A.1980) Thành tế bào tảo gồm các lớp lipopolysaccharide, các sợi nhỏ protein và các phân tử peptidoglucan Màng tế bào nằm sát ngay dưới thành tế bào và nối với màng quang hợp thylacoid tại một vài điểm

Bộ máy quang hợp của tảo xoắn Spirulina: Phycobilisome chứa

phycobiliprotein và protein liên kết được gắn vào bề mặt ngoài của thylacoid

Trang 15

6

Phycobilisome có khối lượng khoảng 7 triệu dalton và có thể tách nguyên vẹn

để nghiên cứu Đối với phycobilisome có cả phycoerythin và phycocyanin thì lớp ngoài cùng là phycoerythin, tiếp theo là phycocyanin và phần trong cùng

là allophycocyanin Phycobilisome hoạt động như một anten thu nhận năng lượng mặt trời để chuyển vào PS II Con đường truyền năng lượng bắt đầu từ phycoerythin sang phycocyanin và cuối cùng đến allophycocyanin trước khi

đạt tới PS II Có khoảng 50 % năng lượng ánh sáng mặt trời Spirulina nhận

được nhờ phycobilisome

Các sắc tố quang hợp gồm chlorophylla, carotenoid, phycocyanin, allophycocyanin và thường có carotenoid-glycoside như myxoxanthophyll,

oscillaxanthin Spirulina có chứa 3 nhóm sắc tố chính: Chlorophyll hấp thụ

ánh sáng lam và đỏ Carotenoid hấp thụ ánh sáng lam và lục Phycobillin hấp thụ ánh sáng lục, vàng và da cam [29]

1.1.3.2 Sinh sản của tảo Spirulina

Tảo Spirulina có phương thức sinh sản vô tính, từ một cơ thể mẹ trưởng

thành (gọi là trichome), tự phân chia thành nhiều mảnh, mỗi mảnh gồm một

số vòng xoắn (2 - 4 tế bào, gọi là hormogonia) Để tạo thành các hormogonia,

sợi Spirulina sẽ hình thành các tế bào chuyên biệt cho sự sinh sản (gọi là đoạn

necridia) Các necridia hình thành các đĩa lõm ở hai mặt và tạo ra hormogonia bởi sự chia cắt tại vị trí các đĩa Khi đã phát triển, dần dần phần đầu hormogonia bị tiêu giảm và trở nên tròn nhưng vách tế bào vẫn có chiều dày không đổi Các hormogonia phát triển, trưởng thành và chu kì sinh sản lặp lại

để đảm bảo vòng đời của Spirulina

Thông thường, Spirulina sinh sản bằng cách gãy ra từng khúc Trong

trường hợp gặp điều kiện không thuận lợi, Spirulina cũng có khả năng tạo bào

tử giống như ở vi khuẩn Chu kì phát triển của Spirulina rất ngắn Chu kì này

thường diễn ra trong 24 giờ như của tảo Chlorella [29]

Trang 16

7

1.1.4 Nghiên cứu ứng dụng

Tảo xoắn Spirulina đã được nghiên cứu sản xuất và được ứng dụng

trong nhiều lĩnh vực khác nhau ở các nước trên thế giới, đặc biệt là trong

ngành thực phẩm và mỹ phẩm Spirulina được nghiên cứu bổ sung vào rất

nhiều thực phẩm như: mì sợi, yaourt, kẹo, trà xanh, bánh quy, bánh mì, bia…Các sản phẩm này được bán ở siêu thị của nhiều nước như: Chi Lê, Đan Mạch, Hà Lan, Mỹ, Úc, NewZealand…

Nhiều giá trị dinh dưỡng và sinh học của tảo Spirulina đã được khám

phá: Tảo rất giàu protein (60-70 % trọng lượng khô của tảo), các vitamin nhóm B, hàm lượng vitamin B12 cao gấp 2 lần trong gan bò Caroten cao gấp

10 lần trong củ cà rốt Ngoài ra tảo Spirulina còn chứa các khoáng vi lượng

(coban, kẽm, sắt…), 11 vitamin cần thiết cho cơ thể và các chất chống oxi

hóa Tảo Spirulina làm cân bằng dinh dưỡng, tổng hợp các chất nội sinh, tăng

hormon và điều hòa sinh lí [29]

1.2 Vị trí và đặc điểm phân loại Gluconacetobacter trong sinh giới

1.2.1 Vị trí phân loại của Gluconacetobacter trong sinh giới

Theo hệ thống phân loại của nhà khoa học Bergey thì Gluconacetobacter thuộc chi Acetobacter, họ Pseudomonadaceae, bộ Pseudomonadales, lớp Schizommycetes Gluconacetobacter thuộc nhóm vi

khuẩn axetic, là loài vi khuẩn tạo được nhiều Biocellulose nhất trong tự nhiên Mỗi tế bào Gluconacetobacter có thể chuyển hóa 108 phân tử glucose thành

cellulose trong 1 giờ [22]

Ngày nay, việc phân loại vi khuẩn acetic nói chung và vi khuẩn

Gluconacetobacter nói riêng còn tồn tại nhiều quan điểm khác nhau Vì vậy,

vấn đề này vẫn đang gây nhiều tranh cãi, đòi hỏi cần có nhiều hơn những nghiên cứu tiếp theo

1.2.2 Đặc điểm phân loại của Gluconacetobacter

Trang 17

8

1.2.2.1 Đặc điểm hình thái tế bào học

Gluconacetobacter là trực khuẩn hình que, thẳng hay hơi cong, kích thước

khoảng 2 µm, tế bào đứng riêng lẻ hoặc xếp thành từng chuỗi, không có khả năng

di động, không sinh bào tử [14] Các tế bào được bao bọc bởi màng nhày có bản chất là hemicellulose, màng này bắt màu xanh khi nhuộm axit H2SO4, bắt màu hồng

khi nhuộm fucshin Gluconacetobacter có khả năng tích lũy 4,5 % acid acetic

trong môi trường, khi nồng độ acid trong môi trường khá cao sẽ ức chế hoạt động của vi khuẩn [4], [24]

1.2.2.2 Đặc điểm nuôi cấy

Trên môi trường thạch đĩa, vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành

khuẩn lạc nhẵn hoặc xù xì, rìa mép khuẩn lạc bằng phẳng hay gợn sóng, màu trắng hoặc trong suốt, khuẩn lạc lồi lên dễ tách khỏi môi trường [25]

Gluconacetobacter khi nuôi cấy trong môi trường lỏng ở điều kiện tĩnh,

chúng sẽ hình thành trên bề mặt môi trường một lớp màng Biocellulose

Ngược lại trong điều kiện nuôi lắc, cellulose hình thành dạng hạt nhỏ với kích thước không đều nhau và phân tán trong môi trường dinh dưỡng tạo ra những đặc tính hình thái khác hẳn cellulose trong điều kiện nuôi cấy tĩnh [14]

1.2.2.3 Đặc điểm sinh lí, sinh hóa

+ Đặc điểm sinh lí:

Vi khuẩn Gluconacetobacter phát triển ở nhiệt độ 25 - 35oC, pH: 4 - 6 Nhiệt độ và pH tối ưu tùy thuộc vào giống Ở 37oC, tế bào sẽ suy thoái hoàn

toàn ngay cả trong môi trường tối ưu Gluconacetobacter có khả năng chịu

được pH thấp nên người ta thường bổ sung thêm acid acetic vào môi trường nuôi cấy để hạn chế sự nhiễm khuẩn lạ [26]

+ Đặc điểm sinh hóa:

Năm 1950, Frateur đã chính thức đưa ra một khóa phân loại mới căn cứ vào các tiêu chuẩn: khả năng oxy hoa acid acetic thành CO2 và H2O; hoạt tính

Trang 18

9

catalase; khả năng sinh trưởng trên môi trường Hoyer [27] Theo quan điểm

này Gluconacetobacter là chủng thuộc chi Acetobacter, họ Pseudomonadaceae,

bộ Pseudomonadales, lớp Schizommycetes Đặc điểm phân biệt với các chủng

khác trong cùng một chi được trình bày ở bảng 1.1 dưới đây

Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá của chủng vi khuẩn Gluconacetobacter

+

3 Sinh trưởng trên môi trường

Hoyer

4 Chuyển hoá glycerol thành

Váng vi khuẩn xuất hiện màu lam +

1.3 Nhu cầu dinh dưỡng của vi khuẩn Gluconacetobacter

1.3.1 Ảnh hưởng của nguồn cacbon

Để vi khuẩn sinh trưởng và phát triển tốt hơn cần cung cấp nguồn cacbon phù hợp Tùy nhóm vi sinh vật mà nguồn cacbon được cung cấp là vô

cơ hay hữu cơ Giá trị dinh dưỡng và khả năng hấp thụ cacbon phụ thuộc vào hai yếu tố: thành phần hóa học và tính chất sinh lí của nguồn thức ăn, đặc điểm sinh lí của từng loại vi sinh vật

Trang 19

10

Người ta sử dụng đường làm thức ăn nuôi cấy phần lớn các vi sinh vật dị dưỡng Đường đơn ở nhiệt độ cao có thể chuyển hóa thành loại hợp chất có màu tối khó hấp thụ Trong môi trường kiềm sau khử trùng, đường còn dễ bị chuyển hóa làm biến đổi pH môi trường Để tránh hiện tượng này khi khử trùng môi trường có chứa đường người ta thường chỉ hấp ở áp lực 0,5 atm ở

110oC trong 30 phút Từ các loại đường đơn tốt nhất nên sử dụng phương pháp hấp gián đoạn (phương pháp Tyndal) Để nuôi cấy các loại vi sinh vật khác nhau người ta sử dụng các nồng độ đường không giống nhau, với vi khuẩn thường dùng 0,2 - 0,5 % đường, hầu hết các vi sinh vật chỉ đồng hoá được các

loại đường ở dạng đồng phân D [5], [26] Gluconacetobacter sinh trưởng chính

trong môi trường có ethanol, glucose, glycerol Có thể sinh trưởng trong môi trường chỉ có D - mantolse Hầu hết các chủng không sử dụng saccarose

Các hợp chất hữu cơ chứa cả cacbon và nitơ (pepton, nước thịt, nước chiết ngô, nước chiết nấm men, nước chiết đại mạch ) có thể vừa sử dụng làm nguồn cacbon, vừa sử dụng làm nguồn nitơ đối với sinh vật

1.3.2 Nguồn dinh dưỡng khoáng

Phospho chiếm tỉ lệ cao nhất trong số các nguyên tố khoáng của tế bào vi sinh vật Để đảm bảo nguồn dinh dưỡng phospho, người ta thường sử dụng các loại phospho vô cơ: KH2PO4, K2HPO, KNO3…Bổ sung phosphat vào các môi trường dinh dưỡng còn có tác dụng tạo ra tính đệm của môi trường

Ngoài ra, còn nhiều nguyên tố khoáng cũng có vai trò ảnh hưởng đến

sinh trưởng của chủng G xylinus và quá trình hình thành màng Biocellulose

như Fe, S, Ca, Mn, Na, Cl…Nếu thiếu một trong số các nguyên tố này thì

chủng Gluconacetobacter không sinh trưởng và phát triển bình thường

1.4 Biocellulose

1.4.1 Cấu trúc

Biocellulose có đường kính bằng 1/100 đường kính của cellulose thực vật

Trang 20

11

(PC-Plant Cellulose) Màng Biocellulose được cấu tạo bởi chuỗi polyme β - 1,4

glucopyranose mạch thẳng, có thành phần hóa học đồng nhất với cellulose thực vật nhưng cấu trúc và đặc tính lại khác xa nhau [22]

Chuỗi polyme β-1,4 glucopyranose mới hình thành liên kết với nhau

tạo thành sợi nhỏ (subfibril) có kích thước 1,5 nm Những sợi nhỏ kết tinh tạo sợi lớn hơn - sợi vĩ mô (microfibril) (Jonas and Farah, 1998), những sợi này

kết hợp với nhau tạo thành bó và cuối cùng tạo dải ribbon (Yamanaka et.al 2000) Dải ribbol có chiều dài trong khoảng từ 1 - 9 nm Những dải ribbol được kéo ra từ tế bào này sẽ liên kết với những dải ribbol của tế bào khác bằng liên kết hiđro hoặc lực Van Der Waals tạo thành cấu trúc mạng lưới hay một lớp màng mỏng trên bề mặt môi trường nuôi cấy Kích thước bên của màng tăng lên khi quần thể vi khuẩn sinh trưởng [6], [10]

Hình 1.2 Sợi cellulose của thực vật

1.4.2 Một số tính chất

Màng Biocellulose có cơ chế kết tinh khác hẳn cellulose của thực vật ở

chỗ chúng không có sự kết hợp hemixellulose, lignin hay những thành phần phụ khác mà được cấu tạo từ các sợi microfibil tạo nên những bó sợi song

song cấu thành mạng lưới cellulose [1] Do đó màng Biocellulose có độ bền

cơ học cao, độ tinh khiết cao, khả năng thấm hút nước lớn… hơn hẳn cellulose của thực vật [24] Cụ thể:

Trang 21

12

+ Độ tinh sạch: màng Biocellulose có độ tinh sạch tốt hơn rất nhiều so với

các cellulose khác, có thể phân hủy sinh học, tái chế hay phục hồi hoàn toàn

+ Độ bền cơ học: màng Biocellulose có độ bền tinh thể cao, sức căng lớn,

trọng lượng lớn, ổn định về kích thước

+ Tính hút nước: màng Biocellulose có khả năng giữ nước đáng kể (lên

đến 99 %), có tính tơi xốp, độ ẩm cao

1.4.3 Cơ chế tổng hợp

Khi nuôi cấy vi khuẩn Gluconacetobacter trong môi trường có nguồn

dinh dưỡng đầy đủ (chủ yếu là carbohydrate, vitamin B1, B2, B12…và các chất kích thích sinh trưởng), chúng sẽ thực hiện quá trình trao đổi chất của mình bằng cách hấp thụ dinh dưỡng từ môi trường bên ngoài vào cơ thể, một phần

để cơ thể sinh trưởng và phát triển, một phần để tổng hợp cellulose và thải ra môi trường Ta thấy các sợi tơ nhỏ phát triển ngày càng dài hướng từ đáy lên

bề mặt trong môi trường nuôi cấy Thiaman (1962) đã giải thích cách tạo

thành cellulose như sau: Các tế bào Gluconacetobacter khi sống trong môi

trường lỏng sẽ thực hiện quá trình trao đổi chất của mình bằng cách hấp thụ đường glucose, kết hợp đường với axit béo để tạo thành tiền chất nằm ở màng

tế bào Tiền chất này được tiết ra ngoài nhờ hệ thống lỗ nằm ở trên màng tế bào cùng với một enzyme có thể polymer hóa glucose thành cellulose

Hình 1.3 Con đường sinh tổng hợp cellulose ở Gluconacetobacter

Trang 22

13

Quá trình tổng hợp Biocellulose là một tiến trình bao gồm nhiều bước

được điều hòa một cách chuyên biệt và chính xác bằng một hệ thống chứa nhiều loại enzyme, phức hợp xúc tác các loại protein điều hòa [17], [20]

Theo tác giả Alina Krystynowics và cộng sự có 4 enzyme tham gia xúc

tác tổng hợp cellulose ở vi khuẩn Gluconacetobacter: Glucokinase (GK),

Phosphoglucomutase (PGM), Glucose - 1 - phosphate uridylytransferase (UDPG pyrophosphorylase hay UGP), Cellulose synthase (CS) Trong đó UGP là enzyme có vai trò quan trọng nhất

Hình 1.4 Con đường chuyển hóa cacbon trong vi khuẩn

Gluconacetobacter 1.4.4 Chức năng của cellulose đối với vi khuẩn Gluconacetobacter

Lớp màng cellulose do vi khuẩn Gluconacetobacter tạo ra bao xung

quanh môi trường hạn chế nguồn oxy từ bên ngoài vào môi trường, điều này ngăn cản sự cung cấp oxy cho các vi khuẩn hiếu khác, tạo điều kiện thuận lợi

cho quá trình cạnh tranh sinh tồn của vi khuẩn Gluconacetobacter Màng

cellulose có khả năng giữ nước nên giúp cho vi khuẩn phân hủy các chất dinh dưỡng để sử dụng và giúp tế bào chống lại ảnh hưởng của tia UV (tia tử ngoại) Nhờ tính dẻo dai và tính thấm nước của các lớp cellulose mà các tế bào vi khuẩn kháng lại được những thay đổi không thuận lợi trong môi trường sống như: giảm độ ẩm, thay đổi pH, xuất hiện các chất độc hại Các vi khuẩn

Trang 23

14

Gluconacetobacter có thể tăng trưởng và phát triển bên trong lớp vỏ bao

Thực nghiệm chỉ ra rằng cellulose bao quanh tế bào vi khuẩn bảo vệ

chúng khỏi tia cực tím Khoảng 23 % số tế bào Gluconacetobacter được bao bọc bởi Biocellulose sống sót sau 1 giờ xử lý bởi tia cực tím Khi tách

Biocellulose ra khỏi tế bào, khả năng sống sót của tế bào giảm chỉ còn khoảng

3 %

Ngoài ra, màng Biocellulose là giá thể chống đỡ cho vi khuẩn

Gluconacetobacter luôn ở bề mặt tiếp giáp giữa môi trường lỏng và không

khí Chính mạng lưới này làm cho các tế bào có thể bám chặt trên bề mặt môi trường và làm tế bào thu nhận chất dinh dưỡng một cách dễ dàng hơn so với khi tế bào ở trong môi trường lỏng không có mạng lưới cellulose

1.5 Mặt nạ dưỡng da ( Biocellulose mask)

Hiện nay trên thế giới xu hướng làm đẹp từ các sản phẩm tự nhiên không chứa chất hóa học đang rất thịnh hành Hàng loạt các hãng mĩ phẩm lớn đều tập trung nghiên cứu cho ra những sản phẩm làm đẹp có nguồn gốc

tự nhiên không có hoặc rất ít tác dụng phụ trong đó có mặt nạ dưỡng

da (Biocellulose mask) Biocellulose mask được sản xuất bằng công nghệ vi

sinh và nguồn nguyên liệu chính là nước dừa Màng thu được được xử lí thành phẩm và bổ sung thêm các hoạt chất với các hướng ứng dụng khác nhau như: làm trắng da, trị mụn hay làm mờ vết nám…

Ở Việt Nam, mặt nạ Biocellulose từ nước dừa lần đầu tiên được sản

xuất tại tỉnh Bến Tre được kiểm nghiệm nhiều lần tại trung tâm kiểm nghiệm dược và mĩ phẩm Bến Tre và được sở y tế xét duyệt chấp nhận (Số công bố 013/11CBMP-BT do sở y tế Bến Tre cấp) Đây là lần đầu tiên mặt nạ 100 % thiên nhiên xuất hiện ở nước ta, có nguồn gốc từ nước dừa, hoàn toàn không cần dùng khăn giấy hay sợi để làm khuôn định hình như các loại mặt nạ thường thấy trên thị trường Khác với các mặt nạ hóa chất trên thị trường có

Trang 24

Vi khuẩn Gluconacetobacter và màng Biocellulose đã thu hút được sự

chú ý của nhiều nhà khoa học trên thế giới và được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực: công nghệ môi trường, công nghiệp giấy, công nghiệp thực phẩm, y

học Các nghiên cứu hiện nay về màng Biocellulose trên thế giới đã tập trung vào vấn đề đề sản xuất và ứng dụng các sản phẩm từ màng Biocellulose vào

các lĩnh vực khác nhau

Hầu hết các tác giả nước ngoài nghiên cứu theo hướng sinh tổng hợp

cellulose từ vi khuẩn, ứng dụng của màng Biocellulose trong y học, công

nghiệp giấy, trong chế biến thực phẩm

Tuy nhiên những ứng dụng thường thấy trên thế giới của màng

Biocellulose là trong ngành dược phẩm và mỹ phẩm Czajt và cs (2006), sử

dụng màng Biocellulose đắp lên vết thương hở, vết bỏng đã thu được kết quả

tốt Các tác giả Jonas và Farad (1998), Czaja và cs (2006) đã dùng màng

Biocellulose làm da nhân tạo, làm mặt nạ dưỡng da cho phụ nữ

1.6.2 Tại Việt Nam

Ở Việt Nam, những nghiên cứu và ứng dụng về Gluconacetobacter và màng Biocellulose còn khá mới mẻ Các công trình nghiên cứu mới chỉ quan

tâm tới quá trình tạo màng, đặc tính và cấu trúc của màng Về ứng dụng thực tiễn, mới chỉ được ứng dụng trong chế tạo màng sinh học dùng trong trị bỏng

và được ứng dụng trong sản xuất thạch dừa [5], [14]

Việc nghiên cứu và sử dụng màng Biocellulose từ chủng

Trang 25

16

Gluconacetobacter ngày càng được nhiều tác giả quan tâm Ngày càng có

nhiều các nghiên cứu, công bố liên quan đến chủng Gluconacetobacter sự hình thành màng Biocellulose và các hướng ứng dụng màng Biocellulose

Năm 2006, tác giả Nguyễn Văn Thanh, Trưởng bộ môn Vi Sinh – Ký Sinh, Trường đại học Y Dược học Tp.HCM đã chế tạo thành công màng trị bỏng

sinh học dầu mù u bằng phương pháp lên men Màng Biocellulose có khả

năng thấm nước cao, kết dính chặt và trơ về mặt hóa học nên nó có vai trò như màng sinh học, có thể thay thế da tạm thời Với các hoạt chất tái sinh mô

và các chất sát khuẩn đều có nguồn gốc thiên nhiên không gây đau rát và không chứa các yếu tố gây kích ứng da, chính vì vậy dùng màng sinh học để ngăn ngừa biến chứng nhiễm trùng vết thương bỏng, tạo điều kiện che phủ sớm vết thương, qua đó, rút ngắn thời gian điều trị và giảm thiểu sẹo xấu trên vùng bỏng sâu

Gần đây, nhóm nghiên cứu của tác giả Đinh Thị Kim Nhung đã thu

nhận màng Biocellulose từ vi khuẩn Gluconacetobacter, ứng dụng màng

Biocellulose trong điều trị bỏng [17]

Ngày đăng: 07/09/2017, 10:50

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
[1] Trần Thị Linh Châm (2012), Nghiên cứu hoàn thiện quy trình xử lý, bảo quản màng Bacterial cellulose từ chủng vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 _ 21 và ứng dụng điều trị bỏng, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu hoàn thiện quy trình xử lý, bảo quản màng Bacterial cellulose từ chủng vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 _ 21 và ứng dụng điều trị bỏng
Tác giả: Trần Thị Linh Châm
Năm: 2012
[2] Nguyễn Lân Dũng (1976), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 1- 2- 3, Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học
Tác giả: Nguyễn Lân Dũng
Nhà XB: Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật Hà Nội
Năm: 1976
[3] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2009), Vi sinh vật học, Nxb Giáo dục Sách, tạp chí
Tiêu đề: Vi sinh vật học
Tác giả: Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty
Nhà XB: Nxb Giáo dục
Năm: 2009
[4] Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào (1990), Thực hành vi sinh vật, Nxb giáo dục, tr. 17-34, 63-74, 89-92 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Thực hành vi sinh vật
Tác giả: Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào
Nhà XB: Nxb giáo dục
Năm: 1990
[5] Trương Thị Ngọc Hoa, Trương Nguyễn Quỳnh Hương (2005), Đa dạng hóa môi trường sản xuất Natadecoco từ vi khuẩn Acetobacter xylinum, Số 2, Tạp chí khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp Sách, tạp chí
Tiêu đề: Đa dạng hóa môi trường sản xuất Natadecoco từ vi khuẩn Acetobacter xylinum
Tác giả: Trương Thị Ngọc Hoa, Trương Nguyễn Quỳnh Hương
Năm: 2005
[6] Đặng Thị Hồng (2007), Phân lập, tuyển chọn và nghiên cứu một số đặc tính sinh học của vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạo màng sinh học, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phân lập, tuyển chọn và nghiên cứu một số đặc tính sinh học của vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạo màng sinh học
Tác giả: Đặng Thị Hồng
Năm: 2007
[7] Nguyễn Quỳnh Hương (2005), Đa dạng hóa các môi trường sản xuất Bacterial cellulose từ vi khuẩn Acetobacter xylinum, Luận văn Thạc sĩ sinh học Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM Sách, tạp chí
Tiêu đề: Đa dạng hóa các môi trường sản xuất Bacterial cellulose từ vi khuẩn Acetobacter xylinum
Tác giả: Nguyễn Quỳnh Hương
Năm: 2005
[8] Nguyễn Thúy Hương (2008), “Ảnh hưởng của nguồn cơ chất và kiểu lên men đến năng suất và chất lượng cellulose vi khuẩn”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, số 24, trang 205-210 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Ảnh hưởng của nguồn cơ chất và kiểu lên men đến năng suất và chất lượng cellulose vi khuẩn”, "Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ
Tác giả: Nguyễn Thúy Hương
Năm: 2008
[9] Đặng Đình Kim, Đặng Hoàng Phước Hiền (1999), Công nghệ sinh học vi tảo, Nxb Nông nghiệp Sách, tạp chí
Tiêu đề: Công nghệ sinh học vi tảo
Tác giả: Đặng Đình Kim, Đặng Hoàng Phước Hiền
Nhà XB: Nxb Nông nghiệp
Năm: 1999
[10] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu các đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”, Tạp chí dược học, số 361 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu các đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ "Acetobacter xylinum" sử dụng làm màng trị bỏng”, "Tạp chí dược học
Tác giả: Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh
Năm: 2006
[11] Lê Văn Lăng (1999), Spirulina – Nuôi trồng, Sử dụng trong y dược và dinh dưỡng, Nxb Y học Sách, tạp chí
Tiêu đề: Spirulina – Nuôi trồng, Sử dụng trong y dược và dinh dưỡng
Tác giả: Lê Văn Lăng
Nhà XB: Nxb Y học
Năm: 1999
[12] Nguyễn Đức Lượng (2000), Công nghệ Vi sinh vật tập 1-2-3, Nxb Đại học Quốc Gia TP.HCM Sách, tạp chí
Tiêu đề: Công nghệ Vi sinh
Tác giả: Nguyễn Đức Lượng
Nhà XB: Nxb Đại học Quốc Gia TP.HCM
Năm: 2000
[13] Nguyễn Thị Nguyệt (2008), Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial cellulose làm mặt nạ dưỡng da, Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu vi khuẩ"n "Acetobacter xylinum cho màng Bacterial cellulose làm mặt nạ dưỡng da
Tác giả: Nguyễn Thị Nguyệt
Năm: 2008
[14] Đinh Thị Kim Nhung (1996), Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn Acetobacter và ứng dụng chúng trong lên men acid acetic theo phương pháp chìm, Luận án PTS Sinh học, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn Acetobacter và ứng dụng chúng trong lên men acid acetic theo phương pháp chìm
Tác giả: Đinh Thị Kim Nhung
Năm: 1996
[15] Đinh Thị Kim Nhung (2012), ”Nghiên cứu thu nhận màng cellulose từ vi khuẩn Acetobacter, ứng dụng trị bỏng”, Đề tài trọng điểm cấp Bộ (2010- 2012) Sách, tạp chí
Tiêu đề: Acetobacter", ứng dụng trị bỏng”
Tác giả: Đinh Thị Kim Nhung
Năm: 2012
[16] Đinh Thị Kim Nhung, Dương Minh Lam (2012), “Nghiên cứu định danh chủng vi khuẩn BHN2_21 có khả năng tạo màng Bacterial cellulose (BC) phân lập được từ mẫu bia Hà Nội”, Kỷ yếu toàn văn Hội nghị Khoa học lần 8, ĐHKHTN- ĐHQG Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 9 và 10 tháng 11, năm 2012 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu định danh chủng vi khuẩn BHN2_21 có khả năng tạo màng "Bacterial cellulose "(BC) phân lập được từ mẫu bia Hà Nội”, "Kỷ yếu toàn văn Hội nghị Khoa học lần 8, ĐHKHTN- ĐHQG Thành phố Hồ Chí Minh
Tác giả: Đinh Thị Kim Nhung, Dương Minh Lam
Năm: 2012
[17] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Hoàng Thị Thảo (2011), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetorbacter xylinum sinh tổng hợp màng Bacterial cellulose ứng dụng trong điều trị bỏng”, Tạp chí Y học thảm họa và bỏng, ISSN 1859-3461 Số 2, tr 122-127 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu vi khuẩn "Acetorbacter xylinum" sinh tổng hợp màng Bacterial cellulose ứng dụng trong điều trị bỏng”," Tạp chí Y học thảm họa và bỏng
Tác giả: Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Hoàng Thị Thảo
Năm: 2011
[18] Lương Đức Phẩm (1998), Công nghệ vi sinh vật, Nxb Nông nghiệp Sách, tạp chí
Tiêu đề: Công nghệ vi sinh vật
Tác giả: Lương Đức Phẩm
Nhà XB: Nxb Nông nghiệp
Năm: 1998
[19] Trần Như Quỳnh (2009), Nghiên cứu một số đặc tính vật lý của màng bacterial cellulose từ Acetobacter xylinum, ứng dụng trị bỏng, Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu một số đặc tính vật lý của màng bacterial cellulose từ Acetobacter xylinum, ứng dụng trị bỏng
Tác giả: Trần Như Quỳnh
Năm: 2009
[20] Trần Linh Thước (2006), Phương pháp phân tích vi sinh vật, Nxb giáo dục, tr. 1- 29, 40- 69 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phương pháp phân tích vi sinh vật
Tác giả: Trần Linh Thước
Nhà XB: Nxb giáo dục
Năm: 2006

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w