Lược sử nghiên cứu Vi sinh vật học

MỤC LỤC Lược sử nghiên cứu Vi sinh vật học Cấu trúc tế bào vi khuẩn Thành tế bào : Màng sinh chất: Tế bào chất : Thể nhân: Bao nhầy: Tiên mao khuẩn mao : Khuẩn mao Khuẩn mao giới: Những đặc điểm chung Vi Sinh Vật 1-Vi sinh vật thuộc giới sinh vật nào? Hệ thống phân loại giới sinh vật Hệ thống phân loại giới sinh vật Hệ thống lĩnh giới (domain) So sánh ba lĩnh giới Bacteria, Archaea Eukarya 2-Các đặc điểm chung vi sinh vật : 1)-Kích thước nhỏ bé : 2)-Hấp thu nhiều, chuyển hoá nhanh : 3) Sinh trưởng nhanh, phát triển mạnh : 4) Có lực thích ứng mạnh dễ dàng phát sinh biến dị : 5) Phân bố rộng, chủng loại nhiều : 6)- Là sinh vật xuất trái đất : Lược sử nghiên cứu Vi sinh vật học 1546- Girolamo Fracastoro (1478, 1553) cho thể nhỏ bé tác nhân gây bệnh tật Ông viết thơ Syphilis sive de morbo gallico (1530) từ tựa đề thơ đó, người ta dùng đề đặt tên bệnh 1590-1608- Zacharias Janssen lần lắp ghép kính hiển vi 1676- Antony van Leeuwenhoek (1632-1723) hoàn thiện kính hiển vi khám phá giới vi sinh vật (mà ông gọi anmalcules) 1688- Nhà vạn vật học người Ý Francisco Redi công bố nghiên cứu phát sinh tự nhiên giòi 1765-1776- Spallanzani (1729-1799) công kích thuyết Phát sinh tự nhiên 1786- Müller đưa phân loại vi khuẩn 1798- Edward Jenner nghĩ phương pháp chủng mủ đậu bò để phong ngừa bệnh đậu mùa 1838-1839- Schwann Schleiden công bố Học thuyết tế bào 1835-1844- Basi công bố bệnh tằm nấm gây nên nhiều bệnh tật khác vi sinh vật gây nên 1847-1850- Semmelweis cho bệnh sốt hậu sản lây truyền qua thầy thuốc kiến nghị dùng phương pháp vô khuẩn để phòng bệnh 1849- Snow nghiên cứu dịch tễ bệnh tả vùng London 1857- Louis Pasteur (1822-1895) chứng minh trình lên men lactic gây nên vi sinh vật 1858- Virchov tuyên bố tế bào sinh từ tế bào 1861- Pasteur chứng minh vi sinh vật không tự phát sinh theo thuyết tự sinh 1867- Lister công bố công trình nghiên cứu phẫu thuật vô khuẩn 1869- Miescher khám phá acid nucleic 1876-1877- Robert Koch (1843-1910) chứng minh bệnh than vi khuẩn Bacillus anthracis gây nên 1880- Alphonse Laveran phát ký sinh trùng Plasmodium gây bệnh sốt rét 1881- Robert Koch nuôi cấy khiết vi khuẩn môi trường đặc chứa gelatin Pasteur tìm vaccin chống bệnh than 1882- Koch phát vi khuẩn lao - Mycobacterium tuberculosis 1884- Lần công bố Nguyên lý Koch Elie Metchnikoff (1845-1916) miêu tả tượng thực bào (phagocytosis) Triển khai nồi khử trùng cao áp (autoclave) Triển khai phương pháp nhuộm Gram 1885- Pasteur tìm vaccin chống bệnh dại Escherich tìm vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh tiêu chảy 1886- Fraenkel phát thấy Streptococcus pneumoniae gây bệnh viêm phổi 1887- Richard Petri phái ta cách dùng hộp lồng (đĩa Petri) để nuôi cấy vi sinh vật 1887-1890- Winogradsky nghiên cứu vi khuẩn lưu huỳnh vi khuẩn nitrat hoá 1889- Beijerink phân lập vi khuẩn nốt sần từ rễ đậu 1890- Von Behring làm kháng độc tố chống bệnh uốn ván bệnh bạch hầu 1892- Ivanowsky phát mầm bệnh nhỏ vi khuẩn (virus) gây bệnh khảm thuốc 1894- Kitasato Yersin khám phá vi khuẩn gây bệnh dịch hạch (Yersina pestis) 1895- Bordet khám phá Bổ thể (complement) 1896- Van Ermengem tìm mầm bệnh ngộ độc thịt (vi khuẩn Clostridium botulinum) 1897- Buchner tách men (ferments) từ nấm men (yeast) Ross chứng minh ký sinh trùng sốt rét lây truyền bệnh qua muỗi 1899- Beijerink chứng minh hạt virus gây nên bệnh khảm thuốc 1900- Reed chứng minh bệnh sốt vàng lây truyền muỗi 1902- Landsteiner khám phá nhóm máu 1903- Wright cộng khám phá Kháng thể (antibody) máu động vật miễn dịch 1905- Schaudinn Hoffmann tìm mầm bệnh giang mai (Treponema pallidum) 1906- Wassermann phát xét nghiệm cố định bổ thể để chẩn đoán giang mai 1909- Ricketts chứng minh bệnh Sốt ban núi đá lan truyền qua ve mầm bệnh vi khuẩn (Rickettsia rickettsii) 1910- Rous phát ung thư gia cầm 1915-1917- D’Herelle Twort phát virus vi khuẩn ( thực khuẩn thể) 1921- Fleming khám phá lizôzim (lysozyme) 1923-Xuất lần đầu phân loại Vi khuẩn (Bergey’s Manual) 1928- Griffith khám phá việc biến nạp (transformation) vi khuẩn 1929- Fleming phát penicillin 1931- Van Niel chứng minh vi khuẩn quang hợp sử dụng chất khử nguồn cung cấp electron không sản sinh ôxy 1933- Ruska làm kính hiển vi điện tử 1935- Stanley kết tinh virus khảm thuốc (TMV) Domag tìm thuốc sulfamide 1937- Chatton phân chia sinh vật thành hai nhóm: Nhân sơ (Procaryotes) Nhân thật (Eucaryotes) 1941- Beadle Tatum đưa giả thuyết gen- enzym 1944- Avery chứng minh ADN chuyển thông tin di truyền trình biến nạp Waksman tìm streptomycin 1046- Lederberg Tatum khám phá trình tiếp hợp (conjugation) vi khuẩn 1949- Enders, Weller Robbins nuôi virus Polio (Poliovirus) mô người nuôi cấy 1950- Lwoff xác định thực khuẩn thể tiềm tan (lysogenic bacteriophages) 1952- Hershey Chase chứng minh thực khuẩn thể tiêm ADN vào tế bào vật chủ (host) Zinder Lederberg khám phá trình tải nạp (transduction) vi khuẩn 1953- Frits Zernike Làm kính hiển vi tương phản pha (phase-contrast microscope) Medawar khám phá tượng nhờn miễn dịch (immune tolerance) Watson Crick khám phá chuỗi xoắn kép ADN 1955- Jacob Monod khám phá yếu tố F plasmid Jerne Burnet chứng minh lý thuyết chọn lọc clone (clonal selection) 1959- Yalow triển khai kỹ thuật Miễn dịch phóng xạ 1961- Jacob Monod giới thiệu mô hình điều hoà hoạt động gen nhờ operon 1961-1966- Nirenberg, Khorana cộng giải thích mã di truyền 1962- Porter chứng minh cấu trúc Globulin miễn dịch G Tổng hợp quinolone có tác dụng diệt khuẩn ( acid nalidixic) 1970- Arber Smith khám phá enzym giới hạn (restriction endonuclease) Temin Baltimore khám phá enzym phiên mã ngược (reverse transcriptase) 1973- Ames triển khai phương pháp vi sinh vật học để khám phá yếu tố gây đột biến (mutagens) Cohen, Boyer, Chang Helling sử dụng vectơ plasmid để tách dòng gen vi khuẩn 1975- Kohler Milstein phát triển kỹ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng ( monoclonal antibodies) Phát bệnh Lyme 1977- Woese Fox thừa nhận Vi khuẩn cổ (Archaea) nhóm vi sinh vật riêng biệt Gilbert Sanger triển khai kỹ thuật giải trình tự ADN (DNA sequencing) 1979-Tổng hợp Insulin kỹ thuật tái tổ hợp ADN Chính thức ngăn chặn bệnh đậu mùa 1980- Phát triển kính hiển vi điện tử quét 1982- Phát triển vaccin tái tổ hợp chống viêm gan B 1982-1983- Cech Altman phát minh ARN xúc tác 1983-1984- Gallo Montagnier phân lập định loại virus gây suy giảm miễn dịch người Mulli triển khai kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) 1986- Lần ứng dụng người vaccin sản xuất kỹ thuật di truyền (vaccin viêm gan B) 1990- Bắt đầu thử nghiệm lần liệu pháp gen (gene-therapy) người 1992- Thử nghiệm người liệu pháp đối nghĩa (antisense therapy) 1995- Hoa Kỳ chấp thuận sử dụng vaccin đậu gà Giải trình tự hệ gen vi khuẩn Haemophilus influenzae 1996- Giải trình tự hệ gen vi khuẩn Methanococcus jannaschii Giải trình tự hệ gen nấm men 1997- Phát loại vi khuẩn lớn Thiomargarita namibiensis Giải trình tự hệ gen vi khuẩn Escherichia coli 2000- Phát vi khuẩn tả Vibrio cholerae có nhiễm sắc thể riêng biệt Janssen Leeuwenhoek (1632-1723) Pasteur (1822-1895 Kính hiển vi Leeuwenhoek Bút tích miêu tả vi sinh vật Leeuwenhoek Thí nghiệm bình cổ cong để phản đối thuyết tự sinh (Pasteur) Robert Koch (1843-1910) Vi khuẩn lao chụp qua kính hiển vi Elie Metchnikoff (1845-1916) Alexander Fleming (1881-1955) Carl Von Linnaeus (1707-1778) Xưa John Ray (1627-1705) Carl Von Linnaeus (1707-1778) chia giới Thực vật Động vật Năm 1866 E H Haeckel (1834-1919) bổ sung thêm giới Nguyên sinh (Protista) Năm 1969 R H Whitaker (1921-1981) đề xuất hệ thống phân loại giới : Khởi sinh (Monera), Nguyên sinh (Protista), Nấm (Fungi), Thực vật (Plantae) Động vật (Animalia) Khởi sinh bao gồm Vi khuẩn (Bacteria) Vi khuẩn lam (Cyanobacteria) Nguyên sinh bao gồm Động vật nguyên sinh (Protzoa), Tảo (Algae) Nấm sợi sống nước (Water molds) Gần có hệ thống phân loại giới- giới thêm giới Cổ vi khuẩn (Archaebacteria), giới Khởi sinh đổi thành giới Vi khuẩn thật (Eubacteria) (P H Raven, G B Johnson, 2002) Cổ vi khuẩn Vi khuẩn thật thuộc Còn T Cavalier-Smith (1993) lại đề xuất hệ thống phân loại giới: Vi khuẩn thật (Eubacteria), Cổ vi khuẩn (Archaebacteria), Cổ trùng (Archezoa), Sắc khuẩn (Chromista), Nấm (Fungi), Thực vật (Plantae) Động vật (Animalia) Theo R Cavalier-Smith Cổ trùng (như Giardia) bao gồm thể đơn bào nguyên thuỷ có nhân thật, có ribosom 70S, chưa có máy Golgi, chưa có ty thể (mitochondria) chưa diệp lục (Chloroplast), chưa có peroxisome Sắc khuẩn bao gồm phần lớn thể quang hợp chứa thể diệp lục phiến (lumen) mạng lưới nội chất nhăn (rough endpplasmic reticulum) tế bào chất (cytoplasm), chẳng hạn Tảo silic , Tảo nâu, Cryptomonas, Nấm noãn Năm 1980, Carl R Woese dựa nghiên cứu sinh học phân tử phát thấy Cổ khuẩn có sai khác lớn trật tự nucleotid ARN ribosom 16S 18S Ông đưa hệ thống phân loại ba lĩnh giới (Domain) bao gồm Cổ khuẩn (Archae), Vi khuẩn (Bacteria) Sinh vật nhân thực (Eucarya) Cổ khuẩn nhóm vi sinh vật có nguồn gốc cổ xưa Chúng bao gồm nhóm vi khuẩn phát triển môi trường cực đoan (extra), chẳng hạn nhóm ưa mặn (Halobacteriales), nhóm ưa nhiệt (Thermococcales, Thermoproteus, Thermoplasmatales), nhóm kỵ khí sinh mêtan (Methanococcales, Methanobacteriales, Methanomicrobiales), nhóm vi khuẩn lưu huỳnh ưa nhiệt (Sulfobales, Desulfurococcales) Monera hệ thống giới tương đương với Vi khuẩn Cổ khuẩn hệ thống giới hệ thống lĩnh giới Nguyên sinh hệ thống giới tương đương với giới Cổ trùng (Archaezoa), Nguyên sinh (Protista-Protozoa) Sắc khuẩn (Chromista) hệ thống giới tương đương với nhóm sau hệ thống lĩnh giới (domain): Archaezoa, Euglenozoa, Alveolata, Stramenopila Rhodophyta Theo hệ thống lĩnh giới Archaezoa bao gồm Diplomonad, Trichomonad Microsporidian Euglenozoa ao gồm Euglenoid Kinetoplastid Alveolata bao gồm Dinoflagellate, Apicomplexan, Ciliate Strmenopila bao gồm Tảo silic (Diatoms) , Tảo vàng (Golden algae), Tảo nâu (Brown algae) Nấm sợi sống nước (Water mold) Rhodophyta gồm Tảo đỏ (Red algae) Riêng Tảo lục (Green algae) phần thuộc Nguyên sinh (Protista) phần thuộc Thực vật (Plantae) Hệ thống phân loại giới sinh vật Hệ thống phân loại giới sinh vật Hệ thống phân loại giới sinh vật Hệ thống lĩnh giới (domain) Monera hay lĩnh giới Vi khuẩn Cổ khuẩn thuộc nhóm Sinh vật nhân sơ (Prokaryote), sinh vật khác thuộc nhóm Sinh vật nhân thật (Eukaryote) Sai khác lĩnh giới Bacteria, Archaea Eukarya trình bày bảng đây: ***- So sánh ba lĩnh giới Bacteria, Archaea Eukarya Đặc điểm Nhân có màng nhân hạch nhân Phức hợp bào quan có màng Bacteria Túi khí ARN vận chuyển mARN đa cistron Eukarya Không Không Có Không Không Có Hầu hết có Thành tế bào peptidoglycan chứa acid muramic Màng lipid Archaea Chứa liên kết este, acid béo mạch thẳng Có Nhiều loại khác nhau, không chứa acid muramic Không chứa acid muramic Chứa Chứa liên kết ete, liên kết este, chuỗi aliphatic acid béo phân nhánh mạch thẳng Có Không Không có Thymine có thymine nhánh phần lớn tARN T TyC tARN tARN mở đầu chứa NtARN mở đầu formylmethionine chứa methionine Có Có Có thymine tARN mở đầu chứa methionine Không Intron mARN Ghép nối, gắn mũ gắn đuôi polyA vào mARN Không Không Có Không Không Có Ribosom Kích thước 70S 70S Yếu tố kéo dài Không phản ứng với Có phản EF2 độc tố bạch hầu ứng Mẫn cảm với cloramphenicol Mẫn cảm Không kanamycin Mẫn cảm với Không Mẫn cảm anisomycin ARN polymerase phụ thuộc ADN Số lượng Một Một số enzym tiểu đơn Cấu trúc 8-12 tiểu đơn vị vị Mẫn cảm Mẫn cảm Không với rifampicin Promoter typ Không Có Polymerase II Trao đổi chất Tương tự Không Có ATPase Sinh Không Có methane Cố định N2 Có Có 80S (ribosom tế bào chất) Có phản ứng Không Mẫn cảm Ba 12-14 tiểu đơn vị Không Có Có Không Không Quang hợp với diệp lục Hoá dưỡng vô Có Không Có Có Có Không Để hiểu chi tiết nội dung ghi bảng nói giáo viên cần giải thích cho sinh viên kiến thức thuộc giáo trình Tế bào học Di truyền học Phần lớn vi sinh vật thuộc ba nhóm Cổ khuẩn, Vi khuẩn Nguyên sinh Trong giới Nấm, nấm men (yeast), nấm sợi (filamentous Fungi) dạng sợi (mycelia) nấm lớn coi vi sinh vật Như vi sinh vật mặt hai giới Động vật Thực vật Người ta ước tính số 1,5 triệu loài sinh vật có khoảng 200 000 loài vi sinh vật (100 000 loài động vật nguyên sinh tảo, 90 000 loài nấm, 2500 loài vi khuẩn lam 1500 loài vi khuẩn) Tuy nhiên hàng năm, có thêm hàng nghìn loài sinh vật phát hiện, có không loài vi sinh vật Virus dạng đặc biệt chưa có cấu trúc thể chưa kể đến số 200 000 loài vi sinh vật nói Số virus đặt tên khoảng 4000 loài Poliovirus Virus cúm gà H5N1 Virus HIV/AIDS Trong thực tế, số loài vi sinh vật phải tới hàng triệu loài Bảo tàng giống chuẩn vi sinh vật (VTCC) thuộc TT Công nghệ Sinh học, ĐHQG Hà Nội hợp tác với nhà khoa học Nhật dựa kỹ thuật sinh học phân tử bước đầu phát nhiều loài vi sinh vật giới công nhận 2-Các đặc điểm chung vi sinh vật : Vi sinh vật có đặc điểm chung sau : 1)-Kích thước nhỏ bé : Vi sinh vật thường đo kích thước đơn vị micromet (1mm= 1/1000mm hay 1/1000 000m) virus đo kích thước đơn vị nanomet (1nn=1/1000 000mm hay 1/1000 000 000m) Kích thước bé diện tích bề mặt vi sinh vật đơn vị thể tích lớn Chẳng hạn đường kính cầu khuẩn (Coccus) có 1mm, xếp đầy chúng thành khối lập lích 1cm3 chúng có diện tích bề mặt rộng tới m2 ! Light microscope : KHV quang học Electron microscope : KHV điện tử Most bacteria: Phần lớn vi khuẩn Kích thước vi khuẩn so với đầu kim khâu Ba dạng chủ yếu vi khuẩn : trực khuẩn, cầu khuẩn xoắn khuẩn 2)-Hấp thu nhiều, chuyển hoá nhanh : Tuy vi sinh vật có kích thước nhỏ bé chúng lại có lực hấp thu chuyển hoá vượt xa sinh vật khác Chẳng hạn vi khuẩn lắctic (Lactobacillus) phân giải lượng đường lactose lớn 100-10 000 lần so với khối lượng chúng tốc độ tổng hợp protein nấm men cao gấp 1000 lần so với đậu tương gấp 100 000 lần so với trâu bò Lactobacillus qua KHV điện tử 3) Sinh trưởng nhanh, phát triển mạnh : Chẳng hạn, trực khuẩn đại tràng (Escherichia coli ) điều kiện thích hợp sau 12-20 phút lại phân cắt lần Nếu lấy thời gian hệ 20 phút phân cắt làn, sau 24 phân cắt 72 lần tạo 722 366 500 000 000 000 000 000 tế bào (4 722 366 1017), tương đương với khối lượng 4722 Tất nhiên tự nhiên điều kiện tối ưu ( thiếu thức ăn, thiếu oxy, dư thừa sản phẩm trao đổi chất có hại ) Trong nòi lên men với điều kiện nuôi cấy thích hợp từ tế bào tạo sau 24 khoảng 100 000 000- 000 000 000 tế bào Thời gian hệ nấm men dài hơn, ví dụ với men rượu (Saccharomyces cerevisiae) 120 phút Với nhiều vi sinh vật khác dài nữa, ví dụ với tảo Tiểu cầu ( Chlorella ) giờ, với vi khuẩn lam Nostoc 23 Có thể nói sinh vật có tốc độ sinh sôi nảy nở nhanh vi sinh vật Vi kuẩn Escherichia coli Nấm men Saccharomyces cerevisiae Nấm sợi Alternaria Vi tảo Chlorella 4) Có lực thích ứng mạnh dễ dàng phát sinh biến dị : Trong trình tiến hoá lâu dài vi sinh vật tạo cho chế điều hoà trao đổi chất để thích ứng với điều kiện sống khác nhau, kể điều kiện bất lợi mà sinh vật khác tgường tồn Có vi sinh vật sống môi trường nóng đến 1300C, lạnh đến 0-50C, mặn đến nồng độ 32% muối ăn, đến nồng độ mật ong, pH thấp đến 0,5 cao đến 10,7, áp suất cao đến 1103 at hay có độ phóng xạ cao đến 750 000 rad Nhiều vi sinh vật phát triển tốt điều kiện tuyệt đối kỵ khí, có noài nấm sợi phát triển dày đặc bể ngâm tử thi với nộng độ Formol cao Vi sinh vật đa số đơn bào, đơn bội, sinh sản nhanh, số lượng nhiều, tiếp xúc trực tiếp với môi trường sống dễ dàng phát sinh biến dị Tần số biến dị thường mức 10-5-10-10 Chỉ sau thời gian ngắn tạo số lượng lớn cá thể biến dị hế hệ sau Những biến dị có ích đưa lại hiệu lớn sản xuất Nếu phát penicillin hoạt tính đạt 20 đơn vị/ml dịch lên men (1943) đạt 100 000 đơn vị/ml Khi phát acid glutamic đạt 1-2g/l đạt đến 150g/ml dịch lên men 5) Phân bố rộng, chủng loại nhiều : Vi sinh vật có mặt khắp nơi Trái đất, không khí, đất, núi cao, biển sâu, thể, người, động vật, thực vật, thực phẩm, đồ vật Vi sinh vật tham gia tích cực vào việc thực vòng tuần hoàn sinhđịa-hoá học (biogeochemical cycles) vòng tuần hoàn C, vòng tuần hoàn n, vòng tuần hoàn P, vòng tuần hoàn S, vòng tuần hoàn Fe Trong nước vi sinh vật có nhiều vùng duyên hải (littoral zone), vùng nước nông (limnetic zone) vùng nước sâu (profundal zone), vùng đáy ao hồ (benthic zone) Trong không khí lên cao số lượng vi sinh vật Số lượng vi sinh vật không khí khu dân cư đông đúc cao nhiều so với không khí mặt biển không khí Bắc cực, Nam cực Hầu hợp chất carbon (trừ kim cương, đá graphít ) mà không thức ăn nhóm vi sinh vật (kể dầu mỏ, khí thiên nhiên, formol dioxin ) Vi sinh vật có phong phú kiểu dinh dưỡng khác : quang tự dưỡng (photoautotrophy), quang dị dưỡng (photoheterotrophy), hoá tự dưỡng (chemoautotrophy), hoá dị dưỡng (chemoheterotrophy).tự dưỡng chất sinh trưởng (auxoautotroph), dị dưỡng chất sinh trưởng (auxoheterotroph) 6)- Là sinh vật xuất trái đất : Trái đất hình thành cách 4,6 tỷ năm tìm thấy dấu vết sống từ cách 3,5 tỷ năm Đó vi sinh vật hoá thạch để lại vết tích tầng đá cổ Vi sinh vật hoá thạch cỗưa phát nhữngdạng giống với Vi khuẩn lam ngày Chúng J.William Schopf tìm thấy tầng đá cổ miền Tây Australia Chúng có dạng đa bào đơn giản, nối thành sợi dài đến vài chục mm với đường kính khoảng 1-2 mm có thành tế bào dày Trước nhà khoa học tìm thấy vết tích chi Gloeodiniopsis có niên đại cách 1,5 tỷ năm vết tích chi Palaeolyngbya có niên đại cách 950 triệu năm Vết tích vi khuẩn lam cách 3,5 tỷ năm Vết tích Gloeodiniopsis cách 1,5 tỷ năm Vết tích Palaeolyngbya cách 950 triệu năm © http://vietsciences.free.fr http://vietsciences.net Nguyễn Lân Dũng cuonglx ... xốp, bền vững, cấu tạo thành phần: -N-Acetylglucosamin ( N-Acetylglucosamine, NAG) -Acid N-Acetylmuramic (N-Acetylmuramic acid, NAM) -Tetrapeptid chứa D- L- acid amin Thành tế bào vi khuẩn Gram... 176 5-1 77 6- Spallanzani (172 9-1 799) công kích thuyết Phát sinh tự nhiên 178 6- Müller đưa phân loại vi khuẩn 179 8- Edward Jenner nghĩ phương pháp chủng mủ đậu bò để phong ngừa bệnh đậu mùa 183 8-1 83 9-. .. bệnh 184 9- Snow nghiên cứu dịch tễ bệnh tả vùng London 185 7- Louis Pasteur (182 2-1 895) chứng minh trình lên men lactic gây nên vi sinh vật 185 8- Virchov tuyên bố tế bào sinh từ tế bào 186 1- Pasteur