Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô

Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô Phương pháp điều tra phát hiện bệnh héo rũ ngô

Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 330-1998 phơng pháp điều tra phát bệnh héo rũ ngô Erwinia stewarti E.F.Smith Phạm vi đối tợng áp dụng: Tiêu chuẩn đợc áp dụng việc điều tra bệnh héo rũ ngô công tác Kiểm dịch thực vật vùng trồng ngô số nh: Cây cờm gạo (Croix lacrima Filei), cỏ đuôi chó (Setaria lutarens), cỏ Goa-tê-ma-la (Tripsacum laxum), cỏ Euchlaene mexicana nh đất đai gieo trồng, phơng tiện chế biến, bảo quản, vận chuyển phận nhằm phát bệnh héo rũ ngô vi khuẩn Erwinia stewarti E.F Smith gây nên, có hay không diện có vị trí nào, phân bố đến ranh giới vùng điều tra Phơng pháp điều tra: 2.1 Điều tra kho phơng tiện vận tải: Trong phơng tiện lu chứa, chế biến vận chuyển, phận nêu mục đợc quan sát lấy mẫu theo phơng pháp quy định TCVN 4731-89 (Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp lấy mẫu) Trong trình điều tra phải ý phận nghi bị nhiễm bệnh rác rởi, tàn t thực vật phơng tiện (kể bao bì, đồ chèn lót) 2.2 Điều tra nơi gieo trồng: Việc điều tra nêu mục nơi gieo trồng đợc thực theo quy định sau đây: 2.2.1 Xác định diện điều tra: Diện điều tra bao gồm diện tích đất đai số lợng túi bầu chậu vại gieo trồng nêu điểm bị nhiễm nghi bị nhiễm bệnh héo rũ ngô Mỗi đơn vị diện điều tra không lớn 10 5.000 túi bầu hay 1.000 chậu vại, lớn chia làm nhiều đơn vị nhỏ để tiến hành điều tra 2.2.2 Xác định điểm điều tra: Ban hành kèm theo định số: 56 1998/QĐ BNN.KHCN ngày14 tháng năm 1998 Bộ Nông nghiệp PTNT Mỗi diện điều tra phải có diện tích m có cây, nằm diện điều tra Nếu diện điều tra có diện tích 10 m2 toàn diện tích điểm điều tra Trờng hợp trồng túi bầu chậu vại điểm điều tra gồm túi bầu chậu vại có Nếu có 10 túi bầu 10 chậu vại toàn số túi bầu chậu vại điểm điều tra Điểm điều tra, tính theo quy định phụ lục số kèm theo tiêu chuẩn Nếu có nhiều điểm điều tra điểm phải đợc phân bố diện điều tra (theo đờng chéo góc zích zắc hình bàn cờ) Một số điểm điều tra đợc tập trung vào nơi có nhiều khả bị nhiễm bệnh héo rũ ngô 2.2.3 Tiến hành điều tra thu thập mẫu: 2.2.3.1 Phải quan sát toàn diện điều tra từ xa đến gần, từ rộng đến hẹp Chú ý có biểu khác thờng, tiếp đó, phải quan sát toàn điểm điều tra, ý có dấu hiệu nghi bị loại vi khuẩn gây hại nh: Còi cọc, tàn lụi, thấp lùn, không hoa kết trái, ngô có hoa đực bị biến mầu, gần phía gốc có đốm xanh, vàng sáng theo sọc gân kéo dài xuống thân 2.2.3.2 Tại điểm điều tra có từ trở lên số lợng đợc quan sát, tìm tòi, thu thập mẫu vật nghi bị nhiễm bệnh tất phận mặt đất, đất bám dính tàn d phải chiếm 40% tổng số điểm đợc đào lên để xem phận dới đất Nếu điểm điều tra có trở xuống tất số phải đợc xem xét phận mặt đất có đợc đào lên để xem phận dới đất 2.3 Phơng pháp lu giữ bảo quản mẫu vật: Một số phận bị bệnh nghi bị bệnh héo rũ ngô đợc thu thập, ép khô ngâm dung dịch giữ đợc hình dạng mầu sắc để làm tiêu Một số phận phải đợc giữ nguyên trạng nh thu thập, để chuyển gửi đến nơi phân tích, giám định Tiêu phải ghi nhãn rõ ràng cho không bị lẫn lộn Vi khuẩn phải đợc làm thành tiêu lam- lamel cố định để lu giữ Thời gian lu giữ tiêu năm 2.4 Phơng pháp phân tích giám định: Chọn hạt (ngô) lép, nhăn nheo nhng vỏ hạt lành lặn tìm giọt dịch tiết chỗ vết cắt ngang thân, lá, bao bắp chỗ tiếp giáp phần cuống bắp với thân (ngô) Phải tách đợc vi khuẩn từ vật thể bị nhiễm phân lập, nuôi cấy vi khuẩn môi trờng nhân tạo định loại vi khuẩn so với mẫu chuẩn tài liệu chuyên môn theo đặc điểm nêu phụ lục số kèm theo tiêu chuẩn Việc định loại vi khuẩn chủ yếu theo phơng pháp sinh hoá so sánh hình thái Nơi có điều kiện áp dụng phơng pháp ELISA phân tích gen 2.5 Dụng cụ điều tra: a) Thớc đo có thang chia tới đơn vị mm b) Kính hiển vi soi (Stereo microcope) với độ phóng đại 10 - 20 lần kính hiển vi quang học với độ phóng đại từ 15 x 40 đến 15 x 90 lần c) Dao, kéo, mũi mác, panh, chổi lông, bút lông, đinh ghim, hộp tiêu bản, kẹp tiêu thiết bị dụng cụ khác cần cho phân tích vi khuẩn d) Tấm vải nhựa cỡ 1,0m x 1,5m, túi polyetilen để lấy mẫu, đựng mẫu đ) Bình thuỷ tinh, ống tuýp, đĩa hộp thuỷ tinh, chai, lọ, bình đựng e) Hoá chất ngâm giữ mẫu vật bị hại, hoá chất vật liệu làm môi trờng nhân tạo thử nghiệm, hoá chất nhuộm làm mẫu lam g) Xẻng, bay, kìm, vam, xiên lấy mẫu h) Bút, giấy loại keo dán i) Các máy móc, dụng cụ ghi hình (nếu có) Ghi chép báo cáo kết điều tra: 3.1 Các tiêu điều tra loại đối tợng phải đợc ghi chép vào sổ điều tra theo thứ tự nh sau: Nơi thu thập mẫu Số lợng điều tra Diện tích diện điều tra Số lợng sơ đồ phân bố điểm điều tra Số lợng mẫu vật tiêu thu thập Số lợng tiêu bản, mẫu vật lu giữ chuyển gửi đến nơi phân tích, giám định Ngày tháng thu thập Kết giám định Ngày, tháng chuyển gửi 10 Ngời, quan giám định 3.2 Kết điều tra đợc lập thành biên theo phụ lục TCVN 4731-89 theo mẫu (khoản điều 3) Quy định ban hành kèm theo Quyết định số 191/NN - BVTV/QĐ, ngày 31/3/1994 Bộ Nông nghiệp Công nghiệp Thực phẩm (nay Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn) 3.3 Việc báo cáo, công bố kết điều tra phải đợc thực theo quy định khoản 2a, Điều 14; Điều 15 ; Điều 16 Pháp lệnh Bảo vệ Kiểm dịch thực vật hành; Khoản 2, Điều 13 Điều lệ Kiểm dịch thực vật hành Phụ lục số Bảng tính số lợng điểm điều tra Diện tích, số lợng diện điều tra Số lợng điểm điều tra (DT = diện tích, T = Số lợng túi bầu, chậu vại) 10 Điều tra toàn >100 1- > 1000 (**) > 1000 (**) > (**) 5+ 23 + DT (T ) 100 50 DT (T ) 1.000 150 83 + DT 0,05 Chỉ lấy số đơn vị (chẵn) (*) (*) 1/ DT T là: Diện tích diện điều tra tính theo m2 theo số lợng túi bầu chậu vại 2/ Chỉ lấy đơn vị chẵn, ví dụ: Diện điều tra 100 m2 (nh 101 m2 149 m2) nhng cha đến 150 m2 số lợng điểm điều tra số diện tích lớn (101 - 100 149 - 100) không chia chẵn cho 50, nh: 149 100 = 0,98 cha đủ chẵn Nhng diện tích diện 50 điều tra 150 m2 tổng số điểm điều tra là: 5+ 150 100 =6 50 Đối với số lợng túi bầu, chậu vại (**) Nếu lớn 10ha khoanh thành diện tích nhỏ 10 tính số lợng điểm điều tra theo bảng Nếu 5.000 túi bầu 1.000 chậu vại làm nh Phụ lục Một số đặc điểm vi khuẩn (Erwinia stewarti E.F Smith) Họ: Pseudomonaceae Bộ: Eubacteriales Vi khuẩn gram âm, hình que (trực khuẩn), bào tử, có kích thớc 0,5-0,7x1,0-2,0 micron, đứng riêng rẽ cá thể hợp lại thành cặp, không chuyển động, lông roi Sinh trởng chậm môi trờng aga, háo khí, khuẩn lạc nhỏ bé, rìa mép khuẩn lạc đều, lõm sâu dạng miệng núi lửa, môi trờng nớc thịt sinh trởng chậm, mầu vàng, không làm loãng aga, tạo axit đờng glucoza, lactoza glixerin, không khử nitrat không tạo thành H 2S indola, không thuỷ phân tinh bột, không hoá lỏng gelatin không tạo axit gelatin, độ nhiệt thích hợp cho vi khuẩn phát triển 30 o - 33oC, chịu đợc 8o - 9oC bị chết nhiệt độ cao 53 oC Phát triển tốt môi trờng U-sin-xki, yếu môi trờng Pherma, không phát triển môi trờng Kôn  ... kết điều tra: 3.1 Các tiêu điều tra loại đối tợng phải đợc ghi chép vào sổ điều tra theo thứ tự nh sau: Nơi thu thập mẫu Số lợng điều tra Diện tích diện điều tra Số lợng sơ đồ phân bố điểm điều. .. hình bàn cờ) Một số điểm điều tra đợc tập trung vào nơi có nhiều khả bị nhiễm bệnh héo rũ ngô 2.2.3 Tiến hành điều tra thu thập mẫu: 2.2.3.1 Phải quan sát toàn diện điều tra từ xa đến gần, từ rộng...Mỗi diện điều tra phải có diện tích m có cây, nằm diện điều tra Nếu diện điều tra có diện tích 10 m2 toàn diện tích điểm điều tra Trờng hợp trồng túi bầu chậu vại điểm điều tra gồm túi bầu