Xác định vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng ở trâu, bò tại một số huyện có dịch trên địa bàn tỉnh Cao Bằng và bước đầu thử nghiệm a

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ KIM DUNG XÁC ĐỊNH VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở TRÂU, BÕ TẠI MỘT SỐ HUYỆN CÓ DỊCH TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH CAO BẰNG VÀ BƢỚC ĐẦU THỬ NGHIỆM AUTO-VACCINE LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thái Nguyên, năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ KIM DUNG XÁC ĐỊNH VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở TRÂU, BÕ TẠI MỘT SỐ HUYỆN CÓ DỊCH TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH CAO BẰNG VÀ BƢỚC ĐẦU THỬ NGHIỆM AUTO-VACCINE Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Đặng Xuân Bình Thái Nguyên, năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu trực tiếp thực với giúp đỡ TS Đặng Xuân Bình Các số liệu, hình ảnh kết luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin đảm bảo thông tin, trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kim Dung Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nỗ lực thân, nhận giúp đỡ quý báu, bảo tận tình thầy cô giáo suốt trình thực đề tài Nhân dịp này, cho phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc thầy: T.S Đặng Xuân Bình người trực tiếp hướng dẫn trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn Khoa Sau đại học - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, tập thể cán nghiên cứu Bộ môn Công nghệ Vi sinh - Viện Khoa học Sự sống, tập thể lãnh đạo cán Chi cục Thú y tỉnh Cao Bằng gia đình, bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi nhất, giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Thái Nguyên, ngày tháng năm 2010 Nguyễn Thị Kim Dung Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng nước 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Ở Việt Nam 1.2 Đặc điểm dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.3 Mầm bệnh 10 1.3.1 Đặc điểm hình thái tính chất bắt màu 11 1.3.2 Đặc tính nuôi cấy 12 1.3.3 Đặc tính sinh hoá vi khuẩn Pasteurella multocida 15 1.3.4 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida 16 1.3.5 Serotype vi khuẩn P multocida 18 1.3.6 Độc lực vi khuẩn P multocida 21 1.3.7 Sức đề kháng 22 1.4 Bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida gây nên 23 1.4.1 Cơ chế sinh bệnh 23 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.4.2 Biểu hiện đặc trưng trâu bò mắc bệnh tụ huyết trùng 23 1.5 Những hiểu biết vắc xin phòng bệnh 25 1.5.1 Một vài nét lịch sử phát triển vắc xin 25 1.5.2 Thành phần vắc xin 26 1.5.3 Công nghệ lên men vi khuẩn chế tạo vắc xin 30 1.5.4 Phân loại vắc xin 30 1.5.5 Vắc xin chỗ (autovaccine) 33 Chƣơng 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 34 2.1.1 Đối tượng 34 2.1.2 Thời gian địa điểm 34 2.2 Nội dung nghiên cứu 34 2.2.1 Điều tra số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng 34 2.2.2 Phân lập vi khuẩn P multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ 34 2.2.3 Chế tạo vắc xin chỗ phòng bệnh tụ huyết trùng 35 2.3 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 35 2.3.1 Mẫu dùng phân lập vi khuẩn 35 2.3.2 Động vật thí nghiệm 35 2.3.3 Hóa chất và dụng cụ nghiên cứu 35 2.3.3.1 Hoá chất dùng để nhuộm Gram 35 2.3.3.2 Hoá chất dùng để thử phản ứng sinh hoá 35 2.3.4 Môi trường nuôi cấy, phân lập vi khuẩn 36 2.3.5 Dụng cụ thí nghiệm 36 2.4 Phương pháp nghiên cứu 36 2.4.1 Phương pháp điều tra dịch tễ 36 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn P multocida 37 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.4.2.1 Nuôi cấy, phân lập 37 2.4.2.2 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hóa học 38 2.4.3 Phương pháp thử độc lực chuột nhắt trắng 41 2.4.4 Phương pháp thử kháng sinh đồ 42 2.4.5 Chế tạo vắc xin chỗ theo tiêu chuẩn ngành 42 2.4.5.1 Phương pháp tính LD50 P multocida chuột 42 2.4.5.2 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn 43 2.4.5.3 Phương pháp chế tạo vắc xin 43 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 45 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 Kết khảo sát tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 46 3.1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 47 3.1.2 Tần suất xuất dịch bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 48 3.1.3 Tỷ lệ trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng mùa vụ 50 3.1.4 Triệu chứng đặc trưng trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng 53 3.1.5 Kết phân lập Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ tỉnh Cao Bằng 54 3.1.6 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella multocida trâu, bò khỏe ổ dịch theo lứa tuổi 56 3.1.7 Kết giám định số đặc tính sinh vật – hoá học chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập số huyện có dịch địa bàn tỉnh Cao Bằng 58 3.1.8 Xác định type giáp mô vi khuẩn P multocida phương pháp PCR (Polymerase chain reaction) 59 3.1.9 Kết xác định độc lực chủng P multocida phân lập 59 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.1.10 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập với số loại kháng sinh 61 3.2 Nghiên cứu chế tạo vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò 62 3.2.1 Chọn chủng vi khuẩn P multocida sản xuất vắc xin 62 3.2.2 Xác định liều gây chết 50% chuột thí nghiệm (LD50) 64 3.2.3 Kết chế tạo kiểm nghiệm autovaccine 65 3.2.4 Kiểm tra an toàn hiệu lực autovaccine động vật thí nghiệm 66 3.2.5 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine 68 3.2.5.1 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 68 3.2.5.2 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 68 3.2.6 Theo dõi biến động tiêu thân nhiệt tần số hô hấp trâu, bò sau tiêm autovaccine 71 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 74 Kết luận 74 Đề nghị 75 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT BHI: Brain Heart Infusion Cs: Cộng DNA: Deoxyribonucleic Acid ĐC: Đối chứng FAO: Food and Agriculture Oganization LD50: Lethal Dose 50 - Liều gây chết 50% MR: Methyl Red PCR: Polymerase Chain Reaction P multocida: Pasteurella multocida TN: Thí nghiệm VP: Voges Proskauer YPC: Yeast extract Pepton - L - Cystin 370C/24h : Bồi dưỡng tủ ấm 370C 24 + Chú thích CB6: Mẫu nghiên cứu số Cao Bằng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Tóm tắt danh pháp P multocida 11 Bảng 1.2 Hệ thống phân loại P multocida 20 Bảng 3.1 Kết khảo sát tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 47 Bảng 3.2 Tần suất xuất dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 - 2009 49 Bảng 3.3 Tỷ lệ trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng mùa vụ 51 Bảng 3.4 Kết theo dõi triệu chứng lâm sàng trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng 53 Bảng 3.5 Kết phân lập Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ 55 Bảng 3.6 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella multocida trâu, bò khỏe ổ dịch theo lứa tuổi 57 Bảng 3.7 Kết giám định số đặc tính sinh vật – hoá học vi khuẩn P multocida phân lập 58 Bảng 3.8 Kết thử độc lực chủng P multocida phân lập 60 Bảng 3.9 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập 62 Bảng 3.10 Kết quả chọn chủng vi khuẩn P multocida để chế tạo autovaccine 63 Bảng 3.11 Kết xác định LD50 64 Bảng 3.12 Kết chế tạo kiểm nghiệm autovaccine phòng thí nghiệm 65 Bảng 3.13 Kết kiểm tra an toàn hiệu lực lô autovaccine 67 Bảng 3.14 Kết thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 69 Bảng 3.15 Kết thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 70 Bảng 3.16 Kết theo dõi biến động tiêu thân nhiệt tần số hô hấp 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read ... DUNG XÁC ĐỊNH VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở TRÂU, BÕ TẠI MỘT SỐ HUYỆN CÓ DỊCH TRÊN Đ A BÀN TỈNH CAO BẰNG VÀ BƢỚC ĐẦU THỬ NGHIỆM AUTO-VACCINE Chuyên ngành: Thú y Mã số: ... học chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập số huyện có dịch đ a bàn tỉnh Cao Bằng 58 3.1.8 Xác định type giáp mô vi khuẩn P multocida phương pháp PCR (Polymerase chain reaction)... read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data