Sơ đồ chiết cây lược vàng

PHẦN 1: TỔNG QUAN PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Mẫu thân rễ Lược vàng (Callisa fragrans) thu hái vào tháng … tại…… Tên khoa học TS Nguyễn Văn Bách, Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật giám định Mẫu tiêu (CF) lưu Phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam (hay trường?, lựa chọn) 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Hóa chất dụng cụ - Hóa chất: Metanol, axeton, clorofom, n-hexan, etyl axetat, điclometan, nước cất, v/v - Dụng cụ: Máy cất quay chân không, cốc thủy tinh, ống nghiệm, phễu thủy tinh, mỏng silica gel, capilla, v/v 2.2.1 Thu thập xử lý mẫu  Thu thập mẫu: Phương pháp thu thập mẫu thực vật tuân thủ theo yêu cầu thực vật học để tiện cho lưu trữ, phân loại giám định thực vật Các mẫu có thông tin địa điểm, tên thông thường, sử dụng dân gian, phận thu hái, ảnh mẫu, v/v Các mẫu thực vật thu được, giám định tên phân loài theo tiêu chuẩn phân loại thực vật Tạo tiêu mẫu: Các mẫu tiêu lưu giữ kho bảo quản, để đảm bảo mẫu không bị hỏng tiêu bản, tiện cho việc tra cứu tìm thông tin sau Lập lý lịch mẫu, gồm số thứ tự, họ, tên khoa học, lá, khối lượng khô, tỉnh, xã, ngày thu, ghi  Phương pháp xử lý mẫu: Mẫu thực vật thái nhỏ, phơi khô, gắn ký hiệu xay nhỏ, bảo quản kho có máy hút ẩm 400C 2.2.3 Phương pháp tạo dịch chiết  Chiết dung môi: Là phương pháp dùng dung môi thích hợp hòa tan chất cần tách thành pha lỏng (gọi dịch chiết) phân chia khỏi pha lỏng (hoặc pha rắn) chứa hỗn hợp chất lại Tách lấy dịch chiết, giải phóng dung môi thu chất cần tách Từ xa xưa, nhân dân ta biết dùng phương pháp chiết, chẳng hạn ngâm thảo dược vào rược để sử dụng hoạt chất tan vào rược, ngâm chàm giã nhỏ nước để tách lấy phẩm chàm nhuộm vải, v/v Ngoài phương pháp ngâm chiết lạnh thông thường, phòng thí nghiệm hay sử dụng dụng cụ hỗ trợ Soxhlet để tăng tính liên tục dung môi nóng nhằm tiết kiệm thời gian hiệu việc chiết Tạo dịch chiết phục vụ sàng lọc hoạt tính theo quy trình chiết mẫu thực vật sau:  Tùy vào đối tượng hướng nghiên cứu cụ thể mà nguyên liệu chiết dùng dùng dạng tươi hay khô Mẫu thực vật thường phơi khô sấy khô trước ngâm chiết  Cân mẫu xay mẫu  Lựa chọn dung môi chiết mẫu Ưu tiên sử dụng loại không độc, có hiệu suất chiết cao cồn 96 oC, metanol, v/v  Mẫu chiết dung môi lựa chọn thiết bị siêu âm Powersonic (405, 220W) nhiệt độ 400C, thời gian 30 phút  Dịch chiết lọc qua giấy lọc (Whatman, d=240 nm, No 1) gộp lại tiến hành cất loại dung môi áp suất giảm nhiệt độ 40 0C, thu cao chiết  Sắc ký lớp mỏng: Sắc ký lớp mỏng (thin layer chromatography - TLC) kĩ thuật sắc ký dùng để phân tích so sánh chất có hỗn hợp mẫu thử Phương pháp sắc ký lớp mỏng bao gồm pha tĩnh lớp mỏng chất, thường silica gel, aluminium oxide, cellulose phủ mặt phẳng chất trơ Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích hòa tan dung môi thích hợp hút lên sắc ký mao dẫn, tách dung dịch thí nghiệm dựa tính phân cực thành phần dung dịch Sắc ký lớp mỏng phương pháp phổ biến ngành khoa học hóa, sinh, dược học với nhiều mục đích khác tính ưu việt độ nhạy cao, lượng mẫu phân tích nhỏ, nhanh, dễ dàng thực TLC dùng để phân tích định tính, định lượng, độ tinh khiết hợp chất hỗ trợ sắc ký cột -Chuẩn bị mẫu phân tích: Hòa tan mẫu dung môi thích hợp (1mg/ml), sau dùng capilla hút dịch mẫu lực mao quản chuyển dung dich mẫu lên chất hấp phụ vị trí tuyến xuất phát -Dung môi khai triển: Các dung môi TLC làm khan chưng cất lại sử dụng Hệ dung môi pha theo tỉ lệ phù hợp siêu âm (lắc) cho bình triển khai, đậy nắp kín Để yên đến dung môi bình ổn định -Triển khai mỏng: Cắt mỏng với kích thước phù hợp, có hai tuyến dung môi tuyến tuyến Dùng kẹp đưa mỏng chấm mẫu vào bình sắc ký, đậy nắp quan sát Khi dung môi chạy đến tuyến dung môi trên, gắp mỏng ra, không để dung môi chạy hết mỏng -Phát vết chất mỏng: Chúng sử dụng đèn tử ngoại có bước sóng λ = 254 nm λ= 360 nm, sử dụng thuốc thử -Đánh dấu vệt chất mỏng, tính giá trị R f ghi màu sắc vệt chất Dựa vào sắc ký đồ TLC đánh giá lượng chất mẫu, khả phân giải dung môi khả phân tách sắc ký điều chế Hình : Mô tả Sắc ký lớp mỏng (TLC) 2.2.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học Viết vài câu từ phần thực nghiệm chị thảo PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết thu mẫu tạo dịch chiết Dựa vào các công trình nghiên cứu trước thí nghiệm thực tế, ưu tiên lựa chọn dung môi cồn 96 oC, nước, phương pháp chiết chiết nóng (chiết Soxhlet) [a, b] Nguyên liệu thực vật sau thu hái loại bỏ phần hư hỏng, phơi khô xay nhỏ Dựa vào việc phân tích sắc ký lớp mỏng TLC đặc điểm hình thái thực vật, nhận biết so sánh chất có mẫu chiết định hướng cho phép thử sinh học, (chèn hình TLC chấm lần trước vào đây) đối tượng nghiên cứu Lược vàng (Callisa fragrans) chia làm ba loại để tạo loại cao chiết: Lá (ký hiệu: CFL, phần mặt đất), Rễ (ký hiệu: CFR, phần mặt đất), Rễ Lá (ký hiệu: CFRL, dạng trộn) Dưới quy trình cụ thể tạo loại cao chiết Quy trình tạo loại cao chiết Lược vàng Lá Callisa fragrans (2,0 kg) khô xay nhỏ, đem chiết nóng (chiết Soxhlet) với cồn 96 oC/10 lít h Dịch chiết cồn thu (8 lít) cô quay áp suất giảm thu dịch chiết cồn dạng lỏng sánh Dịch chiết tiếp tục hòa với nước tỉ lệ 1:1, chiết với etyl axetat, cô cất loại bỏ dung môi thu hai loại cao chiết tương ứng, cao etyl axetat (ký hiệu: CFL-EEt, 5.8545 g, phần chứa chủ yếu lớp chất không phân cực), cao chiết cồn nước (ký hiệu: CFL-EW, 73.2244 g, phần chứa chủ yếu hợp chất phân cực) Phần bã sau chiết cồn, tiếp tục đun với nước lít, 3h, cô cất loại bỏ dung môi thu cao chiết nước (ký hiệu: CFL-W, 23.702 g) Tương tự với trường hợp rễ Lược vàng, thu cao chiết tương ứng cao etyl axetat (ký hiệu: CFR-EEt, 20.01 g), cao chiết cồn nước (ký hiệu: CFREW, 37.6464 g), cao chiết nước (ký hiệu: CFR-W, 8.8479 g) Cuối cùng, rễ khô (0.5 kg, phần mặt đất) trộn với khô (0.5 kg, phần mặt đất), lặp lại trình chiết hai phận thu cao chiết cồn rễ trộn lẫn (ký hiệu CFRL, 70 g) Sơ đồ quy trình chiết cụ thể nêu hình vẽ CFL (2kg bột khô) Chiết Soxhlet 10 lít EtOH 960, h Bã sau chiết Dịch chiết EtOH (8 lít) 1, Đun H2O, lít, 3h 2, Cô cất dung môi Cô cất dung môi CFL-W 23.702 g Dịch chiết Sau cô quay phần 1, Thêm nước, 1:1 2, Chiết với EtOAc EtOAc CFL-EEt 5.8545 g Sơ đồ 1: Quy trình tạo cao chiết Lược vàng Callisa fragrans CFL-EW 73.2244 g CFR (1 kg bột khô) Chiết Soxhlet 10 lít EtOH 960, h Bã sau chiết Dịch chiết EtOH (9 lít) 1, Đun H2O, (5 lít), 3h 2, Cô cất dung môi Cô cất dung môi CFR-W 8.8479 g Dịch chiết Sau cô quay phần 1, Thêm nước, 1:1 2, Chiết với EtOAc EtOAc CFR-EEt 20.01 g CFR-EW 37.6464 g Sơ đồ 2: Quy trình tạo cao chiết rễ Lược vàng Callisa fragrans CFRL (0.5 kg + 0.5 kg rễ bột khô) Chiết Soxhlet 10 lít EtOH 960, h Dịch chiết EtOH (8 lit) Cô cất dung môi Cao chiết (CFRL, 70 g) Sơ đồ 3: Quy trình tạo cao chiết rễ Lược vàng Callisa fragrans Nhận xét: Như với việc chiết với dung môi phân cực cồn nước, dung môi không phân cực etyl axetat phận khác Lược vàng, tạo loại cao chiết khác Trong đó, cao chiết phần mặt đất thu với hiệu suất cao phần mặt đất Tài liệu tham khảo [a] Joash Ban Lee Tan, Wei Jin Yap, Shen Yeng Tan, Yan Yan Lim, Sui Mae Lee, “Antioxidant content, antioxidant activity, antibacterial activity of five plants from the Commelinaceae family”, Antioxidants, 2014, 3, 758-769 [b] tài liệu tham khảo bên viện dược liệu họ làm… chị viết vào Lưu ý: lấy tài liệu [a] làm form chị viết theo, Antioxidants tên tạp chí Tất chứng khoa học phải có trích dẫn đánh giá cao KÝ HIỆU M TRONG SƠ ĐỒ ĐƯỢC ĐỔI LẠI LÀ E, ví dụ CFR-MEt ĐƯỢC CHUYỂN THÀNH CFR-EEt PHẦN 1, PHẦN 2, PHẦN 3… ĐƯỢC VIẾT CÁCH, VÍ DỤ VIẾT HẾT PHẦN MÀ VẪN CÒN KHOẢNG TRẮNG THỪA THÌ PHẦN CŨNG KHÔNG ĐƯỢC VIẾT LIỀN, SANG TRANG MỚI THÌ VĂN BẢN MỚI ĐẸP  ... lại trình chiết hai phận thu cao chiết cồn rễ trộn lẫn (ký hiệu CFRL, 70 g) Sơ đồ quy trình chiết cụ thể nêu hình vẽ CFL (2kg bột khô) Chiết Soxhlet 10 lít EtOH 960, h Bã sau chiết Dịch chiết EtOH... g Dịch chiết Sau cô quay phần 1, Thêm nước, 1:1 2, Chiết với EtOAc EtOAc CFL-EEt 5.8545 g Sơ đồ 1: Quy trình tạo cao chiết Lược vàng Callisa fragrans CFL-EW 73.2244 g CFR (1 kg bột khô) Chiết. .. 37.6464 g Sơ đồ 2: Quy trình tạo cao chiết rễ Lược vàng Callisa fragrans CFRL (0.5 kg + 0.5 kg rễ bột khô) Chiết Soxhlet 10 lít EtOH 960, h Dịch chiết EtOH (8 lit) Cô cất dung môi Cao chiết (CFRL,