nghiên cứu thời điểm thu hoạch và phương pháp sơ chế dược liệu huyền sâm (scrophularia ningpoensis hemsl )

- Nghiên cứu các điều kiện sơ chế dược liệu huyền sâm : + Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ tới chất lượng dược liệu huyền sâm.. Trên cơ sở về các giá trị sử dụng dược liệu cây huyền sâm

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

TRẦN HỮU KHÁNH TÂN

NGHIÊN CỨU THỜI ĐIỂM THU HOẠCH VÀ PHƯƠNG PHÁP SƠ CHẾ DƯỢC LIỆU HUYỀN SÂM (SCROPHULARIA NINGPOENSIS HEMSL.)

Chuyên ngành: Công nghệ sau thu hoạch

Mã số: 60.54.01.04

Người hướng dẫn khoa học: 1 PGS.TS Ngô Xuân Mạnh

2 TS Trần Thị Liên

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan rằng số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực, khách quan và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào

Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám

ơn, Các thông tin được trích dẫn trong luận văn này đã được chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn

LỜI CẢM ƠN

Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn

bè, đồng nghiệp và gia đình

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết

ơn sâu sắc PGS.TS Ngô Xuân Mạnh và TS Trần Thị Liên đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo,

Bộ môn Công nghệ Chế biến, Khoa Công nghệ Thực phẩm - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Dược liệu, Ban lãnh đạo trung tâm nghiên cứu trồng và chế biến cây thuốc Hà Nội, các bạn đồng nghiệp trong Viện Dược liệu, trong Trung tâm nghiên cứu trồng và chế biến cây thuốc Hà Nội đã giúp đỡ

và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn

Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn

MỤC LỤC

Lời cam đoan i

Lời cảm ơn ii

Mục lục iii

Danh mục các kí hiệu, chữ viết tắt v

Danh mục bảng vi

Danh mục hình vii

Trích yếu luận văn viii

Thesis abstract ix

Phần 1 Mở đầu 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích và yêu cầu 3

Phần 2 Tổng quan 4

2.1 Xu thế phát triển và thực trạng trồng trọt, thu hái và sơ chế dược liệu 4

2.1.1 Xu thế phát triển dược liệu ở Việt Nam 4

2.1.2 Thực trạng trồng trọt, thu hái và sơ chế dược liệu ở Việt Nam 5

2.1.3 Sơ chế dược liệu và an toàn của dược liệu 6

2.2 Tổng quan về cây huyền sâm 9

2.2.1 Đặc điểm thực vật học 9

2.2.2 Nguồn gốc, phân bố và sinh thái 11

2.2.3 Thành phần hóa học và công dụng của vị huyền sâm 13

2.2.4 Chế biến huyền sâm 14

2.3 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về thu hoạch, sơ chế và chế biến dược liệu sau thu hoạch 15

2.3.1 Các nghiên cứu trong nước 15

2.3.2 Các nghiên cứu ngoài nước 22

2.4 Luận giải và đề xuất những vấn đề cần nghiên cứu 23

Phần 3 Nguyên vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu 24

3.1 Nguyên vật liệu 24

3.2 Nội dung nghiên cứu 24

3.2.1 Nghiên cứu thời điểm thu hoạch dược liệu huyền sâm 24

3.2.2 Nghiên cứu các điều kiện công nghệ sơ chế dược liệu huyền sâm 24

3.2.3 Xây dựng được quy trình công nghệ thu hoạch và sơ chế sau thu hoạch dược liệu huyền sâm 24

3.3 Phương pháp nghiên cứu 24

3.3.1 Bố trí thí nghiệm 24

3.3.2 Phương pháp xác định các chỉ tiêu 29

3.3.3 Phương pháp ủ dược liệu 35

3.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 35

Phần 4 Kết quả và thảo luận 36

4.1 Kết quả nghiên cứu về thời điểm thu hoạch cây huyền sâm 36

4.1.1 Ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch đến năng suất dược liệu cây huyền sâm 36

4.1.2 Ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch đến chất lượng dược liệu cây huyền sâm 37

4.2 Nghiên cứu về các điều kiện sơ chế dược liệu cây huyền sâm 38

4.2.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ đến chất lượng dược liệu huyền sâm 38

4.2.2 Ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đem ủ đến chất lượng dược liệu huyền sâm 42

4.2.3 Ảnh hưởng của thời gian ngâm ủ đến chất lượng dược liệu huyền sâm 45

4.2.4 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy khô đến chất lượng dược liệu huyền sâm 49

4.3 Xây dựng quy trình công nghệ thu hoạch và sơ chế huyền sâm 52

4.3.1 Sơ đồ công nghệ thu hoạch và sơ chế dược liệu huyền sâm 52

4.3.2 Thuyết minh quy trình 53

Phần 5 Kết luận và kiến nghị 55

5.1 Kết luận 55

5.2 Kiến nghị 55

Tài liệu tham khảo 56

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt

- World Health Organization

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.1 Yêu cầu giới hạn nhiễm khuẩn 9

Bảng 2.2 Mùi, vị độ mềm của các mẫu đương quy chế biến khác nhau 16

Bảng 2.3 Hàm lượng chất tan và tinh dầu trong đương quy chế biến khác nhau 16

Bảng 2.4 Ảnh hưởng của sơ chế và bảo quản đến chất lượng dược liệu đương quy Nhật Bản 17

Bảng 3.3 Mức cho điểm của từng chỉ tiêu đánh giá 34

Bảng 4.1 Ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch đến năng suất dược liệu huyền sâm 36

Bảng 4.2 Ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch đến chất lượng dược liệu huyền sâm 37

Bảng 4.3 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ đến số lượng nấm và vi khuẩn trên dược liệu 39

Bảng 4.4 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ đến hàm lượng acid cinamic và chỉ số IC 50 trong dược liệu huyền sâm 40

Bảng 4.5 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ đến chất lượng cảm quan của dược liệu huyền sâm 41

Bảng 4.6 Ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đem ủ đến chỉ tiêu vi sinh vật có trong dược liệu huyền sâm 42

Bảng 4.7 Ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đem ủ đến chất lượng dược liệu huyền sâm 43

Bảng 4.8 Ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đem ủ đến chất lượng cảm quan của dược liệu huyền sâm 44

Bảng 4.9 Ảnh hưởng của thời gian ngâm ủ đến chỉ tiêu vi sinh vật có trong dược liệu huyền sâm 46

Bảng 4.10 Ảnh hưởng của thời gian ngâm ủ đến chất lượng dược liệu huyền sâm 46

Bảng 4.11 Ảnh hưởng của thời gian ngâm ủ đến chất lượng cảm quan của dược liệu huyền sâm 47

Bảng 4.12 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy khô đến chỉ tiêu vi sinh vật có trong dược liệu huyền sâm 49

Bảng 4.13 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy khô đến chất lượng dược liệu huyền sâm 50

Bảng 4.14 Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy khô đến chất lượng cảm quan của dược liệu huyền sâm 51

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1 Cây và rễ (củ) huyền sâm 10

Hình 2.2 Dược liệu huyền sâm tươi và khô 12

Hình 2.3 Cấu trúc hóa học của một số chất chính trong huyền sâm 13

Hình 3.1 Sơ đồ quá trình sơ chế dược liệu huyền sâm sau thu hoạch 26

Hình 4.1 Huyền sâm không ủ và ủ sau 5, 6, 7, 8, 9, 10 ngày 48

Hình 4.2 Dược liệu huyền sâm ở các hình thức phơi sấy khác nhau 51

Hình 4.3 Sơ đồ công nghệ thu hoạch và sơ chế dược liệu huyền sâm 52

TRÍCH YẾU LUẬN VĂN

Tên tác giả: Trần Hữu Khánh Tân

Tên Luận văn: “Nghiên cứu thời điểm thu hoạch và phương pháp sơ chế dược liệu huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.)”

Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam

1 Mục đích nghiên cứu

Xác định thời điểm thu hoạch và phương pháp sơ chế dược liệu huyền sâm phù hợp

2 Phương pháp nghiên cứu

Dược liệu huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.) được trồng và thu hoạch tại Sa Pa – Lào Cai

- Nghiên cứu ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch tới năng suất và chất lượng dược liệu huyền sâm

- Nghiên cứu các điều kiện sơ chế dược liệu huyền sâm :

+ Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

+ Ảnh hưởng của độ ẩm của huyền sâm trong thời gian ủ tới chất lượng dược liệu + Ảnh hưởng của thời gian ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

+ Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sau ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

Kết quả thí nghiệm được phân tích ANOVA và kiểm định LSD (5%) để so sánh sự khác biệt trung bình giữa các công thức và sự biến động giữa các lần lặp lại trong cùng công thức Các phân tích thống kê sử dụng phần mềm Irristart 5.0 và microsoft excel

3 Kết quả chính và kết luận

- Đã xác định được thời điểm thích hợp cho thu hoạch huyền sâm cho năng suất

và chất lượng tốt nhất

Thời điểm thu hoạch phù hợp nhất là khi cây đã ngừng sinh trưởng, khoảng 50

% lá trên cây bắt đầu chuyển sang già hóa (chuyển úa, vàng); thu hoạch sau trồng khoảng 185 ngày

- Đã xác định được các điều kiện sơ chế dược liệu huyền sâm

 Độ ẩm phù hợp cho ủ dược liệu huyền sâm là 50%

 Thời gian ủ cho chất lượng tốt nhất là 7 – 8 ngày

- Đã tổng hợp xây dựng quy trình thu hoạch và sơ chế dược liệu huyền sâm sau thu hoạch

THESIS ABSTRACT

Master candidate: Tran Huu Khanh Tan

Thesis title: “Study on harvest time and processing methods on Scrophularia ningpoensis Hemsl”

Major: Postharvest technology Code: 60.54.01.04

Educational organization: Vietnam National University of Agriculture

Determine the optimal harvest time and processing methods on Scrophularia ningpoensis Hemsl

Scrophularia ningpoensis Hemsl is grown and harvested in Sa Pa - Lao Cai

- To study harvest time of Scrophularia ningpoensis Hemsl

+ To study the effect of harvest time on yield and quality of Scrophularia ningpoensis Hemsl

- To study the effects of processing conditions on the quality of Scrophularia ningpoensis Hemsl

+ The influence of preheating temperature on the quality of Scrophularia ningpoensis Hemsl

+ The influence of humidity of Scrophularia ningpoensis Hemsl in the incubation time on the quality

+ The influence of incubation time on the quality of Scrophularia ningpoensis Hemsl + The influence of drying temperature after annealing on the quality of Scrophularia ningpoensis Hemsl

Experimental results were analyzed ANOVA and LSD test (5%) to compare the average difference between the treatments and the variation between the replicates in the same treatments The statistical analysis are used as Irristart 5.0 and Microsoft Excel

- Identified the optimal time to harvest of Scrophularia ningpoensis Hemsl to achieve best quality and productivity:

The most optimal harvest time is when the plants stop growing and when about 50% of the leaves begin to turn aging (turn sicken and yellow); harvest at 185 days after planting

- Identified processing conditions of Scrophularia ningpoensis Hemsl:

 The optimal humidity of Scrophularia ningpoensis Hemsl in incubation is 50% humidity

 Incubation time for the best quality is 7-8 days

- Synthesized and constructed harvesting and processing procedure on

PHẦN 1 MỞ ĐẦU

1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong ba thập kỷ qua, thuốc y học cổ truyền, đặc biệt là các loại thuốc chế

từ thảo dược, đã được sử dụng ngày càng nhiều trên toàn thế giới Tuy nhiên cũng đã có ngày càng nhiều báo cáo về việc bệnh nhân bị các hậu quả có hại cho sức khoẻ khi sử dụng các chế phẩm từ thảo dược Các cuộc phân tích và nghiên cứu đã cho thấy có nhiều lý do khác nhau dẫn đến những vấn đề này Một trong những nguyên nhân chính của các phản ứng có hại đã được báo cáo liên quan trực tiếp đến chất lượng kém của các loại thuốc từ thảo dược, bao gồm cả những nguyên liệu thảo dược Thế nên, người ta cũng đã thừa nhận rằng việc bảo đảm chất lượng và kiểm tra chất lượng các loại thuốc thảo dược vẫn chưa được quan tâm đúng mức (Tổ Chức Y Tế Thế Giới, 2003)

Trong vòng hai thập kỉ gần đây, xu hướng quay lại sử dụng các sản phẩm thuốc có nguồn gốc thảo dược để phòng và trị bệnh trở nên phổ biến Dược điển các nước khu vực châu Á như Việt Nam, Hàn Quốc, Trung Quốc, Nhật Bản đều

có các chuyên luận về dược liệu Một số chuyên luận dược liệu cũng đã được đưa vào Dược điển Mĩ, châu Âu Theo ước tính, 70% dân số toàn cầu vẫn sử dụng thuốc từ dược liệu trong chăm sóc sức khỏe ban đầu tại cộng đồng Vì vậy, tổ chức y tế thế giới đã nhấn mạnh việc đảm bảo chất lượng của các thuốc này phải dựa trên các kĩ thuật phân tích hiện đại, với việc sử dụng các chất chuẩn đối chiếu phù hợp

Đảm bảo chất lượng dược liệu sử dụng trong các bệnh viện, các cơ sở sản xuất thuốc là một vấn đề quan trọng Chất lượng dược liệu do nhiều khâu quyết định từ trồng trọt, chăm sóc, thu hoạch, chế biến đến bảo quản Trong đó, thu hái,

sơ chế và bảo quản dược liệu là những khâu cần được quan tâm và chú trọng để góp phần giữ ổn định cho chất lượng dược liệu Đồng thời, mỗi vị dược liệu đều

có những đặc tính riêng; Do đó, mỗi loại cây thuốc cần có biện pháp về thu hái,

sơ chế và chế biến riêng

Ở Việt Nam có hơn 3.800 loài cây là thuốc trên tổng số 10.600 loài thực vật Tổng sản lượng dược liệu trồng ở Việt Nam ước tính hàng năm khoảng 3.000 – 5.000 tấn Do đó việt Nam được coi là nước có nguồn dược liệu hết sức

nước ta chưa được quan tâm quản lý và đầu tư tương xứng với tiềm năng Đồng thời việc sơ chế và chế biến dược liệu thực tế thường không tiến hành theo quy trình mà theo hướng đơn giản hóa, chủ yếu sử dụng theo hình thức sản xuất thủ công theo kinh nghiệm cổ truyền, tuy nhiên, đây cũng là điều dẫn đến tổn thất sau thu hoạch cả về lượng và chất

Với các cây thuốc thì cần thu hái trong mùa hay khoảng thời gian tối ưu để đảm bảo sản xuất được dược liệu và thành phẩm thảo dược với mức chất lượng tốt nhất có thể được Thời điểm thu hái phụ thuộc vào bộ phận dùng của cây cần Cần xác định thời điểm tốt nhất để thu hái (mùa hay giờ trong ngày đạt đỉnh chất lượng), tính theo chất lượng và số lượng của các hợp phần hoạt tính sinh học hơn

là tổng sản lượng thực vật của các bộ phận cây thuốc Thu hoạch quá sớm, cây chưa già, củ còn non, tỷ lệ khô thấp; thu hoạch quá muộn thì chồi mới mọc lên, tiêu hao mất nhiều dinh dưỡng của củ (Tổ Chức Y Tế Thế Giới, 2003)

Dược liệu huyền sâm là rễ đã phơi hay sấy khô của cây Huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.), họ Hoa mõm chó (Scrophulariaceae) Hiện nay, huyền sâm là một trong những loại dược liệu quý và tiềm năng được sử dụng chủ yếu trong y học cổ truyền chủ trị các bệnh nhiệt, ngũ tạng nhiệt, huyết nhiệt, sốt nóng, miệng lưỡi khô, khát nước, mẩn ngứa, viêm họng, lở miệng, viêm amidan Vì vậy mà vị thuốc thường được sơ chế, chế biến theo các phương pháp cổ truyền Trên cơ sở về các giá trị sử dụng dược liệu cây huyền sâm và khả năng phát triển cây thuốc này ở Việt Nam, năm 2013, Thủ Tướng Chính Phủ đã phê duyệt quy hoạch tổng thể phát triển dược liệu đến năm 2020

và định hướng đến năm 2030, theo đó cây Huyền sâm được quy hoạch trồng tại Lào Cai (Bắc Hà), Sơn La (Mộc Châu) và Lâm Đồng (Đà Lạt) (Thủ Tướng Chính Phủ, 2013) Để phát triển vùng trồng cây Huyền sâm một cách bền vững

và đảm bảo được chất lượng dược liệu Huyền sâm trồng theo GACP (Good Agricultural and Collection Practices) với chất lượng tốt, dược liệu sạch và hiệu quả cho người sử dụng

Tuy nhiên, theo kiểm tra của Bộ Y tế thì dược liệu huyền sâm trên thị trường có chất lượng không cao thậm chí nhiều mẫu kiểm tra không còn hoạt chất có tác dụng chữa bệnh, chưa kể còn chứa nhiều vi sinh vật, hóa chất độc hại cho người sử dụng Hơn nữa công nghệ thu hái, sơ chế và chế biến huyền sâm chưa thống nhất dẫn đến chất lượng dược liệu kém và không ổn định

Để giải quyết những vấn đề nêu trên, nhu cầu nghiên cứu về thu hoạch, sơ chế, đặc chế huyền sâm để có một quy trình an toàn, tiết kiệm mà vẫn đảm bảo chất lượng dược liệu là hết sức cần thiết Chính vì vậy, chúng tôi tiến hành đề tài:

“Nghiên cứu thời điểm thu hoạch và phương pháp sơ chế dược liệu huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.)”

PHẦN 2 TỔNG QUAN

2.1 XU THẾ PHÁT TRIỂN VÀ THỰC TRẠNG TRỒNG TRỌT, THU HÁI

VÀ SƠ CHẾ DƯỢC LIỆU

2.1.1 Xu thế phát triển dược liệu ở Việt Nam

Ở Việt Nam, nhu cầu sử dụng đông dược là rất lớn Theo đánh giá của Viện Dược liệu năm 1995, nhu cầu dược liệu toàn 4 quốc khoảng 30 000 tấn, cung cấp cho 145 bệnh viện y học cổ truyền, 242 khoa y học cổ truyền trong bệnh viên đa khoa và khoảng 30.000 lương y đang hành nghề, ngoài ra còn cần khoảng 20.000 tấn cho nhu cầu xuất khẩu (Nguyễn Gia Chấn, 2005); (Nguyễn Thượng Dong, 2009)

Nhiều chế phẩm đông dược đã được nghiên cứu tại các viện nghiên cứu và chuyển giao kĩ thuật cho các xí nghiệp sản xuất trong nước, như thuốc viêm gan Haina, thuốc hạ cholesterol máu và hạ huyết áp Ruventat, thuốc chống đái tháo đường Morantin, thuốc nhỏ mũi Ngũ sắc, thuốc hòa tan sỏi thận Somatan, Sotinin, thuốc tăng tuần hoàn máu Angelin, thuốc viêm gan phyllantin (Nguyễn Minh Khởi, 2011) Về nghiên cứu phát triển, hiện nay các công ty đa quốc gia đang có xu hướng phát triển các dược phẩm có chứa một hoạt chất từ cây thuốc (tinh chất dược liệu) do các chế phẩm này có giá trị kinh tế lớn hơn nhiều so với các sản phẩm chứa cao thuốc (extracts) hoặc hợp chất toàn phần chưa xác định được trong các công thức cổ truyền, kinh điển (Lê Văn Truyền, 2010)

Riêng trong năm 2010, Cục quản lí Dược, Bộ Y tế đã cấp phép nhập khẩu cho 106 chế phẩm từ dược liệu thuộc 15 quốc gia và vùng lãnh thổ trên thế giới

Sự phát triển nhanh chóng các thuốc từ cây cỏ là do xu hướng của các nước phương Tây nhằm tăng cường tự điều trị, và do lo lắng về tác dụng bất lợi của chế phẩm hóa dược và sự nâng cao nhận thức của cộng đồng về vai trò của thuốc

từ dược liệu trong điều trị các bệnh mạn tính, bệnh thông thường (Lê Văn Truyền, 2010) Với sự phát triển của các kĩ thuật phân tích hiện đại, nhiều hoạt chất được tách chiết từ dược liệu, nghiên cứu xác định cấu trúc và tác dụng dược

lí Kết hợp với công nghệ bào chế, các nhà sản xuất đã cho ra đời những dạng thuốc thuận tiện cho người sử dụng như viên nén, viên nang, cốm thuốc, trong

đó nguyên liệu đầu vào là tinh chất hoặc cao dược liệu chuẩn hóa có hàm lượng

nang cao Bạch quả (Ginkgo biloba), chứa các hoạt chất ginkgo flavnol glycosides, terpene lactones, bilobalide, ginkgolide A, ginkgolide B, ginkgolide C; viên tỏi chứa dịch chiết tỏi có hoạt chất chính là allicin, viên nén cao Cúc gai dài (Cardus marianus) chứa hoạt chất chính là silymarin… (Cục Quản Lí Dược

Bộ Y Tế, 2010) Nhiều hoạt chất chiết xuất từ dược liệu được tinh chế đạt đến độ tinh khiết có thể sử dụng làm nguyên liệu bào chế thuốc tiêm Điển hình trong nhóm này là các chế phẩm thuốc tiêm chứa flavonoid của Ginkgo biloba; thuốc tiêm chứa paclitaxel phân lập từ cây Taxus Brevifolia (biệt dược; thuốc tiêm chứa vinblastin phân lập từ cây Vinca rosea… (Trường Đại Học Dược Hà Nội, 2006) Hiện nay, nguồn tài nguyên cây cỏ và tri thức sử dụng cây cỏ làm thuốc là

cơ sở quan trọng để sàng lọc và tìm ra thuốc mới Hướng nghiên cứu này đang rất được coi trọng ở các nước có nền y học tiên tiến như Mĩ, Pháp, Nhật Bản, Trung Quốc (Nguyễn Gia Chấn, 2005)

2.1.2 Thực trạng trồng trọt, thu hái và sơ chế dược liệu ở Việt Nam

Theo kết quả điều tra của Viện Dược Liệu, tính đến 2005 đã ghi nhận được

3948 loài thực vật và nấm lớn có công dụng làm thuốc; 52 loài tảo biển, 408 loài động vật và 75 loại khoáng vật có công dụng làm thuốc ở Việt Nam Trong tổng

số 3948 loài cây thuốc và nấm làm thuốc đã biết, chỉ có khoảng 500 loài là cây thuốc trồng hay từ các loài cây trồng khác nhưng có bộ phận được dùng làm thuốc Song trên thực tế, hiện chỉ có 44 loài trong tổng số đó là cây thuốc trồng sản xuất ra hàng hóa (ở các mức độ khác nhau)

Một số cây thuốc có tiềm năng đã được đầu tư và tổ chức thành công các vùng trồng để tạo nguyên liệu phục vụ trong nước và xuất khẩu, như trồng Thanh cao hoa vàng, Lão quan thảo, Mã đề, Ngưu tất, Sa nhân, Đương qui Nhật bản, Lô hội, Hòe, Sả, Địa liền, Gừng, Tỏi, Cúc hoa, Diệp hạ châu, Trinh nữ hoàng cung, Kim tiền thảo, Actiso, Râu mèo, Quế, Hồi, Hương nhu trắng, Hương nhu tía, Bạc hà, Thảo quả, Cốt khí củ, Hoắc hương, Bạch truật, Địa liền, Nga truật, Nhân trần, Bồ bồ, Thảo quyết minh, Xuyên khung, Mạch môn, Ngải cứu, Xạ can, Sen, …Bên cạnh đó, nhiều địa phương, công ty kinh doanh, các đơn vị nghiên cứu đã trực tiếp đầu tư, xây dựng vùng trồng một số loài cây thuốc để tạo nguồn nguyên liệu cho sản xuất, như: tỉnh Kon Tum và Quảng Nam đầu tư phát triển Sâm ngọc linh; xây dựng được 7 qui trình trồng 7 cây thuốc trên địa bàn tỉnh Thanh Hóa tạo nguyên liệu tại chỗ cho sản xuất thuốc: Angelin từ Đương qui

chữa sỏi thận, Thập vị bổ cho người cao tuổi và Cốm bổ trẻ em của Viện Dược liệu; xây dựng vùng trồng Hòe xen canh với cây nông nghiệp ở Tây nguyên của Công ty xuất nhập khẩu Y tế II thành phố Hồ Chí Minh; qui hoạch vùng trồng Tràm (Melaleuca anternifolia) để chưng cất tinh dầu của Trung tâm Nghiên cứu bảo tồn và phát triển dược liệu Đồng Tháp Mười; nghiên cứu xây dựng qui trình trồng cây thuốc theo tiêu chuẩn GAP-WHO 5 loài cây thuốc Đương qui, Actiso, Ngưu tất, Cúc hoa, Bạch chỉ (Đề tài KC10.02 của Viện Dược liệu; xây dựng vùng trồng Bạc hà Nhật Bản tại Hưng Yên và Nam Định (Công ty cổ phần Dược Mediplantex); xây dựng vùng trồng Kim tiền thảo tại Bắc Giang (Công ty OPC); xây dựng vùng trồng Actiso và Chè dây tại Sa Pa – Lào Cai (Công ty Traphaco); xây dựng vùng nguyên liệu Trinh nữ hoàng cung của Công ty Dược liệu Trung Ương II; trồng Đinh lăng ở Ngĩa Trai…Tổng sản lượng dược liệu trồng trọt hàng năm ước tính khoảng 3000 – 5000 tấn Trong đó, đáng kể nhất là Thanh cao hoa vàng (gần 500 tấn/năm), Quế (>300 tấn/năm), Kim tiền thảo (gần 300 tấn/năm),…Về diện tích trồng một số cây truyền thống như Quế, Cúc hoa, Hồi, Hòe , Kim tiền thảo, Diệp hạ châu…gần đây đã tăng lên nhiều Bên cạnh đó, hầu hết các vùng trồng cây thuốc nhập nội (Bạch chỉ, Xuyên khung, Địa hoàng, Bạch truật, Đương qui, Huyền sâm, Ngưu tất, Cát cánh, Trạch tả) đã bị mất đi đáng kể Những loại dược liệu này đã tái phụ thuộc vào nhập khẩu từ nước ngoài Cùng với nhiều loại dược liệu thuốc bắc khác, nâng tổng số khối lượng dược liệu phải nhập nội từ Trung Quốc lên tới trên 20.000 tấn/năm (Viện Dược Liệu, 2006) 2.1.3 Sơ chế dược liệu và an toàn của dược liệu

Sơ chế và bảo quản dược liệu thường được áp dụng chủ yếu là thủ công và dựa vào kinh nghiệm của y học cổ truyền và được tổng hợp như sau:

Dược liệu sau thu hoạch → Sơ chế → Đặc chế → Làm khô → Bảo quản Trong đó, công đoạn sơ chế dược liệu sau thu hoạch bao gồm phân loại, làm sạch (cơ học, côn trùng, nấm mốc…) Tùy theo yêu cầu đặc thù của dược liệu thì một số cần được đặc chế nhằm giảm thời gian làm khô, ngăn ngừa hư hỏng do nấm mốc, vi sinh vật mà còn có tác dụng khử độc hay giữ lại tối đa những hoạt chất có tác dụng tốt

Trong công tác sơ chế sau thu hoạch thì ngoài các công đoạn phân loại, làm sạch thì sấy là một khâu quan trọng để sơ chế và bảo quản sản phẩm

Các sản phẩm nông nghiệp muốn được bảo quản tốt thì điều kiện đầu tiên là

phải có độ ẩm nhỏ Nhưng sau khi thu hoạch thì sản phẩm thường có độ ẩm cao nên cần phải được làm khô tới độ ẩm thích hợp cho việc bảo quản

Làm khô dược liệu là một quy trình kỹ thuật quan trọng, nó ảnh hưởng không những tới hình dạng bên ngoài mà cả tới chất lượng, thành phần hóa học

và tác dụng chữa bệnh của dược liệu Khi làm khô phải tăng nhiệt độ từ từ cho nước bên trong kịp thoát ra trước khi lớp ngoài của dược liệu khô cứng Nhiệt độ làm khô phải thích hợp với từng bộ phận của của dược liệu như hoa, lá ở 40 -

500C, dược liệu chứa tinh dầu ở 30 – 400C, thân, cành, rễ, củ có thể tới 60 - 700C

Độ ẩm trung bình chứa trong dược liệu khoảng 10 - 13% thì mới không bị mốc hay lên men

- Làm khô bằng không khí thường, đây là phương pháp rẻ tiền, dễ áp dụng nhưng không chủ động về thời tiết

+ Phơi nắng với dược liệu không bị hỏng do tia nắng mặt trời, thường áp dụng cho các dược liệu là rễ, thân rễ, cành Với các bộ phận tế nhị như hoa, lá phơi nắng nhanh trong vài giờ sau đó tiếp tục phơi trong râm

+ Phơi trong râm là phương pháp tốt áp dụng với các dược liệu dễ bị hỏng

do ánh nắng mặt trời như dược liệu có tinh dầu, có thể bó thành từng bó treo lên dây thép Dược liệu phơi theo kiểu này vừa giữ được chất lượng vừa giữ được màu sắc

- Làm khô bằng không khí nóng là phương pháp chủ động, rút ngắn thời gian làm khô Thiết bị sử dụng phổ biến thường là máy sấy vỉ ngang hoặc buồng sấy dạng tuynel Phương pháp này có ưu điểm là chủ động được trong điều kiện thời tiết không thuận lợi như mưa hoặc thời tiết ẩm ướt Trong biện pháp này, hiện nay diêm sinh được dùng để sấy dược liệu Phương pháp này còn gọi là phương pháp xông sinh (sấy sinh) Mục đích của việc sấy theo cách này nhằm làm cho dược liệu có hình thức đẹp và cũng bảo quản được tốt hơn

+ Làm khô lạnh được áp dụng cho các dịch chiết dược liệu quý (Ban đào tạo huấn luyện cán bộ dược liệu Trung Quốc, 1965), (Nguyễn Văn Thuận, 2004)

An toàn của dược liệu

Đảm bảo chất lượng dược liệu và nguồn dược liệu an toàn là một tiêu chí đã được các nhà khoa học đặt ra "Dược liệu an toàn"; "Dược liệu sạch" không chỉ

có ý nghĩa thời thượng mà là hết sức cần thiết Nguồn dược liệu an toàn sẽ cho những dược liệu an toàn An toàn cho người sử dụng, an toàn cho người nuôi trồng, chế biến

Theo Vụ Y Dược cổ truyền (Bộ Y tế): Kết quả lấy mẫu, kiểm nghiệm trên hơn 400 mẫu dược liệu được lấy tại 70 cơ sở khám bệnh, khoa y học cổ truyền tại

5 tỉnh/thành phố (Hà Nội, Thành phố Hồ Chí Minh, Đà Nẵng, Quảng Nam và Hải Dương) cho thấy, nhiều vị thuốc không đảm bảo chất lượng hiện đang được

sử dụng tại các cơ sở khám chữa bệnh Tính riêng đợt 1, với tổng số 193 mẫu, đã

có tới 66% số mẫu không đạt chỉ tiêu so với tài liệu Dược điển Việt Nam Kết quả thanh, kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc năm 2014 tại Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương cho thấy, khoảng 8% thuốc Đông dược không đạt chất lượng Tình trạng thuốc giả, thuốc kém chất lượng cũng khá phức tạp Trong 6.069 mẫu thuốc đông dược - dược liệu được Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương lấy mẫu

để kiểm nghiệm chất lượng thì phát hiện 454 mẫu không đạt tiêu chuẩn chất lượng, chiếm tỷ lệ 7,48%

Đồng thời trên thưc tế số lượng dược liệu không đạt tiêu chí về giới hạn nhiễm khuẩn chiếm một tỷ lệ cao Theo Bộ y tế Việt Nam hướng dẫn việc quản

lý giới hạn nhiễm khuẩn như sau:

Thử giới hạn nhiễm khuẩn nhằm đánh giá số lượng vi khuẩn hiếu khí, nấm, mốc có khả năng sống lại được và phát hiện các vi khuẩn chỉ điểm y tế

có trong thuốc

Thử nghiệm được áp dụng cho tất cả các dược phẩm gồm cả nguyên liệu và thành phẩm của các thuốc không tiệt khuẩn trong quá trình sản xuất

Yêu cầu giới hạn nhiễm khuẩn

Giới hạn nhiễm khuẩn cho các loại thuốc có quá trình sản xuất không tiệt khuẩn như sau:

Bảng 2.1 Yêu cầu giới hạn nhiễm khuẩn

chỗ cho da như kem bôi,

nước thơm, dầu, dung

dịch, bột

Tổng số vi khuẩn hiếu khí sống lại được không quá

500 trong 1 g (ml) Mẫu thử phải không có Enterobacteria, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, nấm và mốc trong 1 g (ml)

nguyên liệu có nguồn gốc

thực vật, động vật không

thể xử lí theo qui trình làm

giảm lượng vi khuẩn

trong 1 g (ml) Nấm và mốc không quá 500 trong 1 g (ml) Tống số Enterobacteria không quá 500 trong1 g (ml)

Không được có Salmonella trong 10 g(ml) Mẫu không có Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus trong 1g(ml)

Huyền sâm là loài cây thân thảo, sống nhiều năm, cao 1,5 - 2 m Rễ củ hình trụ, dài 5 - 12 cm, bên dưới thường phân nhánh, vỏ ngoài màu vàng xám Thân thẳng, hình, vuông có rãnh dọc, khi non có lông tơ, về sau thân nhẵn hoặc có ít lông tuyến Lá mọc đối có hình trứng hoặc hình mũi mác, dài 7 - 20 cm, rộng 3,5

- 12 cm, gốc hình nêm, đầu nhọn vát, rìa lá có răng cưa, mặt trên lá màu lục sẫm, mặt dưới xanh nhạt có ít lông Cuống lá dài 2 – 4 cm (hình 1.1) (Đỗ Tất Lợi, 2003; Viện Dược Liệu, 2004)

Cụm hoa mọc ở ngọn thân và kẽ lá đầu cành thành chùy to gồm nhiều xim tán; hoa màu vàng nâu hoặc tím đỏ Ống tràng hoa hình chén, cánh hình môi, chia làm 5 thùy, đài có 5 răng hàn liền, mép mỏng, mặt ngoài có lông tuyến, tràng hình chén có môi trên dài hơn môi dưới; nhị 4, 2 dài, 2 ngắn thoái hóa gần như hình tròn Quả bế đôi hình trứng, dài 8 – 9cm Hạt nhỏ bé, nhiều hạt màu đen Rễ củ to mập nhưng hơi cong, dài độ 10-20cm, giữa rễ củ phình lớn, hai đầu

củ hơi thon, nói chung mỗi gốc có 4 - 5 củ mọc thành chùm, lúc tươi vỏ màu trắng hoặc vàng nhạt, sau khi chế biến vỏ ngoài màu nâu nhạt bên trong màu đen, mềm dẻo (Ban Đào Tạo Huấn Luyện Cán Bộ Dược Liệu Trung Quốc, 1965), (Viện Dược Liệu, 2004)

Cây ra hoa mùa hè, mùa quả hoa quả: tháng 9 - 10

Hình 2.1 Cây và rễ (củ) huyền sâm

2.2.2 Nguồn gốc, phân bố và sinh thái

Chi Scrophularia L gồm các đại diện là cây thảo hay cây bụi, phân bố ở vùng

ôn đới ấm và cận nhiệt đới Ở Trung Quốc có một số loài được dùng làm thuốc như huyền sâm – S.ningpoensis Hemsl.; S.kakudensis Franch và S.oldhami Oliv

Huyền sâm sản xuất ở tỉnh Tứ Xuyên gọi là “Xuyên huyền sâm” hay “Thổ Huyền sâm” thường trồng vào đầu mùa hạ, đến mùa thu sang năm thì thu hoạch Chủ yếu phân bố ở Đạt Huyện, Ôn Giang, Vạn Huyện, Bồi Lăng Huyền sâm sản xuất ở tỉnh Triết Giang thuộc loại Quảng huyền sâm, trồng vào đầu năm thu hoạch vào cuối năm, phân bố ở các huyện Đông Dương, Tiêu cư Loại này sản xuất ở các tỉnh Sơn Đông, Hồ Bắc, Giang Tây, Thiểm Tây, Quý Châu, Cát Lâm, Liêu Ninh Ở các tỉnh trên ngoài việc trồng trọt ra, còn có khai thác cây mọc hoang dại

Huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl) trồng tại Việt nam được nhập từ Trung Quốc từ những năm 60 Lúc đầu cây được trồng thử ở Sa pa (Lào Cai); sau chuyển xuống Tam Đảo (Vĩnh Phúc), Sìn Hồ (Lai Châu), Phó Bảng - Đồng Văn (Hà Giang); Pà Cò - Mai Châu (Hòa Bình), Bá Thước (Thanh Hóa)… cây trồng ở Việt Nam tỏ ra thích nghi với khí hậu của vùng nhiệt đới núi cao từ

1000 đến 1700 m Huyền Sâm sinh trưởng và phát triển thích hợp nhất ở nhiệt độ

15 – 180C, ở nhiệt độ 00C và trên 340C cây sống được nhưng phát triển kém, lượng mưa thích hợp là từ 1500 – 1800 mm/năm, độ ẩm 80% Cây sinh trưởng và phát triển mạnh trong vụ xuân hè, ra hoa quả nhiều Hạt phát tán xuống đất có khả năng tái sinh khỏe Ở các vùng trước kia trồng nhiều Huyền sâm như Pà Cò, Phó Bảng, Tam Đảo… cây đã trở nên hoang dại hóa, mọc lẫn với nhiều loại cây

cỏ khác ở ven rừng, ven đường đi và ở bờ mương rẫy Cây ưa đất pha cát, màu

mỡ, cao ráo, thoát nước, đất phù sa, đất rừng mới khai phá, không nên trồng ở đất thịt nặng, thoát nước kém, đất nhiều sỏi đá Đất trung tính (pH = 6,5 – 7) thích hợp cho Huyền Sâm sinh trưởng và phát triển tốt (Viện Dược Liệu, 2004)

Dược liệu huyền sâm

Theo dược điển Việt Nam 4, dược liệu huyền sâm là rễ đã phơi hay sấy khô của cây Huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.), họ Hoa mõm chó (Scrophulariaceae) Thu hái khi thân và lá đã tàn héo, loại bỏ gốc thân và rễ con,

rũ sạch đất cát, đem phơi qua, xếp thành đống trong 3 - 6 ngày, rồi phơi hay sấy khô (Viện Dược Liệu, 2004) (hình 2.2)

Hình 2.2 Dược liệu huyền sâm tươi và khô

Mô tả

Rễ củ nguyên, phần trên hơi phình to, phần dưới thuôn nhỏ dần, một số rễ hơi cong, dài 3 - 15 cm Mặt ngoài màu nâu đen, có nếp nhăn và rãnh lộn xộn, nhiều lỗ vỏ nằm ngang và nhiều vết tích của rễ con hay đoạn rễ nhỏ còn sót lại Mặt cắt ngang màu đen, phía ngoài cùng có lớp bần mỏng, phía trong có nhiều vân tỏa ra (bó libe gỗ) Thể chất mềm, hơi dẻo, mùi đặc biệt giống như mùi đường cháy, vị hơi ngọt và hơi đắng

Bột

Màu nâu đen, vị hơi mặn Soi kính hiển vi thấy: Nhiều tế bào mô cứng riêng lẻ hay tụ thành đám, đa số hình thoi Mạch gỗ hầu hết là mạch vạch Mảnh bần gồm những tế bào nhiều cạnh đều đặn có thành dày Mảnh mô mềm Tinh bột nhỏ, hình tròn nằm rải rác (Bộ Y Tế, 2002)

2.2.3 Thành phần hóa học và công dụng của vị huyền sâm

Thành phần hóa học

Rễ huyền sâm có scrophularin, harpagide, harpagoside, ningpogenin, O -

Me catalpol, angorosid C

Còn có chất I, chất II; 1 chất có cấu trúc tương tự acetoside, angoroside A;

2 - (3 - hydroxy - 4 methoxyphenyl), ethyl 1- O - α - L rhamnopyranosyl (1→6)

- feruloyl (1→4) - α - L rhamnopyranosyl (1→3) β - D - glycopyranoside; acid cinamic

Cinamic acid

Hình 2.3 Cấu trúc hóa học của một số chất chính trong huyền sâm

Nguồn: Viện Dược liệu (2004))

Ngoài ra một số chất khác cũng có trong rễ như alcaloid, đường, steroid, acid amin (L asparagin), acid béo (acid oleic, acid stearic), tinh dầu (vết), caroten, 17 nguyên tố vi lượng

Huyền sâm còn có tác dụng tốt đối với viêm họng mạn tính Huyền sâm phối hợp với sâm cau có tác dụng rõ rệt với viêm họng đỏ cấp tính

Một chế phẩm từ huyền sâm, nhọ nồi và sài đất đã được áp dụng điều trị bệnh nhân cap huyết áp và thấy chế phẩm này có tác dụng an thần, hạ áp và lợi tiểu Tính vị công năng

Huyền sâm có vị đắng ngọt, hơi mặn và tính mát, vào hai kinh phế, thận có tác dụng tư âm, giáng hỏa, sinh tân dịch, chống khô khát, lương huyết, giải độc, nhuận táo, hoạt trường

Công dụng: huyền sâm được dung làm thuốc mạch tim, giảm sốt, chống viêm trong điều trị các chứng sốt nóng, khát nước, phát ban, miệng lưỡi nở loét, viêm họng, viêm amidan, ho khan, táo bón, mẩn ngứa, mụn nhọt Ngày dùng 4 -

12 g dạng sắc hoặc cốm ngậm

Trong y học Trung Quốc, Huyền sâm được dung làm thuốc chữa sốt, chống viêm, làm mạnh cơ tim và được chỉ định trong các bệnh viêm họng, viêm thanh quản, viêm miệng, viêm lợi, viêm kết mạc Dùng ngoài huyền sâm có tác dụng tốt với bệnh tạng tuyết dịch (diathèse exsudative) Liều một lần là 5 – 15 g, dạng thuốc sắc Tại chỗ, dùng lá nghiền nhỏ để lau và đắp

Theo kết quả nghiên cứu dược lý hiện đại, Huyền sâm được chứng minh có các tác dụng sau: Có tác dụng cường tim nhẹ; tác dụng an thần, chống co giật, giải nhiệt; tác dụng hạ đường huyết; Có tác dụng kháng khuẩn, trung hòa độc tố Bạch hầu (in vitro); Cồn chiết xuất Huyền sâm có tác dụng làm tăng lưu lượng máu của mạch vành làm cho sức chịu đựng trạng thái thiếu oxy của tim tốt hơn

và tác dụng giãn mạch hạ áp (Viện Dược Liệu, 2004)

2.2.4 Chế biến huyền sâm

Dược liệu Huyền sâm có tên khoa học Radix Scrophulariae Dược điển Việt Nam IV trong chuyên luận huyền sâm có giới thiệu cách chế biến huyền sâm:

Đào lấy rễ, rửa sạch, cắt bỏ rễ con, cắt đầu chồi thừa 3 mm, tách riêng từng

rễ, phân loại to nhỏ Phơi hoặc sấy ở 50 - 60oC đến gần khô Đem ủ 5 - 10 ngày đến khi trong ruột có màu đen hoặc nâu đen, rồi tiếp tục phơi đến khô

Cách ủ: Dược liệu sau khi phơi gần khô đem tãi ra trong nong nia thành một lớp dày chừng 15 cm, để chỗ mát, hàng ngày đảo vài lần, có thể đậy lên trên bằng một lớp rơm mỏng hay bằng một cái nong hoặc nia khác Trong khi ủ phải đảo luôn, không để dày quá, không đậy kín quá dễ bị hấp hơi, thối hỏng

Khi dùng rửa sạch, ủ mềm, thái lát phơi khô

Phương pháp chế biến Huyền sâm Triết Giang: sau khi thu hoạch về, đem phơi nắng ngay, lúc phơi khô được một nửa, đem chất đống 2-3 ngày, sau đó lại đem phơi, qua độ 40 ngày thì khô kiệt, nếu trường hợp bị mưa thì cũng có thể dùng lửa sấy Dù là sấy hay phơi khô, điền cần phải chú ý không được làm cho rỗng ruột Nếu phải dùng lửa sấy thì cần phải chú ý đặc biệt đến lửa sấy, nhất thiết không được quá to lửa, để tránh khô giòn rỗng ruột

Phương pháp sơ chế Thổ huyền sâm: sau khi thu hoạch đem đi rửa ngay đưa lên gìan sấy, sấy cho tới lúc khô được một nửa thì đem ra chất đống 2 - 3 ngày, bên trên có phủ kín cỏ rạ làm cho ruột củ biến thành màu đen, nước bên trong thấm thấu ra ngoài, lại đem ra sấy, sấy cho tới lúc khô 9 phần, bỏ vào trong xảo, lắc đi lắc lại cho củ rễ và đất cát rơi xuống hết, sau đó phân loại đem bán Đến nay chưa thấy nhiều nghiên cứu trong nước về thu hái và sơ chế dược liệu huyền sâm sau thu hoạch

2.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ THU HOẠCH, SƠ CHẾ VÀ CHẾ BIẾN DƯỢC LIỆU SAU THU HOẠCH

2.3.1 Các nghiên cứu trong nước

Lê Xuân Ái và cộng sự (Lê Xuân Ái và cs., 1997) đã nghiên cứu chế biến thử nghiệm đương quy sau thu hoạch theo phương pháp Nhật Bản Nghiên cứu nhằm so sánh chất lượng dược liệu đương quy Nhật Bản di thực chế biến bằng phương pháp của Nhật Bản với đương quy của Trung Quốc đang lưu hành Phương pháp chế biến theo các chuyên gia Nhật Bản gồm các bước:

Bước 1: Củ đương quy sau khi thu hoạch được bó thành từng bó nhỏ treo lên chỗ râm mát Để khô dần đến độ ẩm 20 – 3-% thì bắt đầu chế

Bước 2: Rửa lăn

Rũ sạch đất, đổ quy vào thùng, đổ ngập nước nóng 600C ngâm trong khoảng 5 giờ thì vớt ra rửa từng củ, dùng tay lăn quy trên ván để trong nước nóng đủ 100 lần

Bước 3: Phơi khô

Treo ở nơi râm mát đến khô

Kết quả đánh giá dược liệu: kết quả so sánh 2 mẫu quy chế biến khác nhau

Bảng 2.2 Mùi, vị độ mềm của các mẫu đương quy chế biến khác nhau

Nguồn: Lê Xuân Ái và cs (1997)

Kết quả định lượng chất chiết trong cồn, nước và tinh dầu của hai mẫu

đương quy Nhật Bản chế biến khác nhau được trình bày ở bảng 2.3

Bảng 2.3 Hàm lượng chất tan và tinh dầu trong đương quy

chế biến khác nhau

Mẫu đương quy

Hàm lượng (% so với khối lượng khô tuyệt đối) Chất tan trong

Chế theo phương pháp

Nguồn: Lê Xuân Ái và cs (1997)

Qua đó nhận xét phương pháp chế biến đương quy theo phương pháp Nhật

Bản cho đương quy có độ mềm tương đối, lượng tinh dầu khá cao, đáp ứng yêu

cầu làm thuốc (Lê Xuân Ái và cs., 1998)

Liên quan đến sơ chế và bảo quản dược liệu đương quy, năm 1996, Phạm

Văn Ý và cộng sự nghiên cứu các biện pháp sơ chế và bảo quản rễ củ đương quy

với các nội dung:

Phương pháp sơ chế: Rễ củ sau khi thu hoạch được phơi héo trong lán

thoáng gió 1 -2 ngày, rửa sạch đất, để ráo nước và chia làm 3 lô, mỗi lô được

chia làm 4 lần nhắc lại và xử lý theo 3 phương pháp:

Lô I: sấy bằng diêm sinh, sau đó phơi đến khô

Lô II: sấy ở 500C trong tủ đến khô

Lô III: Sấy bằng củi đến khô

Phương pháp bảo quản: A – kho có điều hòa nhiệt độ

B – Kho thường

Trong đó bảo quản với 2 loại bao bì: a – bao polyetylen

b – bao tải gai

Kết quả ảnh hưởng của sơ chế và bảo quản đến chất lượng đương quy như sau: Bảng 2.4 Ảnh hưởng của sơ chế và bảo quản đến chất lượng dược liệu

đương quy Nhật Bản

Sơ

chế

Hàm lượng (% so với khối lượng khô tuyệt đối)

I – sấy bằng diêm sinh; II – sấy ở 50 0 C; III – sấy bằng củi; a – bao polyetylen;

b – bao tải gai; A – kho có điều hòa nhiệt độ; B – kho không có điều hòa nhiệt độ

Kết quả cho thấy phương pháp sấy bằng củi cho dược liệu có chất lượng cao

và ổn định sau 8 tháng bảo quản ở kho lạnh cũng như kho thường, bảo quản trong bao polyetylen cũng như trong bao tải gai Phương pháp sấy bằng củi có tác dụng hạn chế sự phát triển của nấm mốc và mọt Dược liệu sấy bằng diêm sinh có chất lượng thấp nhất Về mặt hình thức dược liệu sấy bằng diêm sinh cứng và hầu như không còn mùi thơm Trong khi đó, sấy bằng củi dược liệu mềm và có mùi thơm đặc trưng của đương quy Nhật Bản Phương pháp sấy bằng củi được áp dụng ở Trung Quốc để sấy đương quy Trung Quốc (Phạm Văn Ý và cs., 1996)

Nguyễn Bá Hoạt và cs (2001) đã nghiên cứu xác định thời kỳ thu hoạch

và phương pháp sơ chế dược liệu cây lão quan thảo Trong đó nghiên cứu xác

định thời kỳ thu hoạch theo 4 giai đoạn: sinh trưởng mạnh (trước khi ra hoa), bắt đầu ra hoa, ra hoa rộ và hoa tàn Kết quả đã xác định được thời kỳ thu hoạch tối ưu là lúc cây ra hoa rộ Nghiên cứu các phương pháp sơ chế khác nhau theo các phương pháp: phơi âm can, phơi nắng nhẹ, phơi nắng to và sấy trong tủ sấy

ở các nhiệt độ 400 C, 500 C, 600 C, 700 C và 800 C Kết quả cho thấy các phương pháp sơ chế khác nhau ảnh hưởng rất lớn đến chất lượng và màu sắc dược liệu Tốt nhất là phơi trực tiếp dưới nắng to hoặc sấy ở 500 C (Nguyễn Bá Hoạt và cs., 2001)

Năm 2004, Nguyễn Văn Thuận và cộng sự đã nghiên cứu xây dựng một số quy trình sản xuất dược liệu sạch và chế biến sạch để bào chế một số chế phẩm chất lượng cao Qua đó đã xây dựng được quy trình trồng và quy trình chế biến sạch cho 5 loại dược liệu Đương quy, Bạch chỉ, Ngưu tất, Cúc hoa vàng và Actiso Đề tài cũng đã xây dựng được tiêu chuẩn cơ sở cho 5 loại dược liệu nói trên và xây dựng được phương pháp phân tích các hoạt chất chính cũng như các tác nhân gây hại đến sức khỏe người sử dụng Đây là đề tài đầu tiên xây dựng quy trình trồng và chế biến sạch cho 5 loại dược liệu đầu tiên; là bước khởi đầu cho công tác xây dựng quy trình trồng, chế biến và kiểm nghiệm chất lượng sạch cho các loại dược liệu Việt Nam (Nguyễn Văn Thuận, 2004)

Đỗ Minh Trường và Nguyễn Thị Bích Thu năm 2009 đã tiến hành đề tài:

“Nghiên cứu sự tích lũy và biến động hàm lượng sinensitin trong cây Râu mèo qua một số giai đoạn phát triển” Trong đó các mẫu Râu mèo được thu hái vào ba thời điểm: trước ra hoa, hoa nở rộ và sau nở hoa Định lượng sinensitin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và kết luận:

Trong cây Râu mèo lá là cơ quan tích lũy nhiều sinensitin nhất trong tất cả các giai đoạn phát triển

Biến động hàm lượng sinensitin theo quy luật: hàm lượng sinensitin tăng dần từ giai đoạn trước ra hoa đến giai đoạn nở hoa và đạt cực đại ở thời điểm hoa

nở toàn bộ; sau đó hàm lượng sinensitin giảm nhanh ở giai đoạn sau nở hoa (Đỗ Minh Trường và Nguyễn Thị Bích Thu, 2009)

Nguyễn Thị Nguyệt năm 2014 đã nghiên cứu công nghệ đặc chế và bảo quản dược liệu Hoài sơn sau thu hoạch Trong đó nghiên cứu công nghệ bảo quản dược liệu Hoài sơn và xác định công nghệ đặc chế dược liệu Hoài sơn bằng cách xử lý nguyên liệu Hoài sơn tiền sấy bằng phương pháp sunfit và xác định

chế độ xủ lý nhớt của nguyên liệu bằng dung dịch Kali alum KAL(SO4)2 Nghiên cứu đã xác định được:

Xác định được công nghệ sơ đặc chế dược liệu hoài sơn bằng dung dịch KAL(SO4)2 với nồng độ 10g/lít trong 10 giờ và thời gian xử lý dược liệu Hoài sơn tiền sấy bằng dung dịch NaHSO3 là 6 g/lít trong 10 giờ

Xác định được độ ẩm bảo quản ở mức an toàn là 12%, tương ứng hoạt độ nước 0,5 ÷ 0,6 ở điều kiện đẳng nhiệt với nhiệt độ 250 C và độ ẩm môi trường 46 – 59%

Đã xác định được chế độ bảo quản Hoài sơn thích hợp nhất trong môi trường điều biến khí cabonic với nồng độ từ 70 – 80%

Đã xây dựng được quy trình công nghệ đặc chế và bảo quản dược liệu Hoài sơn sau thu hoạch ở quy mô phòng thí nghiệm (Nguyễn Thị Nguyệt, 2014) Năm 2014 Nguyễn Thị Bình (Viện Dược liệu) đã nghiên cứu ảnh hưởng của thời vụ trồng và thời điểm thu hoạch đến năng suất và chất lượng dược liệu cát cánh (Platycodon grandiflorum (Jacq)) nhằm xác định thời vụ trồng và thời điểm thu hoạch thích hợp để sản xuất dược liệu cát cánh Trong đó đã nghiên cứu các thời vụ trồng 15 tháng 10, 15 tháng 11 và 15 tháng 12 và các thời điểm thu hoạch là sau trồng 7, 8, 9 và 10 tháng Qua đó đã kết luận thời vụ trồng vào tháng 10 là phù hợp nhất và thu hoạch sau 8 tháng trồng cho năng suất và chất lượng (hàm lượng platycodin) cao nhất (Nguyễn Thị Bình, 2014)

Liên quan đến khả năng kháng oxi hóa của dược liệu khi sơ chế khác nhau, năm 2009, Lê Minh Hoàng và cộng sự đã nghiên cứu ảnh hưởng của quá trình sơ chế đến hoạt tính chống oxi hóa của phấn hoa Kết quả đã chỉ rõ quá trình sơ chế

và bảo quản có ảnh hưởng rất lớn đến chất lượng của phấn hoa, nhất là những chất có hoạt tính chống ôxy hóa Do vậy, việc xác định hoạt tính chống oxy hóa

đã được lựa chọn để làm cơ sở đánh giá chất lượng của các mẫu phấn hoa sau khi

đã được sơ chế theo các phương pháp khác nhau

Các mẫu phấn sau khi được phơi khô, sấy thông thường, đông khô và sấy chân không, đã được xác định hoạt tính chống oxy hóa bằng phương pháp DPPH Kết quả cho thấy quá trình sơ chế phấn hoa có ảnh hưởng rất lớn đến hoạt tính chống oxy hóa của phấn hoa

Hoạt tính chống oxi hóa của các mẫu phấn hoa phơi nắng, sấy thủ công và

Các mẫu phấn hoa được sấy chân không ở các nhiệt độ từ 37 – 46 0C có hoạt tính chống oxi hóa lần lượt là: 64,06% (370C), 58,46% (400C), 50% (430C), 48,32 % (46 0C) (Lê Minh Hoàng và cs., 2009)

Năm 2014, Nguyễn Quang Vinh nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ sấy đến hàm lượng polyphenol tổng số và khả năng kháng oxi hóa của đài hoa bụp giấm (Hibicus sabdariffa L.) Trong nghiên cứu này tác giả đã tiến hành khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ sấy 600C, 800C, 1000C và 1200C đến hàm lượng polyphenol tổng số và khả năng kháng oxi hóa (gồm khả năng khử và khả năng dập tắt gốc tự

do DPPH) của đài hoa bụp giấm trồng tại tỉnh Đắk Lắk Kết quả cho thấy, hàm lượng polyphenol tổng số và khả năng kháng oxy hóa của đài hoa bụp giấm sấy ở các nhiệt độ khác nhau là không giống nhau khi nhiệt độ sấy tăng thì thời gian sấy càng giảm Ở nhiệt độ 600C thì thời gian sấy rất dài 22 giờ nhưng khi tăng lên

1200C thì thời gian chỉ còn lại 3.5 giờ Hàm lượng polyphenol tổng số của đài hoa bụp giấm ở cácnhiệt độ sấy khác nhau là khác nhau Hàm lượng polyphenol tổng

số cao nhất được tìm thấy trong mẫu sấy ở nhiệt độ 800C là 25.196 mg GAE/g Khi nhiệt độ sấy tăng từ 600C đến 800C thì hàm lượng polyphenol tổng số cũng tăng, cụ thể là từ 21.073 mg GAE/g đến 25.196 mg GAE/g Tuy nhiên, khi nhiệt

độ tăng quá cao thì hàm lượng polyphenol lại giảm như ở 1000C và 1200C lần lượt là 18.461 mg GAE/g và 16.845 mg GAE/g Điều này cho thấy hàm lượng polyphenol tổng số của đài hoa bụp giấm phụ thuộc vào nhiệt độ sấy Trong giới hạn nào đó nhiệt độ sấy tăng thì sự tổn thất hàm lượng polyphenol tổng số giảm nhưng nhiệt độ sấy quá thấp thì thời gian sấy kéo dài dẫn đến sự oxi hóa các hợp chất polyphenol bởi không khí xảy ra nhanh hơn do đó tổn thất polyphenol tăng Bên cạnh đó, khi nhiệt độ sấy quá cao hàm lượng polyphenol tổng số cũng giảm có thể do sự biến đổi của các hợp chất polyphenol dưới tác động nhiệt Cũng tương tự trong các mẫu khảo sát thì mẫu đài hoa sấy ở 800C có khả năng khử cao nhất (đánh giá thông qua độ hấp thu tại bước sóng 700 nm) dao động khoảng từ 1.252 đến 1.510 ở nồng độ 0.5 mg/ml đến 2 mg/ml Trong khi đó, ở cùng nồng độ này, ở nhiệt độ sấy 600C, 1000C và 1200C khả năng khử tương ứng dao động từ 1.211 đến 1.389, 1.244 đến 1.447 và 1.214 đến 1.414 Kết quả này có thể cho thấy rằng các hợp chất polyphenol góp phần đáng kể vào khả năng chống oxy hóa của đài hoa bụp giấm (Nguyễn Quang Vinh và cs., 2014)

Cũng trong năm 2014, Lê Trung Hiếu và cộng sự bước đầu đánh giá khả

đã được sử dụng làm dược liệu theo truyền thống nhưng có nguồn gốc khác nhau, gồm các mẫu nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) được nuôi trồng tại hợp tác xã Phú Lương, hợp tác xã Phú Đa, tỉnh Thừa Thiên Huế, mẫu nấm Lim (Ganoderma lucidum) từ thiên nhiên được thu hái tại Quảng Bình; ngoài ra, một mẫu nấm Linh chi nuôi trồng mua từ Jeju, Hàn quốc được dùng để so sánh Mẫu nấm được sử dụng làm thực phẩm rất phổ biến, theo dân gian là được dùng trong các vị thuốc nhưng hoàn toàn chưa được nghiên cứu: nấm Tràm (Tylopilus Felleus) được thu hái tại huyện Phú Lộc, tỉnh Thừa Thiên Huế Mẫu lá của loài thực vật đang được các nhà khoa học trên thế giới đặc biệt quan tâm trong thời gian gần đây do có nhiều hoạt tính sinh học kỳ diệu, kể cả hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư: Mãng cầu xiêm (Annona muricata) được trồng tại huyện Tân Đông Phú, tỉnh Tiền Giang, miền Tây Nam bộ

Lực kháng oxy hoá tổng của các mẫu khảo sát được nghiên cứu thông qua

mô hình phospho molybdenum Lấy 0,3 mL dịch chiết thêm vào 3 mL dung dịch thuốc thử (0,6 M H2SO4, 28 mM NaH2PO4 và 4 mM (NH4)2MoO4), đậy kín và ủ

950C trong 90 phút Sau đó, mẫu được làm lạnh về nhiệt độ phòng Độ hấp thụ của dung dịch sau phản ứng được đo ở bước sóng 695 nm Trong mẫu trắng, dung dịch cần phân tích được thay bằng nước cất Lực kháng oxy hoá tổng được biểu diễn theo độ hấp thụ của mẫu Acid gallic được sử dụng làm chất so sánh

Mô hình phospho molybdenum là quá trình khử Mo (VI) về Mo (V) trong môi trường acid, đây là quá trình nhận electron, vì vậy, lực kháng oxy hoá được đánh giá bằng khả năng cho electron Theo mô hình này, các mẫu nấm Linh chi

và lá Mãng cầu xiêm có khả năng kháng oxy hoá theo cách cho electron cao, mẫu nấm Tràm có khả năng cho electron thấp Để xác định khả năng kháng oxy hoá bằng phương thức nhường hydro của các mẫu nguyên liệu, cần phải đánh giá thêm theo một mô hình khác

Mẫu nấm Linh chi Phú Lương, Thừa Thiên Huế đã được chúng tôi đánh giá hoạt tính kháng oxy hoá theo mô hình thử nghiệm in vitro trên tế bào gan chuột Dùng CCl4 là chất gây tổn thương gan kinh điển, khi vào cơ thể, CCl4 biến đổi thành các gốc tự do thúc đẩy quá trình peroxy hoá lipid (POL) của màng tế bào gan, tạo ra sản phẩm độc cho tế bào gan, biểu hiện làm tăng MDA (malonyl dialdehyd) Định lượng MDA theo phương pháp Wasowich Mức độ hấp thụ màu của dung dịch đo tỷ lệ thuận với nồng độ MDA Hàm lượng MDA được tính

Liều thử 484 mg cao methanol/kg thể trọng chuột, thể hiện tác dụng kháng oxy hoá ức chế 19,94% sự tăng hàm lượng MDA so với chứng bệnh lý (có ý nghĩa thống kê với P < 0,05) Phương pháp in vitro trên tế bào gan là tổng quát hơn nhưng quá tốn kém so với các phương pháp hóa học như phospho molybdenum,

vì vậy khi sàng lọc hàng loạt mẫu thì phương pháp hóa học vẫn được ưu tiên lựa chọn Các kết quả trên chứng tỏ rằng các mẫu nấm Linh chi làm dược liệu đều có khả năng kháng oxy hóa tốt, trong đó đặc biệt đáng chú ý là mẫu nấm Lim thiên nhiên từ Quảng Bình Nấm Tràm có khả năng kháng oxy hóa thấp hơn nấm dược liệu nhưng tương đương với một số loại thực phẩm khác đã được công bố là có tính kháng oxy hóa, vì vậy đây là một loại thực phẩm tốt Đặc biệt, mẫu lá Mãng cầu xiêm thể hiện hoạt tính kháng oxy hóa rất cao, cao hơn so với các loài Annona khác: loại (hồng, hồng đậm và trắng) của loài Annona diversifolia và trong (lá, hạt, vỏ) của loài Asimina triloba

2.3.2 Các nghiên cứu ngoài nước

Dong Fu-rong (2007), đã nghiên cứu Ảnh hưởng của các phương pháp làm khô khác nhau tới thành phần Imperatorin và Isoimperatorin trong dược liệu bạch chỉ Qua đó kết luận phương pháp làm khô lạnh đông cho sự giảm hàm lượng Imperatorin và Isoimperatorin là thấp nhất và phương pháp này cũng vượt trội hơn các phương pháp khác

Fang Xue-min (2012), đã nghiên cứu sự thay đổi thành phần Polysaccharides trong rễ huyền sâm sống và chế biến Kết quả cho thấy sau khi chế biến, thành phần các polysaccharides giảm đáng kể, từ 9,74% xuống 7,89% (giảm 19,02%)

Để đánh giá ảnh hưởng kháng viêm và chống oxy hóa của các chất chiết xuất của Scrophularia ningpoensis Hemsl, Zeng Huawu và cộng sự tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của kháng viêm và chống oxi hóa của dịch chiết huyền sâm Phương pháp: (1) Carrageenan và rắn hổ mang nọc độc gây ra chuột phù nề chân; (2) Fe 2+ / cystine gây ra chuột microsome gan lipid peroxide và (3) 2,2 'azobis (2 amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) gây oxy hóa tan huyết đã được sử dụng để nghiên cứu ảnh hưởng của các chất chiết xuất từ Scrophularia ningpoensis Kết quả: Các chiết thô của Scrophularia ningpoensis có tác dụng kháng viêm mạnh hơn trong cơ thể Tại một liều tương ứng với số lượng chứa trong các chất chiết xuất dầu thô, các glycosides phenylpropanoid có tác dụng

chống oxy hóa mạnh, trong khi các glycosid iridoid Scrophularia ningpoensis có những hoạt động chống oxy hóa thấp hơn Kết luận: các hoạt động kháng viêm của Scrophularia ningpoensis dường như có một số mối quan hệ với các tác dụng chống oxy hóa của glycosides phenylpropanoid (Zeng Huawu et al., 1999) 2.4 LUẬN GIẢI VÀ ĐỀ XUẤT NHỮNG VẤN ĐỀ CẦN NGHIÊN CỨU Trong chiến lược phát triển ngành dược ở Việt Nam, dược liệu chiếm vị trí quan trọng Dược liệu (chủ yếu là cây thuốc) được xem là nền tảng có trách nhiệm cung ứng nguyên liệu làm thuốc phục vụ nhu cầu sử dụng trong nước, đồng thời là nguồn quan trọng cung cấp các mặt hàng xuất khẩu và cây thuốc được coi là cây công nghiệp có giá trị cao (Nguyễn Bá Hoạt, 2000)

Từ tổng quan tài liệu và tổng hợp thông tin đã nêu trên cho thấy công nghệ thu hoạch và sau thu hoạch dược liệu huyền sâm theo kinh nghiệm của y học cổ truyền Việt Nam và Trung Quốc đã được đúc kết từ lâu đời

Cho đến nay chưa tìm thấy nghiên cứu nào cụ thể và đầy đủ về công tác thu hoạch, sơ chế và chế biến của Việt Nam cho cây huyền sâm

Do đó cách tiếp cận nghiên cứu chung của đề tài là dựa trên tính kế thừa và hoàn thiện

Kế thừa những phương pháp từ thu hoạch đến sơ chế dược liệu huyền sâm theo y học cổ truyền, áp dụng rồi từ đó hoàn thiện

Đã có một số nghiên cứu về xác định thời điểm thu hoạch của dược liệu, tuy nhiên các nghiên cứu đa phần xác định thời điểm thu hoạch để cho năng xuất

là cao nhất nhưng chưa đánh giá tốt được chất lượng của dược liệu; trong khi với dược liệu thì chất lượng được coi là chỉ tiêu quan trọng Do đó khi xác định thời điểm thu hoạch dược liệu huyền sâm cần đánh giá cả yếu tố năng suất và yếu tố chất lượng của dược liệu

Với phương pháp ủ dược liệu huyền sâm thì đây là một trong những khâu tạo nên chất lượng đặc trưng của huyền sâm (huyền là đen, huyền sâm được ví như sâm đen Mầu đen của huyền sâm có được sau quá trình ủ) Đồng thời cũng tạo ra hiệu quả của dược liệu khi được phối hợp trong các bài thuốc

y học cổ truyền

PHẦN 3 NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 NGUYÊN VẬT LIỆU

Dược liệu huyền sâm (Scrophularia ningpoensis Hemsl.) được trồng và thu hoạch tại Sa Pa – Lào Cai

Thời điểm thu hoạch vào tháng 9 năm 2015

Các ô thí nghiệm được trồng với diện tích 20 m2/ô

Phương pháp sơ chế nguyên liệu được thực hiện chung cho tất cả các thực nghiệm, gồm phân loại sơ bộ theo kích thước, rửa sơ bộ bằng nước và để ráo 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

3.2.1 Nghiên cứu thời điểm thu hoạch dược liệu huyền sâm

- Nghiên cứu ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch tới năng suất và chất lượng dược liệu huyền sâm

3.2.2 Nghiên cứu các điều kiện công nghệ sơ chế dược liệu huyền sâm

- Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

- Ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu của huyền sâm ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

- Ảnh hưởng của thời gian ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

- Ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sau ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm 3.2.3 Xây dựng được quy trình công nghệ thu hoạch và sơ chế sau thu hoạch dược liệu huyền sâm

3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

(Qua tham khảo các tài liệu về thời gian sinh trưởng và phát triển của cây huyền sâm, chúng tôi lựa chọn 3 thời điểm thu hoạch cách nhau khoảng 20 ngày)

Cây huyền sâm đến giai đoạn thu hoạch đạt chiều cao cây trung bình là 175

cm, số cành cấp 1 đạt 7 – 8 cành, đường kính thân trung bình 1,85 cm

Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch tới năng suất

và chất lượng dược liệu huyền sâm

Công thức 1.1: Thu hoạch khi cây bắt đầu ngừng sinh trưởng và chuyển sang giai đoạn già hóa (Cây ngừng sinh trưởng, khoảng 10% lá chuyển úa, vàng)

Công thức 1.2: Thu hoạch khi cây bắt đầu chuyển sang giai đoạn tàn lụi (khoảng trên 50% lá chuyển úa, vàng)

Công thức 1.3: Thu hoạch khi cây đã tàn lụi hoàn toàn (trên 90% lá chuyển

úa vàng, lụi)

Để đánh giá năng suất và chất lượng dược liệu huyền sâm ở các thời vụ, chúng tôi tiến hành thu hoạch mỗi thời vụ ngẫu nhiên 3 ô thí nghiệm trồng huyền sâm, mỗi ô có diện tích 20m2; đánh giá các chỉ tiêu:

Chỉ tiêu năng suất:

- Năng suất cá thể (NSCT) (g/cây)

- Năng suất lý thuyết (NSLT) = NSCT x Mật độ x 10.000 m2 (kg/ha)

- Năng suất thực thu (kg/ha)

Chỉ tiêu chất lượng:

- Xác định hoạt tính chống oxi hóa

- Hàm lượng acid cinnamic (% chất khô)

Nội dung 2: nghiên cứu các điều kiện công nghệ sơ chế dược liệu huyền sâm Quá trình sơ chế dược liệu huyền sâm theo sơ đồ công nghệ (hình 3.1)

Hình 3.1 Sơ đồ quá trình sơ chế dược liệu huyền sâm sau thu hoạch

Nguồn: Ban Đào Tạo Huấn Luyện Cán Bộ Dược Liệu Trung Quốc (1965))

Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ sấy sơ bộ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

Theo y học cổ truyền dược liệu huyền sâm có thể phơi hay sấy khô, còn trong dược điển Việt Nam thì huyền sâm phơi hoặc sấy ở 50 – 60 0C đến gần khô Đem ủ 5 - 10 ngày đến khi trong ruột có màu đen hoặc nâu đen, rồi tiếp tục phơi đến khô Dựa vào đó chúng tôi khảo sát các chế độ phơi sấy

Công thức 2.1: phơi nắng tự nhiên

Công thức 2.2: sấy ở nhiệt độ 50 0C

Công thức 2.3: sấy ở nhiệt độ 60 0C

Phơi, sấy sơ bộ

Nguyên liệu huyền sâm

Ủ

Phơi, sấy khô

Sản phẩm huyền sâm

Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức được 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại với 3 kg huyền sâm tươi

Chỉ tiêu đánh giá

- Xác định hoạt tính chống oxi hóa

- Định lượng acid cinnamic (% chất khô)

- Chỉ tiêu vi sinh vật (CFU/g)

Huyền sâm sau khi thu hái về được rửa sạch, loại bỏ các tạp chất, loại bỏ các rẽ củ thối, hỏng, dập nát Sau đó sấy ở nhiệt độ xác định ở thí nghiệm trên đến các độ ẩm thí nghiệm là 30%, 40%, 50%, 60%, 70% sau đó tiến hành ủ huyền sâm và sấy khô đến độ ẩm đạt yêu cầu (14 %) Bố trí các công thức như sau:

Công thức 3.1: Không ủ

Công thức 3.2: Ủ huyền sâm ở độ ẩm dược liệu 30%

Công thức 3.3: Ủ huyền sâm ở độ ẩm dược liệu 40%

Công thức 3.4: Ủ huyền sâm ở độ ẩm dược liệu 50%

Công thức 3.5: Ủ huyền sâm ở độ ẩm dược liệu 60%

Công thức 3.6: Ủ huyền sâm ở độ ẩm dược liệu 70%

Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức được 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại với 3 kg huyền sâm tươi Mẫu có chất lượng cao nhất được lựa chọn để tiến hành các bước nghiên cứu tiếp theo

Các chỉ tiêu đánh giá:

- Xác định hoạt tính chống oxi hóa

- Định lượng acid cinnamic (% chất khô)

- Chỉ tiêu vi sinh vật (CFU/g)

- Chỉ tiêu cảm quan

Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm

Huyền sâm sau khi thu hái về được rửa sạch, loại bỏ các tạp chất Sau đó sấy

sơ bộ với các điều kiện xác định ở thí nghiệm trên đến các độ ẩm được xác định ở thí nghiệm trên, sau đó tiến hành ủ huyền sâm trong các khoảng thời gian thí nghiệm

là 5, 6, 7, 8, 9, 10 ngày và tiến hành sấy khô đến độ ẩm đạt yêu cầu (14 %)

Công thức 4.1: Không ủ

Công thức 4.2: Ủ huyền sâm trong 5 ngày

Công thức 4.3: Ủ huyền sâm trong 6 ngày

Công thức 4.4: Ủ huyền sâm trong 7 ngày

Công thức 4.5: Ủ huyền sâm trong 8 ngày

Công thức 4.6: Ủ huyền sâm trong 9 ngày

Công thức 4.7: Ủ huyền sâm trong 10 ngày

Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức được 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại với 3 kg huyền sâm tươi Mẫu có chất lượng cao nhất được lựa chọn để tiến hành các bước nghiên cứu tiếp theo

Các chỉ tiêu đánh giá:

- Xác định hoạt tính chống oxi hóa

- Định lượng acid cinnamic (% chất khô)

- Chỉ tiêu vi sinh vật (CFU/g)

- Chỉ tiêu cảm quan

Thí nghiệm 5: Khảo sát nhiệt độ sấy sau ủ tới chất lượng dược liệu huyền sâm Nguyên liệu huyền sâm sau khi được sơ chế qua các công đoạn với các điều kiện xác định thí nghiệm trên được định lượng 9 kg/công thức với 3 lần nhắc lại, tiến hành theo phơi sấy theo các công thức:

Công thức 5.1: phơi nắng tự nhiên

Công thức 5.2: sấy ở nhiệt độ 60 0C

Công thức 5.3: sấy ở nhiệt độ 70 0C

Công thức 5.4: sấy ở nhiệt độ 80 0C

Chỉ tiêu đánh giá

- Xác định hoạt tính chống oxi hóa

- Định lượng acid cinnamic (% chất khô)

- Chỉ tiêu vi sinh vật (CFU/g)

- Chỉ tiêu cảm quan

3.3.2 Phương pháp xác định các chỉ tiêu

a Phương pháp lấy mẫu: theo TCVN 5451 – 1991

b Xác định độ ẩm: cân điện tử phân tích độ ẩm Axis AGS 100

c Định lượng acid cinamic trong dược liệu: sử dụng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC) theo chuyên luận Scrophulariae Radix trong Dược điển Trung Quốc (The State Pharmacopoeia Commission of Peple's Repubic of China (2010))

Tiến hành

a Chuẩn bị dung dịch chuẩn:

Dung dịch chuẩn acid cinnamic, nồng độ 1,0 mg/ml trong ethanol 50%: cân chính xác khoảng 5 mg chất chuẩn acid cinnamic, hoà tan với chính xác 5 ml dung dịch ethanol 50% trong bình định mức 5 ml

Từ dung dịch này, tiến hành pha loãng với các hệ số pha loãng khác nhau

để thu được các dung dịch xây dựng đường chuẩn Bảo quản ở nhiệt độ khoảng 2 – 8oC, tránh ánh sáng

b Chuẩn bị dung dịch mẫu thử:

Cân chính xác 1 (g) mẫu bột dược liệu, chuyển mẫu vào bình nón dung tích 100,0 ml Thêm 20,0 ml ethanol 50% Chiết siêu âm trong 1 giờ Để lắng trong

30 phút Lọc, thu được dung dịch tiến hành sắc ký

c Điều kiện tiến hành phân tích:

Hệ thống máy HPLC hãng Shimadzu (Nhật Bản)

Cột: pha đảo Ascentis C18 (250×4,6 mm; 5µm)

Hệ dung môi: Methanol (A) : Acid acetic 0.1% (B)

Tốc độ dòng: 0,7 ml/phút

Detector UV-VIS: bước sóng 280 nm

Thể tích mẫu tiêm vào cột: 10 μl

Chương trình rửa giải:

C: là nồng độ acid cinnamic trong dung dịch thử

m: khối lượng của mẫu dược liệu đem phân tích (g)

b: là độ ẩm của mẫu dược liệu (%)

P: độ tinh khiết của acid cinnamic chuẩn

d Xác định hoạt tính chống oxi hóa: dựa trên khả năng khử gốc tự do Diphenylpicrylhydzaryl (DPPH) (Tarbart J và cs., 2009)

* Nguyên tắc: Các chất nghiên cứu có tác dụng chống oxy hóa theo cơ chế dập tắt gốc tự do sẽ làm giảm màu của 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) Dựa trên sự thay đổi về màu sắc đó, xác định được khả năng chống oxy hóa của mẫu thử (thông qua giá trị IC50) Tiến hành theo các bước:

Bước 1 Chuẩn bị hóa chất:

- Chuẩn bị dung dịch DPPH: cân 3,94 mg DPPH đinh mức bằng methanol trong bình định mức 100 ml được dung dịch DPPH có nồng độ 100 µM ( dung dịch làm việc)