KIỂM ĐỊNH MÁY QUANG PHỔ UVVIS

KIỂM ĐỊNH MÁY QUANG PHỔ UV-VIS NỘI DUNG 1.Kiểm tra độ phẳng đường Trên toàn thang bước sóng, độ thăng giáng đường với không khí phải nằm khoảng quy đònh bảng thông số kỹ thuật Ví dụ: - Máy Hitachi U3210 có độ thăng giáng nằm khoảng ± 0.001Abs - Máy Hitachi U2010 có độ thăng giáng nằm khoảng ± 0.002Abs (200950nm) - Máy Hitachi U3000 có độ thăng giáng nằm khoảng ± 0.001Abs - Máy Ultrospec III có độ thăng giáng nằm khoảng ± 0.002Abs Cốc đo: Trong thực hành, mẫu đo dạng dung dòch, nên thông thường hay dùng cốc đo chuẩn hóa Các cốc đo phải đảm bảo yêu cầu sau: - Phần bề mặt hứng chùm tia cho chùm tia qua phải thật phẳng, nhẵn song song với - Hai ánh sáng tới ánh sáng qua phải song song với - Quang lộ cốc đo (Khoảng cách bên hai bề mặt cốc) phải kiểm tra cách nghiêm ngặt Bề dày cốc đo thường 10mm - Cốc đo thường làm : • Thạch anh cho vùng đo tử ngoại (UV) khả kiến (VIS) • Thủy tinh cho vùng đo khả kiến (VIS) Yêu cầu cốc đo phải cho độ hấp thu hay độ thấu quang luôn chứa dung môi hay dung dòch đo cốc Các cốc đo có bề dày 10mm có dung sai cho phép (±0.05mm hay 0.05/10 = 0.005) Kiểm tra bước sóng (Wavelength checking ) • Máy phải đảm bảo độ bước sóng theo tiêu kỹ thuật máy nhà sản xuất đề • Các máy quang phổ UV-VIS hệ mới, đèn D sử dụng nguồn sáng tạo vạch sáng bước sóng 656.1nm để kiểm tra độ bước sóng • Đối với người hiệu chuẩn máy sử dụng kính chuẩn Holmium oxide hay dung dòch Holmium Perchlorat để kiểm tra độ bước sóng Trang 1/9 • Trong trường hợp máy đo điểm chức quét phổ, tiến hành đo độ hấp thu điểm xung quanh cực kiểm tra Kiểm tra độ hấp thu • Kiểm tra độ hấp thu cho biết độ máy (Photometric Accuracy) Máy phải cho thông số đáp ứng với thông số kỹ thuật đề cho máy • Với máy đạt độ theo quy đònh cho phép thực phép đo tuyệt đối Độ phân giải • Thường độ phân giải máy đo độ rộng giải phổ (Bandwidth – BW) đònh Máy có độ phân giải cao máy cho phép chọn BW có giá trò thấp Máy có BW = 1nm có độ phân giải tốt máy có BW = 5nm Điều cho thấy máy quang phổ có BW = 1-2nm cho kết xác máy so màu có BW = 20-50nm • Với số máy tự ghi kiểm tra độ phân giải dựa phổ thấu quang máy sau kiểm tra độ xác bước sóng • Chọn chế độ ghi phổ kiểm tra độ bước sóng • Thay BANDPASS = 2nm ± 15% đạt yêu cầu • Đo độ rộng giải (Peak Width) ứng với giá trò ½ cực đại từ chiếu xuống thang đo bước sóng Độ rộng đỉnh (Peak Width) phải đạt khoảng 2nm ± 15% • Máy phải cho độ phân giải dđ¸p ứng với yêu cầu theo BP98 theo quy đònh bảng thông số kỹ thuật máy Đạo hàm bậc hai (second derivative) • Với máy cho phép thực độ biến đổi từ phổ thông thường sang phổ thông đạo hàm bậc một, bậc hai hay bậc cao phải kiểm tra mối tương quan đạo hàm bậc hai nồng độ chất cần khảo sát: d A  d ( A1%,1cm)   × cd = d λ  d 2λ  Trong đó: A A(1%,1cm) c d : độ hấp thu bước sóng λ : độ hấp thu phần trăm bước sóng λ : nồng độ dung dòch : bề dày cốc đo (d = 1cm) Trang 2/9 Yêu cầu: Theo biểu thức lấy đạo hàm bậc hai chất khảo sát bước sóng phải cho phụ thuộc d 2A / d2λ theo c tuyến tính máy phải lấy đạo hàm bậc hai theo quy đònh Giới hạn ánh sáng lạc • Ánh sáng lạc nguồn gốc gây sai số cho máy nên quy đònh chặt vùng lượng thấp gần 200nm dung dòch có độ hấp thu cao • nh sáng lạc gây sai lệch âm cho đònh luật Lambert Beer đo thang đo có độ hấp thu cao Ánh sáng lạc tạo buồng đo không kín • Yêu cầu máy phải cho giới hạn ánh sáng lạc phạm vi cho phép CÁCH TIẾN HÀNH Độ phẳng đường nền: • Khi tiến hành phép kiểm tra phải đảm bảo máy sưởi ấm (warm up) thời gian qui đònh (khoảng giờ) thay đổi đột ngột nhiệt độ môi trường đo • Chọn chức ghi phổ (Wavescan) máy, ghi lại toàn đường máy toàn thang bước sóng • Yêu cầu độ thăng giáng đường nằm khoảng cho phép Ví dụ: máy Hitachi U-3210 yêu cầu khoảng ± 0,001 Abs Kiểm tra cốc đo: • Trứơc đo phải xử lý cốc cho sạch: Dùng dung dòch Lauryl sulphat 4% bão hòa với ether để rửa cốc đo Các cốc đo kiểm tra kiểu đo A hay T Cách kiểm tra: • Các cốc đụng nước cất, đặt lên khoang đo kiểm tra vùng 250nm, 360nm, 550nm hay bước sóng cần đo chất Chọn kiểu đo T, nhấn phím AUTOZERO hay SET REFERENCE để đưa số hình 100 Lần lượt thay cốc đo khác • Yêu cầu sai khác độ thấu quang T cốc đo không vượt 0,5%, ∆T