LỜI NÓI ĐẦU
Định danh một vi khuẩn được bắt đầu với nhận định về hình thể và khuẩn lạc của chúng Nhận định sai lạc sẽ dẫn đến định hướng cho các công việc tiếp
theo của chuỗi công việc định danh sai lạc theo và kết quả là không định danh
chính xác được vi khuẩn gây bệnh Tuy vậy, nhận định chính xác hình thể, tính chất bắt màu, cách sắp xếp và cảm nhận được các đặc điểm về khuẩn lạc của chúng lại là công việc rất khó khăn, đòi hỏi người làm phải kiên trì và phải được đào tạo tốt; trong đó, thực hành có ý nghĩa quyết định
Hiện nay, tổ chức thực hành về Vi sinh y học cho sinh viên các trường Y gặp rất nhiều khó khăn về nguyên vật liệu, trang thiết bị, các chủng mẫu và các điều kiện để phân lập vi khuẩn từ các bệnh phẩm lâm sàng Cơ sở thực hành của các Bộ môn Vi sinh y học thường không tương xứng với quy mô tuyển sinh, số sinh viên
các hệ gấp nhiều lần so với đáp ứng thực hành của Bộ môn Vì vậy, chất lượng thực
hành không cao Khi sinh viên ra trường, những kỹ năng cơ bản nhất về vi sinh để phục vụ cho chẩn đoán, điều trị trên lâm sàng; phục vụ chẩn đoán và dự phòng các
vi khuẩn gây dịch chưa đáp ứng được yêu cầu của thực tế
Từ thực tế đó, để tăng cường chất lượng thực hành và hiểu biết thêm lý thuyết, chúng tôi đã biên soạn cuốn "A£as Hình thể Vi khuẩn uà Khuẩn lạc"
Cuốn sách gồm những hình ảnh về hình thể điển hình của các vi khuẩn gây
bệnh chủ yếu ở nước ta hiện nay và hình ảnh khuẩn lạc của chúng Những tính chất này là cơ sở đầu tiên, trực quan sinh động cho định hướng chẩn đoán xác định vi khuẩn Đồng thời, mỗi vi khuẩn cũng có thêm những hình ảnh, phân tích kết quả và giá trị chẩn đoán của các kỹ thuật thiết yếu Qua những hình ảnh này, với những lời giải thích ngắn gọn, người học có thể ghi nhận được những tính chất quan trọng của
các vi khuẩn mà mình chưa từng biết đến hoặc mới được giới thiệu qua lý thuyết
Với định hướng trình bày như vậy, sách có thể dùng cho cả các đối tượng đang làm việc trong các Labo vi sinh lâm sàng, các Trung tâm Y tế dự phòng, các Viện nghiên cứu có liên quan đến vi khuẩn gây bệnh; là tài liệu tra cứu hữu hiệu trong các trường hợp gặp các vi khuẩn mới Chúng tôi hy vọng, cuốn sách sẽ đáp ứng
được một phần nhu cầu thực hành và lý thuyết về vi sinh y học
Tuy đã cố gắng hết sức, nhưng do khả năng có hạn, sách xuất bản lần đầu
chắc chắn sách còn nhiều thiếu sót Chúng tôi mong các bạn học viên và các đồng
nghiệp góp ý để lần xuất bản sau, sách được hoàn thiện hơn
Xin chân thành cảm ơn các bạn đồng nghiệp đã cung cấp một số hình ảnh đẹp cho cuốn sách, cảm ơn Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số 1 (Vabiotech) và Công ty
MSD đã tài trợ kinh phí in cuốn sách này
Chủ biên
Trang 4MUC LUC LOI NOI DAU Tụ cầu 1 2 m
3 Liên cầu đường ruột 4 Não mô cầu, Lậu cầu
5 Moraxella catarrhalis, Acinetobacter
6 Họ vi khuẩn đường ruột
7 Yersinia enterocolitica va Yersinia pestis (Vi khuan dich hach) 8 Vibrio cholerae (Vi khuan ta), Campylobacter va Helicobacter 9; HHGIHDHIIHHBiLiasesesueananaasasaolNaonaa
10 Bordetella, Brucella, Legionella
Bordetella pertussis (truc khuan ho ga) Brucella 11 Pseudomonadaceae Pseudomonas aeruginosa Burkholderia 12 Trực khuẩn hiếu khí, Gram duong va Actinomycetes Corynebacterium spp Lactobacillus spp Bacillus Listeria Actinomycetes 13 Mycobacterium 14 Vi khuẩn ky khí Clostridium tetani Clostridium botulinum Clostridium difficile Clostridium perfringens Clostridium septicum
Một số vi khuẩn ky khí, không sinh nha bào
15 Xoắn khuẩn gây bệnh
16 Rickettsia, Mycoplasma va Chlamydia Rickettsia
Mycoplasma
Trang 5
1 Tụ cầu (Staphylococci) 2 1.1 Hinh anh nhuém Gram của 1.2 Hình ảnh nhuộm Gram tiêu tụ cầu bản mủ
Tụ cầu là những cầu khuẩn Gram Tụ cầu (mũi tên) là những cầu khuẩn
dương, có đường kính 0,8-1,0 pm, Gram dương, đứng thành đôi, thành đứng thành từng đám hình chùm nho bốn, hoặc tụ lại thành đám như chùm nho, nằm trong bạch cầu đa nhân trung tính, xung quanh có nhiều bạch
cầu đa nhân trung tính thoái hóa h + i | 1.3 Tu cau vàng trên môi trường 1.4 Tụ cầu vàng có khả năng sinh thạch máu sắc tố
Khuẩn lạc dạng 8, màu kem trắng, có Khuan lac cé mau vàng chanh trên môi kiêu tan máu ƒj trường thạch thường
Trang 61.5 S epidermidis ha tu cầu đa (trái) và S saprophytieus (phải) trên môi trường thạch máu Khuẩn lạc điển hình của nhóm tụ cầu không sinh coagulase là
khuẩn lạc có màu trắng và không có vòng tan máu xung quanh + o 1.7 Micrococcus spp trén moi trường thạch máu ua Micrococcus Khu ic dién hinh
có màu vàng chanh uong mọc
chậm hơn tụ cầu, đôi khi phải cần
18 giờ nuôi cấy mới nhìn thấy khuân
lạc mọc Thường không gây tan máu
1.6 Thứ nghiệm Catalase
Thử nghiệm này dùng để phân biệt tụ
cầu và Ä//erococei (catalase đương tính)
với các cầu khuân Gram dương khác Phản ứng âm tính khi không có hiện
tượng sủi bọt khí (trái)
1.8 Thử nghiệm Bacitracin
Dùng để phan biét Staphylococci vó Micrococci Bến phai la Micrococcus luteus (nhay cam), vong tic ché > 1(
mm; bén trai 1A Staphylococcus aureus
Trang 7COAGULASE TEST | Thử nghiệm Coagulase |
Dùng để phân biệt tụ cầu vàng với các tụ cầu
ác Có 2 loại coagulase: tự đo và cố định ng nghiệm để xác định
Test coagulase trên 6
coagulase tu do Tu cầu vàng, do có coagulase, nên gây đông huyết tương thỏ
(trai) Những ví khuẩn k
cðagulase, không gây đông huyết tưởng (phải) Thử nghiệm trến phiến kính để xác ác không có định coagulase cố định (hình trên)
1.10 Tụ câu vàng trên môi trường 1.11 aureus (phải v
MSA (Mannitol Salt Agar) - Chapman S epidermidis (trai) trén MSA Môi trường này dùng để phân biệt tt Các cầu uấn Gram dương kh cầu vàng các câu khuân Gran catalase ) và khong sin ›agt
lương có catalase (+) khác Trong MSA không men mannitol nér
có 7.5% NaCl, nên nhiều vi khuẩn Ì sir acl khong m tt
uc ché, khéng mo trér màu môi trười môi trưởng trường này Tụ ‹ ó 2 nau hồi
fen men mannito sinh r acid là
chat chi thi mau (do phenol) tu d
Trang 810 1.12 Thử nghiệm Novobioein
Dùng để phân biệt S saprophyticus với các tụ cầu không sinh coagulase
khac S saprophyticus (trái, kháng
Novobiocin), S epidermidis (phai,
nhạy cảm với Novobioein)
Tiêu chuẩn: Vòng ức chế < 16 mm là
vi khuẩn đề kháng
1.18 Khuẩn lạc của các loại tụ
cầu trên môi trường Uri Select 4
của Bio-Rad
A-S aureus
Trang 9
1.14 MRSA trên môi trường thạch máu
Tụ cầu vàng trên môi trường thạch
máu với kích thước khuẩn lạc và vòng
tan máu rất thay đổi, to nhỏ không đều Đây thường không phải là chủng
tụ cầu thông thường, mà là MRSA (Tụ cầu vang khang Methicillin) o— 2 es @ mS cs os os SS "xxx ates aoa “ 1.15 MRSA trên môi trường MSA (Mannitol Salt có kích thước không đều Agar) Khuân lạc thay đổi, to nhỏ 1.16 Kháng sinh đồ cho tụ cầu vàng Tụ cầu kháng kháng sinh rất mạnh, do đó cần phải làm khang sinh dé
trước khi điều trị Trong hình xuất
hiện hai khuẩn lạc vùng ức chế, đây rất có thể là chủng tụ cầu vàng kháng methieillin (MRSA) moc bén trong i m0 igyyyywwvy Ế*>”gzgyzgg o ow or me ur 1.17 Su dung API 20 St ve wv À SẠC woo naa #
aph để chẩn đoán xác định tụ cầu
Trang 102 Liên cầu (Streptococci) 32.1 Hình ảnh nhuộm Gram của liên cầu
Là những cầu khuẩn Gram dương, xếp
thành đôi hay chuỗi dài ngắn khác
nhau, đường kính 0,6-1,0 tim
2.2 Tiêu bản nhuộm Gram dịch viêm khớp gối, hình ảnh liên cầu nhóm A
Streptococcus pyogenes là những cầu khuẩn Gram dương, đứng thành
chuỗi, nằm trong bạch cầu đa nhân Trên tiêu bản nhuộm Gram, rất khó phân biệt liên cầu nhóm A với các liên cầu khác (mũi tên)
3.3 Hình ảnh nhuộm Gram của
liên cầu viridans
Có rất nhiều loài trong nhóm liên cầu
Trang 11
2.4 Hình ảnh nhuộm Gram của phế
cau (Streptococcus pneumoniae)
Tiêu bản nhuộm trực tiếp từ bệnh phẩm đờm, hình ảnh điển hình là những cầu khuẩn Gram dương hình ngọn nến, xếp thành đôi hoặc chuỗi, xung quanh nhiều bạch cầu đa nhân
trung tính, vỏ phế cầu có thể nhìn thấy
là quầng sáng xung quanh vi khuẩn,
đối lập với nền màu hồng
beta-hemolysis alpha hemolysis
2.5 Hình ảnh nhuộm Gram của
Streptococcus mutans
Cầu khuẩn hoặc có thể kéo dài ra, trông giống trực khuẩn, Gram dương 2.6 Hình ảnh phế cầu qua phương pháp nhuộm vỏ Bằng phương pháp này ta có thể nhìn rõ vỏ của phế cầu (vòng sáng) xung quanh vi khuẩn hình ngọn nến, xếp thành đôi, nằm bên trong
gamma hemolysis (so bemotysss) 2.7 Hinh anh tan mau beta, alpha va gamma trén thach mau
Dang tan mau la đặc điểm rất quan trọng dùng để phân biệt các loại liên cầu
Trang 12
2.8 Hinh ảnh liên cầu tan máu
B (tan máu hoàn toàn) trên thạch máu
Phần lớn liên cầu các nhóm A, B, C,
G, F (Lancefeld) gây tan máu j;
quan trọng nhất là nhóm A Nhóm D
gây tan máu ơ hay y hoặc B Khuẩn
lạc của chúng trên thạch máu tương tự nhau, nhóm C, F, G cũng có thể phân lập được từ đường hô hấp trên nên rất khó phân biệt chúng với nhóm A trên đĩa thạch máu
2.9 Khuẩn lạc của S pyogenes trên thạch máu
Khuẩn lạc trong mờ, bờ rõ, kích thước nhỏ (1 mm) với vòng tan máu rộng
9.10 Khuẩn lạc của S œgalactiae
trên thạch máu
Khuẩn lạc lớn hơn so với khuẩn lạc
của liên cầu tan máu nhóm A và độ
rộng của vòng tan nhỏ hơn so với tương quan độ lớn của khuẩn lạc
2.11 Hình ảnh chụp cận cảnh khuẩn lạc của hai loại liên cầu cùng tan máu B nhóm A (trái) và nhóm B (phải) có thể thấy rõ sự khác biệt
Trang 13
2.12 Test Bacitracin
Dùng để chẩn đoán phân biệt liên cầu nhóm A với các liên cầu tan
máu B khác Bacitracin ức chế sự phat trién cua S pyogenes nhom A (trái), ngược lại với S agalactiae
(phải), không bị ức chế, không xuất hiện vùng ức chế vi khuẩn
2.13 Test PYR
Là test nhanh dùng trong chẩn đoán nhanh liên cầu nhóm A Sự
có mặt của enzyme aminopeptidase
giáng hóa cơ chất PYR (L-pyrolidolyl- B naphthylamide) trong 10 phút Test dương tính khi khoanh giấy chuyển màu đỏ Nhiều phòng xét nghiệm sử dụng test này thay cho test Bacitraein để phân biệt nhanh liên cầu nhóm A (phải) với liên cầu tan máu § khác (trái)
2.14 Test CAMP
Dùng để chẩn đoán liên cầu nhóm
B, S agalactiae Test được tiến
hành: cấy dọc 1 đường chủng tụ
cầu vàng tan máu ÿ, sau đó cấy chủng vi khuẩn cần xác định
1 đường vuông góc với đường cấy
tụ cầu vàng, chú ý 2 đường cấy
không chạm nhau Test dương tính khi xuất hiện vùng tan máu j hình mũi tên là liên cầu nhóm B
(S agalactiae) öỏ trên; phía dưới
Trang 142.15 Test Hippurate
Liên cầu nhóm B và một số cầu
ø ruột có khả năng thủy
phân Hippurate Test này dùng để
phân biệt liên cầu nhóm B (trái, dương tính) với liên cầu tan máu ÿ khác (phải, âm tính) khuẩn đườr 2.16 Hình ảnh khuẩn lạc liên c
nhóm B, S agalactiae, trên môi trudng Uri Select 4
Khuẩn lạc tròn, mỡ, có màu xanh nhạt
2.17 Hình ảnh liên cầu gây tan máu alpha trên thạch máu 5%
ải khơng hồn 1 hong cau xanh e, xung quanh khuan lac Vi khuan
vong tan mau @, màu
gây tan máu a thudng 1a liên cầu
viridans hoặc phế cầu
2.18 Phé cau (S pneumoniae) trén
môi trường thạch máu
Trang 15
2.19 Khuẩn lạc phế cầu sau khoảng
18 giờ nuôi cấy trên thạch máu
Chóp khuẩn lạc có khuynh hướng mất đi, khuẩn lạc có xu hướng bẹt xuống hoặc lõm xuống ở giữa do sự hoạt
động của enzym tự ly giải của phế cau, điều r giúp ta phân biệt với nhóm liên cầu viridans, đây là nhóm vi khuân cũng hay gặp trong bệnh
phẩm họng mũi và cũng tan máu œ
nhưng trung tâm khuẩn lạc không lõm xuống trong quá trình nuôi cấy 2.21 Test tan trong muối mật
Phế cầu bị ly giải bởi muối mật, canh khuẩn trở nên trong (hết đục) là test lương tính (phải) Liên cầu không bị v giải bởi muối mật nên canh khuẩn
vẫn dục (trái)
2.20 Test Optochin
Dùng để phân biệt phế cầu với liên cầu
viridans Sự phát triển của phế cầu bị ức
chế bởi sự có mặt của ethylhydrocupreine hydrochloride (vòng vô khuẩn > 14 mm)
2.22 Test Bile Eseulin (môi trường
BEA - Bile Esculin Agar)
ên cầu nhóm D (S bovis) va Enterococcus có khả năng mọc trên môi trường có 40% mật bò và thủy ngân esculin Test dùng để phân biệt lién cau nhém D va Enterococcus
với các liên cầu khác
Trang 16
2.23 Hinh anh S bovis (trai) va E faecalis (phai)
Noi chung, lién cau nhom D S bovis
thường gây tan mau a, E faecalis
thường không gây tan máu, tuy nhiên sau 48 giờ nuôi cấy, E fwecalis có thể
gây tan máu ơ nhẹ, hình ảnh khuẩn lạc
của hai vi khuẩn trên thạch máu đôi khi
rất khó phân biệt
2.25 Hinh anh tan mau gamma (y)
(không tan máu) trên môi trường
thạch máu 5%
Trong ho Streptococcaceae, các vì
khuẩn gây tan máu y thường là liên cầu
dường ruột #nferococcus và một số loài trong nhóm liên cầu viridans
2.24 Test nuôi cấy trên môi
trường 6,ð% NaCl
Dùng để phân biệt liên cầu đường ruột nferococcus với liên
cầu nhóm D (S8 bovis, trai) Lién cầu đường ruột có khả năng mọc
trên môi trường có nồng độ muối cao, làm môi trường chuyển màu vàng (phải) A 5 n @ 2.26 Phản ứng ngưng kết xác định nhóm liên cầu theo phân loại Laneefield
Dựa vào sự kết hợp đặc hiệu, các
hat latex gan khang thé don dong
sẽ kết hợp đặc hiệu với nhóm liên cầu phù hợp (A, B, €, D, ) tạo
thành hạt có thể nhìn thấy bằng
mắt thường Trên hình là liên cầu
Trang 172.27 E-test cho phé cau
Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) MIC là con số ghi trên thanh giấy ở vị trí thấp nhất của vòng vô khuẩn (mũi tên)
VƠ —HÍP CáC “PNA WGAL PUR PGAL PAL LAP
2.28 Sử dụng test API 20 STREP để chẩn đoán, xác định các loại liên cầu, phế cầu
Trang 183 Liên cầu đường ruột
(Enterococcus spp.)
ad 3.1 Hình ảnh nhuộm Gram của Enterococcus ƒœecalis, nhuộm
Ũ từ môi trường cấy máu
E faecalis là những cầu khuẩn
Gram dương, đứng thành đôi hoặc ý chuỗi ngắn
3.2 Khuẩn lạc cla Enterococcus faeealis trên thạch máu
Khuẩn lạc dang S, mau trang
hoặc xám dục, thường không gây
tan máu
3.3 Khuẩn lạc Enterococcus
faecalis
Trên thạch máu, sau 48 gid nudi gây tan máu alpha Liên cầu đường ruột có thể
gây tan má hoặc ơ, một số chung co thé tan mau ÿ, tùy
1 (cừu, thỏ, ngựa)
Trang 19
3.4, Enterococcus faecalis trén méi trudng Uri select 4 (Bio-Rad)
Khuẩn lạc có mầu xanh, dang S (trai) Hinh bén phai 1a su pha tron Escherichia coli
(màu héng) véi Enterococcus faecalis (mau xanh)
3.5 Tính chất sinh vật hóa học để xác dinh Enterococcus
A - Mọc trên môi trường 6,5% NaCl, làm đổi
mầu môi trường từ hồng sang vàng
B - Mọc được trên môi trường Bile Esculin có 40% mật, thủy phân esculin thành
esculitine kết hợp với sắt tạo màu đen
€ - Test PYR dương tính
D- Test LAP (Leucine arylamidase) duong
tinh
3.6 Test chuyén hóa
arabinose dé phân biệt
E faecalis véi E faecium
E faeeium có thể chuyển hóa
arabinose làm đổi màu môi trường từ tím sang vàng
(trai), E faecalis không chuyển hóa arabinose nên môi trường vẫn giữ nguyên màu tím (phải)
Trang 204 Não mô cầu, lậu cầu
(Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae)
4.1 Hình ảnh nhuộm Gram của 4.2 Hình ảnh nhuộm Gram của
não mô cầu lậu cầu
Tiêu bản này nhuộm từ mủ niệu đạo
của một bệnh nhân nam mắc lậu cấp
Hình ảnh điển hình là đám song cầu Gram âm, hình hạt cà phê đứng lèn chặt trong bạch cầu đa nhân trung tính
thoái hoá (mũi tên) Hình ảnh này có giá trị chẩn đoán cao Trong lậu mạn, lậu cầu thường đứng ngoài tể bào, ít
đứng trong tế bào
BA
Là những song cầu Gram âm, hình
hạt cà phê, quay hai mặt lõm vào
nhau Đây là tiêu bản nhuộm bệnh
phẩm đờm từ bệnh nhân viêm phổi,
hình thể não mô cầu rất giống Moraxella catarrhalis
4.3 Nhuộm Gram soi trực tiếp từ
cặn ly tâm dịch não tủy trên bệnh nhân viêm màng não do
44 Tiêu bản nhuộm Gram của
Moraxella catarrhalis trén bệnh
não mô cầu
Hình ảnh điển hình là song cầu Gram âm, hình hạt cà phê, nam
trong bach cầu đa nhân cho phép
chẩn đoán nhanh bệnh 22
phẩm đờm của bệnh nhân viêm phổi
Là các song cầu Gram âm đứng thành
đôi hoặc bốn Giống như não mô cầu và
H influenzae, M catarrhalis thường
Trang 21
4.5 Khuẩn lạc của Não mô cầu
trên môi trường thạch sôcôla ủ ở 35”C, khí trường 5-8% CO,, khuẩn lạc
dang S mau xám, hơi vàng, không
tan máu Sau 48 giờ nuôi cấy thấy
xuất hiện ánh xanh trong thạch ngay sát khuẩn lạc nơi vi khuẩn mọc dày
4.6 Khuẩn lạc lậu cầu trên môi
trường sôcôla, ở khí trường 3-10%
CO,, 35-37°C với độ ẩm 70%, pH 7,3;
khuẩn lạc xám trắng, mờ dục, lấp lánh, đường kính 0,4-1 mm, kích thước khuẩn
lạc to dần trong quá trình nuôi cấy, nếu để 72 giờ có thể tới 3 mm
4.7 Khuẩn lạc của Neisseria
meningiidis trên môi trường thạch máu cừu ð% Khuẩn lạc tròn, bóng, lấp lánh, đục có màu xám, có thể ở dạng nhày do có vỏ, kích thước 1-1,ỗ mm, không tan máu 4.8 Khuẩn lạc lậu cầu trên môi trường Thayer-Martin
6 35-37°C, 3-10% CO,, 48 giờ Lậu cầu
khó nuôi cấy, dễ chết, đòi hỏi môi trường giàu chất dinh dưỡng như sôcôla, Thayer- Martin Môi trường Thayer-Martin cải tiến có thêm các kháng sinh colistin,
vancomycin, nystatin, trimethoprim dé tic chế các vi khuẩn khác nhưng không anh
hưởng tới lậu cầu
Trang 22
4.9 Phan tng Oxidase
Là test quan trong trong xac dinh Neisseria spp Cac loai trong giống này đều có
oxidase dudng tính Cho khuẩn lạc tiếp xúc với khoanh giấy có tha
p-phenylenediami e dihydrochloride 1% (trái), hay nhỏ trực tiếp vào khuẩn lạc n N-tetramethyl- (phải), khuẩn lạc có màu tím sau 10-30 giây là phần ứng dương tính (mũi tên)
1.10 Sử dụng tính chất lên men 4.11 Bình nuôi cất đường để xác định các Wei spp bằng môi trường CTA chứa 1 được khí trường 5% CO, dùng để vận y dé tạo khí eria trường CO,, khi nén tat co the tạo mOi loai dudng Glucose (G), Lactose chuyển và nuôi cấy lậu cầu (L), Sucrose (S), Maltose (M) ìàn hinh la N meningitidis v6i Glucose va Maltose duong tinh (mau vang)
¡ cầu (Maltosc
phân biệt với l
Trang 235 Moraxella catarrhalis, Acinetobacter
5.1 Hinh anh nhuộm Gram của
cua Moraxella spp
Là các song cầu Gram âm, hình hạt
cà phê, úp hai mặt dẹt vào nhau, kích thước từ 0.5-1.5 pm, đứng thành đôi, bốn hoặc từng đám nhỏ Vi khuẩn có tính chất bắt màu thay đổi, và có xu hướng kháng tẩy màu
5.2, Hình ảnh nhuộm Gram của
Acinetobacter spp
Là các cầu trực khuẩn Gram âm,
thường ở dạng đôi, kích thước nhỏ
khoang 1-1,5 um
5.3 Hinh anh nhuộm Gram của
Acinetobacter spp trong đờm
Vi khuẩn là những cầu trực khuẩn
Gram âm, rất ngắn, mập gần giống
cầu khuẩn, đôi khi có thể nhầm với
Trang 24
5.4 Khuan lac M catarrhalis trên môi trường thạch máu cừu õ%, ở nhiệt độ 35-37°C, khí trường 5-7% CO, Khuẩn lạc tròn, nhỏ, lôi,
mờ dục, màu hơi trắng xám, không
tan máu, đường kính từ 1-3 mm, dùng que cấy đẩy, khuẩn lạc trượt trên mặt
thạch dễ dàng Đôi khi có thể nhầm lan khuan lac M catarrhalis véi cac Neisseria spp khéng gay bénh
5.6 Khuan lac Acinetobacter spp trén thach mau sau 24 gid
Khuẩn lạc trong hoặc hơi đục, không bao giờ có sắc tố, màu trắng sữa, lồi tròn, kích thước khoảng 0,5-2 mm
26
5.5 Khuan lac M catarrhalis trén môi trường sôcôla
Khuẩn lạc tròn lôi, sinh sắc tố màu nâu
hồng, điều này không thấy khi vi khuẩn
mọc trên thạch máu
M catarrhalis khéng moc trén méi trường MacConkey
5.7 Khuan lac Acinetobacter baumanii trên môi trường MacConkey
Khuẩn lạc có màu tím nhạt Hầu hết,
các chung Acinetobacter đều mọc trên MaecConkey mặc dù vi khuẩn không lên men đường nhưng có thể oxy hoá mạnh
lactose sinh acid yéu tao nén mau tím
Trang 25
5.8 Test xac định butyrate
esterase
Đây là một test rất quan trọng trong
chan đoán xác định M catarrhalis (butyrate esterase +), phân biệt vi
khuẩn với các song cầu khuẩn Gram
âm khác (butyrate esterase -)
5.9 Test DNase
Môi trường DNase là môi trường dùng để phân biệt các vi khuẩn có khả năng
sinh enzyme deoxyribonuclease (DNase) Vi khuan có enzym này sẽ
thủy phân ADN Khi nhỏ HCI 1N vào
môi trường, một quầng sáng xung
quanh nơi vi khuẩn mọc sẽ xuất hiện
(mũi tên)
5.10 Hinh anh B catarrhalis
Trang 266 Họ vi khuẩn đường ruột
(Enterobacteriaceae)
6.1 Hình ảnh nhuộm Gram của trực khuẩn đường ruột
Một số lồi như Ư col¿ thường ở dạng trực khuẩn ngắn (9-3 um), map, Gram am (A), trong khi một số loài lại ở dạng trực khuẩn Gram âm dai (5-6 m), mảnh, bắt màu dam hon hai dau, nhu Proteus vulgaris (B)
6.2 Hình ảnh nhuộm Gram vi 6.3 Hình ảnh tiêu bản phân bất
khuẩn chí bình thường trong thường
phan Chỉ có lác đác vài vi khuẩn Gram
Hỗn hợp rất nhiều các vi khuẩn dương Sự xuất hiện bạch cầu trong
Trang 27ee Nà ve ì Ầ_ _ dive i is
6.4 Các trực khuẩn đường ruột
còn có thể xuất hiện trong các
bệnh phẩm khác ngoài đường ruột như nước tiểu, sinh dục, Poymophoucer đường hô hấp, dịch não tủy
| neutrophil (PMN)
Hình ảnh E coli (A) va Proteus mirabilis (B) trong nước tiểu cùng
với bạch cầu đa nhân trung tính
(trén) Hinh anh Klebsiella va bach
cầu trong đờm một bệnh nhân bị
viêm phổi (dưới)
6.5 Hình ảnh trực khuẩn
Salmonella typhi với lông xung
quanh thân
Trang 2830
6.7 Khuẩn lạc của vi khuẩn đường ruột trên thạch máu cừu ð%
Khuẩn lạc họ vi khuẩn đường ruột
trên thạch máu thì lón, xám đục, không tan máu Đặc điểm tan máu rất thay đổi và không đặc trưng cho
bất kỳ loài nào trong họ vi khuẩn đường ruột
6.8 Hình ảnh một số khuẩn lạc đặc biệt của họ vi khuẩn đường ruột A - Klebsiella pneumoniae, khuẩn
lạc nhầy, bóng, lấp lánh do có vỏ
Tuy nhiên nó không phải là hình ảnh duy nhất của loài này
B - Serratia mareeseens, khuẩn lạc
có màu đỏ trên mọi môi trường C - Proteus spp., trén méi trường đặc
thường không tạo thành khuẩn lạc
mà lan khắp bề mặt như những lớp
Trang 296.9 Môi trường EMB_ (Eosin Methylene Blue) agar dung dé phan
lap, chẩn đoán hệ vi khuẩn đường ruột
E coli 1én men lactose sinh acid manh
làm kết tủa chất màu, tạo khuẩn lạc có
màu xanh lá cây và có ánh kim (A) Các vi khuẩn lên men lactose yếu hơn như Enterobacter spp., Klebsiella spp tạo khuẩn lạc màu nâu hồng, đậm hơn ở
giữa (B) Vi khuân không lên men
lactose khéng sinh acid co khuan lac không màu hoặc màu hơi hồng như Salmonella spp.(C 6.10 Môi trường MacConkey môi trường chọn lọc, ding dé phar biệt ví khuẩn có khả nỉ
lactose va khéng lên men lactose
Trang 306.12 Khuẩn lạc của vi khuẩn
không lên men laetose
Trong hình trên khuẩn lạc của vi
khuân không lên men lactose là những khuẩn lạc nhỏ hơn, không màu (mũi tên)
IB
6.11 A - Khuẩn lạc của vi khuẩn
1én men lactose manh (nhu E£ coli), sinh một lượng lớn acid, tạo màu đỏ khuếch tán ra môi trường xung quanh và vòng kết tủa muối mật xung quanh
khuẩn lạc
B - Khuẩn lạc E cofi trên môi
trường MacConkey nhìn gần, khuẩn lạc màu hồng đậm, tròn, khô
€ - Môi trường MacConkey sorbitol dùng để phân biệt chủng E coli O157:H7, vi khuẩn không có khả năng
lên men sorbitol sẽ có khuẩn lạc không
màu, # coli khác có khả năng lên men sorbitol khuẩn lạc có màu đỏ
6.13 Shigella sonnei trên môi
trường MaeConkey
Khong lén men lactose nén tao khuan
lạc không màu, dẹt, bờ không đều, có
Trang 31
6.14 Enterobacter (trai) va Klebsiella (phai) trén méi trường MacConkey
Khuan lac cia Enterobacter nhỏ (2-3 mm), có màu hồng hoặc không màu do có khả
năng lên men lactose sinh acid yếu Khuẩn lạc K/ebsiella lớn hơn (4-5 mm), có màu
hồng, nhầy do có vỏ, thường là K pneumoniae, nhưng không phải là chủng duy nhất
có dạng khuẩn lạc này
6.15 Khuẩn lạc của Serratia marcescens trên môi trường MacConkey
Khuẩn lạc có màu đỏ đặc trưng, đôi
khi có thể nhầm với khuẩn lạc của vi khuan lén men lactose
616 Khuẩn lạc của Proteus
vulgaris trén môi trường
MacConkey
Vi khuẩn không lên men lactose nên tạo
khuẩn lạc không màu, hơi lan nhẹ
Trang 323iu/6i5iG6-E08áY g2 6.17 Môi trường DCA
(Deoxycholate Citrate Agar)
Là môi trường chọn lọc vừa, ức chế
sự phát triển của phần lớn trực khuẩn đường ruột không gây bệnh
Các tác nhân gây bệnh không lên men lactose tạo khuẩn lạc không có màu, ngược lại, các vi khuân lên
men lactose (coliform) khuan lac cé mau hồng hoặc đỏ Các vi khuẩn sinh H;ạŠ sẽ có màu đen ở trung tâm hay toàn bộ khuẩn lạc Đĩa nuôi cấy cần được ủ 6 35°C, đọc kết quả sau 48 giờ Se Salmon: rz ae: oe 0= da
6.18 Môi trường Hektoen Enteric Agar (HE)
Phần lớn họ vi khuẩn đường ruột, trừ một số vi khuẩn lén men lactose nhu:
Escherichia, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, thudng cé khuan lac khéng mau trên môi trường MacConkey, EMB Do đó để phân lập được các tác nhân gây bệnh
đường ruột nên bệnh phẩm phân trên các môi trường chọn lọc cao hơn như HE,
XLD Trên môi trường HE, các vi khuẩn lên men lactose hay suerose/salicin có khuẩn lạc màu vàng hoặc màu da cam; ngược lại, vi khuẩn không lên men lactose hay sucrose/ salicin sẽ có màu xanh (màu môi trường) Vi khuẩn sinh H,S khuân lạc có màu đen ở trung tâm hay toàn bộ khuẩn lạc Trên môi trường HE, khuẩn lạc có màu đen thường là Salmonella spp Hình A - S typhimurium, Hình B - E coli trén HE
Trang 33Escherichia coli Klebsiella pneumoniae »> * 5
Enterobacter cloacae Proteus mirabilis
Citrobacter freundii Serratia marcescens
6.19 Họ vi khuẩn đường ruột trên môi trường Uri Seleet 4 (Bio - Rad)
Trang 34
6.20 Khuan lac Salmonella spp Sinh H,S trén méi truéng XLD
(Xylose Lysine Deoxycholate) Trén
môi trường XLD có thể phân biệt được
Salmonella va Shigella véi cac vi
khuẩn khác: Salmonella sinh H,S, tạo khuẩn lạc màu hồng, có đốm màu đen ở trung tâm khuẩn lạc
6.22 Khuẩn lạc Yersinia
enterocolitica trén m6i trudéng CIN
CIN là môi trường chon loc đặc biệt
dùng để phan lap Y enterocolitica trong phan Y enterocolitica lên men
mannitol sinh acid, tao khudn lac mau
đó đậm ở trung tâm, xung quanh là
vòng không màu Vi khuẩn được ủ ở 25°C doc két qua sau 24-48 gid nuôi cấy
6.21 Môi trường SS (Salmonella Shigella Agar)
Là môi trường dùng để phân lập
Salmonella va Shigella Khuan lạc của
Salmonella va Shigella khéng mau
(màu môi trường) do không lên men lactose Salmonella sinh H,S tạo khuẩn
lạc có chấm den ở trung tâm, còn Shigella thì không
6.23 Oxidase test
Tất c vi khuẩn thuộc họ vi khuar đường ruột đều có oxidase âm tính Thử
test oxidase tốt nhất trên khuẩn lạc lấy
Trang 35C- Ong chứng (chưa cấy) 1 - Glucose (-), Lactose (-), H;§ (-), Gas (-) 2 - Glucose (+), Lactose (-), HLS (-), Gas (-) 3 - Glucose (+), Lactose (-), H,S (+), Gas (-) 4 - Glucose (+), Lactose (+), H,S (-), Gas (+) 5 - Glucose (+), Lactose (+), H,S (+), Gas (-)
6.24 Môi trường Kligler Iron Agar (KIA)
Được sử dụng để phân biệt các trực khuẩn đường ruột dựa vào các phản ứng lên men glucose, lactose, có khả năng sinh H;8, sinh hơi Vi khuẩn được cấy vào môi trường ủ ở 37°C đọc kết quả sau 18-24 giờ nuôi cấy Ví khuẩn chỉ lên men glueose tạo ống có
màu vàng ở phần đứng, phần nghiêng màu đỏ Vi khuẩn lên men lactose cả phần
đứng và nghiêng đều màu vàng Vi khuẩn không lên men tạo ống có màu đỏ ở cả phần đứng và nghiêng Vi khuẩn sinh H,S sẽ kết hợp với muối sắt tạo kết tủa màu
đen; vi khuẩn sinh hơi sẽ đẩy thạch lên hay làm nứt thạch
6.25 Indol test
Một số vi khuẩn có enzyme tryptophanase
có thể thủy phân tryptophan sinh indol
Vi khuẩn được cấy vào môi trường
giàu tryptophan, ủ 24 giờ ở 35°C, sau đó
nhỏ thêm ð giọt thuốc thử Kovac
Trang 36
6.26 Urease Test
Vi khuẩn được u trong 6 35°C, dọc kết
quả sau 18-24 giờ, test dương tính khi môi trường chuyển thành màu đỏ hay hồng cánh sen (giữa) Vi khuẩn có khả nang sinh urease manh nhu Proteus
cho kết quả dương tính sau 3-4 giờ, với
những vi khuẩn sinh urease yếu như Klebsiella sé dọc kết quả sau 18-34
gid, vi khuẩn không sinh urease như E coli, cho kết quả âm tính (phải)
Bên trái là ống chưa
6.27 Tính chất di động
Mục dích của test để xác định vi khuẩn
có khả năng di động hay không Trong
họ vi khuẩn dường ruột, hai giống Shigela và Klebsiela luôn không di
động Các vi khuẩn không di động (không có lông) chỉ mọc dọc theo đường
cấy, xung quanh môi trường trong suốt
(trái), các vi khuẩn di động thì mọc lan
sang hai bên đường cấy (giữa) hoặc mọc
lan xung quanh làm dục tồn bộ mơi
trường ni cấy (phải)
6.28 Citrate Simmons Test
Một số vi khuẩn thuộc họ đường ruột có
kha nang su dung mudi citrate nhu nguồn carbon duy nhất Vi khuẩn được iy trén bé mặt môi trường, ủ 35°C qua đêm Test dương tính khi môi trường
chuyển sang màu xanh nước biển (trái)
Test âm tính: màu môi trường giữ
nguyên (phải)
Trang 37
VPQ) vr)
6.29 Methyl Red (MR) - Voges Proskauer (VP) test
Cá hai test đều sử dụng chung một canh khuẩn, chia đôi để thực hiện phản ứng Test MR dùng để xác định sản phẩm chuyển hóa cuối cùng của glucose Khi chuyển
hóa glueose, một số vi khuẩn Œ coi) sẽ sinh nhiều acid làm giảm pH môi trường xuống dưới 4,5, vì vậy khi nhỏ thêm chất chỉ màu (methyl red) sẽ làm đổi màu chất chỉ thị thành đỏ, trong khi một số vi khuẩn (#nferobacter, Klebsiella) sinh acetoin
là sản phẩm chuyển hoá cuối cùng tạo pH lớn hơn 6,0 làm chất chỉ thị chuyển màu vàng Test VP dùng để xác định acetoin, thuốc thử ơ-naphthol và KOH được nhỏ vào dung dịch nuôi cấy, tạo thành màu đỏ; nếu không có mặt acetoin dung dịch nuôi y không bị đổi màu 6.30 Decarboxylase Test
Cac enzyme decarboxylase va dihydrolase hoạt động trong điều kiện
yếm khí nên cần phải phủ một lớp dầu lên bể mặt môi trường Trong giai đoạn đầu, tất cả các ống đều chuyển màu
vàng do sự chuyển hoa glucose sinh
acid làm đổi màu chất chi thi tim
bromcresol thành vàng pH acid làm
hoạt hóa enzyme decarboxylase của vi
khuẩn tạo amin gây kiểm hố mơi
trường, làm chất chỉ thị màu chuyển thành màu tím, phản ứng dương tính
Ống chứng (Control) chỉ chứa glucose Ba ống còn lại chứa cả glueose và một trong 3 loại amino acid (tw trai sang phai) lysine, arginine, ornithine
Trang 38
‘ASM Microbel ibrary.org © Reynolds 6.31 Phenylalanine Deaminase
Test (PAD test)
Một số vi khuẩn có khả năng loại bỏ nhóm amine từ acid amin phenylalanine tạo nên phenylpyruvic acid, khi nhỏ dung dịch sắt chlorua 10% sẽ tạo thành
màu xanh (phải Các giống Profeus,
Providencia va Morganella trong ho vi khuẩn đường ruột có PAD test dương
tính Test âm tính khi mặt thạch không đổi màu (trái)
6.32 o-nitrophenyl-B-D-
Galactopyranoside (ONPG) Test
Test này dùng để phân biệt các vi
khuẩn lên men lactose cham với các vi khuẩn không lên men laetose, chúng đều có khuẩn lạc không màu trên MacConkey Vi khuan lén men lactose
chậm có enzym thủy phân ONPG thành
o-nitrophenyl tạo màu vàng (trái), test dương tính, đây là test nhanh, cho kết
quả sau 4 giờ
6.33 Eseheriehia coli trên môi trường KIA va phan tng IMViC cua E coli
Trên KIA E coli tao acid 6 ca phan ding va phan nghiêng do sinh acid mạnh từ lên men nhanh ca lactose va glucose làm toàn bộ ống màu vàng, đồng thời sinh hơi
nhiều làm đấy thạch lên cao hoặc nứt thạch (khung trái) Trong phản ứng IMVIC E coli c6 Indol (1), Methyl red dương tính (M), trong khi VP (V) va Citrate (C) 4m
Trang 39IMViC REACTIONS ++
6.34 Klebsiella, Enterobacter, Serratia trén m6i trudng KIA
va phan ting IMViC
Trên môi trường KIA ti trai sang phai: Klebsiella, Enterobacter, Serratia; ba giéng
vi khuẩn này cé phan tng IMViC giéng nhau: - - + + (ngược lại véi E coli)
Klebsiella, Enterobacter lén men lactose sinh nhiéu hoi day thach lén cao, Serratia lén men lactose cham tao kiém 6 phan nghiêng cea ` _ 1 2 3 5
6.35 Một số trực khuẩn đường ruột có khả năng sinh H,S với mức độ khác nhau, dựa vào đặc điểm này có thể giúp phân biệt cac chung vi k ho vi
khuẩn duéng ruét Phan lén Salmonella spp lén men glucose sinh hơi và sinh nhiều
H,S (4), tuy nhién c6é mét sé trudng hợp đặc biệt như S typhi khong sinh hoi va sinh
rất ít HS (2), va S paratyphi A thi khong sinh H.S nén dé bj bo sét (1) Proteus cing lên men glucose và sinh H,S (3) Một số loài Citrobacter lén men ca glucose va lactose đồng thời sinh nhiều H,6 (ð)
Trang 40
Gopi
20¢
ADH
ne toc “ope teins 2s 4 uae TOA ino 4 vp EU GUUẨMAN ino sor‘ ana sac MEL Ay
6.36 API 20E sw dung trong chan đoán, định danh họ vi khuẩn đường ruột Sahmonetla Tay Sd typhimurium 6.37 Phản ứng n ưng kết xác định type huyết thanh của Saimonella spp
kháng huyết thanh chứa các yếu tố đặc hiệu (yếu tố đã biếU để xác định các \ tố khán uyên (chưa biết) bằng phí
vụ cho lật 1 ting ngưng kết trên phiến kính, phục
thức kháng nguyên của các Salmonella