Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)

Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)Khảo sát tần suất các alen trong các locus gen (ADN) hệ Identifiler của dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen ở Việt Nam (LV thạc sĩ)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN NHƢ GIANG KHẢO SÁT TẦN SUẤT CÁC ALEN TRONG CÁC LOCUS GEN (ADN) HỆ IDENTIFILER CỦA DÂN TỘC H’MÔNG PHỤC VỤ CÔNG TÁC GIÁM ĐỊNH GEN Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC HÀ NỘI - NĂM 2014 Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Đề tài: KHẢO SÁT TẦN SUẤT CÁC ALEN TRONG CÁC LOCUS GEN (ADN) HỆ IDENTIFILER CỦA DÂN TỘC H’MÔNG PHỤC VỤ CÔNG TÁC GIÁM ĐỊNH GEN Ở VIỆT NAM Học viên : Nguyễn Nhƣ Giang Chuyên ngành : Hóa Sinh Mã số : 60 42 01 14 Ngƣời hƣớng dẫn : PGS TS Nguyễn Văn Hà NĂM 2014 Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn tới Thầy, cô giảng dạy Viện sinh thái tài nguyên sinh vật - Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam truyền đạt cho kiến thức chuyên sâu lĩnh vực Công nghệ sinh học, làm tiền đề cho tơi hồn thành Luận văn tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Văn Hà - Phó giám đốc Trung tâm giám định sinh học pháp lý - Viện Khoa học hình tận tình hướng dẫn thời gian thực luận văn Tôi xin cảm ơn Lãnh đạo Viện khoa học hình sự, Lãnh đạo Trung tâm giám định sinh học pháp lý, toàn tập thể cán Trung tâm tạo điều kiện giúp đỡ Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình ln tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học hoàn thành luận văn tốt nghiệp Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2014 Học viên Nguyễn Nhƣ Giang Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn CÁC KÍ HIỆU VIẾT TẮT ADN Axit Deoxyribonucleic STR Short Tandem Repeats PCR Polymerase chain Reaction D8 D8S1179 D21 D21S11 D7 D7S820 CSF CSF1PO D3 D3 S1358 THO1 HUMTHO1 D13 D13S317 D16 D16S539 D2 D2 S1338 D19 D19S433 D18 D18S51 D5 D5 S818 χ² Khi bình phương thành phần thí nghiệm χα Khi bình phương tiêu chuẩn Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tình hình nghiên cứu ngồi nước khảo sát tần suất alen locus gen sử dụng giám định ADN 1.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.2 Tình hình nghiên cứu Việt nam Giám định gen (ADN) 2.1 Cơ sở khoa học giám định gen 2.1.1 Cấu trúc, chức phân tử ADN 2.1.2 Cơ chế phân ly độc lập tổ hợp tự sinh sản hữu tính 2.2 Lịch sử phát triển giám định ADN 2.3 Khái niệm giám định gen (ADN) 10 2.4 Khái niệm locus alen 12 2.5 Các tiêu chuẩn cho locus STR dùng giám định ADN 13 2.6 Ý nghĩa sở liệu tần suất alen locus STR 14 CHƢƠNG NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 Nội dung nghiên cứu: 16 Phương pháp nghiên cứu: 16 2.1 Thu mẫu: 16 2.2 Hóa chất, thiết bị dụng cụ: 17 2.2.1 Hóa chất thiết bị cho tách chiết ADN 17 2.2.2 Hóa chất thiết bị cho định lượng ADN 18 2.2.3 Hóa chất thiết bị cho nhân bội điện di 18 2.3 Phân tích mẫu 18 2.3.1 Tách chiết mẫu chelex 18 2.3.2 Định lượng ADN Realtime PCR 19 2.3.3 Nhân bội ADN (PCR) 20 2.3.4 Điện di máy điện di mao dẫn (Capillary Electrophoresis- CE) 22 Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 2.4 Xử lý thống kê số liệu tính tần suất locus gen 25 2.4.1 Cơ sở lý thuyết 25 2.4.2 Phương pháp xử lý thống kê 25 2.4.3 Các bước tính tốn thống kê kiểm định tiến hành phần mềm Excel: 26 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 27 Kết 27 1.1 Thu mẫu 27 1.2 Phân tích mẫu thu kiểu gen theo yêu cầu lập bảng kiểu gen 120 cá thể (Xem bảng - phụ lục) 27 1.3 Xử lý số liệu thống kê (Xem bảng 3.1 đến 3.15); tính bảng tần suất mẫu nghiên cứu (Xem bảng 3.16 đến 3.30); so sánh với số quần thể người Việt người nước (Xem bảng 3.31 đến 3.45) 27 1.3.1 Xử lý số liệu thống kê 27 1.3.2 Bảng tần suất mẫu nghiên cứu 49 Bảng kết thảo luận sở liệu tần suất phân bố alen 15 locus gen (gồm bảng 3.16 đến bảng 3.30) 49 1.3.3 Kết so sánh tần suất alen người H’Mông với số người tộc người (xem Bảng từ 3.31 đến 3.45) biện luận : 56 Bàn luận 68 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 Kết luận 69 Kiến nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ỨNG DỤNG ĐỀ TÀI Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH, BẢNG BIỂU Hình Cấu trúc ADN nhân tế bào (trang 7) Hình Các locus gen hệ Identifiler (trang 24) Bảng 2.1 Thành phần phản ứng Realtime PCR (trang 20) Bảng 2.2 Chu trình nhiệt phản ứng PCR máy realtime 7500 (trang 20) Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR (trang 22) Bảng 2.4 Chu trình nhiệt máy PCR 9700 (trang 22) Bảng 2.5 Thành phần hỗn hợp điện di (trang 24) Bảng 3.1 đến 3.15 Xử lý số liệu thống kê (trang 27 đến trang 46) Bảng 3.16 đến 3.30 Bảng tần suất alen 120 mẫu nghiên cứu (trang 49 đến trang 55) Bảng 3.31 đến 3.45 So sánh tần suất alen với số quần thể (trang 56 đến trang 67) Bảng 1: Danh sách người H’ Mông thu mẫu (Phần phụ lục) Bảng 2: Kết định lượng 120 mẫu ADN 120 cá thể người H’Mông (Phần phụ lục) Bảng 3: Kết kiểu gen 120 cá thể người H’ Mơng (kí hiệu HM1 đến HM120) (Phần phụ lục) Số hóa trung tâm Học liệu– ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Cơ sở khoa học, thực tiễn tính cấp thiết việc nghiên cứu đề tài: Người đặt móng cho ngành di truyền học Mendel Ông người phát quy luật di truyền Mendel gọi đặc điểm truyền từ hệ qua hệ khác “nhân tố di truyền”, mà sau gọi gen Trong nhân tế bào, nhiễm sắc thể xếp thành 23 cặp, 22 cặp nhiễm sắc thể thường cặp nhiễm sắc thể giới tính Các cặp nhiễm sắc thể quy định tính trạng khác thể, bảo tồn trì hệ di truyền từ hệ sang hệ khác Con thừa hưởng đặc tính di truyền thơng qua 23 nhiễm sắc thể từ tinh trùng bố 23 nhiễm sắc thể từ tế bào trứng mẹ Xét nghiệm truy nguyên cá thể người xác định huyết thống trực hệ cha - con, mẹ - chủ yếu thực cách sử dụng marker ADN nằm NST nhân tế bào Ngồi phân tích marker nhiễm sắc thể Y cịn xác định quan hệ huyết thống theo dòng cha ADN thường coi vật liệu di truyền cấp độ phân tử tham gia định tính trạng Trong q trình sinh sản, phân tử ADN nhân đôi truyền cho hệ sau Năm 1953, Watson Crick xây dựng mô hình cấu trúc khơng gian phân tử ADN Theo hai ơng, ADN có cấu trúc từ hai sợi xoắn kép có phân tử lượng lớn, sợi ADN chuỗi xoắn nucleotid gồm loại bazơ nitơ: Adenin (A), Guanin (G), Cytosin (C) Thymin (T) xếp nhau, xoắn quanh trục theo chiều từ trái sang phải thang dây xoắn, mà tay thang phân tử đường (C5H10O4) axit phơtphoric xếp xen kẽ nhau, cịn bậc thang cặp bazơ nitric đứng đối diện liên kết với liên kết hiđrô theo nguyên tắc bổ sung, nghĩa bazơ lớn (A G) bù bazơ bé (T C) hay ngược lại Do đặc điểm cấu trúc, Adenin liên kết với Thymin liên kết hiđrô Guanin liên kết với Cytosin liên kết hiđrô Do cặp nuclêôtit liên kết với theo nguyên tắc bổ sung, chiều rộng chuỗi xoắn kép 20Å , khoảng cách bậc thang chuỗi xoắn 3,4Å, phân tử ADN xoắn theo chu kỳ xoắn, chu kỳ xoắn có 10 cặp nucleotit có chiều cao 34Å Nghiên cứu ứng dụng công nghệ ADN vào công tác đấu tranh phòng chống tội phạm mũi nhọn thực nhiều quốc gia từ năm 80 kỷ XX Cùng với tiến khoa học công nghệ, giám định ADN ngày phát triển, hồn thiện cơng nghệ, phương pháp khả đáp ứng nhu cầu chung pháp luật xã hội Kết luận giám định ADN mang tính định vụ việc mang tính hình sự, dân truy ngun cá thể, xác định quan hệ huyết thống, xác định tung tích nạn nhân vụ thảm họa, chiến tranh… cần thiết cấp bách Tuy nhiên, để bảo đảm tính khoa học tính pháp lý phịng thí nghiệm giám định ADN cần phải có tần suất alen locus gen để sử dụng dùng phân tích, kết luận giám định ADN cho quần thể người (dân tộc) Việc nghiên cứu, khảo sát tần suất alen locus gen dùng giám định ADN dân tộc giới tiến hành mức Tuy nhiên tùy thuộc vào số dân tộc quốc gia phụ thuộc vào lực giám định ADN nước, công bố tần suất alen locus gen dùng giám định ADN nước khác dân tộc khác khác Trong điều kiện cần phải có kết luận giám định ADN có điều kiện bắt buộc phải có sở liệu tần suất alen locus gen dùng cho giám định gen đối quần thể người (dân tộc) cụ thể Hiện nay, giới, đơn vị giám định ADN sử dụng phổ biến Kit với 16 locus gen kit Identifiler, Identifiler Plus Identifiler Direct (hãng AB, Mỹ) kit Powerplex (hãng Promega, Mỹ)… để tính toán tần suất xuất alen Trên sở tính tốn xác suất trùng mẫu phải truy nguyên đồng xác suất quan hệ huyết thống mẫu phải xác định quan hệ huyết thống giám định ADN Ở Việt Nam nay, Viện Khoa học hình đa số quan, tổ chức giám định sử dụng kit Identifiler, Identifiler Plus, Identifiler Direct cho giám định ADN Năm 2011, bảng tần suất alen locus gen hệ Identifiler quần thể người Việt (Kinh) công bố tạp chí ForensicAsia Cho đến nay, chưa có nghiên cứu công bố khảo sát phân bố tần suất alen locus gen hệ Identifiler (gồm 15 gen) quần thể người H’Mông Với dân số khoảng 80.000 người (đứng thứ tổng số 54 dân tộc Việt Nam), dân tộc H’Mông phân bố khắp tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam: Quảng Ninh, Lạng Sơn, Bắc Cạn, Cao Bằng, Hà Giang, Tuyên Quang, Yên Bái, Lào Cai, Lai Châu, Điện Biên, Sơn La, Hồ Bình, Thanh Hố, Nghệ An số Phú Thọ, tỉnh Tây Ngun, điểm nóng tình hình an ninh trật tự xã hội, số vụ án cộng đồng người H’Mơng có diễn biến phức tạp với xu hướng ngày gia tăng Vì vậy, việc tiến hành triển khai đề tài nghiên cứu: “Khảo sát tần suất alen locus gen (ADN) hệ Identifiler dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen Việt Nam” yêu cầu cấp thiết Mục đích đề tài : Khảo sát tần suất alen locus gen (ADN) hệ Identifiler dân tộc H’Mông phục vụ công tác giám định gen Việt Nam Trên sở đó, tính tần suất xuất alen locus dân tộc H’Mông, làm sở khoa học để phân tích, đánh giá đưa kết luận giám định truy nguyên huyết thống truy nguyên cá thể Bảng 3.34 Locus CSF1PO Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia (n=110) Ngƣời Thái lan (n=210) Ngƣời H Mông (n=120) 0.00588 0.005 - 0.008333 - - 0.002 0.04706 0.009 0.019 0.004167 10 0.24706 0.245 0.214 0.254167 11 0.25882 0.314 0.298 0.104167 12 0.34706 0.355 0.376 0.554167 13 0.06765 0.059 0.079 0.075 14 0.02059 0.005 0.01 15 0.00588 0.009 0.002 TS 8 Số lượng alen xuất quần thể người H’Mơng hẳn so với quần thể cịn lại tập trung locus ngắn Bảng 3.35 Locus D3S1358 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia (n=110) Ngƣời Thái lan (n=210) Ngƣời H Mông (n=120) 11 - 0.009 - - 12 - 0.005 - - 13 - - 0.005 14 0.03824 0.045 0.031 0.016667 15 0.31471 0.25 0.286 0.308333 16 0.35 0.332 0.376 0.333333 17 0.20294 0.25 0.217 0.295833 59 18 0.08235 0.109 0.079 0.045833 19 0.00882 - 0.007 20 0.00294 - - - TS 7 Có alen xuất người H’Mơng, hẳn so với quần thể khác tập trung alen 15, 16, 17 Bảng 3.36 Locus THO1 Tộc ngƣời Alen 6.3 9.3 10 11 TS Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia (n=110) Ngƣời Thái lan (n=210) 0.14118 0.109 0.107 0.36176 0.06765 0.32647 0.03824 0.05882 0.00588 0.345 0.095 0.286 0.095 0.068 0.31 0.052 0.355 0.081 0.095 Ngƣời H Mông (n=120) 0.220833 0.004167 0.2 0.016667 0.483333 0.05 0.025 Alen 6.3 alen đặc trưng, xuất người H’Mông; chưa thấy xuất người Thái lan, Malaixia, người Việt(Kinh) Bảng 3.37 Locus D13S317 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia Ngƣời Thái lan Ngƣời H Mông (n=110) (n=210) (n=120) 0.00294 0.005 0.002 - 0.34118 0.236 0.293 0.591667 60 0.13235 0.127 0.167 0.1125 10 0.12353 0.109 0.129 0.108333 11 0.22353 0.318 0.229 0.120833 12 0.13529 0.15 0.133 0.045833 13 0.02941 0.05 0.038 0.016667 14 0.01176 0.005 0.01 0.004167 TS 8 Không thấy alen xuất người H’Mông, alen xuất với tần suất cao, vượt mức bình thường Bảng 3.38 Locus D16S539 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt Ngƣời Ngƣời Thái Ngƣời (Kinh) Malaixia lan H Mông (n=170) (n=110) (n=210) (n=120) - 0.009 - - 0.0058824 0.018 0.007 0.008333 0.2205882 0.109 0.217 0.4125 10 0.1117647 0.182 0.171 0.141667 11 0.2970588 0.271 0.298 0.216667 12 0.2323529 0.259 0.19 0.179167 13 0.1117647 0.109 0.105 0.029167 14 0.0205882 0.023 0.012 0.008333 15 - - - 0.004167 TS Alen 15 thấy xuất người H’Mông 61 Bảng 3.39 Locus D2S1338 Alen 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 TS Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) 0.01176 0.11471 0.07353 0.23529 0.11765 0.04706 0.05 0.173 0.13235 0.03824 0.00588 Tộc ngƣời Ngƣời Ngƣời Thái Malaixia lan (n=110) (n=210) 0.018 0.021 0.095 0.086 0.091 0.069 0.2 0.226 0.132 0.136 0.018 0.062 0.068 0.038 0.173 0.164 0.123 0.15 0.073 0.043 0.009 0.005 11 11 11 Ngƣời H Mông (n=120) 0.016667 0.033333 0.154167 0.1 0.020833 0.0875 0.283333 0.220833 0.0375 0.0375 0.008333 Ở quần thể người H’Mơng khảo sát có alen 27 xuất hiện, mang tính đặc trưng cho quần thể 62 Bảng 3.40 Locus D19S443 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia Ngƣời Thái lan Ngƣời H Mông (n=110) (n=210) (n=120) 0.01471 - 0.017 - 11 0.00294 0.005 - 0.004167 11.2 - 0.005 - - 12 0.04412 0.059 0.036 0.0125 12.2 0.01176 0.009 0.002 - 13 0.23824 0.318 0.281 0.2625 13.2 0.05 0.027 0.036 0.1375 14 0.25294 0.164 0.217 0.158333 14.2 0.11471 0.073 0.093 0.0625 15 0.058 0.091 0.098 0.029167 15.2 0.15 0.218 0.174 0.304167 16 0.01471 0.018 0.014 0.004167 16.2 0.04118 0.014 0.031 0.0125 17 - - - 0.008333 17.2 0.00294 - 0.002 - 18.2 0.00294 - - - TS 14 12 12 11 Alen 17 đặc trưng xuất người H’Mông 63 Bảng 3.41 Locus vWA Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt Ngƣời Ngƣời Thái Ngƣời (Kinh) Malaixia lan H Mông (n=170) (n=110) (n=210) (n=120) 13 - 0.009 - - 14 0.25882 0.164 0.257 0.2875 15 0.01765 0.041 0.026 0.008333 16 0.16765 0.168 0.145 0.120833 17 0.23529 0.277 0.24 0.158333 18 0.19118 0.255 0.207 0.354167 19 0.10588 0.068 0.114 0.066667 20 0.02353 0.018 0.01 0.004167 TS 7 Bảng 3.42 Locus TPOX Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt Ngƣời Ngƣời Thái Ngƣời (Kinh) Malaixia lan H Mông (n=170) (n=110) (n=210) (n=120) - 0.005 - - 0.59118 0.509 0.564 0.3625 0.10294 0.141 0.131 0.104167 10 0.02647 0.032 0.031 0.0125 11 0.25882 0.314 0.248 0.483333 12 0.02059 - 0.024 0.0375 14 - - 0.002 - TS 5 64 Bảng 3.43 Locus D18S51 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia Ngƣời Thái lan Ngƣời H Mông (n=110) (n=210) (n=120) 0.00294 - - - 10 - 0.005 - - 11 0.00882 0.018 0.012 - 12 0.09412 0.077 0.069 0.0125 13 0.10882 0.095 0.133 0.220833 14 0.17647 0.195 0.179 0.279167 15 0.19412 0.227 0.224 0.158333 16 0.21471 0.155 0.195 0.195833 17 0.06765 0.082 0.081 0.025 18 0.03529 0.032 0.033 0.0625 19 0.03824 0.05 0.031 0.0125 20 0.01765 0.032 0.01 0.0125 21 0.02059 0.023 0.021 0.020833 22 0.00882 0.005 0.007 0.0125 23 0.00882 - 0.005 - 25 0.00294 - - - TS 15 14 13 11 Alen người H’Mơng xuất quần thể khác, thấy 11 alen 65 Bảng 3.44 Locus D5S51 Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia Ngƣời Thái lan Ngƣời H Mông (n=110) (n=210) (n=120) 0.02647 0.023 0.026 - 0.005 - 0.05882 0.073 0.069 0.016667 10 0.18824 0.255 0.214 0.25 11 0.31765 0.264 0.271 0.3125 12 0.20294 0.245 0.236 0.233333 13 0.18529 0.123 0.167 0.1625 14 0.01765 0.005 0.017 0.016667 15 - 0.005 - - 16 0.00294 - - - 17 - 0.005 - - TS 10 7 66 0.008333 - Bảng 3.45 Locus FGA Tộc ngƣời Alen Ngƣời Việt (Kinh) (n=170) Ngƣời Malaixia (n=110) Ngƣời Thái lan (n=210) Ngƣời H Mông (n=120) 16 0.00294 - - - 17 - - 0.002 - 18 0.00882 0.009 0.026 0.0125 19 0.10588 0.082 0.05 0.0125 20 0.05588 0.045 0.079 0.041667 20.2 - 0.005 0.002 21 0.14118 0.141 0.129 21.1 0.00294 - - - 21.2 0.00294 0.005 0.021 - 22 0.21176 0.259 0.207 0.1125 22.2 0.02059 0.023 0.012 0.004167 23 0.13824 0.145 0.186 0.095833 23.2 0.01176 0.005 0.007 0.016667 24 0.13235 0.109 0.11 0.266667 24.2 0.01765 0.005 0.005 0.016667 25 0.06765 0.105 0.093 0.266667 25.2 0.00882 0.009 0.012 0.045833 26 0.04118 0.023 0.04 0.1625 26.2 0.00588 0.009 0.005 0.033333 27 0.01765 0.018 0.01 0.091667 28 0.00294 0.005 0.005 28.2 - - - 30.2 0.00294 - - TS 20 18 19 67 0.066667 0.004167 16 Alen 28.2 alen đặc trưng, xuất người H’Mông; chưa thấy xuất người Thái lan, Malaixia, người Việt (kinh) Bàn luận Qua kết khảo sát, nhận thấy số alen đặc trưng, thấy xuất người H’Mông mà chưa thấy xuất quần thể khác Khi gặp mẫu có alen coi đặc điểm đặc biệt giúp cho mẫu mang tính truy nguyên cao, nghi người H’Mơng, locus D21 có alen 35.2, locus D7 có alen 15, locus THO1 có alen 6.3, locus D19 có alen 17, locus FGA có alen 28.2 - Quần thể người H’Mơng khảo sát có lượng alen locus thường so với quần thể so sánh khác Nguyên nhân tập tục hôn nhân chủ yếu lấy người dân tộc, điều thể qua số lượng đồng hợp tử alen cao (bảng 3.16 đến 3.30) - Ứng dụng bảng tần suất alen locus gen hệ Identifiler 120 cá thể người H’Mông giám định gen (ADN) Viện Khoa học hình nói riêng đơn vị giám định khác giá trị khoa học để giám định viên biện luận trước tòa án, đảm bảo khách quan, công minh pháp luật 68 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Với kết khảo sát xây dựng bảng sở liệu tần suất alen gen thuộc hệ Identifiler quần thể người H’Mông rút số kết luận sau: - Đã khảo sát 120 mẫu ADN để xây dựng sở liệu tần suất alen gen thuộc hệ Identifiler quần thể người H’Mơng Q trình thống kê, tính tốn tần suất, kiểm định tính tốn phần mềm Exel, cho kết xác Kết kiểm định cho thấy mẫu thực nghiệm phù hợp với quần thể lý thuyết - Các phương pháp, trình tiến hành theo quy trình giám định ADN Viện Khoa học hình sự, kết đủ độ tin cậy để ứng dụng giám định gen cho cá thể người H’Mông - Qua nghiên cứu phát tổng số 120 mẫu nghiên cứu có 05 alen đặc trưng, thấy xuất quần thể H’Mơng Đó locus D21 có alen 35.2, locus D7 có alen 15, locus THO1 có alen 6.3, locus D19 có alen 17, locus FGA có alen 28.2 Những alen đặc điểm có khả truy nguyên cao để truy nguyên cá thể xác định quan hệ huyết thống cha - mẹ - Điều có ý nghĩa lớn để sàng lọc, định hướng truy tìm tội phạm xuyên quốc gia - Ứng dụng sở liệu tần suất giám định gen (ADN) Viện Khoa học hình nói riêng đơn vị giám định gen khác tồn quốc nói chung có ý nghĩa vơ cấp thiết, đặc biệt vụ án truy nguyên cá thể xác định quan hệ huyết thống cha - mẹ - con, kết chứng khoa học chối cãi được, đặc biệt tranh tụng trước tịa Kết có ý nghĩa lớn khơng nước mà cịn giá trị nhà giám định nghiên cứu gen hình giới 69 Kiến nghị Trong phạm vi đề tài nghiên cứu này, nghiên cứu số lượng mẫu phần lớn thuộc khu vực Tây Bắc Việt Nam Tuy nhiên, để có kết tồn diện tần suất alen quần thể người H’Mơng, chúng tơi có số kiến nghị sau: - Mở rộng quy mô khảo sát, thống kê số lượng mẫu lớn hơn, kiểm định với mức xác suất p = 0,0001 - Tiếp tục khảo sát tần suất alen dân tộc khác Việt Nam, đặc biệt quần thể dân tộc Mường, Trung Quốc, Khơ me… - Các alen đặc trưng cho người H’Mông cần tiếp tục khảo sát - Có thể phối hợp kết nghiên cứu đề tài với nghiên cứu di truyền khác quần thể người dân tộc H’Mông để rút đặc điểm quần thể dân tộc phục vụ nghiên cứu dân tộc học, khoảng cách di truyền… 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Chu Văn Mẫn, Đào Hữu Hồ (1999), iáo tr nh thống k sinh học, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Chu Văn Mẫn (2009), Tin học c ng nghệ sinh học, Nhà xuất giáo dục Việt nam iáo tr nh lý thuyết Thống k , NXB Giáo dục,HN 1996 Hà Quốc Khanh (2002), Điều tra xây dựng sở liệu tần suất gen hệ Nineplex người Việt (Kinh), Đề tài khoa học cấp Bộ Lê Đức Vĩnh (2006), iáo tr nh Xác suất thống k , Đại học Nông nghiệp – Hà Nội TS Lê Thị Thu Thủy (2011), Khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 gen hệ Identifiler quần thể người Kinh ứng dụng giám định ADN lực lượng Kỹ thuật h nh sự, Đề tài khoa học cấp Bộ TS Lê Thị Thu Thủy (2012), Vai trò sở liệu tần suất giám định tư pháp gen (ADN), tạp chí Cảnh sát Phịng chống tội phạm, Số 31 (178) Phạm Xuân Kiều (2005), iáo tr nh Xác suất thống k , NXB GD TS Nguyễn Văn Đức (2002), Phương pháp kiểm tra thống kê Sinh học Nhà xuất khoa học kỹ thuật 10 Đào Hữu Hồ (1999), Xác suất thống k , nhà xuất đại học quốc gia Hà Nội 11 Tăng Văn Khiên (2003), Điều tra chọn mẫu ứng dụng công tác thống k , NXB Thống kê, Hà Nội 12 Viện khoa học hình (2005), iáo tr nh iám định sinh học pháp lý, Hà Nội 13 Viện khoa học hình (2007), iáo tr nh iám định ADN, Hà Nội Tiếng Anh 14 ADN Technology in Forensic Science (1992) Committee on DNA Technology in Forensic Science, National Research Council Commission on Life Sciences (CLS) 15 AmpFlSTR® Identifiler® PCR Amplification Kit User’s Manual 16 Angel Carracedo (2005), Forensic DNA Typing Protocols, Humana Press Inc 17 Bio-Rad Cat No 143-2832 Insert Chelex 100 and Chelex 20 Chelating Ion Exchange Resin, Instruction Manual 18 Fung WK, Ye J, Hu L, Zhao X, Liu B, Wong DM, Law MY(2001), Allele frequencies for nine STR loci in Beijing Chinese Forensic Sci Int ;121(3):207-9 19 John M Butler (2005), Forensic DNA Typing Elsevier 20 John M Butler (2010), Fundamentals of Forensic DNA Typing, Elsevier Inc 21 John M Butler (2012), Advanced Topics in Forensic DNA Typing, Elsevier Inc 22 John S Buckleton, Christopher M Triggs, Simon J Walsh, (2005), Forensic DNA Evidence Interpretation , CRC PRESS 23 Lawrence Koblinsky, Thomas F Liotti, Jamel Oeser-Sweat, (2005), DNA forensic and legal applications,A John Wiley & Sons, Inc Publication 24 Lawrence Kobilinsky, Louis Levine, Henrietta Margolis-Nunno (2007), Forensic DNA Analysis, Infobase Publishing 25 John M Butler (2003), Forensic DNA Typing Elsevier 26 Maruyama S, Minaguchi K, Takezaki N, Nambiar P (2008), Population data on 15 STR loci using AmpF/STR Identifiler kit in a Malay population living in and around Kuala Lumpur, Malaysia Leg Med (Tokyo) 10:160-2 27 Rerkammuaychoke B et al Thai population data on 15 tetrameric STR loci-D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, vWA, TPOX, D18S51, D5S818 and FGA Forensic Science International 158 (2006) 234 -237 28 The Evaluation of Forensic DNA Evidence (1996) Commission on Life Sciences (CLS) 29 Wing Kam Fung, Yue – Qing Hu (2008), Statistical DNA Forensic ... ? ?Khảo sát tần suất alen locus gen (ADN) hệ Identifiler dân tộc H’Mông phục vụ cho công tác giám định gen Việt Nam? ?? yêu cầu cấp thiết Mục đích đề tài : Khảo sát tần suất alen locus gen (ADN) hệ. .. VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Đề tài: KHẢO SÁT TẦN SUẤT CÁC ALEN TRONG CÁC LOCUS GEN (ADN) HỆ IDENTIFILER CỦA DÂN TỘC H’MÔNG PHỤC VỤ CÔNG... (ADN) hệ Identifiler dân tộc H’Mông phục vụ công tác giám định gen Việt Nam Trên sở đó, tính tần suất xuất alen locus dân tộc H’Mơng, làm sở khoa học để phân tích, đánh giá đưa kết luận giám định