Nghiên cứu phân lập và tuyển chọn vi sinh vật phân giải phosphate khó tan trên đất bazan nâu đỏ ở Đak Lak

Header Page of 166 PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Trong thể thực vật, lân đóng vai trò định biến đổi vật chất lượng Nó tham gia cấu tạo nên acid nucleic, coenzyme, adenosin triphosphate (ATP)… chất cần thiết cho sống [2] Ngoài lân đóng vai trò khác tạo môi trường đệm, ảnh hưởng đến trình hút chất khoáng khác Đất chứa khối lượng lớn chất chứa lân Tuy nhiên hợp chất chứa lân đất sử dụng dễ dàng Đặc biệt đất bazan nâu đỏ Tây Nguyên vốn giàu lân tổng số lân dễ tan lại thấp Sự chuyển hóa lân xảy chủ yếu tác dụng trình hóa học sinh học [1] Quá trình chuyển hóa hợp chất phophat khó tan đất có phần đóng góp quan trọng loại vi sinh vật Vi sinh vật có khả chuyển hóa quặng phosphate khó tan thành dễ tan để trồng hấp thụ Do bón vi sinh vật phân giải phosphate khó tan cung cấp lượng lân dễ tan cho trồng giúp hấp thụ chất dinh dưỡng đất tốt [3] Ngoài vi sinh vật chuyển hóa hợp chất lân vừa có khả tạo chất dinh dưỡng cho cây, sinh tổng hợp chất kích thích sinh trưởng thực vật đồng thời có khả ức chế số vi sinh vật gây bệnh vùng rễ trồng [7] Theo Fridland (1973) đất bazan nâu đỏ loại đất hình thành đất bazan, điều kiện nhiệt đới ẩm, bazơ bị rửa trôi mạnh, đất có phản ứng chua, sắt nhôm tích lũy nhiều, nguyên nhân chủ yếu trình giữ chặt lân đất bazan [13] Theo Đoàn Triệu Nhạn (1999): Đất bazan nâu đỏ Tây Nguyên có hàm lượng lân tổng số đạt 0,02% P2O5 lượng lân dễ tiêu 4,12mg P2O5/ 100g đất [13] Đak Lak với 360.000 đất bazan nâu đỏ loại đất giàu lân tổng số thích hợp cho việc phát triển công nghiệp dài ngày [21] Tuy nhiên trình cố định lân từ dễ tiêu thành dạng khó tiêu thường xuyên xảy nên lượng lân dễ tiêu mức nghèo Đồng thời, nông dân thời gian qua thường dùng phân hóa học để Footer Page of 166 Header Page of 166 bón cho trồng thiếu bón phân hữu phân vi sinh vật làm cho đất trồng bị thoái hóa, chai cứng, vi sinh vật đất bị suy thoái, gây ô nhiễm môi trường Xuất phát từ lý tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu phân lập tuyển chọn vi sinh vật phân giải phosphate khó tan đất bazan nâu đỏ Đak Lak 1.2 Mục tiêu đề tài - Tuyển chọn số chủng vi sinh vật có hoạt tính phân giải photphate khó tan cao đất Bazan nâu đỏ Đak Lak 1.3 Ý nghĩa khoa học, thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đề tài góp phân làm sáng tỏ vai trò vi sinh vật phân giải lân khó tan Các nghiên cứu Việt Nam giới phân giải lân khó tan dạng phosphate sắt, nhôm nghiên cứu Đáng ý đề tài nghiên cứu, tuyển chọn phân lập chủng vi khuẩn có khả phân giải lân khó tan hiệu đất bazan nâu đỏ điều kiện cụ thể Đak Lak góp phần bảo tồn nguồn gen vi sinh vật địa hữu ích 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Thành công đề tài góp phần vào việc sản xuất ứng dụng chế phẩm vi sinh vật phân giải lân khó tan sản xuất nông, lâm nghiệp nhằm cung cấp lân dễ tan cho trồng, giảm chi phí đầu tư, giảm thoái hóa đất, góp phần cải thiện đời sống nông dân bảo vệ môi trường nông thôn Đak Lak 1.4 Giới hạn đề tài Trong trình thực thời gian, trang thiết bị, hóa chất có hạn nên tiến hành phân lập số mẫu đất tỉnh Đak Lak theo dỏi số Footer Page of 166 Header Page of 166 tiêu Mặc khác, sinh viên lần đầu tham gia nghiên cứu nên tránh khỏi thiếu sót Kính mong quý thầy cô bạn đóng góp ý kiến Footer Page of 166 Header Page of 166 PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Các dạng lân đất Lân quan trọng trồng Tuy nhiên hiệu suất sử dụng lân trồng không 25%, lượng lớn bị cố định đất chuyển thành dạng khó hấp thụ Lượng dự trữ lân đất xấp xỉ 0,025 – 0,3% P2O5 chúng tồn đất dạng không tan nước khó hấp thụ Thành phần lân dễ tan khó tan đất định tính chất đá mẹ, thành phần giới hàm lượng chất hữu định [5] Theo Sepfe-Satsaben (1960) hàm lượng phosphate trung bình nhiều loại đất thường từ 0.02 – 0.08% Do trình tích lũy sinh học, hàm lượng phosphate lớp đất mặt cao lớp [13] Trong loại đất khoáng , tỉ lệ lân hữu thường từ 25 – 65% Các cỡ hạt thuộc thành phần sét thường chứa nhiều lân cỡ thuộc thành phần cát Do đó: Ở chân đất nhẹ, đất bạc màu… có keo sét, tỉ lệ phosphate thường thấp loại đất khác [13] Tỉ lệ lân đất khác thùy theo tính chất đá mẹ tầng phát sinh từ đá mẹ như: Nai, mica, quartzit… thường tỉ lệ lân thấp đất phát sinh từ mẫu thạch không chua như: Bazan, đá vôi,…[13] Quá trình phân giải xác bã động thực vật cung cấp cho đất nguồn phosphate quan trọng Như việc bổ sung chất hữu vào đất giúp làm tăng cường hàm lượng lân cho đất Trong tự nhiên nói chung đất nói riêng , phosphate tồn hai dạng chủ yếu sau: 2.1.1 Lân hữu Tùy loại đất, tỷ lệ phosphate hữu thường chiếm từ 20 – 80% phosphate tổng số đất Ở lớp đất mặt, phosphate chiếm khoảng 50% [5] Phosphate hữu đất chủ yếu thành phần mùn Đất giàu mùn giàu phosphate hữu Footer Page of 166 Header Page of 166 Theo Kletcôpki Petecbuaxki (1964) thì: Trong phosphate hữu đất, dạng phổ biến dạng fytat, chiếm đến 50% tổng số phosphate hữu Tùy theo môi trường acid hay kiềm mà tồn dạng fytat khác Ở đất chua, phosphate hữu chủ yếu fytat Fe, Al; đất trung tính, kiềm tồn dạng fytat Ca, Mg [13] Phosphate hữu thể động vật, thực vật, vi sinh vật thường gặp hợp chất chủ yếu fitin, phospholipide, acid nucleic Điều đáng ý phosphate vi sinh vật không tham gia trực tiếp vào dinh dưỡng trồng mà phải đợi vi sinh vật chết đi, tế bào bị khoáng hóa trồng hấp thu [5] Khi thực khoáng hóa có tham gia vi sinh vật phân giải phosphate, hợp chất hữu (trong có lân hữu cơ) khoáng hóa để giải phóng lân vô hay hữu cơ, nguồn dinh dưỡng cung cấp thức ăn cho trồng Có 70 – 80 tập đoàn vi sinh vật tham gia vào trình phân giải phosphate [13] Trong trình khoáng hóa chất hữu đất, phosphate hữu giải phóng dạng acid phosphoric muối dễ tan Nhưng dạng lân lại bị đất hấp phụ vi sinh vật hút lại, nên đất rẩ phosphate dạng hòa tan Nhiều tác giả nghiên cứu cho rằng: Nếu chất hữu vùi đất chất hữu nghèo phosphate qua trình phân giải hàm lượng phosphate hữu đất không tăng mà giảm xuống (Ivanop 1955) [3] Theo công trình nghiên cứu Kaila (1954): Nếu chất hữu vùi xuống đất chứa 0.2 – 0.3% P2O5 trình phân giải không tăng thêm phosphate dễ tancho vi sinh vật hút hết Cường độ hút phosphate hữu đất thông qua phân giải vi sinh vật phụ thuộc nhiều vào nhiệt độ Theo Sepfe-Satsaben (1960) điều kiện nhiệt độ bình thường, nước ôn đới , khoáng hóa phosphate hữu tiến hành chậm lượng phosphate cung cấp cho từ hợp chất hữu không đáng kể Trái lại, nhiệt độ từ 35 – 50oC trình khoáng hóa tăng lên mạnh cung cấp cho nhiều phosphate từ hợp chất hữu Vì thế, nước ta bón phân chuồng giải pháp cung cấp phosphate cho trồng [13] Footer Page of 166 Header Page of 166 2.1.2 Lân vô Phosphate vô tồn dạng muối nguyên tố Ca, Fe, Al Ở đất trung tính đất kiềm phosphate Ca chủ yếu, đất chua phosphate Fe, Al chủ yếu Phosphate Ca dễ huy động để làm thức ăn cho phosphate Fe, Al Sự tồn ion phosphate môi trường đất bị chi phối ion phosphate bị chuyển đổi hóa trị [13] Môi trường chua: H2PO4- HPO42- PO43- Trong thực tế, H2PO4- dạng cấy trồng dễ hấp thu Các dạng phosphate lại thường loại khó hòa tan mà trồng đồng hóa được, muốn trồng sử dụng phải qua trình biến đổi thành dạng dễ tan [13] Cũng yếu tố khác, phosphate tự nhiên luôn tuần hoàn chuyển hóa Nhờ vi sinh vật, lân hữu vô hóa biến thành dạng muối acid phosphoric Các dạng lân phần trồng sử dụng biến thành dạng lân hữu cơ, phần bị cố định dạng khó tan Ca3PO4, AlPO4, FePO4 Những dạng khó tan môi trường có pH thích hợp chuyển thành dạng dễ tan Trong trình này, vi sinh vật giữ vai trò quan trọng 2.1.3 Vòng tuần hoàn lân tự nhiên Vòng tuần hoàn lân không giống vòng tuần hoàn nitơ Trong nitơ khan đất lân tồn nhiều đất dạng khó phân giải [15, 18] Nitơ đưa vào đất nhờ vi sinh vật cố định đạm từ không khí, lân, chúng vi sinh vật phân giải từ nguồn lân vô hữu khác Vòng tuần hoàn lân biểu diễn sơ đồ sau: Footer Page of 166 Header Page of 166 Động vật Cây xanh PO43- dung dịch đất PO43- bị hấp thụ Quá trình khoáng Hòa tan Quá trình cố định Lân vô Cố định tạm thời Chất hữu tươi tế bào sinh vật Chất hữu mùn hóa 2.2 Sự chuyển hóa lân đất 2.2.1 Đối với lân hữu Trong đất có nhiều loại vi sinh vật khoáng hóa lân hữu Các vi sinh vật tiết enzyme khử phosphoryl đồng thời giải phóng ion phosphate Phản ứng enzyme nhanh hợp chất lân hữu vừa bón vào đất sau xảy chậm lân bị cải biến Lân tạo phức liên kết với Fe, Al, chất hữu phân tử lượng cao bị giữ chặt phần tử sét Tốc độ giải phóng lân phụ thuộc vào yếu tố sau: - Bản chất hợp chất hữu có lân: Acid nucleic dễ khoáng hóa phytin Nguyên nhân dohầu hết vi sinh vật khoáng hóa lân hữu tiết enzyme tương ứng để phân giải acid nucleic [3] - Nếu lượng C/P cao 300 lân bị vi sinh vật đất cố định Còn mức C/P nhỏ 200, lân thừa nên khoáng hóa [3] Footer Page of 166 Header Page of 166 - pH tối thích – Ở môi trường kiềm lân vô phóng thích nhanh lân hữa - Nhiệt độ cao thuận lợi cho việc khoáng hóa lân hữu Tối thích 40 – 50oC Do đó, mùa hè tốc độ khoáng hóa lân mạnh mùa khác 2.2.2 Đối với lân vô Sự tồn loại ion phosphate đất phụ thuộc vào pH đất Do vậy, thực tế đất, lân tồn chủ yếu hai dạng: H2PO4- HPO42- H2PO4- HPO42- Dung dịch acid PO43Dung dịch kiềm Ở pH = tỷ lệ loại ion gần H2PO4- dễ đồng hóa HPO42-, nên mặt lý thuyết pH = – dinh dưỡng lân thuận lợi Song đất có mặt nhiều ion khác mà vấn đề trở nên phức tạp 2.2.2.1 Sự chuyển hóa lân đất chua Trong đất chua nghèo chất hữu cơ: Fe, Al Mn thường nằm dạng hòa tan phản ứng với H2PO4- tạo thành hợp chất không tan không đồng hóa [13] Al3+ + H2PO4- + 2H2O 2H+ + Al(OH)3.H2PO4 Không tan Ở loại đất chua, Al3+ Fe3+vượt ion H2PO4- nhiều làm cho phản ứng nghiêng theo chiều thuận, tạo thành lân không tan khiên cho lượng nhỏ H2PO4- đất Ở đất chua, ion H2PO4- phản ứng với Fe3+, Al3+ hòa tan mà phản ứng với oxit ngậm nước nguyên tố gibbsit (Al2O3.3H2O) goethit (Fe2O3.3H2O) Ở đất chua số lượng lân bị oxit sắt, oxit nhôm ngậm nươc cố định vượt số lượng lân bị kết tủa với Fe, Al Mn hòa tan Footer Page of 166 Header Page of 166 Al(OH)3 + H2PO4- Al(OH)2.HPO4- + H2O Điều đáng lưu ý hầu hết loại đất chứa oxit sắt, nhôm ngậm nước nên kiểu cố định nhiều lân diễn phạm vi rộng Trong môi trường chua có hai trình cố định lân liên quan tới sét Đó tồn ion OH- lộ bề mặt khoáng sét Sự cố định kèm với việc giải phóng kiềm theo phản ứng sau: Sét – OH + Ca(H2PO4)2 sét – H2PO4- +1/2Ca(OH)2 Khả cố định thay đổi theo chất khoáng vật keo sét theo thứ tự sau đây: Illit > Kaolinit > Montmorillonit [Al] + H2PO4- + 2H2O 2H+ + Al(OH)2.H2PO4 Vai trò sắt nhôm thể qua thực tế việc cố định anion mạnh lên tỉ lệ SiO2/seoquioxit giảm, với loại đất vôi seoquioxit khả cố định lân giảm Còn vôi, người ta thấy sét hấp thụ Ca2+, tỉ lệ anion phosphate hấp thu tăng lên, bất chấp ngưỡng kết tủa canxi phosphate Điều chứng tỏ : Đây tình cố định ion đường hóa học Tính ổn định trình giữ chặt phụ thuộc vào điều kiện môi trường việc giải phóng anion xảy điều kiện môi trường thay đổi đặc biệt sét bị giải keo Ở đất chua, hydroxit sắt, nhôm lương tính nhóm OH- trở thành keo dương tính tham gia hấp phụ trao đổi anion: Al(OH)3 + H+ = Al(OH)2+ + H2O 2.2.2.2 Sự chuyển hóa lân đất kiềm Trong môi trường kiềm giàu Ca, ion H2PO4- phản ứng mạnh với Ca tạo thành hợp chất tan theo phản ứng sau [13]: Footer Page of 166 Header Page 10 of 166 Ca(H2PO4)2 + CaCO3 + H2O → 2CaHPO4.2H2O + CO2 6CaHPO4.2H2O + 2CaCO3 + H2O → Ca8H2(PO4)6.5H2O + 2CO2 Ca8H2(PO4)6.5H2O + CaCO3 → Ca3(PO4)2 + CO2 + 6H2O Lân trở nên hòa tan gặp điều kiện thuận lợi đủ thời gian Ca3(PO4)2 chuyển thành hợp chất không tan hydroxy, carbon fluoro apatit 2.3 Tổng quan vi sinh vật phân giải lân Vi sinh vật (microorganisms) tên chung dùng để tất loại sinh vật nhỏ bé mà muốn thấy chúng, người ta phải sử dụng tới kính hiển vi Theo Hoàng Lương Việt (1978) trung bình gam đất khô có đến gần 200 triệu tế bào vi sinh vật Vi sinh vật có nhóm sau: vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm men, nấm mốc, vi tảo, virus [6] Các nhóm có khả phân giải phosphate vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm men, nấm mốc [5] Nghiên cứu Puneet cộng cho thấy: Việc nhiểm số chủng nấm sợi có khả hòa tan phosphate Aspergillus flavus Asp niger với vi khuẩn cố định nitơ Azotobacter sp tăng suất hạt 17.7%, nhiễm Azotobacter sp làm tăng 9% [18] Kopoor cộng đạt kết tương tự nghiên cứu phối hợp chủng Azotobacter sp với vi khuẩn phân giải phosphate thuộc chi Asgrobacterium sp, Bacillus sp Pseudomonas sp…[20] Vi sinh vật phân giải lân chia thành hai nhóm: Vi sinh vật phân giải lân hữu vi sinh vật phân giải lân vô 2.3.1 Vi sinh vật phân giải lân hữu Sự chuyển hóa hợp chất lân hữu thành muối H3PO4(Stoklaza – 1991, Menkina – 1952) theo sơ đồ sau [1, 5]: Nucleoprotein Lơxitin Nuclein Glixerphosphate Footer Page 10 of 166 acid nucleic H3PO4 Nucleotic H3PO4 Header Page 51 of 166 Variable (PO4) A N A L Y S I S Degrees of Freedom O F V A R I A N C E Sum of T A B L E Mean Squares Square F-value Prob Between 16 2091.403 130.713 Within 34 55.022 1.618 80.771 0.0000 Total 50 2146.425 Coefficient of Variation = 15.49% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 52.160 17.387 0.16 0.73 3.00 35.670 11.890 4.96 0.73 3.00 61.110 20.370 0.39 0.73 3.00 0.260 0.087 0.06 0.73 3.00 39.140 13.047 0.01 0.73 3.00 17.290 5.763 0.55 0.73 3.00 54.270 18.090 0.37 0.73 3.00 19.770 6.590 0.46 0.73 3.00 26.920 8.973 0.41 0.73 10 3.00 3.690 1.230 0.23 0.73 Footer Page 51 of 166 Header Page 52 of 166 11 3.00 6.480 2.160 0.39 0.73 12 3.00 23.500 7.833 0.02 0.73 13 3.00 19.630 6.543 0.22 0.73 14 3.00 3.390 1.130 0.49 0.73 15 3.00 42.760 14.253 1.08 0.73 16 3.00 1.090 0.363 0.15 0.73 17 3.00 11.600 3.867 0.49 0.73 -Total 51.00 418.730 8.210 6.55 Within 0.92 1.27 Trắc nghiệm phân hạng khả phân giải phosphate khó tan 17 chủng vi sinh vật phân lập Function : RANGE Error Mean Square = 1.618 Error Degrees of Freedom = 16 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 3.033 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 17.39 Mean = 11.89 Mean = 20.37 Mean = 0.09000 Mean = 13.05 Mean = 5.760 Footer Page 52 of 166 Ranked Order A BC A H B EF Mean = 20.37 A Mean = 18.09 A Mean = 17.39 A Mean 15 = 14.25 B Mean = 13.05 B Mean = 11.89 BC Header Page 53 of 166 Mean = 18.09 Mean = 6.590 Mean = 8.970 Mean 10 = 1.230 Mean 11 = 2.160 Mean 12 = 7.830 Mean 13 = 6.540 Mean 14 = 1.130 Mean 15 = 14.25 Mean 16 = 0.3600 Mean 17 = 3.870 A Mean = 8.970 Mean 12 = 7.830 DE Mean = 6.590 DEF GH Mean 13 = 6.540 DEF GH Mean = 5.760 EF DE Mean 17 = 3.870 DEF Mean 11 = 2.160 GH Mean 10 = 1.230 GH Mean 14 = 1.130 GH Mean 16 = 0.3600 H Mean = 0.09000 H DEF CD GH B H FG CD FG Phụ bảng 2: Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật phân lập Ký Nhiệt độ phòng 30oC 35oC hiệu chủng Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần M1 2.06 2.13 2.08 2.79 2.95 2.69 5.39 5.5 5.34 X2 1.24 1.47 1.43 2.09 2.19 2.23 6.3 6.35 6.22 X3 2.8 2.76 2.81 3.12 2.84 3.01 5.73 5.79 5.76 M5 3.05 3.21 3.1 4.13 4.37 4.1 5.7 5.83 5.72 M7 1.42 1.4 1.41 2.68 2.51 7.06 7.82 8.43 X15 0.98 1.2 1.09 1.05 1.73 1.24 6.49 6.71 6.36 Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 0.04500 Footer Page 53 of 166 Header Page 54 of 166 Error Degrees of Freedom = 17 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.5020 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 2.090 Mean = 2.810 Mean = 5.410 Mean = 1.380 Mean = 2.170 Mean = 6.290 Mean = 2.790 Mean = 2.990 Mean = 5.760 Mean 10 = 3.120 Mean 11 = 4.200 Mean 12 = 5.750 Mean 13 = 1.410 Mean 14 = 2.730 Mean 15 = 7.770 Mean 16 = 1.090 Mean 17 = 1.340 Ranked Order F Mean 15 = 7.770 Mean 18 = 6.513 B Mean = 6.290 B Mean = 5.760 C Mean 12 = 5.750 C Mean = 5.410 C E Mean 11 = 4.200 E Mean 10 = 3.120 E Mean = 2.990 E Mean = 2.810 E Mean = 2.790 E Mean 14 = 2.730 E Mean = 2.170 F Mean = 2.090 F Mean 13 = 1.410 G G Mean = 1.380 G G Mean 17 = 1.340 G E C G F B C E D C G E A A D Phụ bảng 3: Ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate khó tan chủng v sinh vật tuyển chọn Ký pH = 5.8 pH = 7.8 pH = 8.8 hiệu chủng Lần Lần Footer Page 54 of 166 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Header Page 55 of 166 M1 2.31 2.46 2.28 2.97 3.15 3.09 13.29 12.86 13.33 X2 2.2 2.73 1.82 2.21 2.56 2.25 2.47 2.7 2.48 X3 3.15 2.86 2.81 3.02 3.19 3.33 2.58 2.53 2.57 M5 3.11 3.05 3.11 3.14 3.19 3.12 3.01 3.27 3.2 M7 6.47 6.74 6.56 3.42 3.65 3.7 1.97 1.81 1.68 X15 1.03 1.42 0.88 1.69 1.82 1.8 2.75 3.02 2.87 Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng pH đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 0.03300 Error Degrees of Freedom = 17 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4299 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 2.350 Mean = 3.070 Mean = 13.16 Mean = 2.250 Mean = Mean Ranked Order Mean = 13.16 Mean 13 = 6.590 Mean 14 = 3.590 C F Mean = 3.180 CD 2.340 F Mean 12 = 3.160 D = 2.550 EF Mean 11 = 3.150 D Mean = 2.940 Mean 10 = 3.090 D Mean = 3.180 Mean = 3.070 D Mean = 2.560 Mean = 2.940 DE Mean 10 = 3.090 D Mean 18 = 2.880 DE Mean 11 = 3.150 D Mean = 2.560 Footer Page 55 of 166 F D A DE CD EF A B EF Header Page 56 of 166 Mean 12 = 3.160 Mean 13 = 6.590 Mean 14 = 3.590 Mean 15 = 1.820 Mean 16 = 1.110 Mean 17 = 1.770 Mean 18 = 2.880 D B C G H G DE Mean = 2.550 EF Mean = 2.350 F Mean = 2.340 F Mean = 2.250 F Mean 15 = 1.820 G Mean 17 = 1.770 G Mean 16 = 1.110 H Phụ bảng 4: Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn Ký 0rpm 75rpm 150rpm hiệu chủng Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần M1 0.93 1.17 0.99 1.57 1.35 1.34 7.03 7.36 7.36 X2 1.56 1.38 1.32 1.74 1.38 1.35 2.11 2.17 2.11 X3 3.62 3.93 3.7 2.09 2.14 2.1 1.94 1.68 1.66 M5 1.79 1.72 1.65 2.35 2.61 2.24 0.97 1.12 1.15 M7 1.98 2.54 1.78 1.67 1.92 1.63 0.85 1.05 1.16 X15 3.06 3.28 0.83 3.05 3.49 2.88 2.65 3.01 2.68 Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 0.1340 Error Degrees of Freedom = 17 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.8662 Footer Page 56 of 166 at alpha = 0.010 Header Page 57 of 166 Original Order Ranked Order Mean = 1.030 G Mean = 7.250 Mean = 1.420 FG Mean = 3.750 B Mean = 7.250 Mean 17 = 3.140 BC Mean = 1.420 FG Mean 18 = 2.780 CD Mean = 1.490 FG Mean 11 = 2.400 CDE Mean = 2.130 Mean 16 = 2.390 CDE Mean = 3.750 Mean = 2.130 DEF Mean = 2.110 Mean = 2.110 DEF Mean = 1.760 EFG Mean 13 = 2.100 DEF Mean 10 = 1.720 EFG Mean = 1.760 EFG Mean 11 = 2.400 Mean 14 = 1.740 EFG Mean 12 = 1.070 Mean 10 = 1.720 EFG Mean 13 = 2.100 Mean = 1.490 FG Mean 14 = 1.740 EFG Mean = 1.420 FG Mean 15 = 1.020 G Mean = 1.420 FG Mean 16 = 2.390 Mean 12 = 1.070 G Mean 17 = 3.140 Mean = 1.030 G Mean 18 = 2.780 Mean 15 = 1.020 G A DEF B DEF CDE G DEF CDE BC CD A Phụ bảng 5: xác định nguồn carbon thích hợp để nuôi cấy chủng vi sinh vật phân giải phosphate khó tan phân lập Ký Glucose saccharose hiệu chủng Lần Lần Lần Lần Lần Lần M1 0.92 1.13 1.25 0.69 0.85 0.8 X2 0.27 0.31 0.29 4.37 4.81 4.74 X3 6.22 6.37 6.1 2.06 1.87 1.92 Footer Page 57 of 166 Header Page 58 of 166 M5 0.96 1.17 1.11 4.01 3.94 3.9 M7 1.95 1.48 1.37 0.53 1.06 1.38 X15 0.38 0.42 0.4 0.02 0.05 0.02 Trắc nghiệm phân hạng xác định nguồn carbon thích hợp để nuôi cấy chủng vi sinh vật phân giải phosphate khó tan Function : RANGE Error Mean Square = 0.03400 Error Degrees of Freedom = 11 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4676 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 1.100 Mean = 0.7800 Mean = 0.2900 Mean = 4.640 Mean = 6.230 Mean = 1.950 Mean = 1.080 Mean = 3.950 Mean = 1.600 Mean 10 = 0.9900 Mean 11 = 0.4000 Mean 12 = 0.03000 Ranked Order E Mean = 6.230 EF Mean = 4.640 Mean = 3.950 Mean = 1.950 D Mean = 1.600 D Mean = 1.100 E Mean = 1.080 E Mean 10 = 0.9900 E Mean = 0.7800 EF Mean 11 = 0.4000 FG FG Mean = 0.2900 G G Mean 12 = 0.03000 G G B A D E C D E A B C Phụ bảng 6: xác định nguồn nitơ thích hợp để nuôi cấy chủng vi sinh vật phân giải phosphate khó tan phân lập Footer Page 58 of 166 Header Page 59 of 166 Ký (NH4)2SO4 urê hiệu chủng Lần Lần Lần Lần Lần Lần M1 0.92 1.13 1.25 5.17 4.86 4.94 X2 0.27 0.31 0.29 0.43 0.74 0.36 X3 6.22 6.37 6.1 0.01 0.01 0.01 M5 0.96 1.17 1.11 5.21 5.64 5.14 M7 1.95 1.48 1.37 0.79 0.74 0.81 X15 0.38 0.42 0.4 0.63 0.58 0.59 Trắc nghiệm phân hạng xác định nguồn nitơ thích hợp nuôi cấy chủng vi sinh vật phân giải phosphate khó tan phân lập Function : RANGE Error Mean Square = 0.02500 Error Degrees of Freedom = 11 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4010 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 1.100 Mean = 4.990 Mean = 0.2900 Mean = 0.5100 Mean = 6.230 Mean = 0.01000 Mean = 1.080 Mean = 5.330 Footer Page 59 of 166 Ranked Order D B FG EF A G D B Mean = 6.230 A Mean = 5.330 B Mean = 4.990 B Mean = 1.600 Mean = 1.100 D Mean = 1.080 D Mean 10 = 0.7800 Mean 12 = 0.6000 C DE EF Header Page 60 of 166 Mean = 1.600 Mean 10 = 0.7800 Mean 11 = 0.4000 Mean 12 = 0.6000 C Mean = 0.5100 EF Mean 11 = 0.4000 EFG EFG Mean = 0.2900 FG EF Mean = 0.01000 G DE Phụ bảng 7: Thử nghiệm hoạt tính phân giải phosphate khó tan chủng vi sinh vật tuyển chọn nguồn phosphate Ký hiệu Ca3(PO4)2 AlPO4 chủng Lần Lần Lần Lần Lần Lần M1 4.99 5.17 5.11 2.01 2.35 2.12 X2 0.64 0.59 0.6 0.49 0.41 0.45 X3 2.34 2.58 2.37 0.76 0.91 0.97 M5 1.37 1.72 1.5 0.78 0.72 0.81 M7 1.85 2.13 2.14 0.27 0.35 0.34 X15 3.2 3.68 3.44 0.09 0.11 0.1 Trắc nghiệm phân hạng thử nghiệm khả phân giải AlPO4 chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 0.01600 Error Degrees of Freedom = 11 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.3208 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 5.090 Mean = 2.160 Mean = 0.6000 Footer Page 60 of 166 Ranked Order A CD FGH Mean = 5.090 Mean 11 = 3.440 Mean = 2.430 A B C Header Page 61 of 166 Mean = 0.4500 Mean = 2.430 Mean = 0.8800 Mean = 1.530 Mean = 0.7700 Mean = 2.040 Mean 10 = 0.3200 Mean 11 = 3.440 Mean 12 = 0.1000 GH C F E FG D HI B I Mean = 2.160 CD Mean = 2.040 D Mean = 1.530 Mean = 0.8800 F Mean = 0.7700 FG Mean = 0.6000 FGH Mean = 0.4500 GH Mean 10 = 0.3200 HI Mean 12 = 0.1000 I E Các hình ảnh đề tài Mẫu đất Krông Năng Mẫu đất Cư Kuin Mẫu đất Cư Mgar Hình Các khuẩn lạc mọc môi trường NPRIP Footer Page 61 of 166 Header Page 62 of 166 Hình Hình ảnh ống giống 17 chủng vi sinh vật tuyển chọn Hình Hình ảnh giữ giống 17 chủng vi sinh vật eppendorf Footer Page 62 of 166 Header Page 63 of 166 Hình Hình ảnh khuẩn lạc đĩa thạch chủng lựa chọn Footer Page 63 of 166 Header Page 64 of 166 Hình thái tế bào chủng M1 Hình thái tế bào chủng X2 Hình thái tế bào chủng X3 Hình thái tế bào chủng M5 Hình thái tế bào chủng M7 Hình thái tế bào chủng X15 Hình Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng vi sinh vật tuyển chọn Footer Page 64 of 166 Header Page 65 of 166 Hình Hình ảnh phản ứng màu xanh molipdate 17 chủng vi sinh vật Footer Page 65 of 166 ... DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu phân lập chủng vi sinh vật phân giải photphat khó tan đất bazan nâu đỏ Đak Lak - Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải. .. chọn vi sinh vật phân giải phosphate khó tan đất bazan nâu đỏ Đak Lak 1.2 Mục tiêu đề tài - Tuyển chọn số chủng vi sinh vật có hoạt tính phân giải photphate khó tan cao đất Bazan nâu đỏ Đak Lak. .. nghiên cứu đề tài góp phân làm sáng tỏ vai trò vi sinh vật phân giải lân khó tan Các nghiên cứu Vi t Nam giới phân giải lân khó tan dạng phosphate sắt, nhôm nghiên cứu Đáng ý đề tài nghiên cứu,