THU NHẬN ENZYM PAPAIN ĐỂ ỨNG DỤNG VÀO PHẢN ỨNG THỦY PHÂN PROTEIN TRONG BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG

Header Page of 166 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM THU NHẬN ENZYM PAPAIN ĐỂ ỨNG DỤNG VÀO PHẢN ỨNG THỦY PHÂN PROTEIN TRONG BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỮU CƠ MÃ SỐ: 604427 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC GS.TS TRẦN KIM QUI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2009 Footer Page of 166 Header Page of 166 LỜI CẢM ƠN  Để hoàn thành chƣơng trình cao học luận văn này, em nhận đƣợc hƣớng dẫn, giúp đỡ góp ý nhiệt tình quý thầy cô khoa Hóa trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Trƣớc hết, em xin chân thành cảm ơn đến quý thầy cô khoa Hóa trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TpHCM, đặc biệt thầy cô tận tình dạy bảo cho em suốt thời gian học tập trƣờng Em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến GS.TS Trần Kim Qui, TS Lê Việt Tiến dành nhiều thời gian tâm huyết hƣớng dẫn nghiên cứu giúp em hoàn thành luận văn Nhân đây, em xin chân thành cảm ơn anh chị nghiên cứu sinh động viên giúp đỡ em nhiều trình hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn anh Hồ Anh Vũ, anh động viên đồng hành em suốt thời gian học tập nhƣ thời gian em thực luận văn Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến gia đình cho có đƣợc thành nhƣ ngày hôm Mặc dù có nhiều cố gắng để hoàn thiện luận văn tất nhiệt tình lực mình, nhiên tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp quý báu quý thầy cô bạn Tp.HCM – Ngày 12 tháng 09 năm 2009 Footer Page of 166 Header Page of 166 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ ENZYME PAPAIN 1.1.1 Cysteine protease 1.1.2 Papain 1.1.2.1 Nguồn gốc .2 1.1.2.1.1 Giới thiệu đu đủ 1.1.2.1.2 Phân bố sinh thái đu đủ 1.1.2.1.3 Hoạt tính sinh học công dụng số chất có đu đủ 1.1.2.2 Tính chất papain .5 1.1.2.2.1 Tính chất vật lý 1.1.2.2.2 Tính chất hóa học .5 a) Cấu tạo hóa học b) Cấu trúc không gian .6 c) Cấu trúc tâm hoạt động papain .7 d) Phản ứng papain e Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính xúc tác papain 1.1.2.3 Ứng dụng enzyme papain 10 1.1.2.3.1 Trong y học: .10 1.1.2.3.2 Trong công nghiệp thực phẩm: 10 1.1.2.3.3 Trong ngành công nghiệp khác: 10 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG 10 1.3 PHẢN ỨNG THỦY PHÂN BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG 12 1.3.1 Khái niệm phản ứng thủy phân 12 1.3.2 Quy trình thực phản ứng thủy phân 13 1.3.3 Các thay đổi hóa sinh trình thủy phân: .14 1.3.4 Tính chất sản phẩm sau thủy phân .14 1.3.5 Ƣu nhƣợc điểm phản ứng thủy phân: 15 1.3.5.1 Ƣu điểm: 15 1.3.5.2 Nhƣợc điểm: .15 1.4 ỨNG DỤNG ENZYME PAPAIN LÀM XÚC TÁC CHO PHẢN ỨNG THỦY PHÂN PROTEIN TRONG BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG 15 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 17 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 17 2.1.1 Hóa chất 17 2.1.2 Thiết bị 18 2.2 PHƢƠNG PHÁP THỰC HIỆN 18 2.2.1 Phƣơng pháp trích nhựa đu đủ từ trái .18 2.2.2 Phƣơng pháp thu nhận papain tinh khiết 19 Footer Page of 166 Header Page of 166 2.2.2.1 Loại bỏ chất không tan pH 20 2.2.2.2 Quá trình phân đoạn amonium sulfate 20 2.2.2.3 Quá trình phân đoạn NaCl .20 2.2.2.4 Kết tinh 20 2.2.2.5 Tái kết tinh 21 2.2.2.6 Đông khô chân không 21 2.2.3 Xác định lƣợng protein theo phƣơng pháp Lowry .22 2.2.4 Xác định hoạt tính protein theo phƣơng pháp Anson 23 2.2.5 Xác định đạm tổng số theo phƣơng pháp Kjeldahl 24 2.2.5.1 Nguyên tắc: 24 2.2.5.2 Cách tính: 24 2.2.6 Phƣơng pháp xác định đạm formol (phƣơng pháp Sorensen) 25 2.2.6.1 Nguyên tắc 25 2.2.6.2 Tiến hành 25 2.2.6.3 Cách tính 26 2.2.7 Xác định đạm amoniac 26 2.2.7.1 Nguyên tắc 26 2.2.7.2 Tiến hành 27 2.2.7.3 Cách tính 27 2.2.8 Phƣơng pháp chung tiến hành phản ứng thủy phân bánh dầu đậu phộng với xúc tác papain thô 27 2.2.8.1 Phƣơng pháp loại béo: 27 2.2.8.2 Phƣơng pháp thực phản ứng 27 2.2.8.3 Hiệu suất thủy phân 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .30 3.1 KHẢO SÁT LƢỢNG NHỰA Ở QUẢ ĐU ĐỦ 30 3.2 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN SƠ CHẾ NHỰA TƢƠI .30 3.3 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN THU NHẬN PAPAIN TỪ NHỰA KHÔ .31 3.4 PHƢƠNG PHÁP LOWRY XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG PROTEIN .33 3.5 PHƢƠNG PHÁP ANSON XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH PROTEASE 34 3.6 KHẢO SÁT LƢỢNG ENZYME THU ĐƢỢC SAU CÁC GIAI ĐOẠN TINH CHẾ 35 3.7 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CỦA ENZYME SAU CÁC GIAI ĐOẠN TINH CHẾ 37 3.8 KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI LƢỢNG PROTEIN TRONG CÁC CHẾ PHẨM PROTEASE THU ĐƢỢC THEO THỜI GIAN 39 3.9 KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI HOẠT TÍNH CỦA CÁC CHẾ PHẨM THEO THỜI GIAN .41 3.10 KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA ENZYME PAPAIN 44 3.10.1 Khảo sát ảnh hƣởng pH .44 3.10.2 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ .45 Footer Page of 166 Header Page of 166 3.11 KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG ĐẠM FORMOL VÀ AMONIAC THEO THỜI GIAN TRONG PHẢN ỨNG THỦY PHÂN .46 3.12 KHẢO SÁT PHẢN ỨNG THỦY PHÂN BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG VỚI XÚC TÁC PAPAIN THÔ .49 3.12.1 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.25% so với chất theo thời gian 50 3.12.2 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.50% so với chất theo thời gian 57 3.12.3 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.75% so với chất 65 3.12.4 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 1.00% so với chất 72 KẾT LUẬN 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất vật lý papain Bảng 1.2 Thành phần hóa học hạt đậu phộng 10 Bảng 1.3 Thành phần acid béo bánh dầu đậu phộng 11 Bảng 1.4 Thành phần hóa học bã đậu phộng loại béo 11 Bảng 1.5 Thành phần amino acid đậu phộng 11 Bảng 3.1 Hàm lượng phần trăm nhựa đu đủ loại khác 30 Bảng 3.2 Các phương pháp làm khô nhựa đu đủ .30 Bảng 3.3 Mật độ quang albumin bước sóng 750nm 33 Bảng 3.4 Mật độ quang tyrosin bước sóng 720nm 34 Bảng 3.5 Lượng protein thu phân đoạn tinh chế khác .36 Bảng 3.6 Hoạt tính protease enzyme sau giai đoạn tinh chế .38 Bảng 3.7 Hàm lượng protein chế phẩm theo thời gian 40 Bảng 3.8 Hoạt tính protein chế phẩm theo thời gian 42 Bảng 3.9 Hoạt tính protein P(UI) biến đổi theo pH 44 Bảng 3.10 Hoạt tính protein P(UI) nhựa khô biến đổi theo nhiệt độ 45 Bảng 3.11: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 0.25% so với chất .47 Bảng 3.12: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 0.50% so với chất .47 Bảng 3.13: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 1.00% so với chất .47 Bảng 3.14: Biến thiên hàm lượng đạm amoniac nồng độ enzyme khác 48 Bảng 3.15 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.25% .51 Bảng 3.16 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.25% .51 Bảng 3.17 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.25% .52 Bảng 3.18 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.25% .53 Bảng 3.19 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.25% 53 Bảng 3.20 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.25% .54 Footer Page of 166 Header Page of 166 3.11 KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG ĐẠM FORMOL VÀ AMONIAC THEO THỜI GIAN TRONG PHẢN ỨNG THỦY PHÂN .46 3.12 KHẢO SÁT PHẢN ỨNG THỦY PHÂN BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG VỚI XÚC TÁC PAPAIN THÔ .49 3.12.1 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.25% so với chất theo thời gian 50 3.12.2 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.50% so với chất theo thời gian 57 3.12.3 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 0.75% so với chất 65 3.12.4 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 1.00% so với chất 72 KẾT LUẬN 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất vật lý papain Bảng 1.2 Thành phần hóa học hạt đậu phộng 10 Bảng 1.3 Thành phần acid béo bánh dầu đậu phộng 11 Bảng 1.4 Thành phần hóa học bã đậu phộng loại béo 11 Bảng 1.5 Thành phần amino acid đậu phộng 11 Bảng 3.1 Hàm lượng phần trăm nhựa đu đủ loại khác 30 Bảng 3.2 Các phương pháp làm khô nhựa đu đủ .30 Bảng 3.3 Mật độ quang albumin bước sóng 750nm 33 Bảng 3.4 Mật độ quang tyrosin bước sóng 720nm 34 Bảng 3.5 Lượng protein thu phân đoạn tinh chế khác .36 Bảng 3.6 Hoạt tính protease enzyme sau giai đoạn tinh chế .38 Bảng 3.7 Hàm lượng protein chế phẩm theo thời gian 40 Bảng 3.8 Hoạt tính protein chế phẩm theo thời gian 42 Bảng 3.9 Hoạt tính protein P(UI) biến đổi theo pH 44 Bảng 3.10 Hoạt tính protein P(UI) nhựa khô biến đổi theo nhiệt độ 45 Bảng 3.11: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 0.25% so với chất .47 Bảng 3.12: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 0.50% so với chất .47 Bảng 3.13: Biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian tỉ lệ enzyme 1.00% so với chất .47 Bảng 3.14: Biến thiên hàm lượng đạm amoniac nồng độ enzyme khác 48 Bảng 3.15 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.25% .51 Bảng 3.16 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.25% .51 Bảng 3.17 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.25% .52 Bảng 3.18 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.25% .53 Bảng 3.19 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.25% 53 Bảng 3.20 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.25% .54 Footer Page of 166 Header Page of 166 Bảng 3.21 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.25% .55 Bảng 3.22 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.25% .56 Bảng 3.23 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.25% .56 Bảng 3.24 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.50% .58 Bảng 3.25 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.50% .59 Bảng 3.26 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.50% .59 Bảng 3.27 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.50% .60 Bảng 3.28 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.50% .61 Bảng 3.29 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.50% .61 Bảng 3.30 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.50% .62 Bảng 3.31 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.50% .63 Bảng 3.32 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.50% .63 Bảng 3.33 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.75% .65 Bảng 3.34 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.75% .66 Bảng 3.35 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.75% .66 Bảng 3.36 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.75% .68 Bảng 3.37 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.75% .68 Bảng 3.38 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.75% .69 Bảng 3.39 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lượng xúc tác 0.75% .70 Bảng 3.40 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70OC hàm lượng xúc tác 0.75% .70 Bảng 3.41 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lượng xúc tác 0.75% .71 Bảng 3.42 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lượng xúc tác 1.00% .72 Bảng 3.43 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lượng xúc tác 1.00% .73 Bảng 3.44 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lượng xúc tác 1.00% .74 Bảng 3.45 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lượng xúc tác 1.00% .75 Bảng 3.46 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lượng xúc tác 1.00% .75 Bảng 3.47 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lượng xúc tác 1.00% .76 Bảng 3.48 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lượng xúc tác 1.00% .77 Bảng 3.49 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70OC hàm lượng xúc tác 1.00% .77 Bảng 3.50 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lượng xúc tác 1.00% .78 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 2.1 Các loại hoa trái đu đủ Hình 1.2 Cấu trúc bậc papain Hình 1.3 Cấu trúc tâm hoạt động papain Hình 1.4 Phản ứng hóa học papain Hình 1.8 Sơ đồ phản ứng thủy phân .13 Hình 2.1 Cách lấy nhựa đu đủ 19 Hình 2.2 Sơ đồ thu nhận papain từ nhựa đu đủ đông khô .21 Hình 3.1a Điện di đồ nhựa khô trái non sơ chế dung môi etanol 31 Hình 3.1 b Điện di đồ chế phẩm Merk papain tinh chế từ nhựa đu đủ đông khô 32 Footer Page of 166 Header Page of 166 Hình 3.2 Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ albumin 33 Hình 3.3 Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ tyrosin 34 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn biến thiên lượng protein sau giai đoạn tinh chế .36 Hình 3.5 Sự biến thiên hoạt tính protein sau giai đoạn tinh chế 39 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn biến thiên hàm lượng protein theo thời gian .40 Hình 3.7 Sự biến đổi hoạt tính chế phẩm theo thời gian .42 Hình 3.8 Hoạt tính protein P(UI/ml) nhựa khô biến đổi theo pH .44 Hình 3.9:Hoạt tính protein nhựa khô theo nhiệt độ 46 Hình 3.10: Đồ thị biểu diễn biến thiên hàm lượng đạm formol theo thời gian phản ứng .48 Hình 3.11 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 6.0 hàm lượng xúc tác 0.25% 52 Hình 3.12 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 7.0 hàm lượng xúc tác 0.25% 55 Hình 3.13 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lượng xúc tác 0.25% 57 Hình 3.14 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 6.0 hàm lượng xúc tác 0.50% 60 Hình 3.15 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 7.0 hàm lượng xúc tác 0.50% 62 Hình 3.16 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lượng xúc tác 0.50% 64 Hình 3.17 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 6.0 hàm lượng xúc tác 0.75% 67 Tại pH 7.0, hiệu suất phản ứng nhiệt độ khác trình bày bảng 3.36 – 3.38 67 Hình 3.18 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 7.0 hàm lượng xúc tác 0.75% 69 Hình 3.19 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lượng xúc tác 0.75% 71 Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 6.0 hàm lượng xúc tác 1.00% 74 Hình 3.21 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 7.0 hàm lượng xúc tác 1.00% 76 Hình 3.22 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lượng xúc tác 1.00% 78 Hình 3.23 Kết điện di dung dịch sau phản ứng hàm lượng xúc tác khác 79 Footer Page of 166 Header Page of 166 MỞ ĐẦU Hiện vấn đề vệ sinh an toàn thực phẩm ô nhiễm môi trường vấn đề quan tâm hàng đầu Trong trình sản xuất nước chấm có hàm lượng đạm cao, người ta thường dùng phương pháp thủy phân protein tạo thành dung dịch amino acid Có phương pháp tiến hành phản ứng thủy phân protein: Phương pháp hóa học: thủy phân protein với xúc tác acid, thời gian tiến hành phản ứng 24 Nhược điểm phương pháp tạo thành sản phẩm phụ 3MCPD, chất độc gây ung thư Phương pháp dùng men vi sinh: sử dụng chủng nấm Aspergillus oryzae để xúc tác phản ứng thủy phân protein Nhược điểm phương pháp thời gian thực phản ứng dài khoảng từ – tháng Phương pháp hóa sinh: sử dụng xúc tác enzyme protease có nguồn gốc động thực vật làm xúc tác Phương pháp có thời gian phản ứng ngắn không tạo sản phẩm phụ có khả gây ung thư Các phản ứng sử dụng xúc tác enzyme ứng dụng rộng rãi lĩnh vực chúng cho hiệu suất cao mà thời gian thực phản ứng ngắn so với phản ứng tiến hành theo phương pháp cổ điển Hơn enzyme thường phân bố rộng rãi tất mô, quan động vật thực vật, tế bào vi sinh vật nên tương đối dễ tìm Trong phạm vi luận văn tiến hành thu nhận enzyme papain có nhựa đu đủ ứng dụng tính chất thủy phân protein enzyme papain để làm xúc tác cho phản ứng thủy phân protein bánh dầu đậu phộng ép lấy dầu Chúng chọn enzyme papain enzyme có hoạt tính protease cao, diện nhiều nhựa trái đu đủ, loại trồng phổ biến nước ta LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÓA HỌC Footer Page of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 10 of 166 TỔNG QUAN Chương 1.1 GIỚI THIỆU VỀ ENZYME PAPAIN 1.1.1 Cysteine protease [8, 9, 19, 34, 43] Cysteine proteases (EC.3.4.22) nhóm protein có trọng lượng phân tử khoảng 21-30 kDa, protein có khả xúc tác để thủy phân loại liên kết: peptide, amide, ester thiol Đây enzyme có nhóm –SH tâm hoạt động Người ta tìm thấy 20 họ cysteine proteases (Barrett, 1994) nhiều enzyme số (papain, bromelain, ficain, animal cathepsins) ứng dụng rộng rãi công nghiệp Có hai loại carboxypeptidase B) cysteine proteases endopeptidases exopeptidase (bromelain, (cathepsin ficain, X, cathepsin ) Exopeptidase thủy phân liên kết peptide đầu N đầu C tự endopeptidase cắt đứt liên kết peptide chuỗi polypeptide 1.1.2 Papain 1.1.2.1 Nguồn gốc[2,17, 19, 32 ] Papain (EC 3.4.22.3) cysteine protease biết đến nhiều phân lập lần vào năm 1879 từ nhựa trái đu đủ (Carica papaya) Đây enzyme xác định cấu trúc tinh thể (Drenth et al., 1968; Kamphuis et al., 1894) Trong nhựa đu đủ enzyme papain có loại protease khác chymopapain, caricain, glycyl endopeptidase số enzyme khác (Baines and Brock-lehurst, 1979) Nhựa đu đủ có hàm lượng hoạt tính papain cao tập trung vùng có nắng nóng độ ẩm ổn định quanh năm LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÓA HỌC Footer Page 10 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 78 of 166 70 Tại pH 8.0, kết trình bày bảng 3.39 – 3.41 Bảng 3.39 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lƣợng xúc tác 0.75% Thời gian Mật độ quang Lượng thủy phân 750nm (AU) protein (giờ) (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.1474 211.14 20.77% 0.1751 250.67 26.21% 0.2208 316.01 35.22% 0.2478 354.59 40.53% 10 0.2529 361.86 41.54% 12 0.2575 368.43 42.44% 14 0.2868 410.29 48.21% 16 0.2970 424.86 50.22% 18 0.3058 437.43 51.95% 20 0.3132 448.00 53.41% 22 0.3276 468.57 56.24% 24 0.3438 491.71 59.43% O Bảng 3.40 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70 C hàm lƣợng xúc tác 0.75% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang Lượng 750nm (AU) protein (mg/g) 0.2125 304.19 33.59% 0.2233 319.59 35.71% 0.2257 323.00 36.18% 0.2294 328.29 36.91% 10 0.2368 338.86 38.37% 12 0.2411 345.00 39.21% 14 0.2505 358.43 41.06% 16 0.2570 367.71 42.34% 18 0.3056 437.11 51.91% 20 0.3073 439.60 52.25% 22 0.3587 513.00 62.37% 24 0.3723 532.43 65.04% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 78 of 166 Hiệu suất thủy phân (%) CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 79 of 166 71 Bảng 3.41 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lƣợng xúc tác 0.75% Thời gian Mật độ quang Lượng thủy phân 750nm (AU) protein (giờ) (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.2016 288.54 31.43% 0.2064 295.43 32.38% 0.2092 299.43 32.93% 0.2293 328.14 36.89% 10 0.2026 290.00 31.63% 12 0.2017 288.71 31.46% 14 0.2458 351.76 40.14% 16 0.2553 365.27 42.01% 18 0.2783 398.17 46.54% 20 0.2826 404.29 47.38% 22 0.2987 427.29 50.55% 24 0.3230 462.00 55.34% Nhận xét: hiệu suất phản ứng pH 8.0 giảm nhiều so với pH 7.0 (khoảng 10%) Hiệu suất giảm nhiều 60OC 80OC, nhiên 70OC hiệu suất phản ứng 60% Hiệu suất phản ứng (%) 70 60 50 60oC 40 70oC 80oC 30 20 10 10 12 14 16 18 20 22 24 Thời gian phản ứng (giờ) Hình 3.19 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lƣợng xúc tác 0.75% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 79 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 80 of 166 72 Qua điều kiện khảo sát, nhận thấy phản ứng thủy phân với hàm lượng xúc tác 0.75% có hiệu suất cao pH 7.0 nhiệt độ 70oC 70OC Nhiệt độ pH 6.0 7.0 8.0 Hiệu suất (%) 68.29 69.69 65.04 3.12.4 Khảo sát phản ứng thủy phân hàm lƣợng xúc tác 1.00% so với chất Hàm lượng xúc tác cuối mà tiến hành khảo sát 1.00%, phản ứng thực giá trị pH khác 6, 7, Tương ứng với giá trị pH, tiến hành khảo sát giá trị nhiệt độ 60OC, 70OC, 80OC Sau phản ứng, cân 0.1g dung dịch phản ứng định mức thành 100ml nước sôi để ngừng phản ứng thủy phân Rút 0.4ml dung dịch phản ứng pha loãng để xác định hàm lượng protein hòa tan theo phương pháp Lowry Tại pH 6.0, hiệu suất phản ứng nhiệt độ khác trình bày bảng 3.42 – 3.44 Bảng 3.42 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 60OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 80 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 81 of 166 73 Thời gian Mật độ quang Lượng thủy phân 750nm (AU) protein (giờ) (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.2491 356.43 39.23% 0.2498 357.43 39.37% 0.2569 367.57 40.77% 0.2597 371.57 41.32% 10 0.2848 407.43 46.26% 12 0.2874 411.14 46.77% 14 0.3005 429.86 49.35% 16 0.3233 462.43 53.84% 18 0.3458 494.57 58.27% 20 0.3512 502.29 59.33% 22 0.3515 502.71 59.39% 24 0.3657 523.00 62.19% Bảng 3.43 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 70OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang Lượng 750nm (AU) protein (mg/g) 0.3023 432.43 49.71% 0.3091 442.14 51.05% 0.3220 460.57 53.59% 0.3252 465.14 54.22% 10 0.3302 472.29 55.20% 12 0.3307 473.00 55.30% 14 0.3379 483.29 56.72% 16 0.3397 485.86 57.07% 18 0.3315 474.14 55.46% 20 0.3380 483.43 56.74% 22 0.4008 573.14 69.10% 24 0.4125 589.86 71.40% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 81 of 166 Hiệu suất thủy phân (%) CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 82 of 166 74 Bảng 3.44 Hiệu suất phản ứng pH 6.0, 80OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian Mật độ quang Lượng thủy phân 750nm (AU) protein (giờ) (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.1963 281.00 28.84% 0.2011 287.86 29.78% 0.2124 304.00 32.01% 0.2262 323.71 34.72% 10 0.2484 355.43 39.09% 12 0.2467 353.00 38.76% 14 0.2612 373.71 41.61% 16 0.2821 403.57 45.73% 18 0.2822 403.71 45.75% 20 0.3476 497.14 58.63% 22 0.3502 500.86 59.14% 24 0.3511 502.14 59.31% Nhận xét: với hàm lượng xúc tác 1.00%, hiệu suất phản ứng có chuyển biến rõ Hiệu suất cao thu pH 6.0 71.40% tăng 34.73% so với hàm lượng xúc tác 0.25% Hiệu suất phản ứng (%) Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng (pH 8.0, Nồng độ xúc tác 1.00%) 90.00 80.00 70.00 60.00 60oC 50.00 70oC 40.00 80oC 30.00 20.00 10.00 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Thời gian phản ứng (giờ) Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 6.0 hàm lƣợng xúc tác 1.00% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 82 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 83 of 166 75 Tại pH 7.0, hiệu suất phản ứng nhiệt độ khác trình bày bảng 3.45 – 3.47 (phụ lục 21 – 23) Bảng 3.45 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 60OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang 750nm (AU) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.2918 417.36 47.63% 0.2999 429.00 49.23% 0.3229 461.91 53.77% 0.3256 465.70 54.29% 10 0.3324 475.39 55.63% 12 0.3355 479.80 56.24% 14 0.3395 485.56 57.03% 16 0.3522 503.76 59.54% 18 0.3687 527.26 62.78% 20 0.3766 538.53 64.33% 22 0.3879 554.76 66.57% 24 0.3923 560.96 67.42% Bảng 3.46 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 70OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian Mật độ quang thủy phân 750nm (AU) (giờ) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.2901 415.04 47.31% 0.2974 425.43 48.74% 0.3023 432.37 49.70% 0.3091 442.19 51.05% 10 0.3220 460.63 53.59% 12 0.3252 465.14 54.22% 14 0.3302 472.33 55.21% 16 0.3307 472.93 55.29% 18 0.3315 474.13 55.45% 20 0.3379 483.33 56.72% 22 0.3397 485.91 57.08% 24 0.4589 656.14 80.54% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 83 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 84 of 166 76 Bảng 3.47 Hiệu suất phản ứng pH 7.0, 80OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian Mật độ quang thủy phân 750nm (AU) (giờ) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.1589 227.53 21.47% 0.1732 247.94 24.28% 0.1813 259.51 25.88% 0.1820 260.54 26.02% 10 0.1992 285.13 29.41% 12 0.2039 291.81 30.33% 14 0.2079 297.56 31.12% 16 0.2093 299.60 31.40% 18 0.2242 320.90 34.34% 20 0.2381 340.70 37.06% 22 0.2453 351.00 38.48% 24 0.2642 378.00 42.21% Nhận xét: so với pH 6.0 hiệu suất cao điều kiện 70OC đạt 71.40% pH 7.0 hiệu suất phản ứng tăng lên nhiều đạt giá trị 80.54% Đây hiệu suất cao thu thực phản ứng thủy phân protein bánh dầu đậu phộng loại béo với xúc tác enzyme papain có nhựa đu đủ đông khô Từ đồ thị hình 3.20 thấy nhiệt độ 80OC, hiệu suất phản ứng thấp hẳn so với hai nhiệt độ lại Hiệu suất phản ứng (%) Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng (pH 7.0, Nồng độ xúc tác 1.00%) 90.00 80.00 70.00 60.00 60oC 50.00 70oC 40.00 80oC 30.00 20.00 10.00 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Thời gian phản ứng (giờ) Hình 3.21 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 7.0 hàm lƣợng xúc tác 1.00% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 84 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 85 of 166 77 Tại pH 7.0, hiệu suất phản ứng nhiệt độ khác trình bày bảng 3.48 – 3.50 Bảng 3.48 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 60OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang 750nm (AU) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.1590 227.71 21.49% 0.1732 247.94 24.28% 0.1813 259.63 25.89% 0.1822 260.86 26.06% 10 0.1929 276.14 28.17% 12 0.2041 292.14 30.37% 14 0.2087 298.71 31.28% 16 0.2099 300.43 31.51% 18 0.2240 320.57 34.29% 20 0.2380 340.57 37.05% 22 0.2453 351.00 38.48% 24 0.2789 399.00 45.10% Bảng 3.49 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 70OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang 750nm (AU) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.3045 435.57 50.14% 0.3091 442.14 51.05% 0.3226 461.43 53.70% 0.3229 461.86 53.76% 10 0.3309 473.29 55.34% 12 0.3312 473.71 55.40% 14 0.3365 481.29 56.44% 16 0.3397 485.86 57.07% 18 0.3329 476.14 55.73% 20 0.3380 483.43 56.74% 22 0.3569 510.43 60.46% 24 0.4009 573.29 69.12% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 85 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 86 of 166 78 Hiệu suất phản ứng Bảng 3.50 Hiệu suất phản ứng pH 8.0, 80OC hàm lƣợng xúc tác 1.00% Thời gian thủy phân (giờ) Mật độ quang 750nm (AU) Lượng protein (mg/g) Hiệu suất thủy phân (%) 0.1963 281.00 28.84% 0.2032 290.86 30.20% 0.2146 307.14 32.44% 0.2258 323.14 34.65% 10 0.2476 354.29 38.94% 12 0.2498 357.43 39.37% 14 0.2574 368.29 40.87% 16 0.2645 378.43 42.26% 18 0.2800 400.57 45.32% 20 0.3494 499.71 58.98% 22 0.3523 503.86 59.55% 24 0.3577 511.57 60.61% Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng (pH 8.0, nồng độ xúc tác 1.00% ) 90.00 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 10 12 14 16 18 20 22 24 Thời gian phản ứng 60oC 70oC 80oC Hình 3.22 Sự phụ thuộc hiệu suất vào thời gian phản ứng pH 8.0 hàm lƣợng xúc tác 1.00% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 86 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 87 of 166 79 Qua điều kiện khảo sát, nhận thấy phản ứng thủy phân với hàm lượng xúc tác 1.00% có hiệu suất cao pH 7.0 nhiệt độ 70OC 70oC Nhiệt độ pH 6.0 7.0 8.0 Hiệu suất (%) 71.4 80.54 69.12 Ngoài tiến hành chạy điện di gel polyacrylamid với hàm lượng xúc tác khác 0.25%, 0.75% 1.00% điều kiện thực phản ứng tối ưu xúc tác Kết thu hình 3.23 Hình 3.23 Kết điện di dung dịch sau phản ứng hàm lƣợng xúc tác khác Chú thích: – Thang protein chuẩn – Dung dịch sau phản ứng với hàm lượng xúc tác 0.25% - Dung dịch sau phản ứng với hàm lượng xúc tác 0.50% - Dung dịch sau phản ứng với hàm lượng xúc tác 1.00% LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 87 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 88 of 166 80 KẾT LUẬN Từ kết thu có kết luận sau: Từ 100ml dịch nhựa đu đủ, sau đông khô chân không thu gam nhựa khô Hoạt tính protease enzyme papain nhựa đu đủ đông khô chân xác định theo phương pháp Anson cải tiến 70.35UI/ml Nồng độ enzyme ảnh hưởng quan trọng đến hiệu suất phản ứng thủy phân Ảnh hưởng giới hạn mức độ tương quan trọng lượng nồng độ enzyme chất Khảo sát biến thiên hàm lượng đạm formol đạm amoniac theo thời gian phản ứng, nhận thấy hàm lượng đạm amoniac có biến đổi thấp đồng thời hàm lượng đạm formol sau 24 phản ứng thay đổi Điều chứng tỏ phản ứng thủy phân kết thúc Điều kiện thực phản ứng thủy phân tốt pH 7.0, 70oC hàm lượng xúc tác 1.00% Hiệu suất phản ứng thu 80.54% Sau 24 thủy phân, hầu hết protein có trọng lượng phân tử cao bị thủy phân thành phần dịch thủy phân thu nhận acid amin polypeptide có trọng lượng phân tử khoảng 14,4 – 25,0 kDa Hướng phát triển đề tài Đề tài đóng vai trò quan trọng trình nghiên cứu chế biến nước chấm có hàm lượng đạm dinh dưỡng cao không tạo thành sản phẩm phụ ảnh hưởng đến sức khỏe người Chính vậy, hướng phát triển tiến hành phân tích hàm lượng acid amin chuyển hóa có chúng để đảm bảo sản xuất nước chấm có hàm lượng dinh dưỡng cao Ngoài cần tiếp tục khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến biến thiên hàm lượng axit amin đạm amoniac để từ làm tiền đề cho việc nghiên cứu sản xuất nước chấm từ phế liệu công nghiệp dầu thực vật LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 88 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 89 of 166 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: [1] Lâm Thị Kim Châu, Văn Đức Chín, Ngô Đại Nghiệp (2004), Thực tập lớn sinh hóa, Nxb Đại Học Quốc Gia, Tp.HCM, Trang 25 – 69 [2] Phạm Thị Trân Châu, Phan Tuấn Nghĩa (2006), Công nghệ sinh học (tập 3) – Enzyme ứng dụng, Nxb Giáo dục, Hà Nội, Trang – 28 [3] Nguyễn Thị Chung (1991), “Nghiên cứu điều kiện tối ưu sản xuất papain thô papain thương phẩm”, Tạp chí dược học, Số 4, Trang 23, 30 [4] Phạm Thị Ánh Hồng (2003), Kỹ thuật sinh hóa, Nxb Đại Học Quốc Gia, Tp.HCM, Trang 27 – 116 [5] Dương Thị Hương Giang, Nguyễn Thị Xuân Dung, Phan Thị Bích Trâm (2006), “Nghiên cứu sử dụng enzyme papain thô từ nhựa đu đủ để thủy phân protein bánh dầu đậu nành”, Tạp chí Nghiên cứu Khoa học, Số 5, Trang 115 – 122 [6] Nguyễn Đình Huyên, Hà Ái Quốc, Đồng Thị Thanh Thu (2006), Sinh hóa - phần II, Tủ sách trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Tp.HCM, Trang 29 – 32 [7] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, Trang 372-53 [8] Nguyễn Đức Lượng, Cao Cường, Nguyễn Ánh Tuyết, Lê Thị Thủy Tiên, Tạ Thu Hằng, Huỳnh Ngọc Oanh, Nguyễn Thúy Hương, Phan Thị Huyền (2004), Công nghệ enzyme, Nxb Đại Học Quốc Gia, Tp.HCM, Trang – 230 [9] Lê Thị Phú, Nguyễn Thị Thu Sang (2006), “Khảo sát tinh enzyme chymopapain nhựa trái đu đủ Việt Nam”, Tạp chí phát triển khoa học công nghệ, (5), Trang 59 – 62 [10] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nxb Đại Học Quốc Gia, Tp.HCM, Trang 323 – 354 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 89 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 90 of 166 82 [11] Trần Đình Thanh, Hoàng Thanh Hương, Nguyễn Văn Việt, Trần Đình Toại (2001), Tạp chí hóa học công nghiệp hóa chất, 72 (7), Trang 11 – 18 [12] Đồng Thị Thanh Thu (2006), Sinh hóa bản, Tủ sách trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Tp.HCM, Trang 43 – 61 [13] Trần Đình Toại, Trần Trung Hiếu (2003), “Động học ức chế phản ứng thủy phân protein dự trữ, xúc tác papain từ nhựa đu đủ xanh”, Tạp chí hóa học, 41(1), Trang 14 – 18 [14] Trần Đình Toại, Đỗ Ngọc Lanh, Nguyễn Văn Thiết, Nguyễn Thu Hoài (1994), “Nghiên cứu khả thủy phân số loại protein papain”, Tạp chí hóa học, 32 (4), Trang 33 – 36 [15] Trần Đình Toại, Nguyễn Thu Hoài, Đỗ Ngọc Lanh, Trần Đình Thanh (1996), “ Mô hình phản ứng thủy phân protein dự trữ xúc tác papain”, Tạp chí hóa học, 34 (4), Trang 19 – 23 Tiếng Anh: [16] M Azarkan, A.E Moussaoui, D Wuytswinkel, G Dehon, Y Looze (2003), “Fractionation and purification of the enzymes stored in the latex of Carica papaya”, Journal of Chromatography B, 790, pp 229-238 [17] M Azarkan, R Wintjens, Y Looze, D.B Volant (2004), “Detection of three wound – induced proteins in papaya latex”, Phytochemistry, 65, pp 525 – 534 [18] D.E Burke, S.D Lewis, J.A Shafer (1974), “A two-step procedure for purification of papain from extract of papaya latex”, Archives of biochemistry and biophysics, 164, pp 30 – 36 [19] Tim Bugg (2004), Introduction to enzyme and coenzyme chemistry, Blackwell, UK, pp 100 – 103 [20] S Damrongsakkul, K Ratanathammapan, K Komolpis, W Tanthapanichakoon (2008), “Enzymatic hydrolysis of rawhide using papain and neutrase”, Journal of Industrial and Engineering Chemistry, 14, pp 202 – 206 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 90 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 91 of 166 83 [21] M Dekeyser, S.D Smelt, J Demeester, A Lauwers (1994), “Fractionation and purification of the thiol proteinases from papaya latex”, Journal of Chromatography B, 656, pp 203-208 [22] Hans-Hartwig Otto, T Schirmeister (1997), “Cysteine proteases and their inhibitors”, Chemical Reviews, 97(1), pp 133 – 172 [23] Martin J Harrison, Neil A Burton, and Ian H Hillier (1997), “Catalytic Mechanism of the Enzyme Papain: Predictions with a Hybrid Quantum Mechanical/Molecular Mechanical Potential”, J.Am.Chem.Soc, 119 (50), pp 12285 – 12291 [24] R Monti, C.A Basilio, H.C Trevisan, J Contiero (2000), “Purification of papain from fresh latex of Carica papaya”, Brazilian Archives of Biology and Technology, Vol.43, No.5, pp 501 – 507 [25] A.D Neklyudov, A.N Ivankin, A.V Berdutina (2000), “Properties and uses of protein hydrolysates”, Applied Biochemistry and Microbiology, Vol.36, No.5, pp 452 – 459 [26] S Nitsawang, R Hatti-Kaul, P Kanasawud (2006), “Purification of papain from Carica papaya latex: aqueous two-phase extraction versus two-step salt precipitation”, Enzyme and Microbial Technology, 39, pp 1103 – 1107 [27] T Miyazawa (1999), “Enzymatic resolution of amino acids via ester hydrolysis”, Amino acids, 16, pp 191 – 213 [28] R.A Mckee, H Smith (1986), “Purification of proteinases from Carica papaya”, Phytochemistry, Vol.25, No.10, pp 2283 – 2287 [29] J Polaina, A.P MacCabe (2007), Industrial Enzymes structure, function and application, Spinger, Spain, pp 174 – 176, 187 – 202 [30] S pitpreecha, S Damrongsakkul (2006), “Hydrolysis of raw hide using proteolytic enzyme extracted from papaya latex”, Korean J Chem Eng, Vol.23, No.6, pp 972 – 976 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 91 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM Header Page 92 of 166 84 [31] C.E Salas, M.T.R Gomes, M Hernandez, M.T.P Lopes (2008), “Plant cysteine proteinases: Evaluation of the pharmacological activity”, Phytochemistry, 69, pp 2263 – 2269 [32] H.A.Sathish, P.R Kumar, V Prakash (2007), “Mechanism of solvent induced thermal stabilization of papain”, International Journal of Biological Macromolecules, 41, pp 383 – 390 [33] M.P.C Silvestre (1997), “Review of methods for the analysis of protein hydrolysates”, Food Chemistry, Vol 60, No 2, pp 263 – 271 [34] Robert Rastall (2007), Novel enzyme technology for food applications, CRC press, USA, pp 61-62 [35] S Zucker, D.J Buttle, M.J.H Nicklin, A.J Barret (1985), “The proteolytic activities of chymopapain, papain, and papaya proteinase III”, Biochimica et Biophysica Acta, 828, pp 196 – 204 Trang web: [36]http://www.bio.davidson.edu/people/jowilliamson/Techniques/Protocolw eek5.html [37] http://www.cesti.gov.vn/right/stinfo/content_0/nam_2001/thg9-01/sp- dv/Document.2004-07-29.3451 [38] http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY431/Peptidase10.html [39] http://www.cimsi.org.vn/tapchi/DUOChoc/Nam2000/bai7-5-2000.htm [40] www.ctu.edu.vn/institutes/biotech/19.pdf [41]http://www.dostbinhdinh.org.vn/MagazineNewsPage.asp?TinTS_ID=23 0&TS_ID=13 [42] www.elearning.hueuni.edu.vn/file.php/71/pdf/c5.pdf [43] http://en.wikipedia.org/wiki/Cysteine_protease [44] http://irfanchemist.wordpress.com/2009/04/19/purification-of-protein/ [45]http://www.vietlinh.com.vn/langviet/langrau/rauqualamthuoc/lt_d udu_thainghen.html [46]http://www.shantidatta.com/papain_uses.htm LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Footer Page 92 of 166 CHIÊM LÂM PHÚC DIỄM ... 166 12 1.3 PHẢN ỨNG THỦY PHÂN BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG 1.3.1 Khái niệm phản ứng thủy phân[ 13, 14, 15] Phản ứng thủy phân phản ứng phân hủy chất có tham gia nước Phản ứng thủy phân phản ứng quan trọng... lọc 1.4 ỨNG DỤNG ENZYME PAPAIN LÀM XÚC TÁC CHO PHẢN ỨNG THỦY PHÂN PROTEIN TRONG BÁNH DẦU ĐẬU PHỘNG Trong luận văn này, chúng tơi điều chế enzyme papain để thủy phân protein bánh dầu đậu phộng với... thu nhận enzyme papain có nhựa đu đủ ứng dụng tính chất thủy phân protein enzyme papain để làm xúc tác cho phản ứng thủy phân protein bánh dầu đậu phộng ép lấy dầu Chúng tơi chọn enzyme papain enzyme