Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)Nghiên cứu bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc tại Nghệ An (LA tiến sĩ)
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGÔ THỊ MAI VI NGHIÊN CỨU BỆNH ĐỐM ĐEN (Phaeoisariopsis personata) HẠI LẠC TẠI NGHỆ AN CHUYÊN NGÀNH : BẢO VỆ THỰC VẬT MÃ SỐ : 62 62 01 12 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI, 2017 Công trình hoàn thành tại: HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn: PGS.TS NGUYỄN VĂN VIÊN Phản biện 1: PGS.TS Ngô Bích Hảo Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phản biện 2: PGS.TS Nguyễn Kim Vân Hội Khoa học kỹ thuật Bảo vệ thực vật Việt Nam Phản biện 3: TS Hà Minh Thanh Viện Bảo vệ thực vật Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án thư viện: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Học viện Nông nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Bệnh đốm đen nấm Phaeoisariopsis personata (giai đoạn vô tính) hay Mycosphaerella berkeleyi (giai đoạn hữu tính) bệnh hại nguy hiểm lạc toàn giới Thiệt hại suất bệnh đốm đen toàn cầu ước tính gần triệu USD (CABI, 2006) Mức độ thiệt hại suất bệnh đốm đen hại lạc thay đổi từ 10 – 80%, tùy theo khu vực vụ trồng (CABI, 2006; Zhang, 2001; Dwivedi, 2003; Pensuk, 2003; Khedikar, 2010) Trên đồng ruộng, nấm tạo giai đoạn sinh sản vô tính hữu tính bào tử phân sinh hình thành từ tàn dư tồn đất nguồn bệnh quan trọng Nhìn chung, nấm gây bệnh đốm đen không truyền qua hạt xem tác nhân truyền qua đất Khi bắt đầu vụ trồng, bào từ phân sinh nấm từ tàn dư đất nhiễm phía nhanh chóng phát tán lên phía gây tàn lụi điều kiện ngoại cảnh thuận lợi (McDonald et al., 1985) Tác nhân gây bệnh đốm đen loài nấm túi thuộc nhóm sinh dưỡng “biotrophe” quan hệ nấm với lạc tuân theo quan hệ gen đối gen điển hình Hiện có số nghiên cứu giới tính kháng lạc nấm gây bệnh đốm đen ((Dwivedi et al., 2002; Mace et al., 2006; Mondal and Badigannavar 2009; Mondal et al., 2009; Mallikarjuna et al., 2012) Các chủng nấm khác di truyền có phản ứng mẫn cảm khác thuốc hóa học khác tính gây bệnh giống (Adiver et al., 2009) Vì vậy, mức độ đa dạng đặc điểm sinh học di truyền nấm gây bệnh đốm đen nói riêng tác nhân gây bệnh nói chung cần phải nghiên cứu để áp dụng hiệu biện pháp phòng chống có nghiên cứu mức độ đa dạng nấm gây bệnh thực Cho tới nay, có nghiên cứu mức độ đa dạng phân tử nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Ấn Độ dựa phân tích RAPD (Adiver et al., 2009) phân tích phổ isozyme (Adiver et al., 2008) Tương tự có nghiên cứu mức độ biến động tính gây bệnh nấm gây bệnh đốm đen (Hossain, 1997; Hossain and Ilag, 2000) Tại Nghê ̣ An nói riêng Việt Nam nói chung, bệnh đốm đen hại lạc xuất gây hại phổ biến đồng ruộng Tuy nhiên, nay, chưa có công trình nghiên cứu sâu thực cách hệ thống bệnh Việt Nam Bên ca ̣nh đó, bệnh làm chết nên người dân quan chuyên môn chưa thâ ̣t sự ý thức đươ ̣c tác ̣i của nhóm bê ̣nh ̣i lá đế n suấ t và phẩ m chấ t la ̣c Chı́nh vı̀ vậy, công tác chı̉ đa ̣o phòng trừ bê ̣nh chưa phù hơ ̣p dẫn đế n sự giảm sút nghiêm tro ̣ng về suất cũng phẩ m chấ t la ̣c của vùng Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, việc nghiên cứu bệnh đốm đen hại lạc cần thiết Việt Nam Nghiên cứu tập trung vào đánh giá thiệt hại, mức độ đa dạng nấm đánh giá số biện pháp phòng trừ bệnh điều kiện tỉnh Nghệ An Các kết nghiên cứu luận án sở để nghiên cứu ứng dụng biện pháp trừ bệnh đốm đen nhằm phòng chống hiệu phát triển, lây lan bệnh đồng ruộng, góp phần làm tăng suất phẩm chất lạc 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Đánh giá thiệt hại, mức độ đa dạng biện pháp phòng trừ nấm P personata gây bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An 1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu Bệnh đốm đen hại lạc nấm P personata gây 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu Đề tài tập trung nghiên cứu đa dạng phân tử, đặc tính sinh học, tính gây bệnh số biên pháp phòng chống nấm P personata 1.3.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu Điều tra, đánh giá tác hại nghiên cứu bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Mẫu bệnh đốm đen thu thập Nghệ An số tỉnh khác Lào Cai, Thanh Hóa, Hà Tĩnh Đồng Nai Đề tài thực từ năm 2012 đến năm 2015 1.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI Đề tài đánh giá thiệt hại suất bệnh đốm đen gây lạc đồng ruộng Nghệ An Trên giống lạc L14, bệnh đốm đen làm giảm suất tới 30,24% vụ xuân tới 49,90% vụ thu Bổ sung thông tin phân loại nấm đốm đen hại lạc Nghệ An Trình tự vùng gen ITS 11 mẫu nấm thu thập cho thấy chúng thuộc loài Phaeoisariopsis personata (giai đoạn vô tính) hay Mycosphaerella berkeleyi (giai đoạn hữu tính) Dựa phân tích Rep - PCR chứng tỏ quần thể nấm Nghệ An có mức độ đa dạng thấp mối quan hệ nhóm phả hệ với đặc điểm hình thái, nguồn gốc câc mẫu nấm thu thập Xác định đặc điểm sinh học dịch tễ đặc trưng nấm P personata Nghệ An Trong đó, khám phá khoa học quan trọng xác định dạng sinh sản hữu tính nấm chưa phát thấy điều kiện tự nhiên Nghệ An Kết nghiên cứu luận án chứng tỏ thuốc hoạt chất Carbendazime, dịch chiết thực vật từ cà độc (Datura metel) trầu không (Piper betel) có khả phòng chống hiệu nấm P personata điều kiện phòng thí nghiệm, nhà lưới đồng ruộng Ở đồng ruộng, có hai thời điểm xử lý bệnh đốm đen hiệu nhất, bao gồm phun mọc tuần, tuần mọc tuần tuần 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đề tài bổ sung, đóng góp liệu khoa học định danh nấm đốm đen giải trình tự vùng ITS Đặc biệt, dựa phân tích Rep - PCR chứng tỏ quần thể nấm Nghệ An có mức độ đa dạng thấp mối quan hệ nhóm phả hệ với đặc điểm hình thái, nguồn gốc câc mẫu nấm thu thập Kết nghiên cứu gợi ý nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An, biện pháp quản lý bệnh áp dụng đồng loạt toàn tỉnh tạo hiệu phòng chống giống 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Đề tài xác định đặc điểm sinh học, dịch tễ đặc trưng nấm, đánh giá thiệt hại suất bệnh đốm đen gây lạc nghiên cứu biện pháp phòng trừ bệnh cách hệ thống Kết nghiên cứu đề tài khẳng định tầm quan trọng bệnh đồng thời giải thích gây bệnh nấm P personata hại lạc đồng ruộng, tìm thời điểm xử lý bệnh hiệu quả, từ làm sở cho việc đề xuất áp dụng biện pháp phòng trừ nhằm giảm thiểu thiệt hại bệnh cách hiệu quả, góp phần nâng cao suất phẩm chất lạc PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT LẠC TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM Cây lạc đứng hàng thứ hai sau đậu tương số trồng ngắn ngày lấy dầu thực vật (cả diện tích sản lượng) trồng rộng rãi 100 quốc gia giới Theo số liệu Tổ chức Nông Lương Thế giới (2013), từ năm 2000 đến 2012, với gia tăng suất, sản lượng lạc giới tăng lên, đạt cao 38,4 triệu (năm 2008), sau giảm xuống với tụt giảm diện tích trồng, sản lượng lạc năm 2010 đạt 35,9 triệu (FAO, 2013) Các nước có sản lượng lạc lớn niên vụ 2011/2012 Trung Quốc, Ấn Độ, Nigeria Mỹ Trung Quốc nước đứng đầu với 16,8 triệu tấn, Ấn Độ với 5,78 triệu Việt Nam nước đứng thứ 12 với sản lượng 0,47 triệu (FAO, 2013) Sản xuất lạc Việt Nam phân bố hầu hết vùng sinh thái nông nghiệp với diện tích trồng lạc chiếm khoảng 28% tổng diện tích công nghiệp hàng năm, tập trung chủ yếu vùng Duyên hải Nam Trung Bộ, Đồng sông Hồng, Trung du miền núi phía Bắc Bắc Trung Bộ Theo số liệu Tổng cục Thống kê Việt Nam (2013), vòng 10 năm từ 2002-2012, diện tích giảm từ 246,7 nghìn (năm 2002) xuống 220,5 nghìn (năm 2012) sản xuất lạc Việt Nam có bước chuyển biến tích cực suất, tăng từ 1,62 tấn/ha (năm 2002) lên 2,13 tấn/ha (năm 2012) Sản lượng tăng từ 400,4 nghìn (năm 2002) lên 470,6 nghìn (năm 2012) Năm 2012, suất lạc bình quân nước đạt cao 2,13 tấn/ha Sản lượng lạc nước đạt cao vào năm 2008 với 530,2 nghìn (bảng 2.2) 2.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH ĐỐM ĐEN HẠI LẠC Năm 1985, Ellis Everhad kiểm tra mẫu bệnh Alabama Nam Carolina có kết luận nấm bệnh thuộc loại Cercospora sp đặt tên Cercospora personatum Hiện nay, tên nấm đổi thành Phaeoisariopsis personata (giai đoạn vô tính) hay Mycosphaerella berkeleyi (giai đoạn hữu tính) Theo số liệu Trung tâm Sinh học Nông nghiệp Quốc tế (CABI, 2006), tính toàn giới, bệnh đốm nâu đốm đen làm giảm suất lạc từ 10 - 80%, số thay đổi tùy theo khu vực mùa vụ khác Theo Khedikar et al (2010), lạc vừa bị ảnh hưởng bệnh rỉ sắt bệnh đốm đen suất giảm 50 - 70% Ở Pakistan, tỷ lệ nhiễm bệnh đốm đen lên đến 87,2% thiệt hại suất lên đến 70% (Ijaz et al., 2011) Ở Bangladesh, bệnh đốm lạc nấm C arachidicola C personatum làm giảm suất lạc từ 30 - 48% (Hasan et al., 2016) Ở Việt Nam, theo Mehan and Hong (1994), bệnh rỉ sắt Puccinia arachidis bệnh đốm đen hại lạc Phaeoisariopsis personata hại bệnh hại lạc, phân bố khắp vùng trồng nước Hai bệnh kết hợp với làm giảm 30 - 70% suất lạc Bệnh đốm đen gây hại tất phận mặt đất lạc thân, cành phận bị hại nặng Nấm sản sinh độc tố Cercosporin kìm hãm hoạt động gây tượng rụng sớm Bệnh phát sinh gây hại ngưỡng nhiệt độ 18 - 35oC nhiệt độ tối thích 18 - 23oC (Pande et al., 2004) Trên đồng ruộng, nấm tạo giai đoạn sinh sản vô tính hữu tính bào tử phân sinh hình thành từ tàn dư tồn đất nguồn bệnh quan trọng (CABI, 2006) Các ký chủ bệnh đốm đen ghi nhận loài thực vật thuộc chi Arachis mà chưa ghi nhận loài thực vật khác chi Arachis (Arsule and Pande, 2012) Theo Abdou and Cooper (1974) Butler et al (1994), nấm C personatum sinh trưởng sinh bào tử tốt môi trường WA + PLX OMA + PLX ngưỡng nhiệt độ 25°C Kết nghiên cứu Abdou and Cooper (1974) cho thấy, nấm C personatum sinh bào tử tốt nuôi cấy điều kiện chiếu sáng hoàn toàn nuôi cấy điều kiện tối hoàn toàn nấm không sinh bào tử Tác giả Zhang et al (2001) tiến hành thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo nấm gây bệnh đốm đen hại lạc C personatum lên giống lạc Florunner nhà lưới, điều kiện nhiệt độ 25 - 28oC, cường độ chiếu sáng 14h/ngày, sau đánh giá mức độ bệnh 3, 4, 5, 6, tuần tuổi Kết cho thấy, số bệnh tuần tuổi đạt cao Khi lây nhiễm với nồng độ 1,6 × 105 bào tử/ml số bệnh cao so với công thức lây nhiễm với mật độ độ 1,6 × 103 bào tử/ml 1,6 × 104 bào tử/ml 2.3 NHỮNG NGHIEN CỨU VỀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ BỆNH ĐỐM ĐEN * Biện pháp canh tác Biện pháp canh tác vệ sinh đồng ruộng, thu dọn tàn dư bệnh nhổ bỏ cỏ dại có tác dụng phòng chống hiệu bệnh đốm đen (CABI, 2006; Gaddamwad et al., 2014) * Sử dụng giống kháng Sử dụng giống kháng bệnh coi ưu tiên hàng đầu phòng chống bệnh đốm đen hại lạc Nhiều tác giả giới rằng, sử dụng giống kháng bệnh có hiệu Nhiều dòng/giống lạc kháng bệnh nghiên cứu đưa vào sản xuất LGN123, LGN184, LGN117, GPBD4, VG9816, RHRGS 06083, RHRGS 06092, ICG 5286, ICG 2273, ICG 111426 ICG 6022 (Kukanur et al., 2014; Kahate et al., 2015) Ở Việt Nam, Lưu Minh Cúc (2009) nghiên cứu thị vi vệ tinh lập đồ gen kháng bệnh đốm đen lạc Phân tích đa dạng di truyền 32 giống lạc cho kết 46/104 thị cho đa hình giống Sử dụng phương pháp chọn giống truyền thống kết hợp thị phân tử rút ngắn thời gian chọn giống chọn 17 dòng mang gen kháng bệnh * Sử dụng nấm đối kháng Trong số nấm đối kháng có khả ứng dụng phòng chống bệnh cây, nấm Chaetomium có tiềm lớn Nấm Chaetomium loại nấm túi hoại sinh lớn với 300 loài mô tả (von Arx, Guarro et al 1986) Một số loài Chaetomium, chủ yếu chủng thuộc loài C Globosum C cupreum chứng tỏ có hoạt tính ức chế nhiều loài nấm gây bệnh truyền qua đất Phytophthora spp., Pythium ultimum, Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum f sp lycopersici số nấm hại phần mặt đất Venturia inequalis, Pyricularia oryzae, Botritis cinera, Phomopsis, Colletotrichum (Soytong et al., 2001; Aggarwall et al., 2004) Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu sử dụng nấm Chaetomium phòng chống bệnh đốm đen hại lạc nấm P personata gây công bố * Sử dụng dịch chiết thực vật Theo Singburaudom (2015), hoạt chất hydroxychavicol dịch chiết thô từ trầu không thành phần có hoạt tính chống nấm gây bệnh thực vật Tác giả đánh giá tính kháng dịch chiết số loại nấm Colletotrichum gloeosporioides, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum f sp cubense, Sphaceloma ampelinum, v.v Kết cho thấy, dịch chiết xuất thô từ trầu không ức chế hình thành sợi nấm nảy mầm bào tử Ở nồng độ 1% 10%, dịch chiết trầu khả ức chế 100% loại nấm thử nghiệm điều kiện in vitro Theo Kishore et al (2001), dịch chiết từ cà độc dược (Datura metel L.) có tác dụng tốt việc ức chế khả nảy mầm nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Khi thử nghiệm với nồng độ từ 0,01 - 10%, sau 24h, khả ức chế nảy mầm nấm gây bệnh đốm đen đạt kết tốt, từ 93,9 - 100% Nồng độ dịch chiết 2% có khả ức chế 60% hình bào tử nấm P personata gây bệnh đốm đen hại lạc điều kiện nhà lưới Ở đồng ruộng, sử dụng dịch chiết từ cà độc dược (D metel L.) có khả ức chế tỷ lệ bệnh số bệnh nấm P personata gây bệnh đốm đen hại lạc đến thu hoạch (115 ngày sau trồng) Theo Kishore and Pande (2005), đồng ruộng, sử dụng dịch chiết cà độc dược (D metel L.) phun lên lạc thời điểm 45, 60, 75 90 ngày sau trồng có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen nấm P personata đến 95 ngày sau trồng * Phòng chống chất kích kháng Theo Zhang et al (2001), lây nhiễm nấm gây bệnh đốm đen hại lạc C personatum điều kiện nhà lưới, sau xử lý chất kích kháng salicylic acid, sodium salicylate, isonicotinic acid, or benzo [1,2,3]thiadiazole-7carbothioc acid S-methyl ester (Actigard) tuần tuổi Các chất kích kháng SA, NaSA, BABA INA xử lý với nồng độ 0,5; 1,0; 1,5 2,0 mg/ml; Actigard xử lý với nồng độ 0,05; 0,10; 0,15 0,20 mg/ml Kết thí nghiệm cho thấy, mức giảm số bệnh đốm đen hại lạc sai khác rõ ràng công thức thí nghiệm Khi xử lý chất kích kháng bệnh đốm đen hại lạc C personatum lạc không tạo cảm ứng hệ thống giống số loại trồng khác * Phòng chống thuốc hoá học Thuốc hóa học có hiệu cao phòng chống bệnh đốm đen sử dụng rộng rãi nhiều nước giới Theo Johnson and Subrahmanyam (2003), sử dụng hexaconazole (nồng độ 0,2%) phun vào thời điểm 60 ngày 75 ngày tuổi, số bệnh đốm lạc 18,8% suất tăng lên 43% Theo Pappachan et al (2015), phun thuốc BVTV thuộc nhóm carbendazim (0,1%), carbendazim + mancozeb (0,2%), difenconazole (0,1%) tebuconazole (0,1%) có hiệu cao phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc, phun thuốc carbendazime (0,1%) có suất lạc cao có hiệu kinh tế cao PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 VẬT LIỆU, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 3.1.1 Vật liệu, thiết bị hóa chất nghiên cứu - Vật liệu nghiên cứu: Giống lạc trồng phổ biến Nghệ An (giống L14 giống Sen Lai) 33 mẫu lạc bị bệnh đốm đen thu thập Nghệ An số tỉnh khác Lào Cai, Thanh Hóa, Hà Tĩnh Đồng Nai - Thiết bị nghiên cứu: Máy PCR, tủ lạnh bảo quản mẫu, nồi hấp khử trùng môi trường, buồng nuôi cấy nấm, kính hiển vi, bể ổn nhiệt, v.v - Hoá chất dùng kỹ thuật PCR hóa chất khác thuốc bảo vệ thực vật (Topsin M 70WP, Anvil 5SC, Daconil 75WP, Carbenvil 50SC), chất kích kháng: Salicylic acid, Bion 50WG, Oligochitosan, Aliette 800WG (Aliette 800WG thuốc trừ bệnh chế tác động thuốc có khả kích kháng nên nội dung nghiên cứu luận án sử dụng Aliette 800WP chất kích kháng) - Chế phẩm sinh học: Chế phẩm Ketomium chế phẩm EMINA - Dịch chiết thực vật: Dịch chiết cà độc (Datura metel L.) trầu không (Piper betle L.) - Môi trường nuôi cấy: WA, PDA, OMA, v.v 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu + Điều tra đồng ruộng, đánh giá thiệt hại bệnh thí nghiệm phòng trừ đồng ruộng thực tỉnh Nghệ An + Các nghiên cứu liên quan đặc điểm sinh học, tính gây bệnh mức độ đa dạng phân tử thực tại: - Bộ môn bệnh cây, Khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Trung tâm Bệnh nhiệt đới, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Trung tâm Thực hành thí nghiệm Trại thực nghiệm Nông học, Khoa Nông Lâm Ngư, Trường Đại học Vinh 3.1.3 Thời gian nghiên cứu Đề tài thực tử năm 2012 đến năm 2015 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Đánh giá mức đô ̣ phổ biế n và tác ̣i bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An - Xác đinh ̣ loài nấ m gây bê ̣nh đố m đen và đánh giá mức độ đa dạng phân tử mẫu nấm thu thập - Nghiên cứ u mô ̣t số đặc điểm sinh học nấ m gây bê ̣nh đố m đen ̣i la ̣c - Nghiên cứu biện pháp phòng trừ bê ̣nh đố m đen hại lạc nấm P personata gây 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Phương pháp điều tra theo QCVN 01- 38: 2010/BNNPTNT - Phương pháp đánh giá thiệt hại bệnh đốm đen hại lạc đến sinh trưởng suất lạc thực theo Das and Roy (1995) - Phương pháp phân lập đơn bào tử thực theo Urashima et al (1993) - Các mẫu nấm chiết DNA tổng số theo phương pháp Doyle and Doyle (1987) - Hai mồi ITS4 ITS5 (White et al., 1990) sử dụng để nhân toàn vùng ITS mẫu nấm - Tìm kiếm sở liệu Genbank phần mềm trực tuyến BLAST NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/) Mức độ đa dạng di truyền nấm gây bệnh đốm đen lạc đánh giá kỹ thuật Rep-PCR theo Versalovic et al (1991, 1994) + Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng sinh bào tử nấm P.personata thực theo Stenglein et al (2006) + Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ bào tử tuổi đến khả gây bệnh nấm P personata phương pháp tách thực theo Mallikarjuna (2012) - Đánh giá tính gây bệnh điều kiện chậu vại/ô nhỏ thực theo Aquino et al (1995) - Phương pháp đánh giá khả phòng chống bệnh đốm đen hại lạc thuốc hóa học thực theo Labrinos and Nutter (1993) - Phương pháp đánh giá khả phòng chống bệnh đốm đen hại lạc chất kích kháng thực theo Zhang et al (2001) - Phương pháp đánh giá khả phòng chống bệnh dịch chiết thực vật thực theo Kishore et al (2001) - Phương pháp đánh giá khả phòng chống bệnh phẩm sinh học thực theo Zhang et al (2001) - Tính hiệu lực thuốc, chát kích kháng, dịch chiết thực vật, chế phẩm sinh học theo công thức Abbott (1925) - Số liệu phân tích đa dạng di truyền nấm xử lý phần mềm MEGA 6.0 NTSys 2.0 Hệ số tương đồng cho cặp mẫu tính toán theo công thức: S = (a+d)/(a+b+c+d) Trong S hệ số tương đồng, a số băng giống mẫu, b số băng xuất mẫu thứ i, c số băng xuất mẫu thứ j, d số băng không xuất mẫu (nhưng xuất mẫu khác) - Số liệu điều tra xử lý Microsoft Office Excel Số liệu thí nghiệm tính toán, xử lý thống kê theo phương pháp phân tích phương sai chương trình IRRISTAT 4.0 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 MỨC ĐỘ PHỔ BIẾN VÀ TÁC HẠI CỦA BỆNH ĐỐM ĐEN HẠI LẠC TẠI NGHỆ AN 4.1.1 Mức độ phổ biến bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Bệnh đốm đen xuất gây hại phổ biến hàng năm ruộng lạc Nghệ An vụ thu vụ xuân Trong vụ xuân vụ thu từ năm 2012 đến năm 2014, từ vùng đồng bằng, đồng ven biển đến vùng trung du miền núi tỉnh Nghệ An, Mức độ phổ biến bệnh điểm điều tra đạt mức tối đa 100%, tất ruộng điều tra bị nấm gây bệnh đốm đen P personata gây hại 4.1.2 Diễn biến bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Qua trình điều tra vụ liên tiếp (vụ xuân 2013, vụ thu 2013, vụ xuân 2014) cho thấy, xuất bệnh phụ thuộc vào giai đoạn sinh trưởng Bệnh bắt đầu xâm nhập bắt đàu hoa, đến bắt đầu đầm tia triệu chứng bệnh bắt đầu biều Bệnh phát triển ổn định bắt đầu tăng nhanh lạc vào tiếp tục gây hại đến chín Tuy nhiên, phát triển bệnh phụ thuộc nhiều vào điều kiện thời tiết, đặc biệt độ ẩm lượng mưa Chính vậy, huyện thuộc vùng đồng ven biển Diễn Châu, Nghi Lộc lượng mưa nhiều ảnh hưởng gió biển nên bệnh phát triển mạnh lây lan nhanh Ở Nam Đàn, lượng mưa hàng năm nên bệnh có xu hướng gây hại nhẹ Ở huyện điều tra, điều kiện thời tiết mưa gió nhiều vụ thu thuận lợi cho bệnh phát triển nên mức độ gây hại bệnh cao tàn lụi sớm so với vụ xuân 4.1.3 Ảnh hưởng bệnh đốm đen đến sinh trưởng yếu tố cấu thành suất lạc Mức độ thiệt hại bệnh đến sinh trưởng suất đánh giá vụ liên tiếp gồm vụ xuân vụ thu năm 2014 Kết cho thấy, bệnh đốm đen ảnh hưởng nghiêm trọng đên suất lạc, mức độ gây hại bệnh cao suất giảm Trong vụ xuân 2014, không bị bệnh (cấp 0) suất thu hoạch đạt 58,41 tạ/ha Khi mức độ gây hại trung bình ruộng mức cấp suất giảm 5,02% so với cấp Khi mức độ gây hại trung bình ruộng mức cấp suất giảm 17,0% Khi mức độ gây hại trung bình ruộng mức cấp suất giảm 30,24% Khi mức độ gây hại trung bình ruộng mức cấp suất giảm 43,28% Thực tế điều tra cho thấy, cấp bệnh trung bình ruộng vụ lạc Hình 4.1 Phân tích phả hệ dựa trình tự toàn vùng ITS 11 mẫu nấm gây bệnh hại đốm đen lạc thu Việt Nam (đánh dấu chấm đen) mẫu nấm sẵn có GenBank Cây xây dựng phương pháp NJ Thanh bar trình bày khoảng cách di truyền Giá trị nốt giá trị thống kê boostrap dạng % (1000 lần lặp) trình bày giá trị >50% (Ngưỡng tin cậy nhìn chung 75% có nghĩa 1000 lần lặp 750 lần taxa phân nhóm với nhau) Kết so sánh trình tự phân tích phả hệ vùng ITS chứng tỏ tất 11 mẫu nấm gây bệnh đốm đen hại lạc thu thập Nghệ An, Hà Tĩnh, Lào Cai Đồng Nai thành viên loài M berkeleyi Nghiên cứu chứng minh trình tự vùng ITS bảo thủ loài M berkeleyi sử dụng phân tích đa dạng lại thị phân tử tốt để định danh nấm gây bệnh đốm đen hại lạc M berkeleyi 11 4.2.2 Phân tích đa dạng di truyền nấm gây bệnh đốm đen hại lạc dựa phân tích Rep - PCR 4.2.2.1 Phân tích Rep - PCR mẫu nấm gây bệnh đốm đen hại lạc thu thập Việt Nam Kết phân tích Rep-PCR 33 mẫu nấm gây bệnh đốm đen thu thập giống gồm L14, L26, Sen Lai Sen Nghệ An (Sen NA), trồng vụ xuân 2013 tỉnh gồm Đồng Nai (2 mẫu), Nghệ An (29 mẫu), Thanh Hóa (1 mẫu), Lào Cai (1 mẫu) cho thấy, số băng sản phẩm phản ứng PCR với mồi BOX 17 với kích thước từ ~ 0,15 kb tới ~ kb (Bảng 4.2, Hình 4.2) Bộ mồi ERIC REP không tạo băng sản phẩm Kiểm tra băng sản phẩm gel agarose cho thấy mồi BOX tạo tới băng đa hình nằm gữa vị trí 0,3 kb kb (Hình 4.2) Bảng 4.2 Sản phẩm phân tích Rep-PCR 33 mẫu nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Rep-PCR ERIC-PCR BOX-PCR REP-PCR Số băng hình thành 17 17 Số băng đa hình Kích thước băng tối đa (kb) 0 2.0 0 Hình 4.2 Box-PCR 33 mẫu nấm dốm đen hại lạc M berkeleyi thu thập tỉnh năm 2013 Số thứ tự mẫu tương ứng với số thứ tự Bảng 4.8 M1 M2 thang DNA kb 100 bp (GeneRuler kb, GenRuler 100 bp, Thermo Scientific) với băng tham khảo 250 bp 1500 bp (M1), 100 bp 500 bp (M2) rõ mũi tên 4.2.2.2 Phân tích cụm sản phẩm Rep - PCR Các băng sản phẩm PCR mồi BOX chuyển sang số liệu nhị phân để tạo liệu đầu vào cho phân tích cụm dùng phần mềm NTSYS nhằm tìm hiểu mức độ đa dạng quan hệ mẫu nấm gây bệnh đốm đen Kết phân tích cụm cho mồi BOX tạo cụm mẫu nấm (ký hiệu I, II, III) với ngưỡng phân chia dựa hệ số tương đồng 83 % Cụm III gồm 03 mẫu NA 3.4, NA9.5, NA20.3, cụm II gồm mẫu TH1, LC2, NA12.1, NA14.1, NA24.1, cụm I gồm 25 mẫu lại (Hình 4.3) Mặc dù chia thành cụm (i) PCR không tạo sản phẩm dùng mồi Rep ERIC (chứng tỏ gen chúng giống không chứa vị trí để gắn mồi) (ii) mức tương đồng di truyền cao (83-99%) phân 12 tích dùng mồi BOX nên phân tích Rep - PCR chứng tỏ quần thể nấm gây bệnh đốm đen Nghệ An đồng Kết phù hợp với nghiên cứu điều kiện thí nghiệm Nghệ An, qua năm điều tra từ 2013 đến 2014, chưa phát thấy hình thức sinh sản hữu tính nấm đốm đen Quan sát phù hợp với công bố McDonald et al (1985) nấm đốm đen hại lạc khó hình thành giai đoạn sinh sản hữu tính tự nhiên Hình 4.3 Phân tích cụm dựa số liệu BOX-PCR mẫu nấm gây bệnh đốm đen thu thập Việt Nam Hệ số tương đồng tính theo công thức tính hệ số phù hợp đơn giản (Simple Matching Coeficient) Các vẽ theo phương pháp ghép cặp mẫu dùng khoảng cách trung bình số học ngang (UPGMA) Phân tích χ2 thực nhằm tìm hiểu liệu có mối quan hệ cụm phả hệ với nguồn gốc đặc điểm hình thái mẫu nấm Phân tích χ2 cho thấy mối quan hệ nhóm nấm phân biệt dựa phân tích Box-PCR với nguồn gốc chúng (4 vùng sinh thái, giống lạc), đặc điểm hình thái môi trường nuôi cấy nhân tạo (4 màu tản nấm, nhóm kích thước tản nấm) Bảng 4.3 Quan hệ nhóm phả hệ với nguồn gốc địa lý, giống, đặc điểm hình thái Quan nhóm phả hệ (I, II, III) với Giống (L14, L26, Sen Lai, Sen NA) Vùng sinh thái (Đồng ven biển, Đồng bằng, Trung du, Miền núi) Màu tản nấm (Xám nhạt, Xám đậm, Xám hồng, Đen) Kích thước tản nấm (mm) (0-3,4; >3,46,8; >6,8-10,1; >10,1) Độ tự df χ2 p Kết luận* 1,63 0,951 Không quan hệ 10,7 0,148 Không quan hệ 3,02 0,807 Không quan hệ 6,1 0,412 Không quan hệ * Kết luận dựa ngưỡng tin cậy chung α = 0.05 13 Kết nghiên cứu gợi ý nấm gây bệnh đốm đen Nghệ An, biện pháp quản lý bệnh (giống kháng, thuốc hóa học, chế phẩm sinh học) áp dụng đồng loạt toàn tỉnh tạo hiệu phòng chống giống 4.3 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM P PERSONATA GÂY BỆNH ĐỐM ĐEN HẠI LẠC 4.3.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy điều kiện ánh sáng đến sinh trưởng sinh bào tử nấm P personata Nấm nuôi cấy môi trưởng khác đặt ngưỡng nhiệt độ 25 C, ủ bóng tối liên tục (24h tối) 12 chiếu sáng xen kẽ 12 ủ bóng tối (12h sáng 12h tối) Kết cho thấy, nấm sinh trưởng sinh bào tử thuận lợi nuôi cấy điều kiện 12 sáng xen kẽ 12 tối Trong 10 loại môi trường sử dụng thí nghiệm, môi trường PDA bổ sung dịch chiết lạc thuận lợi cho sinh trưởng nấm, đường kính tản nấm đo sau 10 tuần có giá trị lớn 6,65 mm Trên tất môi trường nuôi cấy có hình thành bào tử Trong đó, môi trường OMA môi trường WA + dịch chiết lạc có lượng bào tử hình thành tản nấm nhiều nhất, 11,67.104 bào tử 12,22.104 bào tử Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Abdou and Cooper (1974) môi trường WA + PLX, OMA phù hợp cho sinh trưởng nấm, kích thước tản nấm đạt mức lớn 1- mm Ngược lại, nuôi cấy điều kiện ủ bóng tối liên tục (24h tối) nấm nấm P personata sinh trưởng chậm không sinh bào tử tất môi trường nuôi cấy 4.3.2 Đánh giá ảnh hưởng nồng độ bào tử tuổi đên khả gây bệnh nấm P personata phương pháp tách Kết thí nghiệm cho thấy, nồng độ bào tử sử dụng để lây nhiễm không ảnh hưởng đến thời gian ủ bệnh, vòng đời đường kính vết bệnh nấm P personata lại ảnh hưởng lớn đến số vết bệnh lá, ảnh hưởng đến diện tích nhiễm bệnh tần số nhiễm Trong đó, khả gây bệnh nấm lây nhiễm với nồng độ 5.105 bào tử/ml đạt mức cao với số vết bệnh 44,33 vết/lá kép, tỷ lệ diện tích nhiễm bệnh 11,61% tần số nhiễm đạt 1,29 vết/cm2 Tuổi ảnh hướng lớn đến khả gây bệnh nấm P personata Bệnh biểu triệu chứng nhanh hình thành bào tử sớm tuần tuổi, với thời gian ủ bệnh vòng đời ngắn 13,33 ngày 16,50 ngày Như vậy, tuần tuổi mẫn cảm với nấm P personata Thực tế điều tra đồng ruộng cho thấy, bệnh đốm đen bắt đầu xuất lạc bắt đầu đâm tia hình thành (tức khoảng tuần sau mọc vụ xuân khoảng tuần sau mọc vụ thu), với thời gian tiềm dục khoảng 14 ngày bào tử nấm phải tiếp xúc khả nhiễm với lạc bắt đầu hoa (tức tuần tuổi vụ xuân tuần tuổi vụ thu) Như giai đoạn lạc hoa giai đoạn nẫm cảm lạc bệnh đốm đen 14 Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Zhang et al (2001) lây nhiễm nhân tạo nấm C personatum lên giống lạc Florunner nhà lưới số bệnh tuần tuổi đạt cao Kết sở khoa học để đưa khuyến cáo cho công tác phòng trừ bệnh Để nâng cao hiệu biện pháp phòng trừ cần tiến hành phun thuốc lạc bắt đầu hoa Đây thời điểm bào tử nấm P personata đất bắt đầu tiếp xúc với tầng phía thực thiện trình xâm nhập, lây bệnh Do xử lý vào thời điểm làm giảm mức độ gây hại bệnh việc ức chế nảy mầm bào tử phát triển sợi nấm bắt đầu xâm nhiễm 4.4 NGHIÊN CỨU BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ BỆNH ĐỐM ĐEN HẠI LẠC DO NẤM P PERSONATA GÂY RA 4.4.1.Nghiên cứu khả phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc biện pháp hóa học Một số loại thuốc hóa học sử dụng phổ biến thị trường Việt Nam tập trung nghiên cứu, bao gồm Topsin M 70WP, Anvil 5SC, Daconil 75WP, Carbenvil 50SC nhằm mục đích tìm loại thuốc hóa học có khả phòng chống hiệu bệnh đốm đen Hiệu lực loại thuốc đánh giá từ phòng thí nghiệm, đến nhà lưới đồng ruộng giống lạc L14 * Ảnh hưởng môṭ số loa ̣i thuốc hoá học đến khả nảy mầm bào tử nấm Phaeoisariopsis personata điều kiện in vitro Kết nghiên cứu cho thấy, Daconil 75WP Carbenvil 50SC hai loại thuốc có hiệu cao việc ức nảy mầm bào tử P personata Tại thời điểm 12 giờ, 24 giờ, 48 sau cấy tất nồng độ thử nghiệm có hiệu lực đạt mức cao 100% * Ảnh hưởng mô ̣t số loa ̣i thuốc hoá học đến khả gây bệnh nấm P personata giống lạc L14 điều kiện in vivo Mặc dù thuốc Daconil 75WP đánh giá có khả ức chế hiệu nảy mầm bào tử nấm P personata điều kiện in vitro tác dụng việc kéo dài thời gian ủ bệnh, đồng thời tác dụng làm giảm đường kính vết bệnh Tuy nhiên, ức chế tốt nảy mầm bào tử nên thuốc có tác dụng làm giàm mạnh số vết bệnh sử dụng thuốc Daconil 75WP nồng 0,19% có tác dụng làm giảm SVB xuống mức thấp 30,33 vết Carbenvil 50SC thuốc có hiệu tốt việc ức chế tính gây bệnh nấm P personata Ngoài khả khống chế hiệu số vết bệnh xuất cây, thuốc có khả ức chế phát triển đường kính vết bệnh Quan trọng hơn, thuốc có tác dụng kéo dài thời gian ủ bệnh, từ làm giảm số lượng chu kỳ xâm nhiễm đồng ruộng hay giảm số lần tái xâm nhiễm vụ trồng, giảm mức độ gây hại bệnh Trong đó, Carbenvil 50SC nồng độ 0,25% có hiệu tối ưu với thời gian ủ bệnh đạt mức dài 26,78 ngày, số vết bệnh đạt mức thấp 27,78 vết đường kính vết bệnh mức thấp 1,53 mm 15 * Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc giống L14 số thuốc hoá học trong điều kiện nhà lưới Thuốc Carbenvil 50SC nồng độ khuyến cáo (0,25%) có hiệu cao nhất, thời điểm tuần 12 tuần sau mọc, hiệu lực phòng trừ đạt 65,9% 78,59% Thuốc Daconil 75WP có tác dụng phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc tương đối tốt Tuy nhiên, để có hiệu tốt cần sử dụng nồng độ 5/4 khuyến cáo (0.19%) Tại thời điểm tuần 12 tuần sau mọc, hiệu lực phòng trừ bệnh đạt mức 63,66% 72,32% * Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen số thuốc hóa học giống lạc L14 đồng ruộng vụ xuân 2014 huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An Thuốc Carbenvil 50SC nồng độ 0,25% Daconil 75WP nồng độ 0,19% phun vào thời điểm gồm: 1) Phun mọc tuần tuần, thời điểm bắt đầu hoa, lúc bào tử đất bắt đầu tiếp xúc với tầng phía để xâm nhập vào Vì phun vào thời điểm nhằm khống chế lượng bào tử nảy mầm xâm nhập vào ức chế phát triển sợi nấm từ ban đầu 2) Phun mọc tuần thời điểm bệnh chớm xuất đồng ruộng Thời điểm lựa chọn để phun khuyến cáo thuốc trừ bệnh thị trường 3) Phun mọc tuần tuần, thời điểm vết bệnh xuất nhiều bắt đầu hình thành bào tử để phát tán, lây lan Vì vậy, phun thời điềm nhằm khống chế hình thành bào tử vết bệnh, đồng thời ức chế nảy mầm, xâm nhập bào tử phát tán Ba thời điểm lựa chọn để tiến hành nghiên cứu hiệu lực phòng trừ sản phẩm khác chất kích kháng, chế phẩm nấm đối kháng dịch chiết thực vật Kết thí nghiệm với thuốc Carbenvil 50SC thể thể bảng 4.4 Bảng 4.4 Hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen thuốc Carbenvil 50SC giống lạc L14 đồng ruộng vụ xuân 2014 huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An CT Nồng độ Thời điểm phun CT2 Khuyến Cây mọc tuần + tuần CT2 Cây mọc tuần cáo (0,25%) Cây mọc tuần + tuần CT3 CT4 (Đ/C) Không phun LSD0,05 TLB (%) CSB (%) HLPT (%) 83,33 100,0 86,67 98,89 9,75 20,25 10,62 54,44 82,14a 62,84b 80,56a 7,00 Khối lượng chắc/cây (g) 14,65a 13,42b 14,74a 11,49c 1,19 Ghi chú: Giá trị trung bình cột mang chữ khác sai khác có ý nghĩa mức α = 0,05 Từ kết thí nghiệm (bảng 4.4) cho thấy, thuốc Carbenvil 50SC phát huy hiệu phun vào thời điểm mọc tuần tuần (CT1) Hiệu phòng trừ bệnh đạt mức cao 82,14%, khối lượng đạt 14,65 16 gam, tăng 27,5% so với đối chứng Ở CT3, phun vào thời điểm tuần tuần sau mọc hiệu phòng trừ tương đương với CT1, đạt mức 80,56% khối lượng qua đạt 14,74 gam/cây, tăng 28,29% so với đối chứng Ở CT2, phun vào thời điểm bệnh chớm xuất loại thuốc hóa học thường khuyến cáo hiệu phòng trừ bệnh Do lúc bào tử xâm nhập phát triển chuẩn bị biểu triệu chứng nên phun lúc tác dụng khống chế lượng nguồn bệnh xâm nhập vào giai đoạn đầu Mặt khác, thời điểm hầu hết vết bệnh chưa biểu triệu chứng nên không khống chế hình thành, phát tán, xâm nhiễm bào tử vết bệnh Chính vậy, hiệu lực phòng trừ bệnh đạt mức thấp 62,84% khối lượng đạt mức 13,42 gam/cây, tăng 16,80% so với đối chứng Tiếp tục thử nghiệm với thuốc Daconil 75WP nồng độ 5/4 khuyến cáo (0,19%), kết thể bảng 4.5 Bảng 4.5 Hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen thuốc hóa học Daconil 75WP giống lạc L14 đồng ruộng vụ xuân 2014 huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An CT Nồng độ CT1 5/4 khuyến CT2 cáo (0,19%) CT3 CT4 (Đ/C) LSD0,05 Thời điểm phun TLB (%) CSB (%) Cây mọc tuần + tuần Cây mọc tuần Cây mọc tuần + tuần Không phun 97,78 96.67 100,0 96,67 15,06 31,97 15,80 53,70 Khối lượng HLPT chắc/cây (%) (g) a 13,68a 72,05 40,40b 12,11b 70,69a 13,42a 11,23b 6,86 1,26 Ghi chú: Giá trị trung bình cột mang chữ khác sai khác có ý nghĩa mức α = 0,05 Từ kết thí nghiệm (bảng 4.5) cho thấy, phun thuốc vào thời điểm tuần tuần sau mọc phun mọc tuần tuần có hiệu phòng trừ bệnh tương đương đạt mức cao Khi tiến hành phun vào thời điểm tuần tuần sau mọc hiệu lực phòng trừ đạt 72,05% khối lượng đạt 13,68 gam/cây, tăng 21,82% so với đối chứng Khi tiến hành phun vào thời điểm tuần tuần sau mọc hiệu lực phòng trừ bệnh đạt 70,69% khối lượng đạt 13,42%, tăng 19,5% so với đối chứng Khi phun vào lúc bệnh chớm xuất hiệu lực phòng trừ đạt mức thấp 40,40% khối lượng đạt 12,11 g/cây không sai khác so với đối chứng Như vậy, Carbenvil 50SC có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen cao Để nâng cao hiệu lực phòng trừ bệnh, góp phần tăng suất lạc cần tiến hành phun 17 thuốc mọc tuần tuần phun mọc tuần tuần 4.4.2 Nghiên cứu khả phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc chất kích kháng Mục tiêu nghiên cứu nhằm tìm hiểu xem tính kháng SAR có hình thành lạc để chống lại bệnh đốm đen hay không Bốn loại hóa chất gồm SA, Bion 50WG, Oligochitosan, Aliette 800WG thử nghiệm giống lạc L14 * Ảnh hưởng số chất kích kháng đến khả gây bệnh nấm P personata giống lạc L14 điều kiện in vivo Kết thí nghiệm cho thấy, hầu hết chất kích kháng thử nghiệm tác dụng kéo dài thời gian ủ bệnh đường kính vết bệnh công thức thí nghiệm giảm không đáng kể so với đối chứng Trong đó, Aliette 800WG nồng độ 0,4% có hiệu cao với thời gian ủ bệnh 15,33 ngày số vết bệnh 48,22 vết, tiếp đến Chitonsan, SA có hiệu Bion 50WG * Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen số chất kích kháng giống lạc L14 điều kiện nhà lưới Các chất kích kháng tiếp tục đánh giá điều kiện nhà lưới nhằm xác định xác khả kích thích hình thành tính kháng SAR để phòng chống bệnh đốm đen lạc Qua kết thí nghiệm cho thấy, Aliette 800WG Chitosan hai chất kích kháng có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen cao Tuy nhiên, Aliette 800WG nồng độ 0,4% Chitosan nồng độ 0,15% có hiệu cao hiệu lực phòng trừ đạt 43,56% 40,43% thời điểm 12 tuần sau mọc Nhìn chung, chất kích kháng có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen thấp, khả kích thích hình thành tính kháng tập nhiễm (SAR) để phòng chống bệnh đốm đen lạc hóa chất không cao Kết phù hợp với kết nghiên cứu Zhang and Reddy (2001) * Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen số chất kích kháng giống lạc L14 đồng ruộng vụ xuân 2014 huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An Các công thức hiệu điều kiện nhà lưới lựa chọn để tiếp tục đánh giá đồng ruộng, bao gồm Bion 50WG nồng độ 0,15%, Alliet 800WG nồng độ 0,40%, SA nồng độ 0,1% Chitosan nồng độ 0,15% Từ kết thí nghiệm cho thấy, Aliette 800WG 0,4% Chitosan 0,15% có hiệu lực phòng trừ bệnh cao nhất, nhiên đạt mức 45,68% 41,82%, khối lượng đạt 12,25 gam/cây 13,06 gam/cây, tăng 9,07% 16,30% so với đối chứng Kết lần khẳng định rằng, sử dụng chất kích kháng để phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc không hiệu 4.4.3 Nghiên cứu khả phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc biện pháp sinh học Nghiên cứu nhằm mục đích tìm loại chế phẩm sinh học phòng trừ hiệu bệnh đốm đen, góp phần tăng suất lạc đồng thời bảo vệ môi trường 18 Hai loại chế phảm sinh học (Kaetomium EM) hai loài cà độc dược (Datura metel L.) trầu không (Betel pepper L.) sử dụng nghiên cứu Các thí nghiệm thực giống lạc L14 4.4.3.1 Nghiên cứu khả phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc dịch chiết thực vật Lá trầu không cà độc dược tách chiết theo cách đun sôi 1000C chiết tươi, loại dịch chiết thử nghiệm từ phòng thí nghiệm đồng ruộng a Ảnh hưởng số dịch chiết thực vật đến khả nảy mầm bào tử nấm P personata điều kiện in vitro Kết thí nghiệm cho thấy, dịch chiết cà độc dược dạng chiết tươi (CDD-CT) có hiệu lực ức chế nảy mầm bào tử nấm P personata cao sử dụng nồng độ 0,5% hiệu lực ức chế sau 48 đạt 95,56% Các nồng độ từ - 9% có hiệu lực đạt mức tối đa 100% sau 48 Tương tự, dịch chiết cà độc dược dạng đun sôi 1000C (CDD-ĐS) nồng độ 0,5% có hiệu lực ức chế nảy mầm bào tử nấm P personata sau 48 đạt 93,33% Các nồng độ từ - 9% đạt hiệu lực cao 100% sau 48 Dịch chiết trầu không dạng chiết tươi (Trau-CT) nồng độ thấp (từ 4%) không hiệu việc ức chế nảy mầm bào tử nấm P personata Còn nồng độ cao (5 - 9%), hiệu lực ức chế sau 48 đạt 100% Tiếp tục thử nghiệm với dịch chiết trầu dạng đun sôi 1000C (Trau-ĐS), kết cho thấy dịch chiết Trau - ĐS có hiệu cao dịch chiết Trau-CT Ơ nồng độ 1%, hiệu lực ức chế sau 48 đạt 70% sử dụng nồng độ 2% hiệu lực ức chế sau 48 đạt 94,44% Ở nồng độ (3 - 9%), hiệu lực ức chế sau 48 đạt mức tối đa 100% b Ảnh hưởng số dịch chiết thực vật đến khả gây bệnh nấm P personata giống lạc L14 điều kiện in vivo Từ kết đánh giá điều kiện in vitro, loại dịch chiết có hiệu tốt lực chọn để tiếp tục thử nghiệm điều kiện in vivo nhằm đánh giá ảnh hưởng chúng đến khả gây bệnh nấm P personata lạc, đồng thời xác định phương pháp phun nồng độ hiệu để áp dụng cho nghiên cứu điều kiện nhà lưới * Thí nghiệm với dịch chiết trầu không cho thấy, dịch chiết Trau-CT Trau-ĐS tác dụng kéo dài thời gian ủ bệnh nấm P personata có tác dụng làm giảm đáng kể đường kính vết bệnh số vết bệnh Tuy nhiên, dịch chiết Trau-CT có hiệu so với dịch chiết Trau-ĐS Điều lần khẳng định rằng, dịch chiết Trau-ĐS có tác dụng tốt việc ức chế phát triển nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Mặt khác, phun dịch chiết trầu không lên trước lây nhiễm 24 có hiệu cao so với phun dịch chiết sau lây nhiễm 24 Điều chứng tỏ dịch chiết trầu tiếp xúc với bào tử trước bào tử nảy mầm, xâm nhập vào có hiệu ức chế khả gây bệnh nấm P personata 19 Vì vậy, sử dụng dịch chiết trầu không dạng đun sôi 1000C (Trau-ĐS) nồng độ 3% để phun lên trước lây nhiễm có hiệu cao nhất, số vết bệnh đường kính vết bệnh giảm xuống đáng kể so với công thức đối chứng, 20,89 vết 2,27mm * Thí nghiệm với dịch chiết cà độc dược cho thấy, dịch chiết dạng chiết tươi (CDD-CT) dạng đun sôi (CDD-ĐS) có hiệu cao việc ức chế tính gây bệnh nấm P personata Điều cho thấy, độc tính dịch chiết cà độc dược bền với nhiệt độ Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Zhang and Reddy (2001) Tuy nhiên, tương tự dịch chiết trầu không, dịch chiết cà độc dược tác dụng kéo dài thời gian ủ bệnh phát huy tác dụng ức chế tính gây bệnh nấm P personata phun lên trước lây bệnh 24 giờ, nghĩa dịch chiết phải tiếp xúc với bào tử trước bào tử nảy mầm Sử dụng dịch chiết CDD-ĐS để phun lên trước lây nhiễm có hiệu cao nhất, SVB ĐKVB giảm xuống đáng kể so với đối chứng Ở nồng độ 2%, SVB ĐKVB đạt mức thấp nhất, 22,22 vết 2,18 mm Tương tự, sử dụng dịch chiết CDD-CT để phun lên trước lây nhiễm có hiệu cao, SVB ĐKVB giảm xuống đáng kể so với đối chứng nồng độ 2%, SVB ĐKVB đạt mức thấp nhất, 23,22 vết 2,20 mm c Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen dịch thực vật giống lạc L14 điệu kiện nhà lưới Dịch chiết trầu không dạng đun sôi 1000C (Trau-ĐS) dịch chiết cà độc dược dạng chiết tươi (CDD-CT) lựa chọn để tiếp tục thí nghiệm điều kiện nhà lưới Do chúng phát huy tốt tác dụng phun lên trước lây nhiễm 24 nên phương pháp lực chọn để thí nghiệm điều kiện nhà lưới Kết thí nghiệm cho thấy, sử dụng nồng độ dịch chiết trầu 3% có hiệu tối ưu với hiệu lực phòng trừ bệnh sau tuần 12 tuần 64,28% 70,28% Tương tự, dịch chiết cà độc dược nồng độ 2% có khả phòng trừ bệnh đốm đen hiệu Tại thời điểm tuần 12 tuần sau mọc, hiệu lực phòng trừ bệnh đạt 64,28% 69,36% d Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen giống lạc L14 dịch chiết thực vật đồng ruộng huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An vụ xuân 2014 Các công thức hiệu điều kiện nhà lưới sử dụng đề tiếp tục đánh giá đồng ruộng, bao gồm dịch chiết trầu không dạng đun sôi 1000C nồng độ 3% dịch chiết cà độc dược dạng đun sôi 1000C nồng độ 2% Tương tự thuốc hóa học, dịch chiết thực vật phun vào thời điểm, bao gồm lúc mọc tuần tuần; lúc mọc tuần; lúc mọc tuần tuần * Thí nghiệm với dịch chiết trầu không: Tỷ lệ bệnh, số bệnh theo dõi để đánh giá hiệu lực phòng trừ 12 tuần sau mọc khối lượng chắc/cây thu hoạch Kết nghiên cứu thể bảng 4.6 Từ kết thí nghiệm cho thấy, phun dịch chiết Trau-ĐS mọc tuần 20 tuần có hiệu phòng trừ bệnh đạt mức cao 73,92% khối lượng đạt 14,21 gam/cây, tăng 24,11% so với đối chứng (bảng 4.34) Tương tự, phun vào thời điểm tuần, tuần sau mọc hiệu lực phòng trừ bệnh đạt 71,6% khối lượng đạt mức cao 13,95 gam/cây, tăng 21,83% so với đối chứng Khi phun dịch chiết vào thời điểm tuần sau mọc thị hiệu lực phòng trừ bệnh đạt thấp (43,22%), khối lượng đạt 12,71 gam/cây sai khác so với đối chứng (bảng 4.34) Bảng 4.6 Hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen dịch chiết trầu không dạng đun sôi 1000C (Trau-ĐS) giống lạc L14 đồng ruộng huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An vụ xuân 2014 CT CT1 CT2 CT3 CT4 (Đ/C) LSD0,05 Nồng độ (%) 3,0 TLB (%) Cây mọc tuần + tuần 93,33 Cây mọc tuần 100,0 Cây mọc tuần + tuần 97,78 Không phun 96,67 Thời điểm phun CSB (%) 13,83 30,12 15,06 52,96 HLPT Khối lượng (%) chắc/cây (gam) 73,92a 14,21a 43,22b 12,71b 71,60a 13,95a 11,45b 6,57 1,27 Ghi chú: Giá trị trung bình cột mang chữ khác sai khác có ý nghĩa mức α = 0,05 * Thí nghiệm với dịch chiết cà độc được: Điều kiện bước thí nghiệm thực tương tự dịch chiết trầu không Theo dõi tỷ lệ bệnh, số bệnh để đánh giá hiệu lực phòng trừ 12 tuần sau mọc khối lượng chắc/cây thu hoạch Kết nghiên cứu thể bảng 4.7 Bảng 4.7 Hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen giống lạc L14 dịch chiết cà độc dược dạng chiết tươi đồng ruộng huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An vụ xuân 2014 CT CT1 CT2 CT3 CT4 (Đ/C) LSD0,05 Nồng độ (%) 2,0 Thời điểm phun TLB (%) CSB (%) HLPT (%) Cây mọc tuần + tuần Cây mọc tuần Cây mọc tuần + tuần Không phun 91,11 97,78 95,55 97,78 14,81 31,85 15,55 54,07 72,66a 41,11b 71,26a 3,92 Khối lượng chắc/cây (gam) 13,68a 12,11b 13,51a 11,14b 1,32 Ghi chú: Giá trị trung bình cột mang chữ khác sai khác có ý nghĩa mức α = 0,05 Từ kết thí nghiệm (bảng 4.7) cho thấy, CT2, phun dịch chiết cà độc dược 2% bệnh chớm xuất (phun tuần tuổi) có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen nhất, với hiệu lực phòng trừ đạt 41,11%, đồng thời khối lượng chắc/cây đạt 12,11 gam sai khác so với đối chứng 21 Ở CT1 CT3, sử dụng dịch chiết cà độc dược 2% để phun phòng (phun tuần tuần tuổi) phun trừ (phun tuần tuần tuổi) có hiệu tốt phòng trừ bệnh đốm đen, hiệu lực phòng trừ tương đương nhau, 72,66% 71,26%, đồng thời khối lượng chắc/cây tăng lên đáng kể so với đối chứng, 13,68 gam 13,51 gam, tăng 22,80% 21,28% so với đối chứng Như vậy, khuyến cáo sử dụng dịch chiết trầu không nồng độ 3% dịch chiết cà độc dược nồng độ 2% để phun đồng ruộng vào thời điểm mọc tuần tuán tuần tuần mang lại hiệu tốt, hạn chế thiệt hại bệnh gây ra, góp phần tăng suất lạc 4.4.3.2 Nghiên cứu khả phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc chế phẩm sinh học Hai chế phẩm sinh học sử dụng để đánh giá khả phòng chống bệnh đốm đen gồm Ketomium EMINA (EM) a Đánh giá hiệu lực ức chế số chế phẩm sinh học đến khả nảy mầm bào tử nấm P personats điều kiện in vitro Từ kết thí nghiệm cho thấy, chế phẩm Kaetomium EM có hiệu lực ức chế khả nảy mầm bào tử nấm P personata không cao Chế phẩm EM nồng độ 0,9% chế phẩm Kaetomium 0,25% có hiệu lực ức chế nảy mầm nấm P personata cao nhất, nhiên đạt 53,35% 56,18% b Ảnh hưởng số chế phẩm sinh học đến khả gây bệnh nấm P personata giống lạc L14 điều kiện in vivo Thí nghiệm điều kiện in vivo thực nhằm bước đầu khảo sát hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen lạc chế phẩm Kaetomium EM thông qua lây nhiễm nhân tạo Kết thí nghiệm cho thấy, loại chế phẩm sinh học Kaetomium EM tác dụng kéo dài thời gian ủ bệnh nấm P personata Mặt khác, khả khống chế phát triển đường kính vết bệnh số vết bệnh công thức thí nghiệm loại chế phẩm không cao Đối với chế phẩm EM, nồng độ 0,75% có khả ức chế tính gây bệnh nấm gây bệnh đốm đen tốt nhất, số vết bệnh đường kính vết bệnh giảm xuống mức thấp nhất, 51,89 vết 2,25 mm Đối với chế phẩm Kaetomium, nồng độ 0,2% có hiệu tối ưu đối việc ức chế tính gây bệnh nấm gây bệnh đốm đen, số vết bệnh đạt mức thấp 40,67 vết/cây đường kính vết bệnh đạt mức thấp 2,17 mm c Đánh giá hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc số chế phẩm sinh học giống lạc L14 điều kiện nhà lưới Các nồng độ tối ưu điều kiện in vivo lựa chọn để tiếp tục thí nghiệm điều kiện nhà lưới Chế phẩm EM thí nghiệm với nồng độ 0,6%, 0,75% 0,9%, Chế phẩm Kaetomium thí nghiệm với nồng độ 0,15%, 0,20% 0,25% Kết thí nghiệm cho thấy, hiệu không cao chế phẩm 22 sinh học EM Kaetomium có khả phòng chống bệnh đốm đen hại lạc Đối với chế phẩm EM, sử dụng nồng độ 0,75% có hiệu tối ưu nhất, hiệu lực phòng trừ bệnh mọc tuần 12 tuần đạt mức cao nhất, 36,93% 47,30% Đối với chế phẩm Kaetomium, sử dụng nồng độ 0,2% hiệu lực phòng trừ bệnh mọc tuần tăng lên mức 47,0% sau 12 tuần đạt mức cao 56,76% d Đánh giá ảnh hưởng số chế phẩm sinh học đến hiệu lực phòng trừ bệnh đốm đen giống lạc L14 đồng ruộng huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An vụ xuân 2014 Các nồng độ thử nghiệm nhà lưới tiếp tục đánh giá đồng ruộng với mong muốn thu kết sát thực điều kiện canh tác tự nhiên Từ kết thí nghiệm cho thấy, chế phẩm EM có hiệu phòng trừ bệnh đốm đen so với chế phẩm Kaetomium, EM sử dụng với nồng độ cao Đối với chế phẩm EM, sử dụng nồng độ 5/4 khuyến cáo (0,75%) có hiệu tối ưu với hiệu lực phòng trừ đạt 49,57% khối lượng đạt 12,90 gam/cây, tăng 13,96% so với đối chứng Đối với chế phẩm Kaetomium, sử dụng nồng độ khuyến cáo hiệu lực phòng trừ bệnh đạt mức cao 59,20% khối lượng đạt mức cao 13,34 gam/cây, tăng 17,84% so với đối chứng Như vậy, sử dụng chế phẩm EM nồng độ 0,75% chế phẩm Kaetomium nồng độ 0,2%) để phun cho lạc mọc tuần, tuần tuần có khả hạn chế phát triển bệnh đốm đen, giúp sinh trưởng phát triển tốt, từ góp phần tăng suát lạc Tuy nhiên, hiệu phòng chống bệnh đôm đen hai loại chế phẩm không cao PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 1) Nấm P personata gây hại tất ruộng lạc điều tra Nghệ An Mức độ phổ biến bệnh vụ thu vụ xuân từ năm 2012 đên 2014 đạt mức cao nhất, 100% số ruộng điều tra bị bệnh Đối với vụ thu vụ xuân, nấm bắt đầu xâm nhập bắt đầu hoa biểu triệu chứng lạc bắt đầu đâm tia Kết điều tra vụ suân 2013, vụ thu 2013 vụ xuân 2014 cho thấy, mức độ gây hại bệnh vụ thu nặng so với vụ xuân bệnh gây hại nặng huyện Diễn Châu, tiếp đến huyện Nghi Lộc bệnh gây hại nhẹ huyện Nam Đàn 2) Bệnh đốm đen gây thiệt hại nghiêm trọng đến suất lạc, đặc biệt vụ thu Trong vụ thu 2014, cấp bệnh tương ứng từ cấp đến cấp suất giảm tương ứng từ 34,23 - 49,90% Trong vụ xuân 2014, cấp bệnh tương ứng từ cấp đến cấp suất giảm tương ứng từ 17,0 - 30,24% 3) Phân tích trình tự vùng ITS 11 mẫu nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Việt Nam, chủ yếu Nghệ An chứng tỏ chúng thuộc loài Phaeoisariopsis 23 persosanta (giai đoạn vô tính) hay Mycosphaerella berkeleyi (giai đoạn hữu tính) 4) Phân tích đa dạng di truyền 33 mẫu nấm gây bệnh đốm đen hại lạc thu thập Việt Nam, chủ yếu Nghệ An, kỹ thuật Rep-PCR chứng tỏ quần thể nấm gây bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An đồng di truyền mối liên hệ cụm nấm xác định BOX-PCR với nguồn gốc thu thập đặc điểm hình thái mẫu nấm Kết phù hợp với quan sát nấm đốm đen Nghệ An không sinh sản hữu tính tự nhiên sinh sản hữu tính thường tạo mức độ đa dạng di truyền cao 5) Môi trường PDA bổ sung dịch chiết lạc kết hợp với thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày điều kiện thuận lợi cho sinh trưởng nấm P.personata, với đường kính tản nấm sau nuôi cấy 10 tuần 6,65 mm Tương tự, môi trường WA bổ sung dịch chiết lạc kết hợp với thời gian chiếu sáng 12 giờ/ ngày điều kiện thuận lợi cho sinh bào tử nấm P.personata, lượng bào tử sinh sau tuần nuôi cấy đạt 12,22.104 bào tử/tản nấm Nấm gây bệnh đốm đen hại lạc không sinh bào tử nuôi cấy điều kiện tối liên tục 6) Kết lây bệnh nhân tạo tách cho thấy tuần tuổi (tương ứng với thời kỳ lạc hoa) nhạy cảm với nấm P.personata với thời gian ủ bệnh vòng đời ngắn 13,33 ngày 16,5 ngày, số vết bệnh đường kính vết bệnh lớn 29,44 vết/lá kép 3,52 mm Nồng độ bào tử 5.105 bào tử/ml có khả gây bệnh mạnh nhất, với số vết bệnh 28 ngày sau lây nhiễm 44,33 vết/lá kép 7) Hoạt Carbendazime dịch chiết thực vật từ cà độc (Datura metel), trầu không (Piper betel) có khả phòng chống hiệu nấm P personata điều kiện phòng thí nghiệm đồng ruộng Ở đồng ruộng, có hai thời điểm xử lý bệnh đốm đen hiệu nhất, bao gồm phun mọc tuần, tuần mọc tuần tuần Với thời điểm phòng trừ trên, thuốc Carbenvil 50SC 0,25% có hiệu cao với hiệu lực phòng trừ 82,14% 80,56%, khối lượng tăng lên 27,50% 26,29% so với đối chứng; tiếp đến dịch chiết trầu không 3% dạng đun sôi với hiệu lực phòng trừ bệnh 73,92% 71,60%, khối lượng tăng 24,11% 21,83% so với đối chứng; tương tự, dịch chiết cà độc dược 2% có hiệu lực phòng trừ bệnh 72,66% 71,26%, khối lượng tăng 22,80% 21,28% so với đối chứng 5.2 KIẾN NGHỊ 1) Cần sử dụng biện pháp phòng trừ bệnh đốm đen từ bắt đầu hoa, tức vào thời điểm tuần sau mọc vụ xuân Để phát huy hiệu biện pháp phòng trừ bệnh, nên phun phun thuốc hóa học Carbendazim dịch chiết trầu không, cà độc dược mọc tuần, tuần mọc tuần tuần 2) Để giảm thiểu tác động xấu thuốc hóa học gây môi trường, sức khỏe người vật nuôi, v.v cần tiếp tục nghiêu cứu sâu sử dụng dịch chiết cà độc dược, dịch chiết trầu không phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc để ứng dụng rộng rãi hiệu sản xuất 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Ngô Thị Mai Vi Nguyễn Văn Viên (2015) Sử dụng dịch chiết cà độc dược (Datura metel L.) phòng trừ bệnh đốm đen (Phaeoisariopsis personata) hại lạc Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn 14 tr 57 - 61 Ngô Thị Mai Vi Nguyễn Văn Viên (2016) Sử dụng dịch chiết trầu không phòng trừ bệnh đốm đen hại lạc Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn 11 tr 30 - 35 Ngô Thị Mai Vi, Hà Giang, Trần Thị Như Hoa Nguyễn Văn Viên (2016) Đặc trưng phân tử nấm Mycosphaerella berkeleyi gây bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Tạp chí Khoa học Nông nghiêp Việt Nam (14) tr 1312 - 1322 ... PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 MỨC ĐỘ PHỔ BIẾN VÀ TÁC HẠI CỦA BỆNH ĐỐM ĐEN HẠI LẠC TẠI NGHỆ AN 4.1.1 Mức độ phổ biến bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Bệnh đốm đen xuất gây hại phổ biến... personata 1.3.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu Điều tra, đánh giá tác hại nghiên cứu bệnh đốm đen hại lạc Nghệ An Mẫu bệnh đốm đen thu thập Nghệ An số tỉnh khác Lào Cai, Thanh Hóa, Hà Tĩnh Đồng Nai... thiệt hại suất bệnh đốm đen gây lạc đồng ruộng Nghệ An Trên giống lạc L14, bệnh đốm đen làm giảm suất tới 30,24% vụ xuân tới 49,90% vụ thu Bổ sung thông tin phân loại nấm đốm đen hại lạc Nghệ An