Cảm biến sinh học trên cơ sở Polyme dẫn trong phát hiện vi rút gây bệnh

TR I H C QU C GIA HÀ N I NG I H C CÔNG NGH *************** Tr n Quang Huy C M BI N SINH H C TRÊN C S POLYME D N TRONG PHÁT HI N VI RÚT GÂY B NH Chuyên ngành : V t li u linh ki n nanô LU N V N TH C S NG IH NG D N KHOA H C : TS Mai Anh Tu n Hà N i - 2007 L I CAM OAN V i t cách tác gi c a đ tài : ‘‘C m bi n sinh h c c s polyme d n phát hi n vi rút’’, xin cam đoan r ng đ tài tác gi đ xu t th c hi n, không trùng l p v i b t k công trình khác th gi i M t ph n k t qu lu n v n đ chí, h i ngh chuyên ngành n Vi t Nam c ng nh c tác gi công b m t s t p c qu c t Tác gi xin ch u hoàn toàn trách nhi m v i n i dung cu n lu n v n Hà N i, ngày 10 tháng 12 n m 2007 Tác gi Tr n Quang Huy L IC M hoàn thành đ tài lu n v n, tr c tiên xin đ i thày h s c t i TS Mai Anh Tu n - ng N c bày t lòng bi t n sâu ng d n, ch đ o khoa h c, t n tình giúp đ khích l su t trình th c hi n đ tài Xin chân thành c m n t i s giúp đ vô quí báu c a nh ng c ng s : Nguy n Th Thanh Th y, Ph ng ình Tâm, Tr nh V n Trung nhóm nghiên c u c m bi n sinh h c t i ITIMS Tôi c ng xin chân thành c m n t i Ban Giám đ c ; Ban ch nhi m khoa Vi rút ; ThS Nguy n Thanh Th y, CN Nguy n Th Minh Liên, TS thí nghi m Hi n vi n t ; ThS Nguy n Th Th Th Thoa - Phòng ng – Phòng thí nghi m vi rút Herpes ; PGS.TS Phan Th Ngà – Phòng thí nghi m vi rút viêm não/Arbo - Vi n V sinh D ch t Trung ng t o u ki n giúp đ su t khóa h c c ng nh nh ng ý ki n đóng góp quí báu trình nghiên c u th c hi n đ tài có đ hi u, Phòng c nh ng k t qu này, c ng xin bày t lòng bi t n t i Ban giám t o sau đ i h c Nghiên c u khoa h c, Khoa V t lý k thu t Công ngh nanô, l p cao h c khóa 12N (2005 -2007) - Tr ng i h c qu c gia Hà N i; Ban giám đ c t p th cán b Vi n Khoa h c V t li u (ITIMS) - Tr ng i h c công ngh t o Qu c t v i h c Bách khoa Hà N i t o u ki n cho h c t p th c hi n đ tài lu n v n Con xin dâng t ng thành công t i cha m , gia đình đ bày t lòng bi t n t i b c sinh thành, nuôi d ng tin t ng, đ ng viên, khích l cu c s ng su t khóa h c Tôi c ng xin chân thành c m n s đ ng viên tinh th n c a b n bè nh ng ng i thân th i gian v a qua Hà N i ngày 10 tháng 12 n m 2007 Tác gi Tr n Quang Huy M CL C Trang ph bìa L i cam đoan L ic m n M cl c Danh m c ký hi u, ch vi t t t Danh m c b ng Danh m c hình v , đ th M U CH NG T NG QUAN Trang 1.1 L ch s phát tri n c m bi n sinh h c ………………………… 1.2 C m bi n sinh h c……………………………………………… 1.2.1 Khái ni m c m bi n sinh h c…………………………… 1.2.2 Nguyên lý c m bi n sinh h c…………………………… 1.2.3 Phân lo i c m bi n sinh h c……………………………… 10 1.3 Polyme d n……………………………………………………… 15 1.3.1 Khái ni m polyme d n ……… ………………………… 15 1.3.2 C ch d n c a polyme d n……………………………… 16 1.3.3 ng d ng polyme d n c m bi n sinh h c………… 18 1.4 M t s khái ni m v sinh h c phân t , vi rút h c, vi rút Herpes 21 1.4.1 M t s khái ni m v sinh h c phân t …………………… 21 1.4.2 M t s khái ni m v vi rút h c…………………………… 24 1.4.3 Vi rút Herpes……………………………………………… 27 CH NG CH T O C M BI N SINH H C 2.1 Thi t b , hóa ch t……………………………………………… 31 2.1.1 Thi t b …………………………………………………… 31 2.1.2 Hóa ch t………………………………………………… 31 2.2 Thi t k ch t o c m bi n vi n c c……………………… 32 2.2.1 Thi t k c m bi n vi n c c…………………………… 32 2.2.2 Qui trình ch t o vi c m bi n…………………… 33 2.3 L a ch n DNA đ u dò………………………………………… 37 2.4 L a ch n polyme d n…………………………………………… 38 2.5 C đ nh DNA đ u dò lên b m t vi c m bi n…………… 39 2.6 o đ c thông s …………………………………………… 41 CH 2.6.1 Kính hi n vi n t quét (KHV TQ)…………………… 41 2.6.2 Ph h ng ngo i bi n đ i chu i Fourier (FTIR)…………… 42 2.6.3 K thu t ph n ng chu i t ng h p polymerase (PCR)… 42 2.6.4 Xây d ng h đo tín hi u c m bi n sinh h c……………… 43 NG K T QU VÀ BÀN LU N 3.1 C m bi n vi n c c…………………………………………… 49 3.2 T o màng polyme d n APTS ….……………………………… 52 3.3 Ph h ng ngo i FTIR…………………………………………… 52 3.4 Dò tìm axit nucleic t m u phân tích…………………………… 53 3.4.1 Dò tìm DNA b sung…………………………………… 53 3.4.2 Dò tìm DNA đ c hi u c a HSV………………………… 60 K T LU N DANH M C CÁC CÔNG TRÌNH Ã CÔNG B TÁC GI TÀI LI U THAM KH O PH L C C A DANH M C CÁC KÝ HI U VÀ CH APTS VI T T T 3-aminopropyl–triethoxy-silance (Tên m t lo i polyme d n) DNA Deoxyribonucleic acid (Axít đêoxyribônuclêic – AND) EDC 1–ethyl-3-(dimethyl-aminopropyl)carbodiimide (Tên ch t đ ho t hóa g c ph t phát c a ADN) ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (K thu t mi n d ch g n men) IF ImmunoFlourescence (K thu t mi n d ch hu nh quang) FTIR Fourier Transform Infrared Spectroscopy (Ph h ng ngo i bi n đ i chu i Fourier) HSV Herpes Simplex Viruses type & (Vi rút Herpes týp 2) ITIMS International Training Institute for Material Science (Vi n t o Qu c t v Khoa h c V t li u) KHV TQ Kính hi n vi n t quét MIA 1-methylimidazole (Tên ch t đ làm n đ nh hóa DNA ho t hóa n NCBI c) National Center of Biotechnology Information (Trung tâm Qu c gia v Thông tin Công ngh sinh h c) PCR Polymerase Chain Reaction (K thu t ph n ng chu i t ng h p polymeraza) RNA Ribonucleic acid (Axít ribônuclêic - ARN) WHO World Health Organization (T ch c Y t Th gi i) DANH M C CÁC B NG Trang B ng 1.1 Các lo i th th s d ng c m bi n sinh h c k thu t đo n hoá B ng 1.2 Ki u đo t ng ng v i b chuy n đ i n hoá đ i t ng phân tích B ng 1.3 M t s t p ch t tiêu bi u dùng đ pha t p polyme d n 18 B ng 1.4 C đ nh phân t sinh h c lên l p polyme d n thi t b 20 c m bi n B ng 1.5 So sánh hai týp vi rút Herpes 29 B ng 2.1 Thông s trình oxy hoá b m t phi n silic 34 B ng 2.2 Thông s trình phún x t o màng kim lo i phi n silic 36 B ng 2.3 Các thông s hàn dây siêu âm 37 B ng 2.4 B ng m u th c hi n phép đo theo n ng đ , nhi t đ , th i gian 48 c m c a hai lo i c m bi n vi n c c 51 B ng 3.2 Tín hi u lai hóa n ng đ m u th p t i nhi t đ phòng 54 B ng 3.3 Tín hi u lai hóa c a DNA đ u dò DNA b sung m u phân 55 B ng 3.1 So sánh u, nh tích B ng 3.4 Tín hi u lai hóa theo s thay đ i c a nhi t đ , n ng đ th i gian 57 B ng 3.5 Tín hi u lai hóa đo v i s n ph m PCR c a HSV 61 DANH M C CÁC HÌNH V VÀ TH c sau lai hoá Trang Hình 1.1 Hình thái b m t c a c m bi n tr Hình 1.2 Nguyên lý ho t đ ng c a c m bi n sinh h c Hình 1.3 Mô hình m t lo i c m bi n enzyme… 11 Hình 1.4 Nguyên lý c a c m bi n sinh h c DNA 12 Hình 1.5 Mô hình c m bi n mi n d ch s i nano phát hi n vi rút 14 Hình 1.6 V trí c a c m bi n sinh h c so v i k thu t truy n th ng 15 khác đ ch n đoán b nh Hình 1.7 T c đ phát tri n c m bi n sinh h c 20 n m tr l i d báo xu h 15 ng phát tri n Hình 1.8 Mô hình ng d ng c a màng polyme d n 19 Hình 1.9 C u trúc s lai hóa c a phân t DNA 21 Hình 1.10a nh hi n vi n t truy n qua c a vi rút Herpes - nhu m âm 27 b n Hình 1.10b C u trúc vi rút Herpes 27 Hình 1.11 B nh nhân b nhi m vi rút HSV-1 28 Hình 2.1a Thi t k c m bi n 70µm x 30µm 32 Hình 2.1b Mô hình c u trúc vi n c c c a c m bi n 70µm x 30µm 32 Hình 2.2a Thi t k c m bi n 20µm x 20µm 32 Hình 2.2b Mô hình c u trúc vi n c c c a c m bi n 20µm x 20µm 32 Hình 2.3 X lý b m t phi n Si 33 Hình 2.4 T o l p màng SiO2 33 Hình 2.5 Mô ph ng trình quang kh c phi n silic 35 Hình 2.6 Mô ph ng trình phún x cao t n t o màng Pt… 35 Hình 2.7 Quá trình lo i b l p c m quang l p màng kim lo i Pt/Cr 36 không c n thi t Hình 2.8 Kính hi n vi n t quét phát x tr Hình 2.9 Máy phân tích ph h ng ngo i bi n đ i chu i Fourier 43 Hình 2.10 D ng sóng t b khu ch đ i Lock-in 43 Hình 2.11 H đo vi sai s d ng máy khuy ch đ i Lock-in SR830 45 ng l nh S-4800-Hitachi 41 ng đ ng c a h đo vi sai Hình 2.12 M ch t 45 Hình 3.1A Vi c m bi n 30µm x 70µm 49 Hình 3.1B Vùng n c c ho t đ ng c a vi c m bi n 30µm x 70µm 49 Hình 3.2A Vi c m bi n lo i 20µm x 20µm 50 Hình 3.2B Vùng n c c ho t đ ng c a vi c m bi n 20µm x 20µm 50 Hình 3.3 Hình nh HV TQ c a màng polyme d n APTS b m t vi 52 c m bi n Hình 3.4 Ph FTIR xác nh n liên k t hóa h c gi a DNA đ u dò – 53 màng APTS Hình 3.5 Tín hi u lai hóa theo th i gian t ng ng v i n ng đ m u 55 phân tích b ng 0,5nM Hình 3.6 Tín hi u lai hóa theo s thay đ i n ng đ m u phân tích 56 nhi t đ phòng Hình 3.7 Tín hi u lai hóa theo th i gian t ng ng v i n ng đ 58 m u phân tích khác Hình 3.8 S nh h ng c a nhi t đ lên kh n ng phát hi n DNA b 59 sung c a vi c m bi n theo n ng đ m u phân tích Hình 3.9 Tín hi u lai hóa theo nhi t đ c a vi c m bi n v i n ng đ 60 m u 1nM Hình 3.10 Hình nh PCR d ng tính v i HSV c a b nh nhân ký hi u 61 VN055 Hình 3.11 Kh n ng phát hi n DNA đ c hi u c a HSV s n ph m 62 PCR Hình o đ c th nghi m vi c m bi n h đo m i 72 M U Trong nh ng n m g n đây, r t nhi u nhà khoa h c n c Qu c t t p trung nghiên c u ch t o lo i c m bi n sinh h c có đ nh y, đ ch n l c cao, thi t b nh g n, s d ng ti n ích cho k t qu tin c y Thi t b đ v i nhi u tính n ng v t tr i có kh n ng kh c ph c đ c h u h t nh thi t b phân tích truy n th ng khác nh ELISA, PCR Trong t c đánh giá c m c a ng lai g n, nhà khoa h c d đoán r ng thi t b truy n th ng s d n b thay th b i th h c m bi n sinh h c nh ng ti n ích c a mang l i Trong l nh v c ch n đoán b nh, ba lo i c m bi n sinh h c ch y u th ng đ c t p trung nghiên c u ch t o : i) c m bi n enzyme c s ph n ng đ c hi u enzyme – c ch t; ii) c m bi n mi n d ch c s ph n ng đ c hi u kháng nguyên – kháng th ; iii) c m bi n DNA c s lai hóa đ c hi u gi a hai s i đ n DNA có trình t b sung Trong phát hi n vi rút gây b nh, hai lo i c m bi n sinh h c th ng đ c t p trung nghiên c u h n c là: c m bi n mi n d ch c m bi n DNA V i m c tiêu phát tri n ch t o lo i vi c m bi n sinh h c đ có th ng d ng phát hi n vi rút gây b nh t i Vi t Nam, đ ng th i ph c v cho lu n v n cao h c, tác gi đ xu t đ c ng đ tài ‘‘C m bi n sinh h c c s polyme d n phát hi n vi rút gây b nh’’ v i nhi m v : - Ch t o b vi c m bi n thích h p cho vi c phân tích, dò tìm nh ng m u sinh h c có n ng đ th p - L a ch n lo i polyme d n thích h p, t ng thích v i m u sinh h c có kh n ng t o màng b m t vi c m bi n, không tham gia vào ph n ng sinh hóa gi a ph n t sinh h c đ u dò ph n t đích - L a ch n ph n t sinh h c đ u dò, c đ nh lên b m t vi c m bi n - o đ c th nghi m v i m u phân tích đ xác đ nh đ nh y thông s khác c a vi c m bi n phát hi n vi rút gây b nh c ng đ c Tr ng i h c công ngh - i h c Qu c gia Hà N i ch p thu n D is h ng d n khoa h c c a Ti n s Mai Anh Tu n, s giúp đ c a nhóm nghiên c u c m bi n sinh h c - Vi n t o Qu c t v Khoa h c V t li u, Tr ng i h c Bách khoa Hà N i, tác gi tri n khai nghiên c u phát tri n lo i c m bi n sinh h c DNA c s polyme d n 3-aminopropyl–triethoxy-silance (APTS) đ phát hi n axit nucleic c a vi rút Herpes týp (HSV) thông qua vi c dò tìm đo n DNA đ c hi u c a lo i vi rút So v i m c tiêu nhi m v đ ra, tác gi hoàn thành đ tài v i nh ng k t qu kh quan M t s k t qu đ chí, h i ngh chuyên ngành n c tác gi công b t p c Qu c t Tác gi nh n th y r ng, lo i c m bi n có đ nh y r t cao, tín hi u lai hóa gi a DNA đ u dò b m t vi c m bi n DNA b sung xu t hi n r t nhanh kho ng phút t i n ng đ 0,5nM nhi t đ phòng k t qu c ng đ t đ nhi t đ ct ng t đ i v i DNA đ c hi u c a HSV 50°C – 55°C Tuy nhiên, tín hi u đ u thu đ c t s lai hóa th ng xu t hi n r t nh , đ đ a vào ng d ng th c t c n ph i có nghiên c u sâu h n, đ ng b h n đ khuy ch đ i, t ng tín hi u đ u Quá trình th c nghi m, k t qu c ng nh nh ng bàn lu n đ c tác gi trình bày chi ti t lu n v n B c c c a lu n v n đ Ch c trình bày nh sau : ng T ng quan Trong ch ng này, tác gi trình bày t ng quan v l ch s , khái ni m c ng nh nguyên lý, phân lo i c a c m bi n sinh h c Bên c nh đó, nh ng ki n th c v polyme d n, cách l a ch n, c đ nh polyme d n lên b m t c m bi n m t s khái ni m c b n v vi rút h c, sinh h c phân t c ng đ Ch c tác gi nêu ng Ch t o c m bi n sinh h c Ch ng mô t toàn b trình th c nghi m đ th c hi n đ tài B t đ u t vi c l a ch n v t li u, hóa ch t, ti p theo mô t vi c thi t k , ch t o lo i c m bi n vi n c c th h m i lo i 70µm x 30µm 20µm x 20µm, trình l a ch n, pha t p t ng h p polyme d n lên b m t vi c m bi n Cu i cùng, mô t cách c đ nh ph n t sinh h c đ u dò lên vi c m bi n, đo đ c thông s thi t l p h đo, ph Ch ng th c đo đ i v i m u phân tích ng K t qu bàn lu n Trong ch ng này, toàn b k t qu c a trình th c nghi m đ c trình bày nh ng bàn lu n c a tác gi đ i v i nh ng k t qu đ t đ c, t đ a k t lu n nh ng ý ki n đ xu t 3 CH NG T NG QUAN 1.1 L ch s phát tri n c m bi n sinh h c Giáo s Lenan C Clark ng i đ u tiên phát minh n c c oxy n m 1956, kh i ngu n c a Công ngh c m bi n sinh h c [16] N m 1962, t i H i th o khoa h c c a Vi n Hàn lâm Khoa h c New York, ông đ xu t m t h ng nghiên c u m i : ‘‘Làm th đ t o c m bi n n hóa thông minh h n (pH, phân th , đ d n,…) ?’’ đ a thêm vào ‘‘l p chuy n ti p enzyme gi ng nh màng k p gi a, theo ki u x p ch ng’’ Khái ni m sau đ c làm sáng t b ng th c nghi m ng ta s d ng n c c oxy Clark đ b y men đ th m tách gi m c a n ng đ oxy đo đ i ng (glucose oxidase) thông qua màng c t l v i n ng đ glucose Trong m t công trình công b n m 1962, Clark Lyon l n đ u tiên đ a khái ni m n c c enzyme [15] Updike Hick tri n khai chi ti t th c nghi m đ ch ng minh s c n thi t đ t o n c c enzyme ch c n ng đo n ng đ glucose m c dù nh n đ cr t nhi u phê bình t nhà chuyên môn [59] N m 1969, Guilbault Montalvo công b chi ti t v n c c enzyme b ng ph ng pháp đo th [28] Hai ông mô t c m bi n urea c s c đ nh ch t urease t i n c c màng ch t l ng l c l a amoniac N m 1975, ý t ng c a Clark tr thành hi n th c công ty thi t b Yellow Springs (Ohio, M ) gi i thi u l n th hai (l n đ u n m 1973) v thi t b phân tích glucose s d ng ph ng pháp đo th N m 1974, Cooney đ ng nghi p đ xu t s d ng b chuy n đ i nhi t cho c m bi n sinh h c Nh ng thi t b m i lo i đ c đ t tên t ng ng v i đ u dò enzyme nhi t [18] men c p nhi t [40] S phát tri n c m bi n sinh h c t o b c đ t phá m i vào n m 1975, Divis cho r ng có th s d ng vi khu n làm y u t nh n bi t sinh h c n c c vi sinh v t đ đo n ng đ c n [25] Công trình c a ông kh i đ u cho h nghiên c u ng Nh t B n nh m t o lo i c m bi n sinh h c có kh n ng ng d ng ki m soát môi tr ng Công ngh sinh h c C ng n m 1975, Lubbers Optitz đ a thu t ng optode đ mô t c m bi n s i quang h c có g n ch t ch th đ đo oxit cácbon II (CO2) ho c oxy Trên c s đó, hai ông đ ng nghi p t o c m bi n sinh h c tín hi u quang đ đo n ng đ c n [60] N m 1976, Clemens đ ng nghi p tích h p thành công c m bi n sinh h c glucose n hoá n t y nhân t o [17], sau đ c Miles (Elkhart) tung th 67 TÀI LI U THAM KH O TÀI I U TI NG VI T Lê Huy Chính, Nguy n V Trung C m nang vi sinh v t y h c Nxb Y h c, 2005 H Hu nh Thùy D ng Sinh h c phân t Nxb Giáo D c, 2003 Nguy n Kim Giao Ch n đoán vi rút gây b nh ng i b ng ph ng pháp ng, Nguy n Th Thanh Th y, Ph ng ình Hi n vi n t Nxb Y h c, 2005 Tr n Quang Huy, Nguy n Th Th Tâm Mai Anh Tu n ng d ng vi c m bi n DNA nghiên c u y sinh h c Tuy n t p công trình nh ng v n đ c b n c a khoa h c s s ng 2007, tr 170 171 Tr n Quang Huy, Nguy n Th Th ng, Nguy n Th Thanh Th y, Ph ng ình Tâm Mai Anh Tu n Phát hi n axit nucleic c a vi rút gây b nh b ng b c m bi n sinh h c DNA T p chí Y h c d phòng, t p XVII, s (91) 2007, tr 57 63 Nguy n Th Th ng M t s đ c m c a h Herpesviridae gây b nh ng i T p chí y h c d phòng (2006), s 3+4 (83), trang 54-58 s (84) trang 6467 TÀI LI U TI NG ANH A.O Scott (Ed.), Biosensors for Food Analysis, The Royal Soc of Chem., Cambridge, UK, 1998 Alcock, S.J and Turner, A.P.F IEEE Engineering in Medicine and Biology, June/July 1994, 319 Antje J Baeumner et al Biosensor for Dengue Virus Detection: Sensitive, Rapid, and Serotype Specific Anal Chem., 74 (6), 2002 , 1442 -1448 10 Bansi D Malhotra et al Prospects of conducting polymers in biosensors Analytica Chimica Acta 578 (2006) 59–74 11 Bobby Pejcic, Roland De Marco Impedance spectroscopy: Over 35 years of electrochemical sensor optimization Electrochimica Acta 51 (2006) 6217– 6229 68 12 Carrascosa et al Trac-Trends ; Anal Chemical 25 (3) (2006), 196-206 13 Cass, A.E.G., Francis, D.G., Hill, H.A.O., Aston, W.J., Higgins, I.J., Plotkin, E.V., Scott, L.D.L and Turner, A.P.F Anal Chem 56, (1984), 667-671 14 Claire L Morgan et al Immunosensors : Technology and opportunities in laboratory medicine Clinical Chemistry 42 :2, 1996, 193-209 15 Clark, L.C Jnr Ann NY Acad Sci 102, (1962) 29-45 16 Clark, L.C Jnr Trans Am Soc Artif Intern Organs 2, (1956) 41- 48 17 Clemens, A.H., Chang, P.H and Myers, R.W Proc Journes Ann de Diabtologie de l'Htel-Dieu, Paris (1976) 18 Cooney, C.L., Weaver, J.C et al In: "Enzyme Engineering" (Eds E.K Pye and L.B Wingard Jnr.) 2, Plenum, New York (1974) 411-417 19 Cooper, M.A Optical biosensors in drug discovery Nat Rev Drug Discov 1, (2002) 515–528 20 D C Cullen, R S Sethi, C R Lowe Anal Chim Acta 231, (1990) 33 21 D.E Gunning et al Performance of ultra-high-density microelectrode arrays Nuclear Instruments and Methods in Physics Research A 576 (2007) 215–219 22 Daniel R Thévenot; Klara Toth et al Pure Appl Chem., Vol 71, No 12, (1999) 2333 - 2348, 23 David O White, Frank J.Fenner Medical Virology Academic Press.1994 24 Dennison, M.J and Turner, A.P.F Biotechnol Adv., (1995)13 25 Divis, C Annals of Microbiology 126A, (1975)175-186 26 Frank Lammers, Thomas Scheper Thermal Biosensors in Biotechnology Volume 64/1999, Springer Berlin / Heidelberg, 35 -67 27 Geoffrey C Allen, Fabio Sorbello et al Macro-, micro - and nano investigations on 3-aminopropyltrimethoxysilane self-assembly-monolayers, Thin Solid Films 483 (2005) 306–311 28 Guilbault, G.G and Montalvo, J JACS 91 (1969) 2164-2569 29 Huy.T.Q., Thuy N.T.T., Tam P.D, Tuan M A., and Chien N.D Investigation of electrochemical DNA sensor for biomedical application Proceedings of the 2sd International Conference on Biomedical Engineering 2007, 273 – 278 30 J Catrlik et al Amperometric biosensors based on two different enzyme systems and their use for glycerol determination in samples from biotechnological 69 fermentation process Analytica Chimica Acta ,Volume 566, Issue 1, 27 April 2006, Pages 11-18 31 J Justin Gooding et al Biosensor technology for detecting biological warfare agents: Recent progress and future trends Analytica Chimica Acta 559 (2006) 137–151 32 Jeffrey D Newman, Anthony P.F Turner, Home blood glucose biosensors: a commercial perspective Biosensors and Bioelectronics 20 (2005) 2435–2453 33 Jeremy J Ramsden Optical biosensors Journal of Molecular Recognition Volume 10, Issue , Pages 109 – 120 34 K Covington Pure Appl Chem 66 (3), (1994) 565 35 Kress-Rogers, E "Handbook of Biosensors and Electronic Noses: Medicine, Food and the Environment", CRC Press, Boca Raton, USA, 1996 36 L J Blum, P R Coulet Biosensor Principles and Applications Marcel Dekker, New York (1991) 37 Lec, R.M Piezoelectric biosensors: recent advances and applications Proceedings of the 2001 IEEE International Volume , Issue , 2001, 419 – 429 38 Liedberg, B., Nylander, C and Lundstrm, I Sensors and Actuators 4, (1983) 299-304 39 M.A Tuan, T Q Huy, N.T.Thuong, L H Hoang, C V Thach, N H Hai DNA Enrichment by Functionalized Magnetic Nanoparticles for On-site and Fast Detection of Virus in Biomedical Application Journal of Korea Physical society (accepted, to be published) 40 Mosbach, K and Danielsson, B Biochim Biophys Acta 364, 140-145 (1974) 41 Nathalie K Guimard et al Conducting polymers in biomedical engineering Prog Polym Sci 32 (2007) 876–921 42 Olivier Lazcka et al Pathogen detection: A perspective of traditional methods and biosensors Biosensors and Bioelectronics 22 (2007) 1205–1217 43 P Bergveld, D R Thévenot In Advances in Biosensors, Supplement (A P F Turner, ed.), p 31 JAI Press, London, UK (1993) 44 P V Climent et al Development of a new amperometric biosensor based on polyphenoloxidase and polyethersulphone membrane Pure Appl Chem., Vol 73, No 12, 2001, pp 1993–1999 70 45 P Van Gerwen, W Laureyn, G Huyberechts, M Op De Beeck, K Baert, A Varlan, W Sansen, L Hermans, R Mertens, Nanoscaled Interdigitated Electrodes For Biochemical Sensors, Sensors and Actuators B, 49 (1-2) (1998) pp 73-80 46 Patolsky, F., Lieber, C.M., Nanowire Nanosensors, Materials Today (2005), 2028 47 Patolsky, F., Zheng, G., Hayden, O., Lakadamyali, M., Zhuang, X., Lieber, C.M., Electrical detection of single viruses, Proc Natl Acad Sci USA (2004), 101, 14017-14022 48 Pinar Kara a, Burcu Meric et al Electrochemical DNA biosensor for the detection and discrimination of herpes simplex Type I and Type II viruses from PCR amplified real samples Analytica Chimica Acta 518 (2004) 69–76 49 R.M.Lec Piezoelectric biosensors: recent advances and applications Proceedings of the 2001 IEEE International Volume , Issue , 2001,419 – 429 50 R Gonzalez , B Masquelier et al Detection of Human Immunodeficiency Virus Type Antiretroviral Resistance Mutations by High-Density DNA Probe Arrays Journal of clinical microbiology (July 2004), p 2907–2912 51 Rich, R.L and Myszka, D.G (2005) Survey of the year 2004 commercial optical biosensor literature J Mol Recognit 18, 431–478; 52 Sara Rodriguez-Mozaz et al Biosensors for environmental applications: Future development trends Pure Appl Chem., Vol 76, No 4, 2004, pp 723–752 53 Sergei V Dzyadevych et al Potentiometric Biosensors Based on ISFETs and Immobilized CholinesterasesVolume 16, Issue 22 , ( 2004) Pages 1873 – 1882 54 Shichiri, M., Kawamori, R., Yamaski, R., Hakai, Y and Abe, H Lancet ii, (1982)1129-1131 55 T Gregory Drummond et al Electrochemical DNA sensors., Nature Biotechnology, 2003, 1192-1199 56 T.A Skotheim, R.L Elsenbaumer, J Reynold, Marcel Dekker Handbook of Conducting Polymers, ed., 2nd Edition, New York, 1998 57 Tarushee Ahuja et al.Biomolecular immobilization on conducting polymers for biosensing applications Biomaterials 28 (2007) 791–805 71 58 Turner, A.P.F "Advances in Biosensors", I; II; Suppl I; III JAI Press, London, UK, 1991; 1992; 1993; 1995 59 Updike, S.J and Hicks, J.P Nature 214,(1967) 986-988 60 Voelkl, K.P., Opitz, N and Lubbers, D.W Fres Z Anal Chem 301,(1980) 162-163 61 White, S.F and Turner, A.P.F In: "Encyclopedia of Bioprocess Technology: Fermentation, Biocatalysis and Bioseparation"(Eds M C Flickinger and S W Drew) Wiley, New York, USA, 1997 62 Y Han et al Surface activation of thin silicon oxides by wet cleaning and silanization Thin Solid Films 510 (2006) 175 - 180 63 Y.K Ye., J.H Zhao Electrochemical behavior and detection of hepatitis B virus DNA PCR production at gold electrode Biosensors and Bioelectronics 18 (2003) 1501-1508 64 http://www.mindbranch.com 72 PH L C ti p t c nghiên c u phát tri n lo i vi c m sinh h c bi n này, song song v i trình ch t o vi c m bi n, thành viên nhóm nghiên c u c a xây d ng phát tri n m t h đo c m tay, có kích th c nh g n v i nh u tính n ng u vi t h n nh m thay th h Lock in RS830, phù h p đáp ng đ c yêu c u phân tích c a vi c m bi n đ i v i m u n ng đ th p nh vi rút,… Hình hình nh vi c m bi n sinh h c 20µm x 20µm đ nghi m h đo m i c đo đ c th Hình o đ c th nghi m vi c m bi n h đo m i (thi t b xách tay) ... đ có th ng d ng phát hi n vi rút gây b nh t i Vi t Nam, đ ng th i ph c v cho lu n v n cao h c, tác gi đ xu t đ c ng đ tài ‘‘C m bi n sinh h c c s polyme d n phát hi n vi rút gây b nh’’ v i nhi... ng polyme d n c m bi n sinh h c………… 18 1.4 M t s khái ni m v sinh h c phân t , vi rút h c, vi rút Herpes 21 1.4.1 M t s khái ni m v sinh h c phân t …………………… 21 1.4.2 M t s khái ni m v vi rút. .. sung Trong phát hi n vi rút gây b nh, hai lo i c m bi n sinh h c th ng đ c t p trung nghiên c u h n c là: c m bi n mi n d ch c m bi n DNA V i m c tiêu phát tri n ch t o lo i vi c m bi n sinh