Ứng dụng chế tạo, thử nghiệm vaccin đa giá vô hoạt phòng bệnh phù đầu, hội chứng tiêu chảy ở lợn do vi khuẩn E. coli và Salmonella gây ra tại Thái Nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM THỊ LAN ỨNG DỤNG CHẾ TẠO, THỬ NGHIỆM VACXIN ĐA GIÁ VÔ HOẠT PHÒNG BỆNH PHÙ ĐẦU, HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN DO VI KHUẨN E.COLI VÀ SALMONELLA GÂY RA TẠI THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM PHẠM THỊ LAN ỨNG DỤNG CHẾ TẠO, THỬ NGHIỆM VACXIN ĐA GIÁ VÔ HOẠT PHÒNG BỆNH PHÙ ĐẦU, HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN DO VI KHUẨN E.COLI VÀ SALMONELLA GÂY RA TẠI THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Quang Tuyên PGS TS Cù Hữu Phú THÁI NGUYÊN - 2015 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài nghiên cứu hoàn thành luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn xác rõ nguồn gốc./ Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Phạm Thị Lan ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài hoàn thành luận văn, nhận giúp đỡ nhiểu tổ chức cá nhân Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn Ban giám đốc, Ban quản lý Sau đại học Đại học Thái Nguyên, phòng Quản lý đào tạo Sau đại học, khoa Chăn nuôi Thú y, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tạo điều kiện cho theo học chương trình đào tạo thạc sỹ trường Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán khoa Chăn nuôi Thú y, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên; Bộ môn Vi trùng -Viện Thú y Quốc gia Chi cục Thú y tỉnh Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành đề tài nghiên cứu Đặc biệt, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy hướng dẫn khoa học GS.TS Nguyễn Quang Tuyên PGS.TS Cù Hữu Phú trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi biết ơn gia đình, bạn bè học viên cao học động viên giúp đỡ hoàn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn./ Thái Nguyên, tháng HỌC VIÊN Phạm Thị Lan năm 2015 iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU v DANH MỤC BẢNG vi MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tế Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn E coli bệnh phù đầu, tiêu chảy lợn E coli 1.1.1 Vi khuẩn E coli 1.1.2 Bệnh tiêu chảy lợn vi khuẩn E coli 12 1.1.3 Bệnh phù đầu lợn 16 1.2 Vi khuẩn Salmonella bệnh tiêu chảy, bại huyết Salmonella lợn 19 1.2.1 Vi khuẩn Salmonella 19 1.2.2 Bệnh tiêu chảy bại huyết lợn Salmonella 29 1.3 Vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, bại huyết lợn 33 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 36 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 36 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 36 2.1.3 Động vật thí nghiệm 36 2.2 Nội dung nghiên cứu 36 2.3 Phương pháp nghiên cứu 37 2.3.1 Các loại hóa chất, môi trường dùng để nuôi cấy, giám định vi khuẩn 37 2.3.2 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn 37 iv 2.3.3 Phương pháp chế tạo thử nghiệm vaccin phòng bệnh tiêu chảy, phù đầu bại huyết cho lợn 37 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu đáp ứng miễn dịch độ dài miễn dịch đàn lợn sau tiêm phòng vaccin đa giá phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn lợn vi khuẩn E coli Salmonella gây 41 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 43 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Kết lựa chọn chủng vi khuẩn để chế tạo vaccin 46 3.2 Kiểm nghiệm vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn 47 3.2.1 Kết kiểm tra đậm độ canh trùng sử dụng chế tạo vaccin 48 3.2.2 Kết kiểm tra khiết canh trùng sử dụng chế tạo vaccin 49 3.2.3 Kết kiểm tra vô trùng lô vaccin chế tạo 50 3.2.4 Kiểm tra an toàn chuột nhắt trắng 51 3.2.5 Kiểm tra hiệu lực bảo hộ vaccin chuột nhắt trắng 53 3.2.6 Kết xác định hiệu lực vaccin lợn thí nghiệm 55 3.3 Kết xác định độ dài miễn dịch hiệu lực vaccin 58 3.3.1 Kết xác định độ dài miễn dịch vaccin 58 3.3.2 Hiệu lực vaccin phòng bệnh cho lợn nuôi Thái Nguyên 64 3.3.3 Nguy lợn lợn bị tiêu chảy không tiêm vaccin 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 Kết luận 67 Đề nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài nghiên cứu hoàn thành luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn xác rõ nguồn gốc./ Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Phạm Thị Lan vi DANH MỤC HÌNH, BẢNG Hình 2.1 Quy trình sản xuất vacxin vô hoạt bổ trợ keo phèn 39 Bảng 2.6: Thí nghiệm kiểm tra an toàn vaccin chuột bạch 41 Bảng 3.1: Các chủng vi khuẩn E coli chọn để chế tạo vaccin 46 Bảng 3.2: Các chủng vi khuẩn Salmonella chọn để chế tạo vaccin 47 Bảng 3.3: Kết kiểm tra đậm độ lô vaccin 48 Bảng 3.4: Kết kiểm tra khiết lô canh trùng sử dụng chế tạo vaccin 49 Bảng 3.5: Kết kiểm tra vô trùng lô vaccin 50 Bảng 3.6: Kết kiểm tra an toàn vaccin chuột nhắt trắng 52 Bảng 3.7: Hiệu lực vaccin chuột nhắt trắng công cường độc vi khuẩn E coli 53 Bảng 3.8: Hiệu lực vaccin chuột nhắt trắng công cường độc vi khuẩn Salmonella 54 Bảng 3.9: Kết xác định hiệu lực vaccin lợn thí nghiệm 56 Bảng 3.10: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng 60 Bảng 3.11: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng 61 Bảng 3.12: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng 61 Bảng 3.13: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng 62 Bảng 3.14: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng 63 Bảng 3.15: Tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy vùng tiêm phòng vùng không tiêm phòng vaccin 64 Bảng 3.16: Nguy lợn bị tiêu chảy không tiêm phòng vaccin 66 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần đây, với phát triển kinh tế, ngành chăn nuôi nói chung chăn nuôi lợn nói riêng nước ta có bước phát triển mạnh mẽ, trở thành ngành sản xuất quan trọng, chiếm tỷ trọng đáng kể xuất sản phẩm chăn nuôi góp phần xóa đói giảm nghèo Theo định hướng Thủ tướng Chính phủ phê duyệt Quyết định số 10/2008/QĐ-TTg ngày 16/01/2008 [22] Chiến lược phát triển chăn nuôi đến năm 2020 [3], mục tiêu định hướng là: Phát triển nhanh quy mô đàn lợn ngoại theo hướng trang trại, công nghiệp nơi có điều kiện đất đai, kiểm soát dịch bệnh môi trường; trì quy mô định hình thức chăn nuôi lợn lai, lợn đặc sản phù hợp với điều kiện chăn nuôi nông hộ số vùng Tỷ trọng chăn nuôi nông nghiệp đến năm 2020 đạt 42%, năm 2010 đạt khoảng 32% năm 2015 đạt 38%; Đảm bảo an toàn dịch bệnh vệ sinh an toàn thực phẩm, khống chế có hiệu bệnh nguy hiểm chăn nuôi; Các sở chăn nuôi, chăn nuôi theo phương thức trang trại, công nghiệp sở giết mổ, chế biến gia súc, gia cầm phải có hệ thống xử lý chất thải, bảo vệ giảm ô nhiễm môi trường Để đạt mục tiêu này, Thủ tướng Chính phủ ban hành Quyết định số 50/2014/QĐ-TTg ngày 4/9/2014 [23], sách hỗ trợ nâng cao hiệu chăn nuôi nông hộ giai đoạn 2015-2020; Nghị định số 210/2013/NĐ-CP [15] ngày 19/12/2013 Chính phủ sách khuyến khích doanh nghiệp đầu tư vào nông nghiệp, nông thôn; Nghị Định số 55/2015/NĐ-CP [16] ngày 9/6/2015 Chính phủ sách tín dụng phục vụ phát triển nông nghiệp, nông thôn Tuy nhiên, ngành chăn nuôi lợn nước ta phải đối mặt với khó khăn, thách thức chất lượng giống, thức ăn, giá thị trường,… Đặc biệt bệnh dịch thường xuyên xảy gây thiệt hại lớn kinh tế Trong có số bệnh thường xuyên xảy ảnh hưởng đến mục tiêu phát triển chăn nuôi mà đe dọa ảnh hưởng đến sức khỏe người Bệnh phù đầu vi khuẩn E coli bệnh vi khuẩn Salmonella gây tổn thất nặng nề cho ngành chăn nuôi lợn toàn quốc Bệnh Salmonella gây thường dạng nhiễm trùng máu cấp tính viêm ruột non Tuy nhiên, hai thể bệnh thường xảy đồng thời với Vi khuẩn Salmonella E coli gây tiêu chảy cho lợn lứa tuổi, đặc biệt lợn trước sau cai sữa chăn nuôi trang trại quy mô lớn hay chăn nuôi nông hộ với quy mô nhỏ Để hạn chế thấp thiệt hại cho người chăn nuôi, thuận lợi cho việc sử dụng biện pháp phòng bệnh vaccin đảm bảo an toàn thực phẩm không lây nhiễm vi khuẩn, gây ngộ độc cho người tiêu dùng Việc chế tạo vaccin đa giá, tiêm mũi phòng ba bệnh: phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn vi khuẩn E coli Salmonella spp gây đòi hỏi cấp thiết thực tế nước ta Vì vậy, để có cở sở khoa học cho việc nghiên cứu, xây dựng biện pháp phòng trị bệnh vaccin, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Ứng dụng chế tạo, thử nghiệm vaccin đa giá vô hoạt phòng bệnh phù đầu, hội chứng tiêu chảy lợn vi khuẩn E coli Salmonella gây Thái Nguyên” Mục tiêu đề tài - Tuyển chọn chủng vi khuẩn E coli, Salmonella sử dụng chế tạo thử nghiệm vaccin đa giá phòng bệnh cho lợn; - Xác định hiệu lực vaccin đa giá phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn lợn vi khuẩn E coli Salmonella gây Thái Nguyên Ý nghĩa khoa học thực tế 3.1 Ý nghĩa khoa học - Nghiên cứu chế tạo vaccin đa giá từ chủng vi khuẩn E coli Salmonella phân lập được; 63 3.3.1.5 Kết xác định hiệu giá kháng thể sau tiêm vaccin tháng Kết xác định hiệu giá kháng thể sau tiêm phòng vaccin tháng trình bày bảng 3.14 Qua bảng 3.14 cho thấy: Tháng thứ 10-20% số mẫu huyết ngưng kết 1/16 với kháng nguyên chủng vi khuẩn dùng sản xuất vaccin E coli serotype O141, E coli serotype O149, E coli serotype O8, Salmonella cholerae suis Salmonella typhimurium Kết nghiên cứu phù hợp với báo cáo Tô Long Thành (2009) [29] cho “miễn dịch bị giảm xuống gần không: Cơ thể vật nhớ vi khuẩn mà gặp vi khuẩn bị tiêu diệt trước gây hại cho thể” Bảng 3.14: Hiệu giá kháng thể vaccin sau tiêm phòng tháng Hiệu giá kháng thể Số 1/16 Kháng nguyên kiểm kiểm tra tra (Mẫu) 1/32 Số mẫu 1/64 Số (%) (+) mẫu Số (%) (+) mẫu (%) (+) E coli serotype O141 10 20 - - E coli serotype O149 10 10 - - E coli serotype O8 10 10 - - Salmonella choleraesuis 10 20 - - Salmonella typhimurium 10 20 - - Theo quy trình thường qui Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia Phòng thí nghiệm Vi trùng, Viện nghiên cứu động vật Queensland Australia vaccin có hiệu lực phòng bệnh hiệu giá kháng thể ngưng kết phải đạt ≥ 1/16 sau tháng lợn tiêm vaccin Như vậy, vaccin phòng Kháng nguyên K (Kháng nguyên vỏ bọc - Capsular), gọi kháng nguyên bề mặt (OMP - Outer membrane protein) kháng nguyên vỏ bọc (Capsular) Vai trò kháng nguyên K chưa thống Có nhiều ý kiến cho rằng, ý nghĩa độc lực vi khuẩn, thấy độc lực chủng E coli có kháng nguyên K giống độc lực chủng kháng nguyên K (Orskov.F, 1978) [58] Tuy nhiên, có ý kiến khác cho rằng, có ý nghĩa độc lực tham gia bảo vệ vi khuẩn trước yếu tố phòng vệ vật chủ Tuy vậy, phần lớn ý kiến thống kháng nguyên K có hai nhiệm vụ sau: Hỗ trợ phản ứng ngưng kết kháng nguyên O, nên thường ghi liền công thức serotype vi khuẩn Ox: Ví dụ như: E coli O139: K88, O149: K88 Tạo hàng rào bảo vệ cho vi khuẩn chống lại tác động ngoại cảnh tượng thực bào, yếu tố phòng vệ vật chủ Kháng nguyên F (Kháng nguyên Fimbriae- Kháng nguyên bám dính): Hầu hết chủng E coli gây bệnh sản sinh nhiều kháng nguyên bám dính Các chủng không gây bệnh kháng nguyên bám dính Kháng nguyên bám dính giúp vi khuẩn bám vào thụ thể đặc hiệu bề mặt tế bào biểu mô ruột lớp màng nhày để xâm nhập gây bệnh, đồng thời chống lại khả đào thải vi khuẩn nhu động ruột Một số loại kháng nguyên bám dính vi khuẩn E coli thuộc nhóm ETEC (Enterotoxigenic E coli) gây bệnh chủ yếu cho lợn F4 (K88), F5 (K99), F6 (987P), F18 F41 (Cater.G.R cs, 1995) [34] 1.1.1.2 Đặc tính nuôi cấy, sinh vật, hoá học a Đặc tính nuôi cấy Vi khuẩn E coli trực khuẩn hiếu khí yếm khí tùy tiện, sinh trưởng phổ nhiệt độ rộng (từ 5- 400C), nhiệt độ thích hợp 370C phổ pH rộng (pH từ 5,5 - 8,0), pH thích hợp từ 7,2-7,4 65 phòng 870 lợn không tiêm phòng vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn Kết trình bày bảng 3.15 Kết bảng 3.15 cho thấy: Lợn có triệu chứng mắc phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn vùng không tiêm cao vùng tiêm vaccin Ở vùng không tiêm vaccin số lợn mắc bệnh 212/870 theo dõi (24,36%) Trong vùng tiêm vaccin số lợn mắc bệnh 55/816 theo dõi (6,74%) Áp dụng công thức tính hiệu lực tiêm phòng (ở mục 2.4.5) thay số liệu qua tính toán xác định đuợc hiệu lực vaccin thử nghiệm 72,33% (P < 0,001) Kết tương đồng với kết nghiên cứu Cù Hữu Phú cộng (2000) [14] với hiệu lực phòng bệnh Autovaccin vô hoạt có bổ sung keo phèn chế từ chủng E coli chủng Salmonella có độc lực mạnh đạt 89,22% Như vậy, vaccin chế tạo từ chủng vi khuẩn E coli Salmonella phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn nuôi tỉnh Thái Nguyên có hiệu lực đạt 72,33% Với việc thử nghiệm vaccin đạt kết giúp nhận định vi khuẩn E coli Salmonella có vai trò quan trọng gây bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn lợn Thái Nguyên 3.3.3 Nguy lợn lợn bị tiêu chảy không tiêm vaccin Để đánh giá sai khác tỷ lệ lợn mắc bệnh lợn tiêm lợn không tiêm vaccin vùng nghiên cứu, tiến hành xác định nguy tương đối lợn mắc bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn không tiêm phòng vaccin Kết trình bày bảng 3.16 Từ kết bảng 3.16, áp dụng công thức tính RR trình bày mục (2.3.1.2) công thức tính χ2 (2.4.5) thay số liệu vào qua tính toán cho kết χ2TN = 98,17 > χ2α RR = 3,62 Như vậy, lợn không tiêm vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn có nguy mắc bệnh cao gấp 3,62 lần so với lợn tiêm (p < 0,001) 66 Bảng 3.16: Nguy lợn bị tiêu chảy không tiêm phòng vaccin Nội dung Không tiêm vaccin Số mắc Số không bệnh mắc bệnh (Con) (Con) a b a +b 212 658 870 c d c +d 55 761 816 a +c b+d 267 1419 Tiêm vaccin Tính chung Cộng χ2 RR 98,17 3,62 N = 1686 Tóm lại, vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn chế tạo từ chủng vi khuẩn E coli serotype O141, E coli serotype O149, E coli serotype O8, Salmonella choleraesuis Salmonella typhimurium có tác dụng tốt để phòng bệnh bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn khả bảo hộ tháng với hiệu giá kháng thể đạt 1/16 hiệu lực tiêm phòng đạt 72,33% 67 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Chọn chủng E Coli: serotype O141, O14, O8, chủng Salmonella cholerae suis Salmonella typhimurium có độc lực cao, cấu trúc kháng nguyên ổn định, mang số yếu tố gây bệnh để sản xuất thử nghiệm vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn con; Kiểm nghiệm vaccin đạt tiêu về: Đậm độ vi khuần từ 19,3320,67 x 109 vi khuẩn/ml; đạt độ khiết, vô trùng an toàn 100% thử nghiệm chuột; Vaccin bảo hộ chuột nhắt trắng đạt từ 90-100% lợn thí nghiệm hiệu lực vaccin đạt 66,67% Qua kết xác định hiệu giá kháng thể, khẳng định vaccin có khả bảo hộ tốt cho đàn lợn tháng sau tiêm phòng vaccin, để phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho đàn lợn con; Hiệu lực vaccin đạt 72,33% lợn không tiêm phòng vaccin có nguy bị tiêu chảy cao gấp 3,62 lần so với lợn tiêm vaccin Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình chế tạo sử dụng vaccin phòng bệnh phù đầu, tiêu chảy, phó thương hàn cho lợn vi khuẩn E coli Salmonella gây 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Đặng Xuân Bình (2011), "Vi khuẩn E coli gây bệnh phù đầu lợn sau cai sữa chế tạo thử nghiệm auto-vacxin phòng bệnh", Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số năm 2011; Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2003), Quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vacxin dùng thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2003, tr 14-18, tr 45-46; Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn: Chiến lược phát triển chăn nuôi đến năm 2020, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2008, Tr 6-9; Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên (2001), “Kết phân lập xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella spp gây bệnh Phó thương hàn lợn số tỉnh miền núi phía Bắc” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 3; Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên, Đỗ Thị Lan Phương (2003), “Xác định số yếu tố gây bệnh Salmonella Typhimurium phân lập từ lợn bị tiêu chảy số tỉnh miền núi phía Bắc” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 4; Trương Văn Dung, Yoshihara shinobu (2002), Cẩm nang chẩn đoán tiêu chuẩn bệnh gia súc Việt Nam Viện Thú y Quốc gia Tổ chức hợp tác quốc tế Nhật Bản; Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Văn Đức, Đặng Hồng Mai, Nguyễn Vĩnh Phước (1976) Một số phương pháp nghiên cứu Vi sinh vật, tập NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội; Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (1996) Bệnh lợn nái lợn NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 57 - 147; Trần Đức Hạnh (2011), “Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa bị tiêu chảy chế Vi khuẩn E coli phát triển dễ dàng môi trường nuôi cấy thông thường Khi nuôi cấy môi trường, để tủ ấm 370C sau 24 vi khuẩn phát triển sau: Môi trường thạch thường: Hình thành khuẩn lạc tròn, ướt, bóng láng không suốt, màu tro trắng nhạt, lồi, đường kính từ 2-3mm Nuôi lâu, khuẩn lạc có màu nâu nhạt mọc rộng ra, quan sát thấy khuẩn lạc dạng R (Rough) M (Mucous) Môi trường nước thịt: Phát triển nhanh, tốt, môi trường đục có lắng cặn màu tro nhạt đáy, có màu xám nhạt, canh trùng có mùi phân thối Môi trường MacConkey: Khuẩn lạc có màu hồng cánh sen, tròn nhỏ, lồi, không trầy, rìa gọn, không làm chuyển màu môi trường b Đặc tính sinh vật hoá học Phản ứng lên men đường: Vi khuẩn E coli lên men sinh loại đường Lactose, Fructose, Glucose, Levulose, Galactose, Xylose, Manitol; lên men không chắn loại đường Duncitol, Saccarose Salixin; Một số phản ứng sinh hoá khác: Phản ứng Indol MR dương tính, phản ứng H2S, VP, Urea âm tính 1.1.1.3 Đặc tính gây bệnh vi khuẩn E coli a Cơ chế gây bệnh vi khuẩn E coli Để gây bệnh, vi khuẩn E coli phải bám dính vào tế bào nhung mao ruột yếu tố bám dính kháng nguyên F Sau đó, nhờ yếu tố xâm nhập (Invasion), vi khuẩn xâm nhập vào tế bào biểu mô thành ruột Ở đó, vi khuẩn phát triển, nhân lên phá huỷ lớp tế bào biểu mô gây viêm ruột, đồng thời sản sinh độc tố đường ruột Enterotoxin Độc tố đường ruột tác động vào trình trao đổi muối, nước, làm rối loạn chu trình Nước từ thể tập trung vào lòng ruột làm căng ruột, với khí lên men ruột gây nên tác dụng học, làm nhu động ruột tăng, đẩy nước 70 19 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Đỗ Ngọc Thuý, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Xuân Huyên, Văn Thị Hường, Đào Thị Hảo (2004) Lựa chọn chủng E coli để chế tạo Autovacxin phòng bệnh tiêu chảy cho lợn theo mẹ Viện Thú Y 35 năm xây dựng phát triển (1969 - 2004) NXB Nông nghiệp, Hà Nội; 20 Nguyễn Vĩnh Phước (1974) Vi sinh vật Thú y, tập NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội; 21 Trương Quang (2005) “Kết nghiên cứu vai trò gây bệnh E coli hội chứng tiêu chảy lợn - 60 ngày tuổi” Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú Y, tập XII, (số 1/2005); 22 Quyết định số 10/2008/QĐ-TTg ngày 16/01/2008 chiến lược phát triển chăn nuôi đến năm 2020; 23 Quyết định số 50/2014/QĐ-TTg ngày 4/9/2014, sách hỗ trợ nâng cao hiệu chăn nuôi nông hộ giai đoạn 2015-2020; 24 Lê Văn Tạo cs (1993) “Nghiên cứu chế tạo vacxin E coli uống phòng bệnh phân trắng lợn con” Tạp chí Nông nghiệp công nghiệp thực phẩm, 9/1993, Hà Nội; 25 Lê Văn Tạo cs (1996) Xác định yếu tố gây bệnh di truyền Plasmid vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bị bệnh phân trắng chọn chủng sản xuất vaccine Báo cáo Hội thảo REI, Hà Nội; 26 Lê Văn Tạo (1997) Bệnh Escherichia coli gây Những thành tựu nghiên cứu phòng chống bệnh vật nuôi, tài liệu giảng dạy sau đại học cho bác sĩ thú y kỹ sư chăn nuôi Viện thú y quốc gia, Hà nội; 27 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997) Vi sinh vật thú y NXB Nông nghiệp, Hà Nội; 28 Nguyễn Như Thanh, TS Bùi Quang Anh, TS Trương Quang, (2001), Dịch tễ học thú y, Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội; 29 Tô Long Thành (2009), Miễn dịch chống vi khuẩn, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, số 3, 2009; 71 30 Nguyễn Văn Thiện, (1997), Phương pháp nghiên cứu chăn nuôi, Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội; 31 Trung tâm chẩn đoán cố vấn thú y CP (2010), Một số bệnh heo cách điều trị- tập 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Hồ Chí Minh; 32 Trịnh Quang Tuyên (2004) “Phân lập xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli từ lợn bị tiêu chảy nuôi trại lợn Tam Điệp” Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y (số 4) II Tiếng Anh 33 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings Company 34 Carter G.R, Chengapa.M.M, Rober T.S.A.W (1995) Essentials of veterinary Microbiology A warerly Company, 1995 35 Casey, T A., Nagy, B & Moon, H W (1992) Pathogenicity of porcine enterotoxigenic Escherichia coli that not express K88, K99, F41, or 987P adhesins American Journal of Veterinary Research 53 36 CIRAD “Training Course Salmonella”, 23 - 37 October 2006 37 Clarke G.J, Wallis T.S, Starkey W.J, Collins J, Spencer A.J, Daddon G.J, Osborne M.P, Candy D.C and Stephen I (1988), “Expression of an antigen in strains of Salmonella typhimurium with antibodies tocholeratoxin” Med Microbiol, 25 38 Dean E A, Whipp S C & Moon H W (1989) Age-specific colonization of porcine intestinal epithelium by 987P-piliated enterotoxigenic Escherichia coli Infection and Immunity 57 39 Dean-Nystrom E A & Samuel, J E (1994) Age-related resistance to 987P fimbria-mediated colonization correlates with specific glycolipid receptors in intestinal mucus in swine Infection and Immunity 62 40 Ewing, Edward (1970), Indentification of Enterobacteriaceae Edicion Revolucionnalria, Instituto Cubano Del libro 19 No 1002, Vedado Habana 72 41 Fairbrother.J.M (1992) Enteric colibacillosis Diseases of swine IOWA State University Press/AMES, IOWA U.S.A 7th Edition, 1992 42 Finlay B.B and Falkow (1988), “Virulence factors associated with Salmonella species” Microbiological Sciences Vol 5, No.11 43 Frost A.J, Bland A.P, Wallis T.S (1997), “The early dynamic respose of the calf ileal ephithelium to Salmonella typhimurium” Vet - Pathol, 34 44 Giannella, R A (1976) Suckling mouse model for detection of heatstable Escherichia coli enterotoxin: characteristics of the model Infection and Immunity 14 45 Guinee, P A M & Jansen, W H (1979) Behavior of Escherichia coli K antigens K88ab, K88ac, and K88ad in immunoelectrophoresis, double diffusion, and haemagglutination Infection and Immunity 23 46 Gyles, C.L., Fairbrother, J.M (2010) Escherichia coli In: Pathogenesis of bacterial infections in animal (4th edition) Editor: Gyles, C.L., Prescott, J.F., Songer, J.G., and Thoen, C.O., Blackwell publishing, USA, 267-308 47 Isaacson, R E., Nagy, B & Moon, H W (1977) Colonization of porcine small intestine by Escherichia coli: Colonization and adhesion factors of pig enteropathogens that lack K88 Journal of Infectious Diseases 135 48 Jones J.W, Richardson A.L (1981), “The attachment to invasion of helacells by Salmonella typhimurium the contribution of manose sensitive and manose - sensitive haemaglutinate activities” J Gen Microbiol, V127 49 Ketyle I Emodyl, Kentrohrt (1975) Mouse lang Oedema caused by a toxin substance of Escherichia coli strains Acta Microbiol, A cad-Sci Hung-25 73 50 Kishima M, Uchida i, Namimatsu T, Osumi T, Takahashi S, Tanaka K, Aoki H, Matsuura K and Yamamoto K (2008), “Nationwide Surveillance of Salmonella in the Faeces of Pigs in Japan” 51 Krause M, Fang F.C, Gedaily A.E, Libby S and Guiney D.G (1995), “Mutational Ananysis of SpvR Binding to DNA in the Regulation of the Salmonella Plasmid Virulence Operon” Academic Press Inc Plasmid 52 Links, I., Love, R & Greenwood, P (1985) Colibacillosis in newborn piglets associated with class enterotoxigenic Escherichia coli In Infectious diarrhoea of the young: strategies for control in humans and animals, pp 281-287 Edited by S Tzipori Geelong, Australia: Elsevier Science Publishers 53 Morris I.A, Wray C, Sojka W.J (1976), “The effect of T and B lymphocyte depletion on the protection of mice vaccinated with a get E mutant of Salmonella typhymurium” Bristh J of Exp 54 Nagy, B., Arp, L H., Moon, H W & Casey, T A (1992) Colonization of the small intestine of weaned pigs by enterotoxigenic Escherichia coli that lack known colonization factors Veterinary Pathology 29 55 Nagy, B., Awad-Masalmed, M., Bodoky, T., Munch, P & Szekrenyi, M T (1996) Association of shiga-like toxin type II (SLTII) and heat stable enterotoxins with F18ab, F18ac, K88 and F41 fimbriae of Escherichia coli from weaned pigs In Proceedings of 14th Congress International Pigs Veterinary Society, pp 264 Bologna Italy 56 Nagy, B & Fekete, P Z (1999) Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) in farm animals Veterinary Research 30 57 Orskov, I Orskov, F Sojka, W.J Wittig, W (1964) K antigens K88ab (L) and K88ac (L) in E coli A new O antigen: O147 and a new K antigen K89 (B) Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica sect, B 62 chất chứa ngoài, gây nên tượng tiêu chảy Sau phát triển thành ruột, vi khuẩn vào hệ lâm ba, đến hệ tuần hoàn, gây nhiễm trùng máu Trong máu, vi khuẩn chống lại tượng thực bào, gây dung huyết, làm cho thể thiếu máu Từ hệ tuần hoàn, vi khuẩn đến tổ chức quan Ở đây, vi khuẩn lại phát triển nhân lên lần thứ hai, phá huỷ tế bào tổ chức, gây viêm sản sinh độc tố gồm Enterotoxin Verotoxin, phá huỷ tế bào tổ chức, gây tụ huyết xuất huyết b Các yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli Các yếu tố gây bệnh E coli bao gồm khả kháng khuẩn, yếu tố bám dính, khả xâm nhập, yếu tố gây dung huyết khả sản xuất độc tố Các chủng vi khuẩn E coli yếu tố khả gây bệnh Dựa vào yếu tố gây bệnh nói trên, người ta phân loại vi khuẩn E coli thành loại sau: Enterotoxigenic E coli (ETEC), Enteropathogenic E coli (EPEC), Adherence Enteropathogenic E coli (AEEC) Verotoxingenic E coli (VTEC) (Lê Văn Tạo, 1997) [26] Trong đó, chủng vi khuẩn thuộc nhóm ETEC VTEC thường gây bệnh tiêu chảy cho lợn sơ sinh lợn sau cai sữa (Fairbrother.J.M, 1992) [41] * Yếu tố kháng khuẩn Nhiều chủng vi khuẩn E coli có khả sản sinh chất kháng khuẩn có tác dụng ức chế tiêu diệt loại vi khuẩn khác, gọi ColicinV Vì vậy, yếu tố coi yếu tố độc lực vi khuẩn E coli gây bệnh (Smith.H.W cs, 1967) [63] * Yếu tố bám dính Để gây bệnh, chủng ETEC phải bám dính lên tế bào biểu mô ruột non Hầu hết chủng ETEC có mang nhiều yếu tố bám dính như: F4 (K88), F5 (K99), F6 (987P), F17, F18, F41, F42 F165 Ở lợn, chủng vi khuẩn ETEC gây bệnh tiêu chảy thường mang yếu tố bám dính sau đây: 75 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA Ảnh 1: Vaccin đa giá phòng bệnh tiêu Ảnh 2: Lấy vaccin tiêm phòng chảy, phù đầu, phó thương hàn lợn cho đàn lợn Ảnh 3: Tiêm phòng vaccin đa giá cho đàn lợn phòng bệnh tiêu chảy, phù đầu, phó thương hàn 76 Ảnh 4: Tiêm phòng vaccin đa giá cho lợn 14 ngày tuổi phòng bệnh tiêu chảy, phù đầu, phó thương hàn Ảnh 5: Lấy máu lợn tiêm phòng vaccin 77 Ảnh 6: Tiêm phòng đại trà cho đàn lợn phòng bệnh tiêu chảy, phù đầu, phó thương hàn Hình 7: Đàn lợn tiêm phòng vaccin đa giá phát triển khỏe mạnh