Nghiên cứu biểu hiện gen và chức năng 1 Nghiên cứu phiên mã RNA của một gen 1.1 Phát hiện sự hiện diện của một bảng sao và xác định trình tự nucleotide của nó 1.2 Bản đồ phiên mã bằng cách lai giữa gen và ARN 1.3 Phân tích phiên mã bằng cách mở rộng phân tích mồi. 1.4 phân tích bản sao bằng PCR 2 Nghiên cứu điều hòa biểu hiện gen. 2.1 Xác định vị trí gắn kết protein trên một phân tử DNA 2.2 Xác định trình tự kiểm soát bằng cách phân tích xóa 3 Xác định và nghiên cứu các sản phẩm dịch thuật của một dòng gene 3.1 HRT và HART có thể xác định các sản phẩm dịch thuật của một nhân bản vô tính gen 3.2 Phân tích các protein bằng cách đột biến trong ống nghiệm
CHUYÊN ĐỀ Studying Gene Expression and Function Năm học 2016 Nghiên cứu biểu gen chức Nghiên cứu phiên mã RNA gen 1.1 Phát diện bảng xác định trình tự nucleotide 1.2 Bản đồ phiên mã cách lai gen ARN 1.3 Phân tích phiên mã cách mở rộng phân tích mồi 1.4 phân tích PCR Nghiên cứu điều hòa biểu gen 2.1 Xác định vị trí gắn kết protein phân tử DNA 2.2 Xác định trình tự kiểm soát cách phân tích xóa Xác định nghiên cứu sản phẩm dịch thuật dòng gene 3.1 HRT HART xác định sản phẩm dịch thuật nhân vô tính gen 3.2 Phân tích protein cách đột biến ống nghiệm 1/Nghiên cứu phiên mã RNA gen 1.1/Phát diện bảng phiên mã xác định trình tự nucleotide Các 5'end mRNA xác định từ trình tự cDNA không đầy đủ 1.2/Bản đồ phiên mã cách lai gen ARN Một lai DNA-mRNA hiệu xử lý lai với đơn - nuclease sợi cụ thể S1 1.3/ Phân tích phiên mã cách mở rộng phân tích mồi -Mở rộng Primer sử dụng có phần chuỗi phiên mã biết đến.Vì đoạn mồi oligonucleotide ngắn phải đặt lên RNA vị trí biết, tốt vòng 100-200 nucleotide 'cuối bảng phiên mã -Một đặt lên, đoạn mồi mở rộng cách chép ngược -Định vị vị trí trạm chuỗi ADN thực đơn giản cách xác định độ dài phân tử DNA sợi đơn mối tương quan thông tin với vị trí gắn mồi primer Sơ đồ phân tích phiên mã cách mở rộng phân tích mồi 1.4/Phân tích PCR 2/Nghiên cứu điều hòa biểu gen • Vài gen thể tất thời gian Phần lớn thuộc vào điều chỉnh biểu sản phẩm gen chúng yêu cầu tế bào • Ví dụ, gen mã hóa cho enzym tham gia vào tổng hợp tryptophan tắt có lượng dồi tryptophan tế bào, bật lại nồng độ tryptophan 2.1Xác định vị trí gắn kết protein phân tử DNA Gel chậm phát triển DNA-protein DNA + protein ràng buộc Di động thấp DNA protein ràng buộc Di động cao -Có thể phát DNA có protein ràng buộc phương pháp điện di *Footprinting với DNase I Footprinting hoạt động sở tương tác với protein điều tiết bảo vệ DNA vùng liên kết không bị suy thoái endonuclease deoxyribonuclease (DNase) I Xác định vị trí liên kết protein phân tử DNA Xét nghiệm sửa đổi can thiệp Một protein ràng buộc bảo vệ vùng DNA có dài so với trình tự kiểm soát -Các mảnh vỡ DNA trước tiên phải dán nhãn đầu -Sau đó, thí nghiệm loại hóa chất mà đổi nucleotide cụ thể, ví dụ dimethyl sulfat, động gắn nhóm methyl cho guanine nucleotide Sửa đổi thực điều kiện hạn chế trung bình nucleotide phân đoạn DNA sửa đổi - Bây ADN trộn với chiết xuất protein -Chìa khóa để khảo nghiệm protein không gắn vào DNA guanines khu vực kiểm soát sửa đổi, methyl hóa nucleotide can thiệp với phản ứng hóa học cụ thể cho phép để tạo thành phức hợp đính kèm với protein Một thí nghiệm sửa đổi can thiệp 2.2 Xác định trình tự kiểm soát cách phân tích xóa Kỹ thuật phụ thuộc vào giả định việc xóa trình tự kiểm soát dẫn đến thay đổi cách thức biểu gen nhân quy định Các nguyên tắc sau phân tích xóa Hình phân tích xóa: Một gen thị gắn liền với khu vực thượng nguồn gen hạt giống cụ thể từ nhà máy Loại bỏ đoạn hạn chế giới hạn khu R xóa trình tự điều khiển trung gian biểu gen hạt giống cụ thể, gen thị thể tất mô thực vật 3/Xác định nghiên cứu sản phẩm dịch thuật dòng gene 3.1/HRT HART xác định sản phẩm dịch thuật nhân vô tính gen Hai kỹ thuật liên quan, lai phát hành dịch (HRT) lai bắt giữ dịch (HART), sử dụng để xác định sản phẩm dịch thuật mã hóa gen nhân vô tính Cả hai phụ thuộc vào khả mRNA tinh khiết để tổng hợp trực tiếp protein hệ thống dịch tế bào Hình18 di động miễn phiên dịch hình 19 lai phát hành phiên dịch Hình lai bắt giữ phiên dịch 3.2Phân tích protein cách đột biến ống nghiệm • • • Các loại khác ống nghiệm kỹ thuật đột biến Sử dụng oligonucleotide để tạo đột biến điểm gen nhân Các phương pháp khác việc tạo đột biến điểm gen nhân vô tính Các kỹ thuật đột biến khác ống nghiệm Sử dụng oligonucleotide để tạo đột biến điểm gen nhân Các phương pháp khác việc tạo đột biến điểm gen nhân vô tính -PCR sử dụng để tạo đột biến gen nhân -Tổng hợp gen nhân tạo *Tiềm đột biến gen ống nghiệm - Trong đột biến in vitro có tiềm đáng ý, hai nghiên cứu túy công nghệ sinh học áp dụng -Khả thao tác enzyme theo cách dẫn đến tiến đáng kể hiểu biết xúc tác sinh học dẫn đến thực địa kỹ thuật protein, kỹ thuật đột biến sử dụng để phát triển enzyme cho mục đích công nghệ sinh học [...]... điểm ở một gen nhân bản Các phương pháp khác của việc tạo ra một đột biến điểm ở một gen nhân bản vô tính Các kỹ thuật đột biến khác nhau trong ống nghiệm Sử dụng một oligonucleotide để tạo ra một đột biến điểm ở một gen nhân bản Các phương pháp khác của việc tạo ra một đột biến điểm ở một gen nhân bản vô tính -PCR cũng có thể được sử dụng để tạo ra các đột biến ở các gen nhân bản -Tổng hợp gen nhân... thay đổi trong cách thức biểu hiện của một gen nhân bản được quy định Các nguyên tắc sau phân tích xóa Hình phân tích xóa: Một gen chỉ thị đã được gắn liền với các khu vực thượng nguồn của một gen hạt giống cụ thể từ một nhà máy Loại bỏ các đoạn hạn chế giới hạn bởi các khu R xóa các trình tự điều khiển trung gian biểu hiện gen hạt giống cụ thể, do đó các gen chỉ thị bây giờ được thể hiện trong tất... các mô của thực vật 3/Xác định và nghiên cứu các sản phẩm dịch thuật của một dòng gene 3.1/HRT và HART có thể xác định các sản phẩm dịch thuật của một nhân bản vô tính gen Hai kỹ thuật liên quan, lai phát hành bản dịch (HRT) và lai bắt giữ bản dịch (HART), được sử dụng để xác định các sản phẩm dịch thuật mã hóa bởi một gen nhân bản vô tính Cả hai phụ thuộc vào khả năng của mRNA tinh khiết để tổng hợp...Sơ đồ thực hiện gen chậm phát triển *Footprinting với DNase I Footprinting hoạt động trên cơ sở rằng sự tương tác với một protein điều tiết bảo vệ DNA trong vùng liên kết không bị suy thoái bởi một endonuclease như deoxyribonuclease... Các phương pháp khác của việc tạo ra một đột biến điểm ở một gen nhân bản vô tính -PCR cũng có thể được sử dụng để tạo ra các đột biến ở các gen nhân bản -Tổng hợp gen nhân tạo *Tiềm năng của đột biến gen trong ống nghiệm - Trong đột biến in vitro có tiềm năng đáng chú ý, cả hai nghiên cứu thuần túy và công nghệ sinh học áp dụng -Khả năng thao tác enzyme theo cách này đã dẫn đến những tiến bộ đáng kể