CHƯƠNG-4-KHAI-THÁC-GEN

Chương 4: Khai thác gen Nội dung Các loại Cải biến genenzyme khai thác gen Biến nạp gen, chuyển gen Phương pháp đọc trình tự Sanger dideoxy Nhân dịng genPhản ứng PCR Chương 4: Khai thác gen Nội dung Các loại enzyme khai thác gen Cải biến gen Biến nạp gen, chuyển gen Phương pháp đọc trình tự Sanger dideoxy Nhân dòng gen Phản ứng PCR 4.1 Các loại enzyme khai thác gen Nội dung gồm: 4.1.1 Enzyme giới hạn 4.1.2 Enzyme sửa đổi 4.1.3 Enzyme nối 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn a 11/2/16 Hiện tượng giới hạn (restriction) 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn a Hiện tượng giới hạn (restriction) Các tượng nêu kết hệ thống gồm loại enzyme: • Các enzyme RE cắt ADN phage vị trí chun biệt, ln ln tạo thành trình tự có kích thước xác định • Methylase enzyme chịu trách nhiệm gắn nhóm methyl vào A C vị trí cắt RE Khi A, C methyl hóa RE khơng cịn nhận biết vị trí cắt 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn b Tên gọi RE (Restriction Enzyme) Tên gọi thống RE quy định sau: • • • Chữ đầu viết hoa chữ đầu tên giống vi khuẩn từ RE li trích Hai chữ khơng viết hoa tương ứng với lồi vi khuẩn nói Tiếp theo số la mã thứ tự RE phát (Trường hợp nhiều RE tìm thấy lồi vi khuẩn) 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn b Tên gọi RE (Restriction Enzyme) Tên gọi thống RE quy định sau: • • • • • • Đơi cịn thêm chữ viết hoa để chủng vi khuẩn sử dụng Ví dụ: Escherichia coliRy13 Giống Lồi Chủng EcoRI: enzyme tìm thấy E coli EcoRV: enzyme thứ năm tìm thấy E coli 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn c Các loại enzyme giới hạn Có loại enzyme giới hạn • Loại I: Nhận biết trình tự, di chuyển ADN cách khoảng 1000 – 5000 nu giải phóng vài chục nu • • Loại II: Nhận biết trình tự cắt ngau vị trí Loại III: Nhận biết trình tự cắt ADN vị trí cách khoảng 20 nu 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn d Các RE loại II Trình tự nhận biết • • • • Mỗi RE nhận biết trình tự đặc trưng Các trình tự thường 4-8 nu (thường gặp 6) Các RE có trình tự nhận biết gọi isochizomers Đối với số RE, trình tự nhận biết khơng có chun biệt tuyệt đối 11/2/16 00.BCC-Overview 4.1.1 Enzyme giới hạn d Các RE loại II Trình tự nhận biết • • Đặc trưng quan trọng trình tự nhận biết chúng có cấu trúc polindromic Ví dụ 11/2/16 00.BCC-Overview 10