SORBITOL Sorbitolum C6H14O6 P.t.l: 182,2 Sorbitol D–glucitol (D-sorbitol), phải chứa từ 97,0 đến 102,0% C 6H14O6, tính theo chế phẩm khan Tính chất Bột kết tinh màu trắng, hay gần trắng, đa hình Rất dễ tan nước, thực tế không tan ethanol 96% Đònh tính A Hòa tan 0,5 g chế phẩm hỗn hợp gồm ml anhydrid acetic (TT) 0,5 ml pyridin (TT) cách làm nóng, để yên 10 phút Đổ hỗn hợp vào 25 ml nước, để yên nước đá lọc Lấy tủa, kết tinh lại lượng nhỏ ethanol 96% (TT) sấy khô chân không, điểm chảy tủa thu phải khoảng 98 oC đến 104 oC (Phụ lục 6.7) B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G (TT) Dung môi khai triển: Propanol - ethyl acetat - nước (70 : 20 : 10) Dung dòch thử: Hoà tan 25 mg chế phẩm nước pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dòch đối chiếu (1): Hoà tan 25 mg sorbitol chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dòch đối chiếu (2): Hoà tan 25 mg manitol chuẩn (ĐC), 25 mg sorbitol chuẩn (ĐC) nước pha loãng thành 10 ml với dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dòch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 17 cm Lấy mỏng ra, để khô không khí phun dung dòch acid - aminobenzoic (TT) Để khô mỏng luồng không khí lạnh đến aceton bay hết Sấy mỏng 100 °C 15 phút Để nguội phun dung dòch natri periodat 0,2% Để khô mỏng luồng không khí lạnh Sấy mỏng 100 °C 15 phút Vết sắc ký đồ dung dòch thử phải có vò trí, màu sắc kích thước tương ứng với vết sắc ký đồ thu dung dòch đối chiếu (1) Phép thử có giá trò sắc ký đồ dung dòch đối chiếu (2) có vết tách rõ ràng riêng biệt C Hòa tan 5,00 g chế phẩm 6,4 g dinatri tetraborat (TT) 40 ml nước, để yên giờ, lắc, pha loãng thành 50,0 ml nước Lọc cần Góc quay cực riêng từ +4,0 đến +7,0o tính theo chế phẩm khan (Phụ lục 6.4) Độ màu sắc dung dòch Hoà tan 5,0 g chế phẩm nước pha loãng thành 50 ml với dung môi Dung dòch phải (Phụ lục 9.2) không màu (Phụ lục 9.3, phương pháp 2) Độ dẫn điện Hòa tan 20,0 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Đo độ dẫn điện dung dòch đo khuấy từ nhẹ không 20 µS.cm-1 (Phụ lục 6.10) Đường khử Không 0,2% tính theo glucose Hòa tan 5,0 g chế phẩm ml nước cách đun nóng nhẹ Để nguội, thêm 20 ml dung dòch đồng - citrat (TT) vài viên bi thuỷ tinh Đun nóng cho sau phút sôi đun sôi tiếp phút Làm nguội nhanh thêm 100 ml dung dòch acid acetic 2,4% (tt/tt) (TT) , 20,0 ml dung dòch iod 0,05 N (CĐ) Vừa lắc vừa thêm 25 ml hỗn hợp acid hydrocloric - nước (6 : 94) Khi tủa tan hết, chuẩn độ iod thừa dung dòch natri thiosulfat 0,05 N (CĐ) dùng ml dung dòch hồ tinh bột (TT) làm thò, cho vào cuối phép chuẩn độ Thể tích dung dòch natri thiosulfat 0,05 N (CĐ) tiêu thụ không 12,8 ml Tạp chất liên quan Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng mô tả phần đònh lượng Tiêm dung dòch đối chiếu (2) Điều chỉnh độ nhạy hệ thống cho chiều cao pic sorbitol phải 50% thang đo Tiêm dung dòch thử, dung dòch đối chiếu (3) tiến hành chạy sắc ký với thời gian lần thời gian lưu sorbitol Trong sắc ký đồ dung dòch thử: diện tích pic phụ nào, pic chính, không lớn diện tích pic sắc ký đồ dung dòch đối chiếu (2) (2%) tổng diện tích tất pic phụ không 1,5 lần diện tích pic sắc ký đồ dung dòch đối chiếu (2) (3%) Bỏ qua pic có diện tích nhỏ diện tích pic dung dòch đối chiếu (3) (0,1%) Chì Không 0,5 phần triệu (Phụ lục 9.4.4) Nickel Không phần triệu (Phụ lục 9.4.10) Hoà tan chế phẩm 150,0 ml hỗn hợp dung môi quy đònh Nước Không 1,5% (Phụ lục 10.3) Dùng 1,00 g chế phẩm Độ nhiễm khuẩn Nếu chế phẩm dự đònh dùng để sản xuất thuốc tiêm phải đạt yêu cầu độ nhiễm khuẩn: số lượng vi khuẩn hiếu khí sống lại không 100 vi khuẩn, không 100 nấm mốc men cho gam chế phẩm, xác đònh phương pháp đóa thạch (Phụ lục 13.6) Chế phẩm Escherichia coli Salmonella (Phụ lục 13.6) Nội độc tố vi khuẩn Nếu chế phẩm dự đònh dùng để sản xuất thuốc tiêm mà phương pháp khác thích hợp để lọai nội độc tố vi khuẩn phải chứa IU/g thuốc tiêm có nồng độ sorbitol thấp 100 g/l chứa 2,5 IU/g thuốc tiêm có nồng độ sorbitol cao 100 g/l (Phụ lục 13.2) Đònh lượng Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Nước dùng cho sắc ký lỏng, loại bọt khí Dung dòch thử: Hòa tan 5,0 g chế phẩm 20 ml nước pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Dung dòch đối chiếu (1): Hòa tan 0,50 g sorbitol chuẩn (ĐC) ml nước pha loãng thành 10,0 ml với dung môi Dung dòch đối chiếu (2): Pha loãng 2,0 ml dung dòch thử thành 100,0 ml nước Dung dòch đối chiếu (3): Pha loãng 5,0 ml dung dòch đối chiếu (2) thành 100,0 ml nước Dung dòch phân giải: Hòa tan 0,5 g sorbitol (TT) 0,5 g manitol (TT) ml nước pha loãng thành 10,0 ml với dung môi Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (0,3 m x 7,8 mm) nhồi nhựa trao đổi cation mạnh (dạng calci) (TT) (9 µm) giữ nhiệt độ 85 ± oC Pha động: Nước loại bọt khí Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút Detector khúc xạ kế giữ nhiệt độ không đổi Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Tiêm dung dòch phân giải tiến hành chạy sắc ký với thời gian lần thời gian lưu sorbitol Sắc ký đồ ghi điều kiện nêu thời gian lưu sorbitol khoảng 27 phút thời gian lưu tương đối so với sorbitol là: maltitol khoảng 0,6, manitol khoảng 0,8 iditol khoảng 1,1 Phép thử có giá trò độ phân giải pic sorbitol pic manitol sắc ký đồ dung dòch phân giải Tiêm dung dòch thử dung dòch đối chiếu (1) Tiến hành chạy săc ký với thời gian lần thời gian lưu sorbitol Tính hàm lượng % D-sorbitol từ diện tích pic hàm lượng sorbitol chuẩn Bảo quản Trong đồ đựng kín Nhãn phải ghi nồng độ tối đa nội độc tố vi khuẩn có thích hợp để pha thuốc tiêm không